生活用水中的肺炎性军团杆菌:处理方法及检测技术

肺炎性军团杆菌(Legionella pneumophila)为人工热水系统中发现的致病性水生病菌。自发现20年来,如何有效地处理和防治该病菌已引起高度重视。本文通过最近十几年来的有关文献,对目前处理该水生病菌的几种有效方法和检测技术作简明扼要的描述。

荧光环介导恒温扩增技术检测嗜肺军团菌方法的建立

目的探讨利用环介导恒温扩增技术(LAMP)建立可以准确快速检测嗜肺军团菌的方法。方法选取嗜肺军团菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希氏菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌菌株,根据嗜肺军团菌毒力mip基因的6个特殊区域,使用Primer Explorer Version 4软件设计LAMP引物(mip-1、mip-2、mip-3),提取病原菌基因组DNA进行LAMP,评价其特异性、最低检测限和稳定性。结果筛选出mip-3引物在测定嗜肺军团菌的LAMP反应体系中扩增约10min出峰且峰值较高;非嗜肺军团菌菌株没有扩增反应;LAMP检测限可达100fg/μL;mip-3引物在10次重复检测中几乎同时出峰,稳定性良好。结论建立的LAMP检测方法具有特异性强、稳定性高特点,能快速、准确检测出嗜肺军团菌,具有较大的推广及应用前景。

公共场所水环境中活嗜肺军团菌的快速检测方法

旨在建立一种基于16S rRNA前体的分子学检测方法用于快速检测活嗜肺军团菌,应用该方法与ISO标准法调查公共场所水环境中嗜肺军团菌的水平及污染现状。此研究方法的理论基础在于营养刺激后可诱导嗜肺军团菌16S rRNA前体的合成,后者可作为检测细胞活性的指标。分别应用预刺激RT-qPCR法和ISO法对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌以及非军团菌进行检测,并验证两种方法的特异性、灵敏度。应用预刺激RT-qPCR法和ISO法检测公共场所水环境中的嗜肺军团菌,比较两者结果的一致性。结果显示,预刺激时间大于3 h时,嗜肺军团菌16S rRNA前体的增长缓慢,最佳预刺激时间设置为3 h。预刺激RT-qPCR法与ISO法均能较好地检出嗜肺军团菌,特异性均为100%,预刺激法的最低检测浓度(Limit of detection,LOD)为102Cell/L,ISO标准法的LOD为104 Cell/L。预刺激法及ISO法的总阳性率分别为43.5%(30/69)和40.6%(28/69),两种方法的检出率差异无明显统计学意义(C2=0.119,P=0.730)。预刺激RT-qPCR法是一种快速有效的检测活嗜肺军团菌的方法,诊断灵敏度及特异性高,是ISO标准法潜在的替代方案。

基于酶底物法对饮用水和非饮用水中嗜肺军团菌的定量测定

研究采用酶底物法对饮用水和非饮用水中的嗜肺嗜肺军团菌进行定量检测。结果表明,酶底物法对检测嗜肺嗜肺军团菌的质控样品有较高的准确度和稳定性。对饮用水实际样品中嗜肺军团菌进行检测,在30份管网水中未检出阳性结果,在60份二次供水样品中检出率达5%,其中3份阳性样品均来自公共场所建筑自来水龙头,阳性样品的检出浓度为1.0~5.2MPN/(100mL)。对非饮用水实际样品中嗜肺军团菌进行检测,在全部30份水样中检出率达67%,阳性样品的检出浓度为2.2~1992.6MPN/(100mL)。对酶底物法检测出的阳性样品均进行了菌落验证试验,无假阳性现象,表明酶底物法检测饮用水和非饮用水中实际水样的嗜肺军团菌特异度为100%。其结果表明,在非饮用水和饮用水末端公共场所区域水体中,仍存在嗜肺军团菌污染风险,对人群构成潜在威胁。

集中空调通风系统中嗜肺军团菌卫生检测方法的研究进展

嗜肺军团菌是导致军团病发生的主要致病因素,在集中空调冷却系统中可能会滋生嗜肺军团菌。能够准确高效的检测嗜肺军团菌对其防控具有重要意义。本文综述了目前嗜肺军团菌检测中常用的检测方法,介绍了细菌分离培养法、荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测法、酶底物法等检测方法,对比了几种检测方法在嗜肺军团菌检测时的优点和不足。

Legiolert酶底物法结合质谱法对环境样本水体中嗜肺军团菌定量检测分离

目的探讨Legiolert酶底物法结合质谱法直接对环境样本水体中嗜肺军团菌定量检测分离的应用。方法采集2021年7月至11月南京14家公共场所,其中包括宾馆饭店、休闲中心等集中空调冷却水18份,淋浴水30份等共计48份样本。利用Legiolert酶底物法直接对环境样本水体中嗜肺军团菌定量检测,并对分离培养的纯菌落结合质谱法,荧光定量PCR试验确认后血清学分型,与传统分离培养法相比较得出两种方法对环境样本的嗜肺军团菌检出率。结果48份样本两种方法嗜肺军团菌检出率分别为8.33%(4/48)、31.25%(15/48),两种检测方法差异有统计学意义(χ^(2)=5.37,P<0.05)。结论Legiolert酶底物法结合质谱法对环境样本水体中嗜肺军团菌检出率明显高于传统分离培养法。

酶底物法定量检测嗜肺军团菌的应用研究

目的开展嗜肺军团菌检测新方法的应用研究,利用酶底物法定量检测技术应用于辖区公共场所不同水样的嗜肺军团菌检测中。方法 2018年—2021年收集辖区公共场所淋浴热水、水龙头水样以及集中空调冷凝水、冷却水样,采用酶底物法进行检测,对检出的阳性样本经细菌分离技术与TaqMan荧光定量PCR实验验证确认。结果应用酶底物定量检测法在336件水样中检出阳性样本81件,阳性率为24.1%。嗜肺军团菌计数结果在<1 MPN/100 ml~2 272.6 MPN/100 ml。对81件阳性样本经细菌分离培养、血清分型实验、荧光定量PCR实验加以验证确认,无假阳性,方法特异度为100%。结论通过应用酶底物法检测嗜肺军团菌,操作简便、结果快速、定量、灵敏,具有推广应用的价值。