纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

葛根对中国仓鼠肺细胞的毒性作用

目的:观察葛根对中国仓鼠肺细胞(CHL)形态学、细胞增殖活性及细胞相对存活率的影响。方法:以葛根为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的葛根在不同作用时间对CHL相对存活率的影响。结果:不同浓度的葛根(12.50、50.00、100.00、200.00和400.00 mg.L-1)作用一定时间后,CHL存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现细胞脱落,呈现出时间-剂量效应关系。接触受试物48 h后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为282.00 mg.L-1。结论:葛根可以抑制CHL生长,降低线粒体代谢活性。

甲醛、三氯乙烯、三氯化铝的细胞联合毒作用

目的 研究甲醛、三氯乙烯和三氯化铝的联合毒作用类型。方法 噻唑蓝法 (MTT)测定 3种物质各自的半数生长抑制浓度 (IC50 )及混合物 (甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 )的IC50 ,根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型。结果 甲醛、三氯乙烯、三氯化铝及其混合物质的IC50 分别为 0 . 0 2 2 6 ,0 . 36 8,0 . 5 89和0 . 12 4mg/ml,据Finney法求得Q值为 1 .0 8,Logisitc回归模型参数 β4差异无统计学意义。结论 甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 (6∶11∶33)混合染毒 ,对中国仓鼠肺细胞的联合毒性表现为相加作用。

黄芪总皂苷对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg.L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响;(2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg.L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达。结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性;(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg.L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达。结论黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现。

镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性作用的实验研究

目的 观察镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞 (CHL)的毒性作用。方法 以我国某镍冶炼厂电炉烟道尘为受试物 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法检测CHL细胞活性。结果 不同浓度下的镍冶炼烟尘 ( 6 2 5、 12 5 0、 2 5 0 0、 5 0 0 0、10 0 0 0 μg/ml)作用一定时间后 ,CHL细胞存活率下降 ,呈现出时间 剂量 反应关系。接触受试物 3 6h ,细胞生长半数抑制浓度IC50 为 2 1 3 6μg/ml。同时镜下观察细胞形态也发生改变。 结论 镍冶炼烟尘可以抑制CHL细胞生长 。

噻唑蓝比色法检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌的研究

目的探讨噻唑蓝(MTT)法用于口腔常见细菌(变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌)活菌计数的可行性及具体应用过程中的实验条件。方法本实验以菌落形成单位(CFU)法为标准对照。实验通过改变比色的波长、反应时间、试剂剂量、细菌菌龄等实验条件,获得MTT法测量常见口腔细菌的一系列参数,对变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌进行活菌计数,并与CFU法所测的细菌数量相比较。结果 MTT法在测量变异链球菌时,最佳的检测波长为510nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～1.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量血链球菌时,最佳的检测波长为545nm,最佳的测定细菌范围是1.5×105～2.0×107CFU·mL-1。MTT法在测量伴放线菌嗜血菌时,最佳的检测波长为557nm,最佳的测定细菌范围是1.0×106～5.0×107CFU·mL-1。MTT法与菌落形成单位法的测量结果是一致的,并且对于不同菌龄的变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌均适用。结论 MTT法可以用于检测变异链球菌、血链球菌、伴放线菌嗜血菌等口腔常见细菌的活菌数量,并且具有快速、方便等优点。

rhEGF促进人结膜上皮细胞增殖的实验研究

目的:探讨rhEGF（recombinant human epidermal growth factor）促进培养人结膜上皮细胞增殖的作用及最佳有效浓度,为提高眼表重建术后成功率寻找有效的治疗手段。方法:在传代人结膜上皮细胞中分别加入1μg/ml～100μg/ml浓度的rhEGF,于加药后第24、48、72、96h分别采用MTT法得出光吸收值以测定活性细胞数。结果:24h EGF各浓度组与对照组光吸收值无明显差异。48h50μg/ml、20μg/ml、10μg/mlEGF组光吸收值明显高于对照组,72h除 100μg/mlEGF组外,其余EGF各组均明显高于对照组。96h EGF各浓度组均明显高于对照组,100μg/ml组与其余EGF浓度组有显著性差异。结论:EGF对结膜上皮的增殖有明显促进作用,浓度为 10～50μg/ml可以获得较好的效果。眼科学报2001;17:118～121。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

光敏化姜黄素的细胞毒理学检验

探究基于小鼠成纤维L929细胞的光敏化姜黄素的细胞毒理学。采用倒置显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测L929细胞的相对增殖率,按通用标准评价细胞毒性;DNA片段化分析及Hoechst细胞核染色法检测细胞凋亡状况。结果表明:经不同浓度的光敏化姜黄素(5、10、20μmol/L)处理后,L929细胞生长良好,呈梭形或不规则形状,与对照组相比均无明显差异;毒性级别为"0"或"1",即无细胞毒性;在琼脂糖凝胶电泳图上未见"阶梯状"的条带出现,细胞核染色后也呈现正常的蓝色,即光敏化姜黄素不会引起L929细胞凋亡,对L929细胞没有毒性。

刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响

目的研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCECs)生长的影响。方法采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基作为对照。神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSS11.0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析。结果成功进行了RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达。ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<0.001),且10%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<0.001)。结论ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂。

尼古丁对人牙龈成纤维细胞的增殖及IL-8表达的影响

目的：探讨尼古丁对体外培养人牙龈成纤维细胞（HGFs）的增殖及其分泌IL-8的影响。方法：组织块法原代培养HGFs，MTT法观察10、50、100、250、500、1000、2000μg/mL不同浓度尼古丁对其增殖的影响；取第4代HGFs分别与10、50、100、250、500、1000μg/mL不同浓度尼古丁共同培养72 h，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测HGFs培养上清中IL-8的含量。结果：50～2000μg/mL不同浓度的尼古丁均能明显抑制HGFs的增殖（P＜0．05），且呈浓度依赖性；10～500μg/mL尼古丁均能明显促进HGFs合成IL-8（P＜0．05），其中以100μg/mL浓度组的促进作用最强。结论：一定浓度尼古丁可抑制HGFs的增殖并促进其合成IL-8，提示尼古丁可能通过调控IL-8的表达而造成对牙周组织的破坏。

不同材料硬性透氧性角膜接触镜表面细菌黏附能力的对比研究

背景角膜接触镜的佩戴可能会增加角膜感染的机会，一些研究认为角膜接触镜材料的透氧性与角膜感染的发生有关。目的比较用于制作硬性透氧性角膜接触镜（RGP—CL）的材料，如氟硅丙烯酸酯A（XO）、氟硅丙烯酸酯B（EO）和聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）表面对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的黏附情况。方法分别将3种RGP—CL镜片材料置于3种细菌悬液中培养24h，采用MTT比色法、旋涡震荡菌落计数法和扫描电子显微镜观察并比较3种材料表面黏附细菌的能力。结果MTT比色法结果显示，XO制镜材料对金黄色葡萄球菌的黏附能力（A值）明显低于EO材料和PMMA材料，差异均有统计学意义（q=7．379、8．207，P〈0．01），但EO材料与PMMA材料对金黄色葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=0．828，P〉0．05）；XO材料及EO材料表面表皮葡萄球菌的黏附能力低于PMMA材料，差异均有统计学意义（q=14．000、12．800，P〈0．01），而XO材料与EO材料间表皮葡萄球菌黏附能力的比较差异无统计学意义（q=1．200，P〉0．05）；3种材料对铜绿假单胞杆菌的黏附能力（A值）差异无统计学意义（F=2．155，P=0．138）。旋涡震荡菌落计数法结果显示，XO、EO、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌的黏附数量分别为（37．9±1．5）x10^6、（49．9±2．2）x10^6、（67．4±1．6）×10^6个，差异有统计学意义（F=206．240，P=0．000），EO材料、PMMA材料表面金黄色葡萄球菌菌落计数明显高于XO材料，差异均有统计学意义（P〈0．01）。XO、EO、PMMA材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量分别为（7．94-1．3）×10。、（10．5±1．5）×10。、（11．2±1．2）×10。个，XO材料表面表皮葡萄球菌的黏附数量明显低于PMMA材料，差异有统计学意义（q=5．060，P〈0．05），XO材料与EO材料、EO材料与PMMA材料之间表皮葡萄球菌黏附数量的差异均无统计学意义（q=3．290、1．770，P〉0．05）。3种材料表面铜绿假单胞杆菌的黏附数量差异无统计学意义（F=0．232，P=0．799）。扫描电子显微镜观察显示，XO材料和EO材料表面金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的黏附呈散在性分布，而PMMA材料表面这两种细菌黏附形成“网状”外观，3种镜片材料表面铜绿假单胞杆菌形态无明显差别。结论PMMA材料表面细菌的黏附能力强于XO材料和EO材料，RGP—CL的透氧性对镜片表面细菌黏附的能力无明显影响。

甘肃猫儿眼提取物对人LGC-7910细胞毒性作用及机制

给予人LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物体外培养,采用流式细胞仪、MTT法对甘肃猫儿眼提取物细胞毒性活性进行了检测.结果为,分别给予LGC-7910细胞甘肃猫儿眼提取物10.0、1.0和0.1μg/mL 48 h后测定,对细胞增殖的抑制率分别为82.4%、54.9%和33%,半数抑制浓度(IC50)为0.53μg/mL;凋亡率分别为32.1%、25.6%和16.3%.

稳定高表达人野生型DNApolβ食管癌细胞Ec9706的生物学特征

目的:建立稳定高表达人野生型DNA聚合酶beta(polβ)的食管癌细胞系Ec9706,并对该细胞系的生物学特征进行分析。方法:脂质体转染法将人野生型polβ重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入Ec9706细胞,荧光显微镜观察转染效果,经G418筛选得到稳定转染细胞系。RT-PCR方法检测转染细胞polβmRNA的表达水平,绘制生长曲线,软琼脂实验测细胞克隆形成率,MTT法测转染前后细胞对顺铂的敏感性。结果:荧光显微镜下转染细胞荧光强,转染效率高,RT-PCR结果表明转染细胞的polβ表达较空载体转染细胞、对照细胞增加。转染前后细胞生长速度接近,转染细胞周期分布发生改变,多被阻滞在S期,在软琼脂实验中克隆形成率增加,对顺铂的敏感性降低。结论:成功建立了稳定高表达人野生型polβ的Ec9706细胞系,polβ的高表达与细胞的细胞周期分布、恶性增殖能力及耐药性有一定关系。

猫儿眼植物酸抗肿瘤作用的实验研究

采用气-质联用仪、流式细胞仪、MTT法和台盼蓝法对猫儿眼植物酸组分及其抗肿瘤活性进行实验研究.结果为,分别给予SGC-7901细胞猫儿眼植物酸10.0μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL48h后测定,对肿瘤细胞的抑制率分别为73.5%、52.9%和26.5%,半数抑制浓度(IC50)为0.909μg/mL;对细胞增殖抑制率分别为70.8%、58.7%和30.9%,IC50为0.552μg/mL;凋亡率分别为26.8%、22.6%和12.4%.

和胃降逆胶囊通过PI3K/AKT信号通路调控人胃癌AGS细胞增殖与凋亡机制研究

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况。结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24 h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P<0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义。在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低。各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P<0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P<0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P<0.05),且呈现出浓度相关性。结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡。

鹭鸶咯口服液对8种常见细菌抑菌作用及对小鼠3种免疫细胞作用的研究

按照常规药物敏感性法测定鹭鸶咯口服液对引起人呼吸道感染的8种常见细菌的抑菌作用进行了体外试验观察。结果显示,此药物对8种常见细菌有较强的抑菌作用;进而采用噻唑蓝(MTT)比色法研究了鹭鸶咯口服液对小鼠淋巴细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的活化作用。结果表明,在一定药物浓度或剂量范围内,该药物在体内外对上述3种小鼠免疫细胞活化作用均显著,亦无毒性。又采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验观察了鹭鸶咯口服液对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。结果表明,该药物对提高巨噬细胞吞噬功能有显著作用。

不同来源生脉注射液体外细胞毒性的比较及原因分析

目的:比较不同来源生脉注射液体外细胞毒性的差别,寻找造成差别的主要原因。方法:将不同来源生脉注射液原液以及不同浓度的稀释液分别与L929细胞接触培养,通过倒置相差显微镜观察其形态,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)量化细胞毒性,计算相对增殖率,并进行细胞毒性评价。结果:8个厂家生产的生脉注射液原液的细胞毒性分级均为4级,为重度毒性。样品A的EC50最高,说明其细胞毒性较其他样品高。在生脉注射液所添加的辅料中,当聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温80)浓度为处方量的0.5%时,其细胞毒性分级为3～4级。将吐温80稀释至0.062 5%时,其细胞毒性分级为1级,基本无细胞毒性。8个厂家生产的生脉注射液原液中吐温80的含量不一致,有些厂家的含量大于0.5%。结论:不同厂家生产的生脉注射液由于原料产地、生产条件不同等原因,其细胞毒性存在较大的差别。吐温80作为中药注射剂的辅料,在高于0.062 5%的浓度下存在细胞毒性。生脉注射液中吐温80的含量与细胞毒性可能呈一定的正相关性。

金欣口服液血中移行成分体外抗呼吸道合胞病毒的研究

目的:通过研究金欣口服液血中移行成分的体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用,明确金欣口服液作用的物质基础。方法:采用细胞培养技术,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,以利巴韦林为阳性对照,观察金欣口服液血中移行成分槲皮素、虎杖苷、黄芩素、汉黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚在人喉癌上皮细胞(Hep-2)中对RSV的抑制作用,以治疗指数(TI)为评价指标。结果:在Hep-2细胞中槲皮素、虎杖苷、黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚对RSV具有直接灭活作用,TI分别为12.78、38.07、28.93、9.43、1.58,槲皮素、异鼠李素对RSV感染具有一定的治疗作用,TI分别为12.00、4.25,汉黄芩素对RSV感染有预防作用,TI为1.57。结论:槲皮素、虎杖苷、黄芩素、汉黄芩素、异鼠李素、大黄素甲醚是金欣口服液抗呼吸道合胞病毒的物质基础。

苯扎氯铵对人结膜上皮细胞毒性的研究

目的探讨苯扎氯铵（BAC）对无血清培养法培养的人结膜上皮细胞的细胞毒性。方法采用无血清培养的3-5代人结膜上皮细胞，将不同浓度的BAC（0．01％，0．005％，0．001％，0．0005％，0．0001％）单次作用于结膜上皮细胞15min，分别于处理细胞后6，12，24，48hMTT法检测细胞活力，于处理细胞后48h固定，扫描电镜观察拍照。结果自BAC处理后6h起，与对照组相比，各浓度BAC均使细胞活力下降（P〈0．01）。经过48小时的恢复期，细胞活力未见恢复。随BAC浓度增高，细胞表面微绒毛消失，细胞出现不同程度收缩至脱落至大部分溶解坏死。结论BAC对于培养的人结膜上皮细胞具有细胞毒性，其毒性作用呈剂量依赖性。