金黄色葡萄球菌基因敲除质粒的构建及应用

背景:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌已经成为全球院内感染的首要致病菌,建立快速简单的基因敲除方法是研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力、耐药性的重要技术。目的:构建适用于金黄色葡萄球菌基因敲除的质粒,用于金葡菌耐药性及毒力的研究。方法:以p UC19为构建的基本骨架,通过overlap PCR的技术手段,把p CL52.1中p LE194Ts温敏复制子及质粒p HY300PLK中四环素抗性基因片段,通过高保证扩增后,连接入p UC19的Eco RⅠ位点,保留p UC19中所有的多克隆位点,构建大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒,并对金黄色葡萄球菌N315 dap B基因进行敲除,通过多重PCR对基因敲除菌株进行鉴定。结果与结论:成功构建了大肠杆菌-金黄色葡萄球菌穿梭质粒p YZ1和p YZ8,并用于金葡菌基因的敲除,通过酶切及overlap技术构建了同源重组质粒p YZ-Δdap B,电转入RN4220进行修饰后,再电转入N315,通过温度筛选,获得了dap B基因突变菌株,成功的敲除了dap B基因。提示p YZ1和p YZ8能够成功用于金黄色葡萄球菌耐药菌株基因的敲除,为进一步研究临床金黄色葡萄球菌分离株耐药性及毒力提供了工具。

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染回顾性分析

目的分析医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的高危因素、药物敏感率和临床转归,为临床诊治MRSA感染提供依据。方法对临床送检各类标本中分离出的110例次MRSA,按照科室分布、标本种类、药物耐药性及临床疗效等进行回顾性分析。结果医院获得性MRSA主要分布于ICU、神经内科、干部科,感染主要来源于痰液、手术切口分泌物、皮肤创面分泌物,分别占68.2%、11.8%和8.2%,对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类敏感率为0,对氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖甙类抗生素呈不同程度耐药,对替考拉宁、替加环素、万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因和喹奴/达福普汀敏感率为100%;在ICU 90%以上的MRSA感染患者为年龄80岁以上、侵入性操作和长期使用广谱抗生素,在非ICU病房则以住院时间长和接受手术者居多。结论MRSA感染多发生于有多个基础疾病和高危因素者,临床表现复杂多样,临床上应加强对MRSA的防控,且应根据药敏合理使用抗生素,降低耐药菌株产生的概率。

2009-2012年舟山医院送检标本中金黄色葡萄球菌的临床分布和耐药分析

目的了解金黄色葡萄球菌(SAU)的临床分布及耐药情况。方法收集2009—2012年微生物室分离培养的SAU,采用细菌鉴定分析仪及配套的鉴定条和药敏条对菌株进行鉴定和药敏实验。结果共检出672株SAU,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)365株,占54.3%,甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)307株,占45.7%。SAU主要分离自重症监护室、骨科和心血管科。MRSA主要分离自重症监护室、骨科和神经内科。痰标本中分离的MRSA最多,其次为脓液分泌物。MRSA对大多数抗生素耐药,其耐药率<50.0%的抗生素有利福平、万古霉素、复方磺胺甲恶唑、喹奴普汀-达福普汀、替考拉宁和呋喃妥因等。MSSA对除青霉素外的大多数抗生素敏感。未发现耐万古霉素菌株。结论 SAU临床分布广泛,MRSA检出率较高,应加强SAU耐药性监测。

烧伤患者耐甲氧西林金黄色葡萄球RAPD分析

目的:调查烧伤患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药性及分子流行病学情况,为控制感染提供科学依据。方法烧伤患者分离的金黄色葡萄球菌用PCR法扩增其mecA基因确定MRSA菌株,K-B纸片法检测MRSA的耐药性,随机引物扩增多态性DNA(RAPD)进行同源性分析。结果 MRSA的分离率为41.1%,对多种抗生素均耐药,没有发现耐万古霉素和替考拉宁的菌株。23株MRSA经RAPD分型,均获得稳定的条带,可分为四型,以Ⅱ型为主,共检出13株。结论烧伤患者分离MRSA菌株具有多重耐药性,应根据药敏试验结果合理选用抗生素进行治疗;采用RAPD对MRSA的同源性进行研究,为控制感染提供分子流行病学依据。

美洲大蠊肠道内生放线菌抗金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌活性分析

昆虫肠道共生放线菌作为一种特境放线菌,因与土壤中的放线菌生存环境的不同,研究其种类和抗菌活性具有重要意义。将金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)这两种致病菌作为指示细菌,对分离自美洲大蠊Periplaneta americana肠道的159株内生放线菌使用牛津杯法实验,分别对其进行体外抑菌活性筛选,随后利用16S rRNA PCR、BLAST同源性对比和构建系统发育树相结合的方法对菌株进行分子生物学鉴定,对关键酶基因非核糖体多肽合成酶(Nonribosomal peptide synthetase,NRPS)基因、多聚酮合酶(Polyketone synthase,PKS)基因和卤化酶基因FADH2进行初步筛选。结果表明49株放线菌能够不同程度的抑制金黄色葡萄球菌和MRSA,有11株放线菌对两种致病菌均具有不同程度的抑制作用。49株放线菌中链霉菌属有36株(73.47%),属于优势菌属;其余的13株放线菌分别属于戈登氏菌属、微杆菌属、短状杆菌属、分枝杆菌属、无色杆菌属和小单孢菌属。琼脂糖凝胶电泳结果显示,11株放线菌中有6株放线菌均检测到关键酶基因PKS I、NRPS和卤化酶基因FADH2。本研究表明美洲大蠊肠道中含有具有抗菌活性的放线菌资源。

糖尿病合并耐甲氧西林葡萄球菌菌血症患者用药监护1例

目的:通过临床药师对1例糖尿病合并耐甲氧西林葡萄球菌感染患者实施药学监护的过程,探讨此类患者药学监护要点及药师在临床药物治疗中发挥的作用。方法:针对患者病情,协助医师根据药敏结果为患者制定有效的治疗方案,调整注射用盐酸万古霉素的给药剂量,关注患者使用利奈唑胺注射液后出现的不良反应,提出合理的药学监护措施,对患者血糖进行监控并提供健康教育计划。结果:患者经过抗感染及降糖治疗后,感染与血糖均得到有效控制,同时利奈唑胺注射液引起的血小板减少也得到恢复,患者病情稳定出院。结论:临床药师参与个体化给药方案的制定,进行必要的药学监护,对于临床规范、合理用药具有重要意义。