体外神经细胞过表达Mex3C-1对诱导性Fos表达的影响

目的探讨Mex3C-1对卡巴胆碱诱导的Fos表达的影响。方法将具有可持续表达人Mex3C-1序列的质粒pLV-CMV-Mex3C(OE)在HEK293T细胞中包装成慢病毒载体,同时制备非特异性对照(NC)CmiR0001-MR03的慢病毒载体,分别感染人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,经嘌呤霉素筛选后得到稳定高表达Mex3C-1和阴性对照细胞系,用Real time PCR和Western blot方法检测Mex3C-1的基因和蛋白表达效果。之后用卡巴胆碱诱导Fos表达,在诱导0、30、60、90和120min后分别提取mRNA,采用Real time PCR方法检测Fos mRNA的相对表达量。结果Real time PCR检测结果显示,OE组的Mex3C-1 mRNA的相对表达量(21.11±0.60)高于NC组(1.03±0.13)(t=32.63,P=0.000)。Western blot结果显示,在82kDa处OE组的Mex3C-1蛋白表达量高于NC组(P<0.001)。Real time PCR检测不同干预时间两组Fos mRNA,除0min外各个时间点OE组均高于NC组,表明Mex3C-1的过表达可以明显上调Fos mRNA的表达;NC组于120min时已基本恢复至基础值,而OE组120min时Fos mRNA表达量仍然较高,Mex3C-1过表达可以延长Fos mRNA的半衰期,增强其稳定性,OE组与阴性对照NC组比较,Fos mRNA表达量差异有统计学意义(F=287.069,P=0.000)。结论持续过表达Mex3C-1的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系建立成功,且Mex3C-1过表达能够明显增强卡巴胆碱诱导的Fos表达程度并增强其稳定性。

重组胰岛素样生长因子-1对3C基因敲除小鼠卵巢胰岛素样生长因子-1受体相关表达和雌激素分泌的影响

目的探讨重组胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对MEX3C基因敲除小鼠卵巢发育的影响。方法采用聚合酶链式反应(PCR)法鉴定4周龄FVB(SPF级)小鼠基因型,将鉴定出的雌性小鼠随机分为4组(每组6只):野生型组、MEX3C基因敲除小鼠纯合子(简称纯合子组)、纯合子+IGF-1处理组、处理对照组。比较IGF-1注射前后各组小鼠体质量及卵巢湿重变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中雌二醇水平;HE染色观察卵巢形态结构;免疫组织化学法和Western blotting法测定MEX3C、重组胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和p-AKT(Ser473)蛋白表达。结果IGF-1注射前,纯合子组体质量[(6.33±0.31)g]明显轻于野生型组[(15.20±0.35)g],差异有统计学意义(P<0.001)。ELISA结果显示,与处理对照组[(8.1248±0.8477)ng/L]相比,纯合子+IGF-1处理组[(17.2453±0.0731)ng/L]血清雌二醇水平显著较高,差异有统计学意义(P<0.001)。HE染色结果显示,与处理对照组相比,纯合子+IGF-1处理组中原始卵泡数(19.83±2.94)和初级卵泡数(15.50±2.69)增多,且闭锁卵泡数(7.17±1.42)减少,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Western blotting结果证实,与处理对照组相比,纯合子+IGF-1处理组IGF-1R和p-AKT蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P=0.0141,P=0.0025)。结论IGF-1促进MEX3C基因敲除小鼠卵巢卵泡发育,其机制是通过上调IGF-1R和p-AKT水平,提高血清雌激素水平促进卵泡发育。