姜黄素联合美罗培南对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响

目的本课题旨在研究姜黄素(CUR)联合美罗培南(MEM)对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)MexAB-OprM外排泵过表达的抑制作用。方法微量肉汤法检测MEM的MIC,并通过MIC逆转倍数筛选出外排泵高表达的菌株;微量肉汤检测CUR的MIC;棋盘滴定法测定MEM和CUR的最佳联合浓度;PCR技术检测7株菌的mexA、mexB、oprM和mexR、nalC、nalD基因;qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因的表达水平;利用260 nm处吸光度检测细菌细胞膜的完整性;溴化乙锭(EB)荧光累积和直接外排含量来观察MexAB-OprM外排泵的表达;qRT-PCR技术检测CUR-MEM联合和MEM单药处理细菌24 h后mexA、mexB、oprM基因和调控基因mexR、nalC、nalD的表达水平。结果30株CRPA筛选出7株外排泵MexAB-OprM高表达的菌株;微量肉汤法确定CUR的MIC为512~1024μg/mL;棋盘滴定法发现CUR显著降低了MEM的MIC值,两者有明显的协同作用,FIC指数为≤0.5;PCR技术均检测到mexA、mexB、oprM、mexR、nalC、nalD基因。qRT-PCR技术检测7株菌的mexB、oprM基因,发现PA21号菌株外排泵表达水平远高于其他6菌株;OD260 nm吸光度检测实验发现128μg/mL的CUR没有破坏细胞膜的完整性,256和512μg/mL的CUR浓度能不同程度的破坏细胞膜;CUR单药组EB细胞内荧光累计百分比为11.2%、MEM单药组6.4%、CUR-MEM联合组为22.2%;与单药组相比,联合组差异有统计学意义(P<0.01,F=19.12);直接EB外排实验发现EB含量的变化:CUR单药组降低10.6%,MEM单药组降低15.7%,药物联合组降低7.1%;qRT-PCR实验发现,药物联合组mexA、mexB、oprM基因与CUR组相比分别降低41.62%、39.57%、59.78%,与MEM单药组相比分别降低53.5%、48.44%、63.09%,差异有统计学意义(P<0.05,F=13.24,F=27.07,F=213.50);qRT-PCR实验发现药物联合组的调控基因mexR与MEM组相比升高22.9%,差异具有统计学意义(P<0.05,F=9.64),nalC与MEM组相比分别降低77.54%,差异具有统计学意义(P<0.001,F=46.21),nalD与CUR单药组相比降低69.62%,与MEM组相比分别降低76.29%,差异具有统计学意义(P<0.001,F=66.41)。结论CUR联合MEM可以抑制MexAB-OprM外排泵的过表达,CUR与MEM以浓度依赖性方式发挥协同作用。

铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排表型筛选和外排基因检测

目的研究解放军总医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排系统,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法采用外排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺)与喹诺酮类抗生素,以微量肉汤稀释法测定加与不加外排泵抑制剂时环丙沙星与左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)值,并计算MIC值的变化,根据加与不加外排泵抑制剂MIC值降低3个稀释度及以上筛选主动外排表型阳性菌株;PCR扩增外排表型阳性菌的耐药基因oprM、mexB和mexR,并对3株菌进行mexR基因测序分析;RT-PCR检测oprM基因的mRNA水平,分析耐药基因的表达情况。结果苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺能极大的降低左氧氟沙星和环丙沙星的MIC值,70株多重耐药铜绿假单胞菌中46株表型阳性(65.7%),其中PCR检测oprM、mexB和mexR基因同时阳性菌株42株(91.3%),仅oprM基因阳性2株(4.3%),oprM、mexB和mexR基因均阴性2株(4.3%)。RT-PCR产物测定A值(A260/A280)与PAO1对照阳性菌株13株,以PAO1的oprM/rpoD的A值为对照阳性菌株4株,同时满足A值(A260/A280)和oprM/rpoD比值均高于PAO1的菌株3株。测序结果与GenBank中已知的mexR基因比对,其中2株同源性为100%,1株第434位核苷酸插入2bp(AT)。结论中国人民解放军总医院多重耐药铜绿假单胞菌大多存在主动外排的耐药机制,其耐药与外排泵过度表达相关。

阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵及耐药性的影响

目的探讨阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的影响,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺PAβN)干预铜绿假单胞菌后,采用微量肉汤稀释法测定常见药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值的变化,筛选主动外排表型阳性菌株。PCR扩增主动外排表型阳性菌株oprM、mexB和mexR;real-time PCR检测主动外排表型阳性菌株mexB的mRNA水平;对主动外排表型阳性菌株进行mexR基因测序分析。在阿奇霉素作用下,观察铜绿假单胞菌的mexB基因表达及对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值变化。结果从20个临床多重耐药的铜绿假单胞菌菌株中筛选出8株主动外排表型阳性菌。检测表明这8株菌oprM、mexB和mexR均呈阳性,mexB的mRNA水平均较PAO1显著增高。对8株MexAB-OprM高表达菌mexR基因进行测序,发现菌株PAO03的mexR基因存在突变。阿奇霉素可显著降低mexR基因未突变MexAB-OprM高表达菌株的mexB基因的表达和对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值,而对菌株PAO03和nalB突变株(mexR基因突变MexAB-OprM高表达菌株)无显著影响。结论阿奇霉素可抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性。

MexAB-OprM和MexXY-OprM在耐药铜绿假单胞菌中的表达

目的探讨MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌多重耐药的关系。方法挑选临床分离的铜绿假单胞菌敏感株和多重耐药株各30株,以及标准质控株,用RT-PCR扩增其mexB、mexY和核糖体参照基因rpsL片段,根据mexB、mexY与rpsL扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB与mexY mRNA的表达水平。结果标准株、所有敏感株和多重耐药株均检测出mexB、mexY的mRNA基因,耐药株的mexB、mexY mRNA水平显著高于敏感株(P<0.05)。结论MexAB-OprM和MexXY-OprM主动外排系统与铜绿假单胞菌固有耐药有关,其表达水平异常增高与多重耐药形成密切相关。

铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM的研究进展

医院感染在感染性疾病中占有相当比例。院内感染的病原菌中,铜绿假单胞菌的感染高居榜首,且耐药状况十分严重。主动外排系统是细菌存在耐药性并发生获得性多重耐药的主要原因。M exAB-OprM型外排系统因具有广谱的外排活性成为铜绿假单胞菌最具临床意义的药物外排系统。本文对细菌主动外排系统的分类,PA M exAB-OprM外排系统的组成、结构、重要作用及表达调控予以综述,并对其治疗研究作出展望。

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药表型与外排泵MexAB-OprM表达的关系

目的了解多重耐药铜绿假单胞菌(multidrug resistance Pseudomonas aeruginosaPa)临床菌株外排泵抑制剂对抗生素活性的影响;探讨多重耐药铜绿假单胞菌的耐药机制及其耐药性与外排泵表达水平关系。方法PCR法对30株铜绿假单胞菌进行MexB基因检测;采用实时荧光定量PCR的方法检测MexAB-OprM的mRNA相对表达水平;对多重耐药铜绿假单胞菌采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验,观察抗生素的MIC变化。结果联合外排泵抑制剂后,庆大霉素和环丙沙星MIC值与之前相比大部分有2个折点的变化,有4株Pa的MIC值有4个折点以上的变化,但总体耐药率差异无统计学意义(P】0.05);30株多重耐药Pa株中,均存在外排泵MexAB-OprM的高表达,多重耐药菌株外排泵表达量达敏感株的60倍之多。结论外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株中起着十分重要的作用,当外排泵抑制剂CCCP浓度为7.5μg/ml对头孢噻肟等抗Pa活性影响较小,不能明显增强其对耐药菌的抗菌活性;而对庆大霉素、环丙沙星等抗Pa活性影响较大,能较为明显增强其对耐药菌的抗菌活性。MexAB-OprM的高表达与多重耐药菌的耐药性有着密切关系,可能起着基础性耐药作用,具体机制有待进一步的研究。

定量RT-PCR检测多药耐药铜绿假单胞菌中MexAB-OprM外排泵

铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）所涉及耐药机制相当复杂,包括抗生素灭活酶或修饰酶的生成、外膜低渗透性、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成和主动外排等[1]。近年来的研究发现,铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa,PA）内存在着多种主动外排系统[2],MexAB-OprM是在PA中发现的第一个RND家族外排系统,在PA对多种β-内酰胺类抗生素（包括碳青霉烯类）的固有耐药机制中发挥重要作用,MexAB-OprM是迄今为止最具有临床意义的药物外排系统。

扶正解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达影响的研究

目的:研究扶正解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响。方法:针对筛选出的MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过微量稀释法,测定哌拉西林-他唑巴坦的最小抑菌浓度和扶正解毒化瘀方水提物的最小杀菌浓度,从而确定荧光定量PCR细菌样本时培养剂中哌拉西林-他唑巴坦和扶正解毒化瘀方水提物的浓度。绘制细菌生长曲线,确定细菌样本的培养时间。利用实时荧光定量PCR技术检测药物干预前后mex B、oprM、mexR的表达量。结果:扶正解毒化瘀方水提物能降低MexAB-OprM外排泵阳性MDRPA菌株的mex B、oprM表达量(P <0. 05),同时能增加mexR的表达量(P <0. 05)。结论:扶正解毒化瘀方对MDRPA所致肺炎的作用机制之一可能是通过抑制MexAB-OprM外排泵的表达实现的。

多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM的表达及mexR基因的突变

目的分析MexAB-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌耐药性中的作用,并讨论MexAB-OprM高表达与mexR基因突变的关系。方法 L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC207,110)联合环丙沙星(CIP)筛选13株多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统表型;RT-PCR检测13株多重耐药和7株全敏感的铜绿假单胞菌结构基因mexB的mRNA相对含量,推测MexAB-OprM表达水平;对6株MexAB-OprM高表达的多重耐药铜绿假单胞菌进行mexR基因扩增、测序和比对。结果 13株多重耐药铜绿假单胞菌9株主动外排系统表型阳性,阳性率69.2%;所有检测株中均有MexAB-OprM表达,其中有6株多重耐药株高表达;6株多重耐药高表达株中有5株存在mexR基因的突变。结论 MexAB-OprM主动外排系统高表达是导致本院铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因,而mexR基因的突变又是导致MexAB-OprM高表达的主要原因。

3所综合性医院分离的多重耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的表达分析

目的分析多重耐药铜绿假单胞菌(PA)外排泵MexAB-OprM的表达,并探讨MexAB-OprM高表达与调控基因mexR、nalC和nalD突变的关系。方法利用肉汤稀释法进行头孢他啶、头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星和氨曲南的敏感性试验,联合外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(PAβN)进行外排泵的表型筛选试验;在表型筛选为阳性的PA中随机挑选7株,实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测膜融合蛋白基因mexA的相对表达量;PCR扩增调控基因mexR、nalC和nalD,将扩增结果测序比对。结果耐环丙沙星、头孢他啶、氨曲南、头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南和阿米卡星PA外排泵的表型筛选阳性率分别为96.8%、44.8%、41.4%、41.4%、40.0%、10.0%;以野生型铜绿假单胞菌(PAO1)为对照菌,mexA的相对表达量范围为1.56~10.03(2.29±0.60),属于外排泵的高表达;高表达菌株均发生mexR、nalC和nalD基因突变和氨基酸替换。结论环丙沙星的耐药以外排泵耐药机制为主,调控基因mexR、nalC和nalD的碱基突变导致了外排泵MexAB-OprM高表达,外排泵的高表达导致了铜绿假单胞菌的耐药。

海南某三甲医院多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM表达及与耐药表型的关系研究

目的探讨多重耐药铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达及其与耐药表型的关系。方法选取2016年9月至2018年10月儋州市人民医院微生物培养室分离的Pa 54株,采用琼脂稀释法测定14种抗菌药物的MIC,加外排泵抑制剂苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺(PAβN)进行干预实验,实时荧光定量PCR检测膜融合蛋白mexA、mexC、mexE、mexX的mRNA表达水平,以判断MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM的表达情况,PCR扩增调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ对扩增产物进行测序,使用Blast软件在GenBank上与已知序列进行比对。结果RT-PCR检测发现,耐药菌株中18株(33.33%)Pa高表达MexAB-OprM外排系统,9株(16.67%)高表达MexCD-OprJ外排系统,12株(22.22%)高表达MexEF-OprN外排系统,14株(25.93%)高表达MexXY-OprM外排系统。抑制剂作用下18株MexAB-OprM外排泵高表达Pa株对头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星的MIC为2~64μg/ml,9株MexCD-OprJ高表达株中6株对头孢噻肟的敏感性MIC为2~128 mg/ml,12株MexEF-OprN中对环丙沙星、亚胺培南的敏感性MIC为4~128 mg/ml,14株MexXY-OprM为庆大霉素、环丙沙星高度耐药菌株。分别随机选择mexA、mexC、mexE、mexX高表达菌株中的4个菌株,mexR高表达菌株中发生3个mexR基因突变;4个nfxB高表达菌株中均发生82位的突变;4个mexT高表达菌株中均发生26位的突变;2个mexZ高表达菌株发生138位的突变,1个发生50位的突变。结论主动外排系统MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-OprM过度表达是Pa多重耐药机制之一,同时与其调控基因mexR、nfxB、mexT、mexZ发生突变相关。

MexAB-OprM主动外排系统在全耐药铜绿假单胞菌耐药中的作用及机制

目的探讨MexAB-OprM主动外排系统(外排泵)在全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用及其过度表达的机制。方法联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC-207,110)和环丙沙星(CIP),测定26株全耐药铜绿假单胞菌的MIC;用RT-PCR法扩增MexAB-OprM内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA片段,根据mexB与16SrDNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexBmRNA的表达水平,判断MexAB-OprM的表达情况;用PCR法扩增MexAB-OprM调控基因mexR并对其产物测序,用Blast软件在GenBank中与已知序列比对。结果联合MC-207,110后有20株(76.9%)CIP的MIC值下降4倍及以上;26株全耐药铜绿假单胞菌中有22株MexAB-OprM高表达,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氨基酸替换,2株发生插入突变,导致氨基酸插入;点突变位点是336G-A、603G-A、660G-A、584C-G、653T-A,后两者导致氨基酸替换103Ala-Gly、126Val-Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala。结论MexAB-OprM主动外排系统的高表达对铜绿假单胞菌的耐药性起重要作用,调控基因mexR的突变是其高表达的原因之一。

外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌中的作用

目的:探讨铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)的耐药机制及其耐药性与外排泵表达水平关系。方法:PCR法对30株铜绿假单胞菌进行MexB基因检测;采用实时荧光定量PCR的方法检测MexAB-OprM的mRNA相对表达水平;对多重耐药铜绿假单胞菌采用琼脂对倍稀释法进行外排泵抑制剂的抑制试验,观察抗菌药物的MIC变化。结果:联合外排泵抑制剂后,庆大霉素(GEN)和环丙沙星(CIP)MIC值与之前相比大部分有2个折点的变化,有4株MPa的MIC值有4个折点以上的变化,但总体耐药率差异无统计学意义(P>0.05);30株多重耐药Pa株中,均存在外排泵Mex-AB-OprM的高表达,多重耐药菌组外排泵表达量达敏感组的36.5倍。当外排泵抑制剂CCCP浓度为7.5μg/ml时,庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、四环素(TET)MIC值不变或增加的菌株(≥1MIC组)与MIC值减小的菌株(≤1/2MIC组)的外排泵相对表达量之间有着显著性的差异(P<0.05),而头孢噻肟(CTX)MIC值不变或增加的菌株(≥1MIC组)与MIC值减小的菌株(≤1/2MIC组)的外排泵相对表达量之间无显著性的差异(P>0.05)。结论:外排泵MexAB-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌临床分离株中起着十分重要的作用,MexAB-OprM的高表达与多重耐药Pa菌庆大霉素、环丙沙星的耐药性有着密切关系,可能起着基础性耐药作用,但其对头孢噻肟的耐药性影响较小。其高表达还与庆大霉素、环丙沙星、四环素的耐药有着直接的量的关系,具体机制有待进一步的研究。

KL-0153,一种新型铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵抑制剂（英文）

铜绿假单胞菌是一种具有高发病率和死亡率的条件致病菌。以MexAB-OprM外排泵为主的耐药节结化细胞分化家族多药耐药外排系统的存在是铜绿假单胞菌产生多药耐药的主要原因。MexAB-OprM外排泵抑制剂可以显著增强被MexAB-OprM外排的抗生素的活性,作为抗菌药物增效剂,具有良好的临床应用前景。在本研究中,通过小分子库筛选得到了一种新型的MexAB-OprM外排泵抑制剂KL-0153,通过与抗生素的协同活性研究以及EB积累检测证明了其对于MexAB-OprM的抑制活性。在表达MexAB-OprM的铜绿假单胞菌菌株,特别是MexAB-OprM高表达株中,KL-0153与被MexAB-OprM外排的抗生素有协同作用,并且在EB积累检测中,其活性强于阳性药羰基-氰-间-氯苯腙。尽管KL-0153也具有明显的肝肾毒性,但作为先导化合物,对于KL-0153的进一步研究将有助于新型MexAB-OprM外排泵抑制剂的研发。

多药耐药铜绿假单胞菌的MexAB-OprM表达水平研究

目的探讨MexAB-OprM主动外排泵系统与铜绿假单胞菌的多药耐药关系。方法选取82株重症监护病房分离的多药耐药铜绿假单胞菌,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测MexAB-OprM基因的表达情况。结果在选取的82株多药耐药铜绿假单胞菌中,共检出50株外排MexAB-OprM表型阳性(61.0%),以标准野生株PAEO1作为对照,其中38株MexAB-OprM系统表达差异倍数≥30倍,占76.0%,其余12株MexAB-OprM表达差异倍数<30倍,占24.0%。结论 MexAB-OprM主动外排系统表达水平异常增高可能与铜绿假单胞菌的多药耐药有关。

铜绿假单孢菌多药外排系统研究进展

铜绿假单孢菌是一种重要的院内感染条件致病菌 ,具有先天的和后天获得的多重高度耐药性 ,一旦感染 ,临床治疗十分困难。铜绿假单孢菌的耐药机理十分复杂 ,除常见耐药机制外 ,很重要的就是其拥有可以外排多种药物的主动外排系统 ,使抗菌药物很难发挥应有作用。本文将从近年铜绿假单孢菌中各类外排泵的研究情况 ,特别是其中最重要的外排系统“MexAB -OprM”的分子结构模型、膜定位、该基因的表达与调控等方面的研究进展做一综述。

铜绿假单胞菌RND外排泵研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA），是一种广泛分布于自然界的革兰阴性非发酵菌，也是临床上常见的、引起院内获得性感染的重要条件致病菌，尤其是来自 ICU 重症、气管插管等侵袭性操作、长期使用抗生素的感染患者［1］。1990年初Poole 等人在铜绿假单胞菌野生株中发现编码外排泵 MexAB-OprM的操纵子，以及其在固有耐药中发挥的作用。在2013年，美国疾病预防与控制中心［2］列出当前的耐药危机，其中包括假单胞菌属。国内已有多项大型流行病学调查显示我国 PA 感染的严重性［3］，以及外排泵机制在抗药性方面发挥了重要作用［4］。铜绿假单胞菌药物外排泵介导了具有临床重要意义的多重耐药性（包括天然耐药和获得性耐药）。本文主要对铜绿假单胞菌常见外排泵的特点、底物谱、调控机制等进行综述。

铜绿假单胞菌主动外排泵介导的多重抗生素耐药性(英文)

铜绿假单胞菌作为一种机会致病菌 ,对多种临床常用抗生素呈现明显的固有与获得性耐药 ,这种多重耐药性的形成机制在于该菌具有的多种能量依赖性的药物主动外排泵和低通透性外膜屏障协同作用所致。近 10年对铜绿假单胞菌药物外排泵的研究已经颇为深入 ,本文对有关进展予以讨论。在铜绿假单胞菌已报道了 6种属于“耐药—生节—分裂 (RND)”类的药物外排泵系统 ,它们可在天然野生株表达或者由于基因突变而诱导表达 ,从而介导了对β-内酰胺类 (包括β-内酰胺酶抑制剂 )、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、大环内酯类及四环素类等的耐药性。这些外排泵中尤其以 Mex AB-Opr M系统的作用底物范围最广 ,在耐药性形成中起主要作用。RND类外排泵系统也普遍存在于其它革兰氏阴性细菌。各外排泵通常由内膜转运体蛋白、内膜融合蛋白及外膜通道蛋白一起形成功能性转运复合体将药物排至胞外。药物外排泵常影响对灭活酶较稳定的抗菌药物。一些新抗菌药物如 L inezolid(Oxa-zolidinoes类 )、Telithromycin(Ketolides类 )及 Tigecycline(Glycyclines类 )也是 Mex AB-Opr M等 RND类外排泵的作用底物 ,故这些药物抗革兰氏阳性细菌的活性较强。铜绿假单胞菌外排泵表达的调控机制多是在转录水平上受局部阻遏物或激活物的作用。

生物膜铜绿假单胞菌多药外排泵的表达研究

目的研究铜绿假单胞菌在浮游态、生物膜态及经亚胺培南、环丙沙星诱导后,多药外排泵MexAB-OprM及其阻遏蛋白MexR基因表达情况。方法用铜绿假单胞菌PAO1在eppendorf管内建立生物膜;用1/2 MIC亚胺培南、环丙沙星对浮游菌诱导4 h;4 MIC亚胺培南2、MIC环丙沙星对生物膜菌诱导12 h,分别于生物膜形成的第35、天,用实时荧光定量PCR的方法,测定铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM及MexR的基因表达。结果铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,其外排泵MexAB-OprM的表达水平明显降低,其相对表达量最高相差近10倍,其差异有统计学意义(P<0.05);铜绿假单胞菌由浮游菌变为生物膜菌后,阻遏蛋白MexR表达差异无统计学意义;在亚胺培南及环丙沙星诱导后,浮游菌和生物膜菌其基因MexAB-OprM、MexR表达差异均无统计学意义。结论铜绿假单胞菌由浮游菌转变为生物膜菌后,外排泵MexAB-OprM表达明显减少,MexR基因表达无影响;亚胺培南、环丙沙星对浮游菌及生物膜菌的MexAB-OprM、MexR均无诱导作用。