鸡脾脏METTL3、METTL14基因对肠炎沙门氏菌感染的表达调控

为探讨鸡METTL3、METTL14基因对肠炎沙门氏菌感染的调控作用,该试验将40只2日龄肠炎沙门氏菌阴性广西瑶鸡(父本)和济宁百日鸡(母本)杂交的F1代随机均分为2组,试验组和对照组分别接种0.3mL肠炎沙门氏菌菌液及PBS,在接种后第1天和第7天鸡的脾脏组织提取总RNA,采用实时荧光定量PCR检测不同时间点METTL3、METTL14基因的表达水平。结果显示:METTL3和METTL14具有相似的表达趋势,均在感染后第1天试验组高于对照组(P<0.05),感染后第7天试验组低于对照组,但只有METTL14差异显著(P<0.05)。可见,鸡感染肠炎沙门氏菌后,可以引起脾脏组织METTL3和METTL14基因的差异表达。

METTL14介导的m^(6)A甲基化修饰Snail-1蛋白对食管癌细胞侵袭和上皮间质转化特性的影响

目的:探讨METTL14介导的m^(6)A甲基化修饰Snail-1蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)侵袭和上皮间质转化(EMT)中的影响和作用机制。方法:通过GEPIA分析ESCC患者METTL14的表达情况及对其生存期进行评估;实验分为si-NC组和si-METTL14组;qPCR检测METTL14基因的表达;Western blot检测Snail-1和EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达;Transwell实验检测细胞侵袭能力;MeRIP-qPCR检测m^(6)A修饰Snail-1的水平;加入放线菌素D(actinomycin D)检测Snail-1 mRNA稳定性。结果:ESCC患者和细胞系中METTL14的表达显著升高(P<0.01);METTL14高表达患者的生存期明显缩短(P<0.01)。si-METTL14组中METTL14 mRNA和蛋白的表达水平都显著降低(P<0.01);E-cadherin表达显著上升(P<0.01),而N-cadherin和Vimentin的表达显著降低(P<0.01);细胞侵袭个数明显减少(P<0.01)。进一步发现,si-METTL14转染显著下调Snail-1的mRNA和蛋白水平(P<0.01),且显著降低m^(6)A Snail-1水平(P<0.01)以及Snail-1 mRNA的稳定性(P<0.01)。Snail-1拯救实验证明与si-METTL14+OE-NC组相比,si-METTL14+OE-Snail-1组中E-cadherin的表达显著降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin的表达显著升高(P<0.01)。结论:在ESCC细胞中,METTL14和Snail-1的表达均上调;敲低METTL14可显著降低Snail-1 mRNA的稳定性,而减少其表达,从而抑制ESCC细胞侵袭和EMT过程。

METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化对宫颈癌细胞凋亡和增殖的影响

目的探讨METTL14通过调控巨噬细胞分化抑制宫颈癌病理性发展及相关机制。方法检测宫颈癌病变样本METTL14 m RNA和蛋白,以及IL-6、iNOS、Arg-1和CD206表达变化。PMA诱导THP-1细胞转化为巨噬细胞,慢病毒过表达或抑制METTL14表达,检测IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化以及PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路相关蛋白表达情况。随后加入PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路激动剂和抑制剂,检测过表达或抑制METTL14后,巨噬细胞IL-6、iNO、Arg-1和CD206表达变化,并取其上清制成条件培养基,孵育Hela细胞,检测细胞凋亡和增殖情况。结果1)宫颈癌病变组织中METTL14 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),巨噬细胞M1型标志物IL-6和iNOS表达明显降低(P<0.05),而M2型标志物Arg-1和CD206表达明显升高(P<0.05)。2)巨噬细胞过表达METTL14后,IL-6和iNOS表达明显升高(P<0.05),而Arg-1和CD206表达明显降低(P<0.05),M1/M2比例升高;抑制METTL14表达后,M1型标志物降低(P<0.05),M2型标志物升高(P<0.05),M1/M2比例降低。3)巨噬细胞中转染OE-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被抑制(P<0.05);加入PI3K/AKT激动剂后,M1型标志物降低而M2型标记物升高(P<0.05),M1/M2比例降低;OE-METTL14可逆转此趋势。Sh-METTL14慢病毒组PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路被激活(P<0.05),加入PI3K/AKT抑制剂后,M1型标志物升高而M2型标记物降低(P<0.05),M1/M2比例升高;Sh-METTL14可逆转此趋势。4)取转染OE-METTL14慢病毒后的巨噬细胞上清培养Hela细胞,可见细胞凋亡明显增多(P<0.05),增殖明显减少(P<0.05)。Sh-METTL14组的Hela细胞则表现出细胞凋亡减少(P<0.05),增殖增多(P<0.05)。结论METTL14通过PI3K/AKT/GSK3β/β-catenin信号通路调控巨噬细胞分化可能有促进宫颈癌细胞凋亡,抑制增殖的作用。

脾脏METTL3、METTL14基因对鸡空肠弯曲菌感染的表达调控

m6A甲基化修饰(N6-Methyladenosine Modifications)是常见的RNA修饰之一,可以改变多种生理过程,且与免疫功能的调节密切相关。METTL3和METTL14是甲基转移酶的2个重要组成部分。为探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)感染对鸡METTL3、METTL14基因表达的影响,本实验将120只3日龄空肠弯曲菌阴性SPF鸡随机分为2组,对照组60只接种PBS,实验组60只接种空肠弯曲菌菌液。分别在接种后4、8、12、16、20、24 h采集实验组、对照组脾脏组织样品并提取总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术,检测不同时间点METTL3、METTL14基因在实验组、对照组中的表达水平。结果显示,接种后4、8、20 h,实验组METTL3、METTL14基因的表达量均高于对照组,接种后12、16、24 h,实验组METTL3、METTL14基因的表达量均低于对照组。本研究初步揭示了METTL3、METTL14基因在空肠弯曲菌感染中发挥的表达调控作用,这种调控作用可能具有时间特异性,该结果为进一步探讨METTL3和METTL14基因在空肠弯曲菌感染中的分子调控机制提供理论依据。

湖羊m^(6)A甲基转移酶METTL14基因CDS序列克隆及表达谱分析

【目的】克隆湖羊甲基转移酶样蛋白14基因(METTL14)编码区(CDS)序列,探究其分子特征及组织表达分布规律,为揭示METTL14基因调控湖羊肌肉发育的特异性分子机制打下基础。【方法】提取湖羊肌肉组织RNA并反转录合成cDNA,以cDNA为模板扩增METTL14基因CDS序列,通过ProtParam、ProtScale、SignaIP-6.0等在线软件进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR进行湖羊METTL14基因组织表达谱分析。【结果】湖羊METTL14基因CDS序列全长1371 bp,共编码456个氨基酸残基;湖羊METTL14基因CDS序列与黄牛、人类、小鼠、大鼠、猕猴、山羊、弯角剑羚、马、双峰驼、野牦牛、野猪和水牛等12个参考物种的METTL14基因核苷酸序列相似性为89.28%~99.78%,对应的METTL14氨基酸序列相似性为98.66%~100.00%;基于METTL14基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,湖羊与山羊的亲缘关系最近,与双峰驼的亲缘关系较远。湖羊METTL14蛋白分子式为C2277H3575N669O709S16,分子量为52179.45 Da,理论等电点(pI)为5.89,不存在信号肽,无跨膜结构域,具有较强的亲水性,属于不稳定蛋白,主要分布在细胞核(占69.6%);湖羊METTL14蛋白包含12个α-螺旋和10个β-折叠,但以无规则卷曲为主。METTL14基因在湖羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、睾丸、肌肉及皮下脂肪中均有表达,以心脏中的相对表达量最高,而肝脏中的相对表达量最低。【结论】METTL14作为m^(6)A甲基化的核心蛋白,在物种进化过程中高度保守;METTL14基因在湖羊肌肉和脂肪等多个组织中均有表达,且表达量与机体的代谢活动相关,可作为调控湖羊肌肉生长发育的候选基因进一步研究。

METTL14上调miR-141的m6A修饰抑制ZEB1促进肺成纤维细胞增殖与炎症

目的:探究METTL14是否通过调控pri-miR-141的m6A修饰参与调控成纤维细胞的增殖和炎症因子分泌。方法:使用METTL14过表达慢病毒转染MRC-5细胞,采用qPCR和western blot检测METTL14和ZEB1的表达量;采用CCK-8和流式细胞术检测METTL14对MRC-5增殖和凋亡的影响;IL-2,IL6和TNF-α的ELISA试剂盒检测METTL14对MRC-5分泌炎症因子的影响;采用meRIP检测pri-miR-141上的m6A修饰位点,RIP检测pri-miR-141与METTL14的结合情况。结果:在MRC-5细胞中成功过表达METTL14基因;METTL14高表达促进MRC-5细胞增殖,抑制其凋亡,并促进MRC-5细胞分泌炎症因子;pri-miR-141上存在m6A修饰位点,且pri-miR-141能够和METTL14直接结合;METTL14高表达增加miR-141的表达量,并抑制ZEB1 mRNA与蛋白表达。结论:METTL14通过增加pri-miR-141的m6A修饰位点促进miR-141的表达,抑制ZEB1从而促进成纤维细胞的增殖和炎症因子的分泌。

人源m^(6)A甲基转移酶复合物METTL3-METTL14的表达、纯化和透射电镜观察

N^(6)-腺苷酸甲基化(m^(6)A)是一种重要的mRNA和长链非编码RNA的内部修饰方式,通过影响RNA代谢的各个方面,参与调控人体一系列生理过程。METTL3和METTL14组成的甲基转移酶复合物可以有效地催化甲基基团的转移,但其具体的催化机制尚不完全清楚。本研究通过进行蛋白质结构无序度分析及三维模型预测发现,二者除MTD结构域外其他区域基本处于无序或低复杂度状态。为了进一步探索METTL3-METTL14复合物实现甲基基团转移的结构基础,本研究在哺乳动物细胞HEK293S GnTI-中成功表达了全长序列的人源METTL3-METTL14蛋白复合物,并通过镍柱亲和层析、离子交换及凝胶过滤层析获得了高纯度的METTL3-METTL14蛋白复合物,并推测全长METTL3和METTL14以1∶1的比例组成复合物。通过120kV透射电子显微镜观察发现,蛋白颗粒大小均一,颗粒直径在10~12nm。

METTL14 upregulates m6A modification of pri‑miR‑141 inhibiting ZEB1 to promote proliferation and inflammation of lung fibroblasts

Objective: To explore whether METTL14 is involved in regulating the fibroblast proliferation and inflammatory cytokine secretion by regulating the m6A modification of pri‑miR‑141. Methods: MRC‑5 cells were transfected via METTL14 overexpression lentivirus to increase METTL14 expression. Levels of METTL14 and ZEB1 were measured by qPCR and western blot. The effect of METTL14 on MRC‑5 proliferation and apoptosis was determined by CCK‑8 and flow cytometry, respectively. The ELISA kits of IL‑2, IL6 and TNF‑α were used to detect the effect of METTL14 on MRC‑5 inflammatory secretion. m6A modification site on pri‑miR‑141 was detected by meRIP. The binding site between pri‑miR‑141 and METTL14 was determined by RIP. Results: We successfully upregulated METTL14 expression in MRC‑5 cells. Elevated METTL14 promoted MRC‑5 cell proliferation, suppressed its apoptosis and promoted inflammatory factors secretion in MRC‑5 cells. pri‑miR‑141 had m6A modification sites. pri‑miR‑141 can directly bind to METTL14. METTL14 upregulation increased miR‑141 while suppressed ZEB1 expression. Conclusion: METTL14 can promote the expression of miR‑141 by increasing the m6A modification site of pri‑miR‑141, and inhibit ZEB1, thereby promoting the proliferation of fibroblasts and the secretion of inflammatory factors.

METTL14在非小细胞肺癌中的表达及对其增殖、迁移的作用

目的 探讨METTL14在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达及作用。方法 CPTAC数据库分析METTL14在NSCLC肿瘤组织和正常组织中的表达差异及不同肿瘤分期中的表达情况;从临床收集10例癌旁组织标本及30例NSCLC组织标本,通过免疫组织化学方法检测METTL14的表达;Western blotting检测多种NSCLC细胞系中METTL14的表达;干扰Hcc827细胞中METTL14,克隆形成实验检测METTL14干扰前后细胞增殖情况;Transwell检测METTL14干扰前后细胞迁移情况;在H1299细胞中过表达METTL14,克隆形成实验检测METTL14过表达前后细胞增殖情况;Transwell检测METTL14过表达前后细胞迁移情况。结果 CPTAC数据库分析表明,METTL14在NSCLC肿瘤组织中的表达较正常组织显著上调,并与临床分期呈正相关。METTL14在收集的NSCLC组织中的表达较癌旁组织显著上调;METTL14在NSCLC细胞系Hcc827表达较高,在H1299细胞表达较低。干扰METTL14显著抑制Hcc827细胞的增殖、迁移能力;过表达METTL14显著增强H1299细胞的增殖、迁移能力。结论 METTL14在NSCLC肿瘤组织高表达并促进NSCLC细胞的增殖、迁移。

METTL14介导的卵巢癌细胞促进肿瘤发生发展的分子机制初探

据报道,甲基转移酶样14(METTL14)在多种癌症中的关键作用和分子机制方面取得了进展,尤其是在胃肠道癌症中,包括肝癌、结直肠癌、胃癌和胰腺癌等~([1])。最近的研究表明,METTL14的失调与参与各种癌症恶性发展的表型密切相关,包括增殖、转移、凋亡、耐药性、肿瘤干细胞样特征、免疫治疗、慢性炎症和糖脂代谢等~([2])。但METTL14在卵巢癌当中可能发挥的重要作用及其机制尚不清楚。本研究分析了癌症基因组图谱数据库(TCGA)中的卵巢癌数据.

METTL14通过激活PI3K-AKT-mTOR调控免疫细胞对卵巢癌细胞增殖、转移的影响

针对卵巢癌细胞的增殖与转移,主要探究m6A甲基化转移酶METTL14的临床效果,对潜在分子机制进行深入的探讨。方法 利用小干扰RNA敲减卵巢癌细胞系SKOV3的METTL14分子,使用CCK8,transwell,划痕实验等探究敲减前后细胞的增殖、转移功能,比较我院不同类型的卵巢癌样本中METTL14表达量,通过对TCGA数据库中卵巢癌患者进行基因富集分析(GSEA),寻找METTL14下游通路,Western blot及qPCR检测下游通路。结果 METTL14促进卵巢癌细胞的增殖和转移功能,GSEA提示METTL14下游可能和PI3K-AKT-mTOR通路及免疫指标相关,经过我院卵巢癌患者样本的相关分析与证实,在卵巢癌分析以及淋巴结转移方面METTL14拥有更高的表达,其下游可能是通过促进CD4,CD8,单核细胞及巨噬细胞的功能及PI3K-AKT-mTOR通路实现。结论 过表达METTL14可以激活卵巢癌组织中的免疫细胞及卵巢癌细胞中的PI3K-AKT-mTOR促进卵巢癌细胞增殖和转移。

METTL14基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构和骨密度及氧化应激的影响

目的 研究人甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因敲除对骨质疏松小鼠骨微结构、骨密度及氧化应激的影响。方法 12只野生型小鼠随机分为对照组和模型组,每组6只。对照组小鼠切除卵巢附近脂肪组织;模型组小鼠切除双侧卵巢构建骨质疏松小鼠模型;另取6只切除双侧卵巢的METTL14基因敲除小鼠作为敲低组。术后8周,使用micro-CT扫描仪测量小鼠右股骨骨密度和骨微结构相关指标,使用ELISA检测小鼠血清中PINP、CTX、MDA和SOD水平。结果 模型组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,敲低组小鼠骨密度、BV/TV、Tb. N、Tb. Th、SOD、PINP、CTX水平显著低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于对照组,敲低组小鼠Tb. Sp、MDA水平显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 METTL14基因敲除可抑制骨质疏松小鼠骨密度,破坏骨微结构,并促进氧化应激。

单基因METTL14在泛癌中的综合分析

目的联合多数据库分析METTL14在肿瘤中的表达及其与肿瘤微环境之间的关系。方法从相关数据库中获取各个肿瘤及正常组织中的基因数据,分析METTL14在不同正常组织和不同肿瘤组织中的表达水平;比较METTL14的表达水平高低与肿瘤预后之间的关系;分别分析METTL14表达与免疫细胞评分和免疫检查点的相关性;分析METTL14表达与MMRs以及DNMTs的表达关系。结果METTL14在大多数实体肿瘤中表达水平较正常组织低;KIRC、MESO、READ中METTL14的低表达可能与患者的不良预后有关,K⁃M生存曲线显示KICH、LGG中METTL14的高表达;METTL14的表达水平与BLCA、COAD、HNSC中的免疫浸润水平最显著相关;各个肿瘤中METTL14的表达水平与多个检查点呈正相关;泛癌中METTL14的表达水平与MMRs基因及DNMTs的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论本研究全面揭示了METTL14在不同肿瘤发生和发展过程中的重要作用,为METTL14作为未来肿瘤预后评估以及免疫治疗的关键靶点提供新的见解。

脂多糖诱导人和小鼠肠上皮细胞炎症并上调细胞甲基转移酶样蛋白3(METTL3)和METTL14表达

目的探讨N_(6)-甲基腺苷(m^(6)A)修饰在HIEC-6人肠上皮细胞与MODE-K小鼠肠上皮细胞炎性状态下的变化。方法采用不同剂量的脂多糖(LPS)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞10 h或相同剂量LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α分别刺激HIEC-6细胞与MODE-K细胞(0、3、6、12、24)h。实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达;实时定量PCR和Western blot法分别检测m^(6)A修饰相关分子甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、METTL14、METTL16、Wilms瘤1相关蛋白(WTAP)、烷基化修复同源蛋白5(ALKBH5)、脂肪量和肥胖相关蛋白(FTO)、YTH结构域蛋白1(YTHDC1)、YTHDC2的mRNA和蛋白表达。结果与对照组相比,HIEC-6细胞与MODE-K细胞在LPS诱导的时间依赖与剂量依赖模型中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平增高,并同步上调METTL3和METTL14 mRNA与蛋白水平。结论LPS可以诱导肠上皮细胞出现炎症反应,并上调肠上皮细胞中METTL3和METTL14的表达。

METTL14促进肝纤维化的机制研究

目的研究RNA甲基化转移酶METTL14对肝星状细胞系增殖及活化的影响。方法RT-qPCR检测TGF-β1处理后的肝星状细胞系中METTL14的表达量;在肝星状细胞系中过表达METTL14,采用MTT和Transwell的方法检测细胞的增殖及迁移,RT-qPCR和蛋白质印迹检测细胞中COL I和α-SMA的蛋白表达。结果TGF-β1与肝星状细胞共培养后,METTL14的表达量上调了2.8倍左右。过表达METTL14后,肝星状细胞培养48 h的吸光度为(0.730±0.047),高于对照组的(0.533±0.022);同时细胞的迁移数目为(186.00±42.75)亦高于对照组(97.00±7.00)差异均有统计学意义(P<0.05)。高表达METTL14细胞中COL I与α-SMA的相对表达水平(2.48±0.31;3.36±0.43)均显著高于对照组(1.00±0.26;1.00±0.24)差异均有统计学意义(P<0.05)。COL I与α-SMA的蛋白表达亦明显高于对照组。结论METTL14促进肝星状细胞增殖、活化是肝纤维化的重要机制。

METTL14在CML细胞中的表达及其与PKM剪接体间的相关性分析

目的探讨METTL14在伊马替尼(Imatinib,IM)敏感和耐药慢粒(chronic myeloid leukemia,CML)细胞中的表达差异,并分析其与PKM剪接体间的相关性。方法收集南昌大学第二附属医院门诊的健康对照组、CML慢性期、CML急变期各5例外周血或骨髓,运用RNA转录组测序(RNA-seq)技术进行测序,筛选差异表达基因;另收集30例IM敏感的慢性期CML患者外周血或骨髓作为IM敏感组,10例IM耐药急变期标本作为耐药组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证40例临床样本中METTL14基因差异表达,并采用Spearman法分析METTL14和PKM剪接体的相关性,同时通过SRAMP网址预测PKM基因是否含有m6A修饰位点。结果RNA测序结果显示,分别与对照组和慢性期比,急变期基因表达谱有很大的差异,且差异基因显著富集的是剪接体功能通路;METTL14 mRNA在IM敏感组和耐药组中相对表达量分别是(13.720±2.512)和(21.450±1.426),差异有统计学意义(P=0.028)。qRT-PCR结果显示METTL14 mRNA在敏感组中的表达较耐药组显著降低(P<0.001);Spearman相关分析表明,METTL14 mRNA表达水平与PKM2/PKM1比值呈正相关(r=0.495,P=0.005);SRAMP网址预测PKM基因9号外显子区域高度富集m6A修饰位点。结论高表达的METTL14介导的m6A修饰PKM基因外显子9使其高度甲基化而不被剪接,PKM1生成减少,PKM2相应增多,从而促进CML耐药,为探讨CML耐药机制和治疗靶点提供新思路。

METTL14在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探究RNA甲基转移酶METTL14在肝细胞癌(HCC)中的表达,及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色的方法,检测METTL14在147对肝癌、癌旁肝组织中的表达,根据病理医师的评分,把147例肝癌组织表达分为METTL14高表达组与METTL14低表达组,通过卡方检验分析其表达量高低与临床病理指标的相关性;应用Kaplan-Meier方法分析METTL14表达水平与肝癌患者术后预后生存的关系,包括总生存期与无瘤生存期;运用COX回归模型对METTL14表达与肝癌患者术后的总生存期与无瘤生存期进行单因素分析以及多因素分析,以探索METTL14的表达水平是否可作为肝癌患者术后预后的独立预后危险因素。结果与癌旁组织相比,METTL14在HCC组织中表达明显降低(P<0.001);HCC组织中METTL14表达与HCC患者肿瘤大小(P=0.044)及TNM分期(P=0.046)相关;HCC组织中METTL14的低表达与患者的不良预后显著相关,其术后总生存期及无瘤生存期明显缩短(P<0.05),且是影响HCC患者术后总生存期及无瘤生存期的一个独立危险因素。结论 METTL14可能成为一种原发性肝癌切除术后的新的预后指标。

METTL14通过促进N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移

目的 探究甲基转移酶样蛋白14(METTL14)基因对宫颈癌细胞增殖和转移能力的影响及其可能的分子机制。方法使用基因表达数据集(GEO)数据库和宫颈癌组织芯片分析宫颈癌组织及癌旁组织的METTL14和Myc表达水平。采用RNA干扰技术(RNAi)沉默HeLa和SiHa宫颈癌细胞中METTL14的表达,实时荧光定量PCR(qPCR)验证沉默效果。敲低METTL14后,CCK-8实验、集落形成实验、 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)实验检测细胞增殖和集落形成能力,Transwell^(TM)实验检测细胞迁移能力。Western blot法测定敲低METTL14后METTL14和Myc的蛋白表达水平,甲基化RNA免疫共沉淀后实时定量PCR(MeRIP-qPCR)检测各组HeLa细胞中N^(6)甲基腺嘌呤(m^(6)A)Myc的表达水平。结果 GEO数据库和宫颈癌组织芯片染色结果显示,METTL14和Myc在宫颈癌组织中的表达显著高于宫颈癌癌旁组织,且METTL14高表达的宫颈癌患者生存期更短。沉默METTL14后能明显抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的细胞活力、增殖和迁移能力,其作用机制可能与METTL14促进m^(6)A Myc的表达有关。结论 METTL14通过促进m^(6)A Myc的表达促进宫颈癌细胞的增殖和迁移。

METTL14在非小细胞肺癌中的表达以及预后意义

目的探讨METTL14在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达以及与预后之间的相关性。方法收集我院2015年1月-2016年7月收治并行手术切除术的64例NSCLC患者癌变组织(研究组)及相应的癌旁正常组织(对照组),采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测组织中METTL14 mRNA的表达,westernblot检测METTL14蛋白表达。比较两组间METTL14的表达与临床病理特征之间的关系,绘制Kaplan-Meier生存曲线,采用多因素Cox回归模型分析独立预后因素。结果METTL14 mRNA在研究组与对照组中的相对表达量分别为(3.03±1.02)、(1.01±0.04),METTL14蛋白在研究组与对照组中的相对表达量分别为(0.21±0.05)、(0.13±0.03),METTL14 mRNA与蛋白在NSCLC癌变组织中的表达较癌旁正常组织高(P均<0.05);TNMⅢ+Ⅳ级、合并淋巴转移的NSCLC患者METTL14高表达的比例较高(P均<0.05),METTL14高、低表达与患者的年龄、性别、病理类型以及吸烟史无关(P均>0.05),METTL14高、低表达的NSCLC患者中位生存时间分别为23.5、34.5个月,总生存率分别为15.63%、46.88%,METTL14低表达的NSCLC患者预后优于METTL14高表达患者(P均<0.05)。Cox回归模型分析发现METTL14高表达、TNMⅢ+Ⅳ级是影响NSCLC患者生存的独立预后因素(P均<0.05)。结论METTL14在NSCLC组织中高表达,且与患者TNM分级、淋巴转移相关,可能参与了NSCLC的发生发展,提示NSCLC患者预后不良。

METTL14对顺铂诱导的结直肠癌细胞的凋亡和自噬的影响

目的:探讨METTL14在结直肠癌组织中的表达及上调METTL14对顺铂诱导的结直肠癌细胞的凋亡和自噬的影响。方法:免疫组织化学法检测METTL14在结直肠癌组织中的表达;qRT-PCR和Western blot检测METTL14在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blot检测过表达METTL14在SW480细胞中的表达;CCK-8检测SW480细胞在不同DDP浓度下的细胞活力;流式细胞术检测SW480细胞的凋亡率;Western blot检测SW480细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比例;电镜检测SW480细胞中自噬体数量。结果:METTL14在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中低表达(P<0.01);上调METTL14使SW480细胞对顺铂的敏感性增加(P<0.01),IC_(50)值降低(P<0.01);上调METTL14使SW480细胞的凋亡率增加(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增加(P<0.01),自噬体数目增加(P<0.01)。结论:METTL14在结直肠癌中低表达,而METTL14的上调通过增强细胞凋亡使结直肠癌细胞对顺铂敏感,并且增加了细胞自噬。