Mus81基因沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响

目的研究甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(methyl methanesulfonate and UV sensitive gene clone 81,Mus81)沉默对Hep3B人肝癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法采用慢病毒介导的小干扰RNA技术沉默Mus81基因的表达并以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT⁃PCR)检测Mus81基因的沉默效率。噻唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,平板克隆实验、碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)⁃APC染色法分别检测Mus81沉默对Hep3B细胞系增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果慢病毒感染效率高于80%,Mus81基因干扰效率为76.42%(P<0.001)。MTT生长曲线和平板克隆实验的结果显示,Mus81沉默的Hep3B细胞系的生长速度明显下降(P<0.001),增殖能力也明显减弱[细胞克隆数:(2±1)比(54±3),P<0.001]。Annexin V⁃APC和PI染色检测显示Mus81沉默Hep3B细胞系的凋亡率明显升高[(20.87±0.82)%vs.(0.69±0.09)%,P<0.001]并出现G1期细胞比例轻微降低[(33.77±1.61)%vs.(42.06±0.40)%,P<0.05]。结论Mus81基因沉默可明显抑制人肝癌细胞系Hep3B的生长增殖并促进其凋亡。

Mus81基因沉默对MCF-7人乳腺癌细胞系增殖凋亡及化疗敏感性的影响

目的研究Mus81基因沉默对MCF-7人乳腺癌细胞系增殖、凋亡和化疗敏感性的影响并初步探讨其调控机制。方法首先构建Mus81沉默的MCF-7乳腺癌细胞系,使用噻唑蓝(MTT)法和平板克隆实验检测细胞生长和增殖,碘化丙锭(PI)染色法和膜联蛋白V(Annexin V)-APC染色法检测细胞周期及凋亡的变化。qRT-PCR检测Mus81沉默后下游基因的表达,MTT法检测化疗药物的50%抑制浓度(IC50)及逆转指数(RI)。结果(1)MTT生长曲线和平板克隆实验显示Mus81基因沉默后MCF-7细胞系增殖显著减缓(P<0.001),细胞克隆数明显下降(P<0.001)。(2)Annexin V-APC和PI染色检测显示MCF-7细胞凋亡率升高(P<0.001),并出现明显的G2/M期阻滞。(3)MTT检测结果显示,Mus81沉默后MCF-7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5-氟尿嘧啶的IC50值明显降低,RI依次为5.118、3.070、3.027及8.997。(4)qRT-PCR及Western blot检测下游信号通路表达的结果显示,Mus81沉默后MCF-7细胞中的APAF1、APC和PTEN基因表达升高,MAPK3和MAPK1基因表达降低。结论Mus81基因沉默可明显抑制MCF-7人乳腺癌细胞系的生长增殖并诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡,还可提高MCF-7细胞对顺铂、阿霉素、表阿霉素和5-氟尿嘧啶的敏感性,其机制可能与调控APAF1、APC、PTEN、MAPK1及MAPK3等下游基因的表达有关,提示Mus81可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。

甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因沉默对人结肠癌HCT116细胞增殖凋亡的影响

目的 观察甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因（Mus81）沉默对结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响并探讨其调控机制.方法 采用慢病毒介导的小干扰RNA （siRNA）技术靶向沉默Mus81基因的表达,以实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot检测Mus81基因的表达抑制率.采用噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,以碘化丙锭（PI）及膜联蛋白V（Annexin V）-APC染色法检测细胞周期及凋亡率,以Real-time PCR法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）及p53基因的表达.结果 Mus81基因和蛋白的抑制率分别为84.64％和71.03％ （P＜0.01）.Mus81沉默后HCT116细胞的增殖速度明显降低（P＜0.01）,凋亡率明显升高[（19.69±0.20）％比（8.74±0.11）％,P＜0.01],G2/M期细胞比例轻微上升[（12.99±0.48）％比（11.69±0.41）％,P＜0.05],其bax和p53的表达分别升高了71.73％和12.02％ （P ＜0.05）,bcl-2表达则降低了37.72％ （P ＜0.01）.结论 Mus81基因沉默可明显促进HCT116细胞凋亡并抑制其增殖,其机制可能与调控bax、bcl-2及p53基因的表达有关.