纤蛇纹石石棉及代用纤维粉尘的光谱研究与噻唑蓝(MTT)比色法分析

以纤蛇纹石石棉、陶瓷纤维、玻璃纤维、岩棉、硅灰石为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测染毒72h后V79细胞的存活率,并通过吉姆萨染色观察细胞形态学上的变化。不同浓度ρ/(μg.ml-1)的矿物粉尘(100,200,400,600,800,1000)作用72h后,V79存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现大量细胞衰亡,呈现出剂量效应关系,且细胞毒性大小为玻璃纤维>纤蛇纹石石棉>陶瓷纤维>硅灰石>岩棉;形态学观察发现染毒细胞出现空泡、肿胀、裸核、黑褐色颗粒以及胞浆胞核模糊、形态变化等现象,且不同的粉尘对V79细胞的影响不同。总体而言,岩棉是五种粉尘中毒性最低的石棉代用纤维。

MTT-四氯化碳萃取吸光光度法测定活菌数

噻唑蓝(MTT)-四氯化碳萃取比色法是一种快速测定活细胞的方法,通过对反应条件的探索,建立了一种快速的测定细菌活性的方法。结果表明,MTT-四氯化碳萃取法可以有效地测定活菌数,并且与传统的平板稀释法和比浊法的测定结果一致,可以作为代替平板稀释法活菌计数的一种新方法。

MTT法测定乳腺癌对化疗药物敏感性的实验研究

目的探讨肿瘤药敏试验在乳腺癌化疗选药中的作用。方法将19例患者的浸润性乳腺导管癌组织进行体外培养,以临床常用的6种化疗药物加以干预,MTT法检测化疗药物对癌细胞的抑制率。结果浸润性乳腺导管癌细胞对顺铂、阿霉素、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、甲氨喋呤、多西紫杉醇中度敏感,6种化疗药物对乳腺癌细胞的抑制率无显著性差异(P=0.934)。结论初次化疗的浸润性乳腺导管癌患者对多种化疗药物均较为敏感。

姜黄素-生物素偶联物的合成及抗肿瘤活性研究

为进一步开发安全有效的抗口腔癌药物,利用酰基化法及羧氨缩合法制备一系列姜黄素类衍生物,采用药物拼合原理,使姜黄素连接具有一定抗肿瘤活性及靶向性的生物素,合成一系列姜黄素-生物素偶联物(目标化合物2、4、5),其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR和HR-MS(ESI)确证。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测目标化合物对人口腔表皮样癌细胞(KB细胞)增殖的抑制作用。结果显示:化合物2在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是40.82μmol/L和26.23μmol/L,提示其抗肿瘤活性优于姜黄素。化合物4在作用24 h及48 h时对KB细胞的IC_(50)分别是39.83μmol/L和51.24μmol/L,提示在作用24 h时,其抗肿瘤活性优于原药姜黄素。

臭氧水对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的:探讨不同浓度臭氧水(OW)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的细胞毒性。方法:体外培养HGFs,按干预臭氧水浓度分为5组:1、2、4、6 mg/L和空白对照组,在作用的不同时点(1、5、10、20 min)采用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态变化,MTT法测定细胞的相对增殖率,采用SPSS软件进行统计分析。结果:浓度为1和2 mg/L的OW在20 min内对HGFs的细胞毒性为1级,4 mg/L作用1 min,细胞毒性为1级,作用5~20 min,细胞毒性为2级;6 mg/L作用1~20 min,细胞毒性为2~3级。结论:臭氧水的细胞毒性与其浓度和作用时间有关,低浓度臭氧水(≤2 mg/L)可应用于临床治疗和消毒中,在保证作用效果的情况下,应尽量减小臭氧水的作用时间和浓度。

石草鞋化学成分及对人乳腺癌高转移细胞增殖的影响

目的:通过对石草鞋化学成分的分离及活性研究,揭示石草鞋抑制人乳腺癌高转移细胞增殖作用的物质基础。方法:对石草鞋90%乙醇提取物采用硅胶、葡聚糖凝胶LH-20(Sephadex LH-20)进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构;采用噻唑蓝(MTT)法测试化合物对人乳腺癌高转移细胞增殖的影响。结果:从石草鞋中分离得到12个化合物,分别鉴定为isoagatholal、monoeerin、对羟基肉桂酸甲酯、secologanoside、邻苯二甲酸二正丁酯、对羟基肉桂酸乙酯、isobonein、columbianetin acetate、gentioside、crototropone、3-羟基对甲氧基苯甲醛、2-desoxy-4-epi-pulchellin。monoeerin的半数抑制浓度(IC50)值为12.35μg/mL,crototropone的IC50值为9.51μg/m L。结论:所有化合物均为首次从石草鞋中分离得到,isoagatholal、monoeerin、isobonein、gentioside、crototropone为首次从该属植物中分离得到;monoeerin、crototropone可抑制人乳腺癌高转移细胞增殖。

甲醛、三氯乙烯、三氯化铝的细胞联合毒作用

目的 研究甲醛、三氯乙烯和三氯化铝的联合毒作用类型。方法 噻唑蓝法 (MTT)测定 3种物质各自的半数生长抑制浓度 (IC50 )及混合物 (甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 )的IC50 ,根据Finney数学模型和Logistic回归方法判断联合作用类型。结果 甲醛、三氯乙烯、三氯化铝及其混合物质的IC50 分别为 0 . 0 2 2 6 ,0 . 36 8,0 . 5 89和0 . 12 4mg/ml,据Finney法求得Q值为 1 .0 8,Logisitc回归模型参数 β4差异无统计学意义。结论 甲醛、三氯化铝、三氯乙烯 (6∶11∶33)混合染毒 ,对中国仓鼠肺细胞的联合毒性表现为相加作用。

葛根对中国仓鼠肺细胞的毒性作用

目的:观察葛根对中国仓鼠肺细胞(CHL)形态学、细胞增殖活性及细胞相对存活率的影响。方法:以葛根为受试物,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的葛根在不同作用时间对CHL相对存活率的影响。结果:不同浓度的葛根(12.50、50.00、100.00、200.00和400.00 mg.L-1)作用一定时间后,CHL存活率下降,细胞增殖明显受到抑制并出现细胞脱落,呈现出时间-剂量效应关系。接触受试物48 h后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为282.00 mg.L-1。结论:葛根可以抑制CHL生长,降低线粒体代谢活性。

黄芪总皂苷对H_2O_2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg.L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响;(2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg.L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达。结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性;(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg.L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达。结论黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现。

全冠修复材料对人牙龈成纤维细胞的毒性

目的:观察镍铬合金、金合金、铸造陶瓷对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast cells,HGFC)的毒性。方法:制备镍铬合金、金合金、铸造陶瓷的细胞培养基浸提液,采用四唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT法)测定材料对HGFC生长的影响;在材料周围接种HGFC,观察细胞的生长情况。采用Stata9.1软件对实验结果进行析因分析。结果:金合金的细胞相对增殖率为1.016、1.014、0.824、0.796,镍铬合金的细胞相对增殖率为1.028、1.079、0.903、0.809,铸造陶瓷的细胞相对增殖率为1.018、1.030、0.924、0.818。金合金和镍铬合金对细胞相对增殖率的影响有统计学差异(P=0.021),但金合金与铸造陶瓷、镍铬合金与铸造陶瓷之间无统计学差异(P>0.05)。金合金、镍铬合金和铸造陶瓷的细胞毒性级别(cytotoxical grade,CG)为0-1级。倒置显微镜观察3种材料周围均有细胞生长,镍铬合金周围有细胞坏死带产生。结论:镍铬合金与HGFC直接接触引起的细胞损伤比析出的金属离子对细胞损伤大。金合金和铸造陶瓷具有良好的生物相容性。

rhEGF促进人结膜上皮细胞增殖的实验研究

目的:探讨rhEGF（recombinant human epidermal growth factor）促进培养人结膜上皮细胞增殖的作用及最佳有效浓度,为提高眼表重建术后成功率寻找有效的治疗手段。方法:在传代人结膜上皮细胞中分别加入1μg/ml～100μg/ml浓度的rhEGF,于加药后第24、48、72、96h分别采用MTT法得出光吸收值以测定活性细胞数。结果:24h EGF各浓度组与对照组光吸收值无明显差异。48h50μg/ml、20μg/ml、10μg/mlEGF组光吸收值明显高于对照组,72h除 100μg/mlEGF组外,其余EGF各组均明显高于对照组。96h EGF各浓度组均明显高于对照组,100μg/ml组与其余EGF浓度组有显著性差异。结论:EGF对结膜上皮的增殖有明显促进作用,浓度为 10～50μg/ml可以获得较好的效果。眼科学报2001;17:118～121。

镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞毒性作用的实验研究

目的 观察镍冶炼烟尘对中国仓鼠肺细胞 (CHL)的毒性作用。方法 以我国某镍冶炼厂电炉烟道尘为受试物 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法检测CHL细胞活性。结果 不同浓度下的镍冶炼烟尘 ( 6 2 5、 12 5 0、 2 5 0 0、 5 0 0 0、10 0 0 0 μg/ml)作用一定时间后 ,CHL细胞存活率下降 ,呈现出时间 剂量 反应关系。接触受试物 3 6h ,细胞生长半数抑制浓度IC50 为 2 1 3 6μg/ml。同时镜下观察细胞形态也发生改变。 结论 镍冶炼烟尘可以抑制CHL细胞生长 。

藤茶提取物的抗肿瘤作用研究

目的观察藤茶提取物(FL0810)体内外抗肿瘤的作用。方法采用S180腹水瘤模型观察FL0810体内抗肿瘤作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究FL0810对肿瘤细胞体外增殖的影响。结果 FL0810能延长S180腹水瘤小鼠生存时间,与模型对照组相比有显著差异(P<0.05);FL0810对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、人前列腺癌细胞DU145均有较强的体外增殖抑制作用,且呈现明显的剂量依赖性,抑制率随着药物浓度增加而增加;72 h半数抑制浓度(IC50)为别为208.71,226.14,150μg/mL。结论藤茶提取物在体内对S180的生长有一定的抑制作用,在体外对人乳腺癌和人前列腺癌有明显的抑制作用。

光敏化姜黄素的细胞毒理学检验

探究基于小鼠成纤维L929细胞的光敏化姜黄素的细胞毒理学。采用倒置显微镜观察细胞形态;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测L929细胞的相对增殖率,按通用标准评价细胞毒性;DNA片段化分析及Hoechst细胞核染色法检测细胞凋亡状况。结果表明:经不同浓度的光敏化姜黄素(5、10、20μmol/L)处理后,L929细胞生长良好,呈梭形或不规则形状,与对照组相比均无明显差异;毒性级别为"0"或"1",即无细胞毒性;在琼脂糖凝胶电泳图上未见"阶梯状"的条带出现,细胞核染色后也呈现正常的蓝色,即光敏化姜黄素不会引起L929细胞凋亡,对L929细胞没有毒性。

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖作用的影响

目的:探讨氯吡格雷(Clopidogrel)对人胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响.方法:体外培养人胃黏膜上皮细胞株GES-1,将含不同浓度氯吡格雷(0.01、0.1、0.5和1mmol/L)的培养液与GES-1细胞共同培养24、48及72h,采用MTT比色法计算细胞生长抑制率.以药物不同浓度对GES-1细胞生长抑制率作图,得到剂量反应曲线.依据Bliss法,利用SPSS15.0软件求出氯吡格雷的半数抑制浓度IC50和安全浓度IC90(存活率≥90%的药物浓度).倒置相差显微镜观察各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后细胞形态学变化,用流式细胞术膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法检测各浓度组氯吡格雷与GES-1细胞共同培养24h后对细胞凋亡的影响.结果:氯吡格雷对GES-1细胞的损伤呈浓度依赖性(F=11.546,P=0.002),无时间依赖性(F=13.455,P=0.003).氯吡格雷作用24h、48h和72h的IC50分别为0.36、0.51和0.35mmol/L,IC90分别为0.08、0.16和0.08mmol/L.光镜下可见药物作用后贴壁细胞数量减少,细胞变圆,悬浮,部分细胞核浓缩,细胞损害随药物浓度增加而增大.流式细胞术显示:空白对照组及0.01、0.1、0.5、1mmol/L氯吡格雷组凋亡率为4.7%、5.3%、14.7%、51.0%、60.5%.随着氯吡格雷药物浓度增加,GES-1细胞的凋亡率亦随之增加.结论:氯吡格雷可抑制人胃黏膜上皮细胞的增殖,具有剂量依赖性,诱导细胞发生凋亡.

刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响

目的研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCECs)生长的影响。方法采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基作为对照。神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSS11.0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析。结果成功进行了RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达。ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<0.001),且10%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<0.001)。结论ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂。

尼古丁对人牙龈成纤维细胞的增殖及IL-8表达的影响

目的：探讨尼古丁对体外培养人牙龈成纤维细胞（HGFs）的增殖及其分泌IL-8的影响。方法：组织块法原代培养HGFs，MTT法观察10、50、100、250、500、1000、2000μg/mL不同浓度尼古丁对其增殖的影响；取第4代HGFs分别与10、50、100、250、500、1000μg/mL不同浓度尼古丁共同培养72 h，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测HGFs培养上清中IL-8的含量。结果：50～2000μg/mL不同浓度的尼古丁均能明显抑制HGFs的增殖（P＜0．05），且呈浓度依赖性；10～500μg/mL尼古丁均能明显促进HGFs合成IL-8（P＜0．05），其中以100μg/mL浓度组的促进作用最强。结论：一定浓度尼古丁可抑制HGFs的增殖并促进其合成IL-8，提示尼古丁可能通过调控IL-8的表达而造成对牙周组织的破坏。

高强度皮秒脉冲电场诱导HeLa细胞生物电效应分析

为研究高强度ps脉冲电场(psPEF)诱导HeLa细胞的生物电效应,将脉冲电场参数组合(电场强度为250kV/cm,脉宽为800ps,脉冲个数为1 000、3 000、5 000,频率为3Hz)作用于人宫颈癌HeLa细胞。利用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测ps脉冲对细胞的生长抑制情况;钙离子指示剂(Fluo-3/AM)探针标记细胞,激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子体积分数的改变;蛋白质印迹法检测促凋亡蛋白Bax与凋亡抑制蛋白Bcl-2释放水平的改变。实验发现:细胞死亡率与施加脉冲个数正相关,且处理后12h抑制率最高;激光扫描共聚焦半定量分析显示,处理组细胞荧光强度明显高于对照组(检验水准P<0.05);蛋白质印迹法检测结果表明,处理组细胞内Bax表达量增加(P<0.05),Bcl-2释放量略有降低。上述结果表明:高强度ps脉冲通过诱导细胞凋亡进而抑制了HeLa细胞的增殖。

吉祥草及其果实不同提取部位的体外抗肿瘤活性筛选

目的探讨吉祥草及其果实的乙醇提取物及其不同溶剂萃取部位对肿瘤细胞的体外抑制作用,筛选抗肿瘤活性部位。方法以人肾透明细胞腺癌786-O细胞、人结肠癌HT-29细胞及人肺腺癌A549细胞为供试细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法对吉祥草及其果实的不同提取部位进行体外抗肿瘤活性筛选。结果吉祥草乙醇提取部位、正丁醇分离部位及其果实乙酸乙酯分离部位、正丁醇分离部位对肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用,其中吉祥草正丁醇分离部位对786-O、HT-29、A549的细胞毒性较强,其半数抑制浓度(IC5)0分别为:92.78,96.04,63.24 mg.L-1,果实正丁醇分离部位对786-O、HT-29、A549细胞有一定的增殖抑制作用,其IC50分别为:179.03,189.67,329.95 mg.L-1。结论吉祥草正丁醇分离部位是吉祥草主要的抗肿瘤活性部位。

灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法:运用MTT法研究灵芝孢子粉水溶性成份在体外对HepG2细胞的抑制作用,并利用裸小鼠的移植瘤模型研究灵芝孢子粉在体内对HepG2细胞的生长抑制作用.HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变.结果:TMTT实验结果表明灵芝孢子粉对HepG2细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72h达到最低,为2.14g/L.体内抑瘤实验结果显示灵芝孢子粉为2000mg/kg时,对裸小鼠移植瘤的抑制率为57.0%.镜下观察灵芝孢子粉治疗组肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.结论:高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.