METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

METTL3通过mRNA m6A甲基化促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移及分泌炎症因子

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移及分泌炎症因子的作用及机制。方法本研究纳入类风湿关节炎及骨关节炎患者各25例,留取滑膜组织,分别用RT-qPCR及免疫组化法检测METTL3表达水平,ELISA检测RNA m6A浓度;分离培养RA滑膜成纤维细胞,分为NC组、hi-METTL3(过表达METTL3)组、si-METTL3(敲低METTL3)组、STM2457(METTL3抑制剂)干预组,用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡、ELISA检测细胞培养上清液白介素-6(IL-6)、白介素-17A(IL-17A)、肿瘤坏死因子-κB活化受体配体(RANKL)、骨保护素(OPG)的浓度。结果与骨关节炎滑膜组织相比,RA滑膜组织RNA m6A表达显著增高(P<0.05),METTL3的表达显著增高(P<0.05)。过表达METTL3后,滑膜成纤维细胞m6A表达增加,细胞增殖、迁移能力显著提高,凋亡无明显变化,分泌细胞因子IL-6、RANKL显著增加,OPG显著减少(P<0.05)。干扰METTL3表达后,滑膜成纤维细胞m6A表达减少,细胞增殖、迁移显著减低,分泌细胞因子IL-6、RANKL显著降低,OPG显著增高(P<0.05);使用METTL3抑制剂STM2457干预后,滑膜成纤维细胞增殖、迁移显著减低,分泌细胞因子IL-6、RANKL显著降低,OPG显著增高(P<0.05);各组表达IL-17A无显著差异。结论METTL3可能通过RNA m6A甲基化修饰促进RA滑膜成纤维细胞增殖、迁移及促进IL-6、RANKL的表达,抑制OPG的表达。

METTL3调控miR-126介导TGF-β/Smad信号通路影响糖尿病肾病的机制研究

目的:建立糖尿病肾病(Diabetes Kidney Disease,DKD)大鼠模型,探讨METTL3调控糖尿病肾病的作用机制。方法:将SD大鼠适应性喂养7d后,按照随机数字法分为4组,正常对照组(Control组)、糖尿病肾病模型组(DKD组)、糖尿病肾病模型+METTL3干扰对照组(DKD+NC组)和糖尿病肾病模型+METTL3干扰组(DKD+siMETTL3组),每组8只。造模结束后收集大鼠血液标本及肾脏组织,采用全自动生化分析仪分析空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、24h尿蛋白(Uridine triphosphate,UTP)的表达水平,RT-qPCR法检测miR-126的基因表达,ELISA检测TGF-β1的表达,Western blotting检测METTL3、smad2、smad3、smad7的蛋白水平。结果:与Control组相比,DKD组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著升高(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著降低(P<0.05);与DKD组比较,DKD+siMETTL3组的FBG、BUN、UTP、TGF-β1、METTL3、smad2、smad3显著降低(P<0.05),体质量、miR-126、smad7显著升高(P<0.05)。结论:METTL3可以通过调控miR-126及TGF-β/smad通路,介导DKD的进展。

m6A甲基转移酶METTL3通过β‐arrestin 1/p65调控结肠癌细胞增殖

目的探讨m6A甲基转移酶METTL3通过β-arrestin 1/p65在结肠癌细胞中的作用机制。方法使用结肠癌细胞系HCT116,应用荧光定量PCR、Western blot测定结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1及增值蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达水平;利用细胞转染及细胞克隆实验,观察METTL3、β-arres-tin1和p65在结肠癌细胞增殖中的作用。结果METTL3和β-arrestin 1在结肠癌细胞中表达升高(以actin作为内参基因,与正常对照组比较,P<0.05)。结肠癌细胞转染METTL3-shRNA后,转染组灰度(0.36±0.046)较对照组(1.27±0.14)明显减少(P=0.0004);与对照组克隆数(465±42)比较,转染组细胞增殖(85±37)明显减少(P<0.05);细胞增殖蛋白PCNA、Cyclin D1及Cyclin E的表达也明显减少(分别为P<0.01、0.05、0.01);结肠癌细胞中METTL3、β-arrestin 1和p-p65蛋白表达均增高(均为P<0.05)。随后HCT116细胞沉默MET-TL3的表达,发现细胞中β-arrestin 1、p-p65蛋白的表达明显下降(均为P<0.05)。结论METTL3影响结肠癌细胞的增殖可能通过β-arrestin 1/p65调控参与肿瘤的发生发展。

METTL3介导的CCNE1 m^(6)A修饰调控乳腺癌细胞对哌柏西利敏感性的研究

目的:探讨RNA甲基转移酶METTL3介导的m^(6)A修饰对乳腺癌细胞哌柏西利敏感性的影响及作用机制。方法:将乳腺癌细胞MCF-7随机分为:si-NC组,si-METTL3组,si-CCNE1组,si-METTL3+OE-NC组和si-METTL3+OE-CCNE1组;qPCR和Western blot检测METTL3和CCNE1的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8检测哌柏西利敏感性;RIP实验检测METTL3和CCNE1 mRNA的相互作用;MeRIP-qPCR检测CCNE1的m^(6)A修饰水平;加入放线菌素D检测CCNE1 mRNA稳定性。结果:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1的mRNA水平显著升高(P<0.05);抑制METTL3或抑制CCNE1的表达显著提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性(P<0.05),且抑制METTL3显著降低CCNE1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05);RIP实验证实METTL3和CCNE1 mRNA具有相互作用,且CCNE1发生了m^(6)A修饰;与si-NC组相比,si-METTL3组中CCNE1的m^(6)A修饰水平显著减少,CCNE1 mRNA稳定性显著降低;进一步实验表明,与si-METTL3+OE-NC组相比,si-METTL3+OE-CCNE1组中哌柏西利敏感性显著降低(P<0.05)。结论:在MCF-7细胞中,METTL3和CCNE1表达均上调;抑制METTL3能够提高MCF-7细胞对哌柏西利的敏感性,这与METTL3介导的m^(6)A修饰调控CCNE1 mRNA稳定性有关。

N^(6)-甲基腺苷(m6A)转移酶METTL3和m6A调控LINC01465在肝细胞癌增殖转移中的作用机制

目的探讨甲基转移酶样3(METTL3)在肝癌细胞中调控m6A水平,影响长链非编码(lncRNA)LINC01465的表达,促进肝癌细胞增殖转移的机制。方法利用人类癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析METTL3在肝癌组织和正常肝组织中的表达差异及与患者预后的关系;用Western blot、RT-qPCR分析验证METTL3在细胞、组织中的表达;用m6A比色法验证肝癌细胞及正常肝细胞中的m6A水平;敲低METTL3后进行CCK-8、克隆形成、Transwell迁移、侵袭实验,研究METTL3对肝癌增殖转移的调控作用;转录组RNA m6A甲基化测序确定METTL3的下游调控基因LINC01465。RT-qPCR验证沉默METTL3后LINC01465的表达量,以及LINC01465在肝细胞癌中的表达水平。结果METTL3在肝癌组织和细胞中明显高表达且与患者预后较差相关;高表达的METTL3促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭;METTL3影响LINC01465的m6A水平及其表达量来促进肝细胞癌的发展进程。结论METTL3可通过m6A依赖的方式来影响LINC01465的表达水平,促进肝癌细胞增殖转移,METTL3可能成为肝癌预后及治疗的靶向标志物。

METTL3在同型半胱氨酸诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用

背景:高同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)血症与胰岛β细胞功能密切相关,但其具体分子机制尚不完全明确。目的:探讨METTL3在Hcy诱导小鼠胰岛β细胞自噬中的作用。方法:取第3,4代小鼠胰岛β细胞进行实验。①细胞模型建立和分组:对照组细胞不加入Hcy,Hcy组细胞加入浓度为100µmol/L Hcy干预48h;②按Lipofectamine^(TM) 2000说明书将过表达质粒Ad-METTL3及si-METTL3转染小鼠胰岛β细胞,设计3种不同干扰片段,PCR验证、筛选出干扰效率最好的干扰片段;③转染后实验分组:对照组、Hcy组、Ad-NC(阴性对照)+Hcy组、Ad-METTL3+Hcy组、si-NC(阴性对照)+Hcy组和si-METTL3+Hcy组;④采用qRT-PCR及Western blot检测细胞中METTL3及细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;ELISA法测定胰岛素水平来评价胰岛β细胞胰岛素分泌能力;分别过表达和干扰METTL3后检测细胞自噬相关蛋白及胰岛素水平。结果与结论:①与对照组相比,Hcy组自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平升高(P<0.05),而p62表达明显降低(P<0.05),胰岛素分泌能力明显下降(P<0.05);②与对照组相比,Hcy组中METTL3蛋白及mRNA水平表达均降低(P<0.05);③胰岛β细胞中沉默METTL3后,Hcy进一步上调了细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ的表达(P<0.05),而p62表达显著下降(P<0.05),细胞中胰岛素水平增加(P<0.05);过表达METTL3后,Hcy则使LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著降低且p62表达则增高(P<0.05);④结论:METTL3参与了Hcy诱导的胰岛β细胞自噬调控,对胰岛素的分泌发挥着调控作用。

长白猪METTL3基因克隆及其在卵母细胞中的表达规律

甲基转移酶样3(METTL3)是一种重要的甲基化酶,在调控细胞功能和命运方面发挥着关键作用。本试验旨在探究长白猪METTL3基因编码蛋白的生物学特性,及其在卵母细胞体外成熟前后和早期胚胎发育各时期的表达模式。试验采用PCR方法扩增、克隆长白猪METTL3基因的目的片段,并进行生物信息学分析。结果表明,长白猪METTL3基因CDS序列全长为1 743 bp,共编码580个氨基酸。长白猪METTL3基因氨基酸序列与家犬、牛、斑马鱼、人、山羊、绵羊等11个物种进行同源性比对,与绵羊的同源性最高(95.59%),与斑马鱼的同源性最低(68%)。长白猪METTL3蛋白二级结构主要由α-螺旋(33.45%)、无规则卷曲(50.34%)、延伸链(12.41%)和β-转角(3.79%)构成,存在59个磷酸化位点,并且无信号肽结构。RT-qPCR结果表明,METTL3在长白猪卵母细胞体外成熟前后和孤雌激活后的胚胎发育各时期均有表达,其中在囊胚时期的表达量最高,在生发泡期(GV)表达量最低。本研究克隆得到了长白猪METTL3基因,并揭示了其在长白猪卵母细胞体外成熟前后和早期胚胎发育各时期的表达模式,为阐明METTL3在长白猪卵母细胞和早期胚胎发育中的作用奠定了基础。

METTL3通过YTHDF2/AKT1/PPARγ调控人骨髓间充质干细胞成脂分化的机制研究

目的:探讨N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)甲基化酶甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在体外调控人骨髓间充质干细胞(MSCs)向脂肪细胞分化的作用机制。方法:构建METTL3、AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和YTH m^(6)A RNA结合蛋白F2(YTHDF2)慢病毒载体,包装慢病毒并感染MSCs;采用成脂分化试剂盒诱导各组MSCs分化为脂肪细胞,利用油红O染色检测各组的脂肪细胞形成情况;采用分子克隆技术构建METTL3突变重组载体以证实METTL3的m^(6)A关键位点对靶基因的调控作用;利用放线菌素D作用于YTHDF2过表达的MSCs以探究阅读蛋白YTHDF2对AKT1 mRNA和蛋白表达的影响;采用RNA pull-down结合银染和Western blot实验检测可能发生甲基化修饰的片段与识别蛋白的结合情况。结果:m^(6)A甲基化酶METTL3以PPARγ/AKT1依赖的方式抑制骨髓MSCs的脂肪形成,并且以m^(6)A修饰阅读蛋白YTHDF2依赖的方式抑制AKT1的蛋白表达。YTHDF2可识别并结合发生m^(6)A修饰的AKT1编码序列(CDS),降低其表达水平,抑制MSCs脂肪形成过程。结论:m^(6)A甲基化酶METTL3通过YTHDF2/AKT1/PPARγ通路调控人骨髓MSCs成脂分化过程。本研究为从肿瘤微环境角度寻找急性髓系白血病治疗新靶点提供了理论依据。

METTL3介导的m6A甲基化调控脂多糖诱导的内皮细胞通透性变化

目的探讨甲基化转移酶3(METTL3)介导的N6-甲基腺苷(m6A)甲基化修饰参与调控脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞通透性变化的分子生物学机制。方法选用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行体外培养,使用50、125、250、500、1000、2000 ng/ml的LPS干预HUVECs 24 h,应用Real-time PCR检测METTL3 mRNA的表达;选用500 ng/ml的LPS干预HUVECs 24 h,检测m6A甲基化水平,应用细胞通透性实验检测细胞通透性,应用Real-time PCR和Western blot检测细胞间连接蛋白(Claudin-5、Occludin和VE-caherin)mRNA和蛋白表达;构建METTL3过表达稳转细胞株,检测METTL3过表达时内皮细胞m6A甲基化水平及通透性的变化。结果与对照组相比,LPS抑制HUVECs METTL3 mRNA表达,使得内皮细胞m6A甲基化下调,细胞通透性升高,细胞间连接蛋白(Claudin-5、Occludin和VE-caherin)mRNA和蛋白表达下降;当METTL3过表达时,内皮细胞m6A甲基化水平增强,LPS诱导的内皮细胞通透性增加得以改善。结论METTL3介导的m6A甲基化能够改善脓毒症诱导的内皮细胞通透性增加。

肺腺癌组织中METTL3蛋白表达水平及其与18 F-FDG最大标准摄取值的相关性

目的探讨肺腺癌(LUAD)组织中甲基转移酶3(METTL3)蛋白表达水平及其与18 F-氟脱氧葡萄糖(18 F-FDG)最大标准摄取值(SUVmax)的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月在该院进行肺部手术前接受18 F-FDG PET/CT扫描的所有LUAD患者资料,共收集89例LUAD患者的肿瘤组织标本及其相匹配的30例癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测LUAD组织中METTL3蛋白表达水平。对所有患者随访1年,并进行生存分析。采用Spearman相关对METTL3蛋白表达评分与PET/CT参数的相关性进行分析。结果TCGA数据库癌症基因组图谱数据显示,483例LUAD组织中METTL3 mRNA表达水平明显高于59例正常肺组织,差异有统计学意义(P<0.05)。89例LUAD组织中METTL3蛋白阳性表达率为52.81%(47/89),与相匹配的30例癌旁组织比较,LUAD组织中METTL3蛋白阳性表达率(56.67%)明显高于癌旁组织(16.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、肿瘤分化程度和淋巴结转移LUAD患者肿瘤组织METTL3蛋白表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。与METTL3阴性组比较,METTL3阳性组SUVmax明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示,LUAD患者METTL3蛋白表达评分与SUVmax呈明显正相关(r=0.667,P<0.001)。SUVmax预测METTL3阳性表达的受试者工作特征曲线下面积为0.851(95%CI:0.773~0.928),对应的最佳截断值为10.55,灵敏度和特异度分别为83.0%和73.8%。随访期间,METTL3蛋白阳性组较阴性组中位总生存期更短,且总生存率更低,差异有统计学意义(χ^(2)=9.726,P=0.002)。结论LUAD组织中METTL3有望成为新的病理诊断和预后标志物。LUAD组织中METTL3蛋白表达评分与18 F-FDG SUVmax呈正相关,18 F-FDG SUVmax可能是反映METTL3蛋白表达评分的无创检测工具。

KAT8通过增强METTL3表达促进结直肠癌细胞系增殖

目的探究赖氨酸乙酰转移酶8(KAT8)在结直肠癌细胞增殖过程中所扮演的角色及潜在作用机制。方法通过TCGA数据库的RNA-seq数据分析KAT8在结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织的表达情况;集落形成实验和CCK8法检测KAT8敲低细胞的增殖;利用GEO数据库对KAT8敲低细胞与对照细胞的差异基因进行分析,并进一步进行功能通路富集分析;利用cBioPortal网站分析结直肠癌数据库中KAT8与调控N6-甲基腺苷(m6A)相关基因的相关性;Western blot检测KAT8和METTL3的蛋白表达。结果与人正常结直肠组织相比,KAT8在结直肠癌中高表达(P<0.05);敲低或选择性抑制KAT8抑制结直肠癌细胞系增殖(P<0.05);敲低KAT8降低结直肠癌细胞总RNA的m6A修饰水平(P<0.05);敲低KAT8抑制METTL3的表达(P<0.05);过表达METTL3能够逆转敲低KAT8抑制的细胞增殖(P<0.05)。结论KAT8通过增强METTL3介导的m6A修饰进而促进结直肠癌细胞系的增殖。

老年带状疱疹急性期METTL3及Gal⁃3表达水平对带状疱疹后遗神经痛的预测价值

目的研究老年带状疱疹(herpes zoster,HZ)病人急性期外周血甲基转移酶样因子3(METTL3)及半乳糖凝集素3(Gal-3)的表达情况,并探讨其预测带状疱疹后遗神经痛(postherpetic neuralgia,PHN)的价值。方法选取我院2019年1月至2022年1月诊治的190例老年HZ病人为研究对象,另选取50例健康体检的老年人为对照组,检测受试对象外周血METTL3 mRNA及血清Gal-3蛋白表达水平并进行比较分析。根据HZ病人是否发生PHN分为PHN组(n=44)和无PHN组(NPHN组)(n=146),采用Logistic回归分析PHN的相关因素,绘制ROC曲线评估METTL3 mRNA及Gal-3蛋白表达水平对PHN的预测价值。结果HZ病人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中METTL3 mRNA相对表达量低于对照组,血清Gal-3蛋白水平高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。老年PHN病人METTL3 mRNA表达水平与VAS评分呈负相关(r=-0.612,P<0.05),血清Gal-3蛋白水平与VAS评分呈正相关(r=0.604,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,病程(OR=1.756,95%CI:1.253~2.460)、Gal-3蛋白(OR=1.318,95%CI:1.025~1.693)是影响老年PHN发生的风险因素,METTL3 mRNA(OR=0.742,95%CI:0.581~0.948)是保护因素。METTL3 mRNA及Gal-3蛋白联合预测老年PHN的曲线下面积为0.924(95%CI:0.843~0.958),高于单项检测0.812(0.774~0.861)、0.859(0.811~0.897),差异具有统计学意义(Z=4.312、3.363,均P<0.05)。结论老年急性期HZ病人外周血PBMC中METTL3 mRNA表达降低,血清Gal-3蛋白表达升高,两者联合对老年PHN的发生具有较高的预测价值。

甲基转移酶METTL3介导m6A甲基化调控犬JBMMSCs成骨分化

目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P<0.001)及蛋白水平(P<0.01)下降。检测两组细胞的增殖、迁移、碱性磷酸酶活性、钙沉积以及成骨相关因子骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA及蛋白水平。结果:与沉默对照(siNC)组相比,siMETTL3组培养24、48、72、96 h的增殖活性降低(P<0.001),24 h后细胞迁移能力下降(P<0.05)。成骨诱导7 d后siMETTL3组碱性磷酸酶活性下降,21 d后矿化沉积较siNC组少。qRT-PCR及Western Blot显示,OCN的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平降低。结论:沉默METTL3可抑制JBMMSCs的增殖、迁移及成骨分化。

鸡脾脏METTL3、METTL14基因对肠炎沙门氏菌感染的表达调控

为探讨鸡METTL3、METTL14基因对肠炎沙门氏菌感染的调控作用,该试验将40只2日龄肠炎沙门氏菌阴性广西瑶鸡(父本)和济宁百日鸡(母本)杂交的F1代随机均分为2组,试验组和对照组分别接种0.3mL肠炎沙门氏菌菌液及PBS,在接种后第1天和第7天鸡的脾脏组织提取总RNA,采用实时荧光定量PCR检测不同时间点METTL3、METTL14基因的表达水平。结果显示:METTL3和METTL14具有相似的表达趋势,均在感染后第1天试验组高于对照组(P<0.05),感染后第7天试验组低于对照组,但只有METTL14差异显著(P<0.05)。可见,鸡感染肠炎沙门氏菌后,可以引起脾脏组织METTL3和METTL14基因的差异表达。

探讨METTL3在Kummell疾病中的生物学作用

N6-甲基腺苷(m6A)在真核生物中最丰富的mRNA修饰,其甲基转移酶样3 (METTL3)是最重要的催化亚基。近年研究表明,METTL3在多种疾病中起着关键作用,其中骨质疏松的发生中成骨细胞及破骨细胞相关的RNA修饰均受到METTL3的调节。成骨细胞及破骨细胞在Kummell发生中有生物学相关性,而METTL3在Kummell中的表达情况以及临床意义尚未得到强调。故在这里,我们总结了METTL3的表达与Kummell病及其他骨骼疾病的发生发展中的关联性,为Kummell疾病的发生进展机制研究提供理论基础和研究思路。

METTL3调控miR-301a促进缺氧环境下内皮集落形成细胞血管生成

目的:探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞(ECFCs)血管生成能力的影响及甲基转移酶样3(METTL3)的调控作用。方法:分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L氯化钴(CoCl_(2))的培养基处理细胞24 h,对照组CoCl_(2)浓度为0。CCK-8检测不同浓度CoCl_(2)对ECFCs增殖的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,筛选适宜浓度的CoCl_(2)用于缺氧环境构建。Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力。RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况。构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs,将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组。RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化。结果:与正常对照组比较,50μmol/L和100μmol/L的CoCl_(2)培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖(均P<0.0001),HIF-1α随着CoCl_(2)浓度升高而高表达(P<0.01)。100μmol/L CoCl_(2)组中ECFCs迁移能力和血管生成能力提高(均P<0.01),VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高(均P<0.01),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高(均P<0.01)。与NC-shRNA组比较,METTL3-shRNA组中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA表达降低(均P<0.05),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力,METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成。

急性心肌梗死患者急诊PCI术前血清METTL3和脂蛋白a表达与术后左心室重构发生的剂量反应关系

目的分析急性心肌梗死(AMI)患者急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术前血清甲基化转移酶样蛋白3(METTL3)、脂蛋白a(Lpa)表达与术后左心室重构(LVR)发生的剂量反应关系。方法采取前瞻性研究,选择2021年4月至2023年4月于湖北省中西医结合医院收治的急诊PCI的AMI患者作为研究对象。采集患者PCI术前静脉血,检测血清METTL3、Lpa水平。患者急诊PCI术后随访1年,根据随访期间LVR发生情况分组并收集基线资料。采用二元Logistics回归分析血清METTL3相对表达量、Lpa水平对AMI患者急诊PCI术后LVR发生的影响;采用接受者操作特征曲线(ROC)评估血清METTL3相对表达量、Lpa水平预测AMI患者急诊PCI术后LVR发生价值;采用样条函数与Logistics回归相结合的限制性立方样条法分析血清METTL3相对表达量、Lpa水平与AMI患者急诊PCI术后LVR发生的剂量反应关系。结果LVR组METTL3相对表达量、Lpa水平高于无LVR组(P<0.05);二元Logistics回归结果显示,血清METTL3相对表达量和Lpa水平升高是AMI患者急诊PCI术后LVR发生的危险因素(OR>1,P<0.05);血清METTL3相对表达量和Lpa水平升高可增加AMI患者急诊PCI术后LVR发生风险,特别是当血清METTL3相对表达量>1.42、Lpa>3.60mmol/L时,AMI患者急诊PCI术后LVR发生风险随METTL3相对表达量和Lpa水平升高而升高。结论AMI患者急诊PCI术前血清METTL3相对表达量和Lpa水平与术后左心室重构密切相关,且术后LVR发生风险随血清METTL3相对表达量和Lpa水平升高而升高。

结直肠癌组织中METTL3、miR-23a-3p表达与病理参数及术后肝转移的关系

目的探讨结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)组织中甲基转移样酶3(Methyltransferase-like protein 3,METTL3)、微小核糖核酸-23a-3p(miRNA-23a-3p,miR-23a-3p)表达与病理参数及CRC术后肝转移的关系。方法选取2018年3月至2021年6月中国医科大学附属盛京医院收治的145例CRC患者,患者均进行CRC根治术,术中取患者CRC组织及癌旁组织样本,采用荧光定量聚合酶链反应法检测METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平,分析不同病理参数的CRC组织METTL3 mRNA、miR-23a-3p表达情况。收集患者临床病理资料,采用Cox比例风险模型对预后因素进行单变量和多变量分析。术后随访2年,统计患者术后肝转移发生情况,并采用受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p对CRC术后肝转移的预测价值。结果CRC组织中METTL3 mRNA、miR-23a-3p水平均高于癌旁组织(P<0.05);国际抗癌联盟肿瘤通用分期(Tumor node metastasis,TNM)Ⅲ期CRC患者METTL3 mRNA水平高于Ⅱ期,低分化CRC患者METTL3 mRNA水平高于中-高分化(P<0.05);TNMⅢ期CRC患者miR-23a-3p水平高于Ⅱ期,发生淋巴转移CRC患者METTL3 mRNA水平高于未发生淋巴转移CRC患者(P<0.05);单因素及多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅲ期、低分化、淋巴转移、METTL3 mRNA及miR-23a-3p高水平是CRC术后肝转移的独立危险因素(P<0.05);ROC分析结果显示,血清METTL3 mRNA、miR-23a-3p单独及联合预测CRC术后肝转移的曲线下面积(Area under the curve,AUC)分别为0.748(0.669~0.816)、0.778(0.701~0.842)、0.882(0.818~0.930),二者联合检测预测CRC术后肝转移的效能高于单独检测(Z=2.387、2.027,P均<0.05)。结论CRC组织中METTL3、miR-23a-3p表达均异常升高,METTL3与TNM分期、分化程度相关,miR-23a-3p与TNM分期、淋巴转移相关,METTL3、miR-23a-3p联合对预测CRC术后肝转移具有更高价值。

METTL3/DUXAP8轴促进涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究甲基转移酶样3(METTL3)介导的m6A修饰调控双同源盒A假基因8(DUXAP 8)对涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其潜在的分子机制。方法:通过肿瘤组织和癌旁组织全转录组测序筛选出差异基因DUXAP 8并进行qRT-PCR验证;采用m6A修饰位点预测网站SRAMP预测DUXAP 8上的m6A修饰位点;qRT-PCR、Western blot检测m6A修饰和上皮-间质转化(EMT)相关基因mRNA及蛋白水平。干扰或过表达METTL3和DUXAP 8,通过CCK-8、划痕、侵袭实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力;结合MeRIP-qPCR检测METTL3和DUXAP 8的相关性。结果:DUXAP 8在SACC肿瘤组织的表达显著高于癌旁组织(P<0.05);干扰DUXAP 8可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及EMT相关基因表达水平(P<0.05);DUXAP 8上存在多个可信度较高的m6A修饰位点;METTL3在肿瘤组织高表达且较其他相关基因差异最为显著(P<0.05);METTL3作为甲基转移酶调控DUXAP 8的表达;下调METTL3可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并可部分逆转DUXAP 8过表达对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:METTL3介导的m6A修饰上调DUXAP 8的表达,从而促进了SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。