日本血吸虫Mf2基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究

目的 在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum Sj)Mf2蛋白 ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。 方法 将SjMf2基因亚克隆至pCEX -5X -3原核表达载体 ,以GST融合蛋白的形式在ER2 688中表达 ,表达产物免疫小鼠 ,免疫用抗原剂量为 5 0 μg 次 鼠 ,对照组分别注射FCA或PBS ,在 0、2、6周共免疫 3次。第 3次免疫后 2周进行攻击感染 ,42d后杀鼠 ,观察减虫和减卵效果。 结果 在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf2基因在大肠杆菌中得以高效表达 ,形成了SjGST -Mf2融合蛋白 ,用这种融合蛋白免疫小鼠 ,诱导产生了2 7 75 %的减虫率和 45 7%的每雌肝组织虫卵减少率 (LEPF)。 结论 SjMf2基因亚克隆至pGEX -5X -3载体后可在大肠杆菌中高效表达 ,表达产物能诱导小鼠产生一定程度的抗日本血吸虫保护性免疫力。

激动α_(1B)-肾上腺素受体对DDT1 MF-2细胞生长的刺激作用及其途径

目的 研究激动α1B 肾上腺素受体 (α1B AR)对DDT1MF 2细胞生长的影响及其机制。方法 用3H-胸腺嘧啶参入法测定细胞的DNA合成速率 ;用流式细胞计测定细胞周期。结果 去甲肾上腺素 (NE ,0 1～ 1μmol·L-1)可刺激DDT1MF 2细胞DNA的合成。磷脂酶C抑制剂 (U7312 2 ,10 μmol·L-1)、Ca2 +/ATP酶抑制剂 (CPA ,10 μmol·L-1)、胞内Ca2 +络合剂 (BAPTA/AM ,10 μmol·L-1)、PKC抑制剂(RO 31 82 2 0 ,0 1μmol·L-1或calphostinC ,0 1μmol·L-1)、酪氨酸激酶抑制剂 (tyrphostinA2 5 ,10 μmol·L-1或genis tein ,10 μmol·L-1)、MEK1/ 2抑制剂 (PD 980 5 9,10 μmol·L-1)均可阻断NE刺激细胞DNA合成的作用。结论 激动α1B AR可刺激DDT1MF 2细胞增殖 ,其信号转导途径可能与PLC激活、Ca2 +释放、PKC。