解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠的作用机制——肝损伤和肝线粒体自噬蛋白Mfn1、Mfn2的影响

研究解毒化瘀颗粒对肝衰竭大鼠肝损害和线粒体自噬特异性蛋白Mfn1、Mfn2表达的作用。将180只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和解毒化瘀颗粒给药组(JDHYKL组)。采用D-GalN+LPS复制急性肝衰竭大鼠模型。JDHYKL组给予解毒化瘀颗粒造模前5天开始灌胃给药,延续至成模后24 h,正常组与模型对照组分别给予等量蒸馏水代替。检测各组大鼠ALT,AST和TBIL水平;HE染色观察各组大鼠肝组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体自噬特异性蛋白Mfn1、Mfn2表达。经解毒化瘀颗粒治疗后大鼠肝组织肝细胞形态组织结构基本正常,细胞呈条索状排列,部分假小叶形成,肝细胞坏死及空泡化较模型组减轻,同时可明显降低LF大鼠ALT、AST(P<0.05),提高Mfn1、Mfn2表达(P<0.05)。解毒化瘀颗粒可能是通过上调Mfn1和Mfn2的表达抑制线粒体分裂,推动线粒体结合,降低碎片化现象,保护线粒体,而对大鼠肝衰竭发挥保护作用。

外感寒邪对小鼠淋巴细胞线粒体Mfn1/Mfn2和Drp-1表达的影响

目的观察外感寒邪对小鼠淋巴细胞线粒体Mfn1/Mfn2和Drp-1表达及线粒体功能的影响。方法 60只昆明小鼠随机分为常温对照组和寒邪模型组,置于人工气候箱中处理后取小鼠外周血分离淋巴细胞,透射电镜观察淋巴细胞线粒体超微结构,ATP测试试剂盒检测细胞内ATP含量,线粒体呼吸链复合物活性比色法定量检测试剂盒检测线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的活性,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡情况。结果透射电镜观察发现寒邪模型组小鼠外周血淋巴细胞线粒体数目减少,线粒体肿胀、变短,线粒体内出现液泡结构;与常温对照组相比,寒邪模型组细胞内ATP含量减少,线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ的活性下降(P<0.05);JC-1荧光探针检测显示寒邪模型组线粒体膜电位下降,流式细胞仪检测发现外周血淋巴细胞凋亡率增加,western blot检测线粒体Mfn1/Mfn2表达下降和Drp-1表达增加。结论外寒可能通过影响小鼠外周血淋巴细胞线粒体Mfn1/Mfn2和Drp-1表达,使线粒体分裂与融合发生障碍,从而影响线粒体的形态和功能,使ATP生成减少,并诱发凋亡的发生,从而影响外周血淋巴细胞功能。

线粒体融合与分裂的分子机制及相关疾病的研究进展

线粒体是细胞能量代谢的中心,线粒体的网格形态可通过其融合与分裂而处于一种动态的变化中,以此适应不同环境下的能量需求。线粒体融合蛋白Mitofusin1/2(Mfn1/2),视神经萎缩蛋白(OPA1)和线粒体分裂蛋白(Drp1)分别在线粒体的融合和分裂过程中起到了关键的调节作用。而线粒体融合与分裂功能的异常,参与了人体各个系统许多损伤过程,包括视神经萎缩、缺血再灌注损伤等。本文将回顾上述几种关键蛋白为代表的线粒体融合与分裂关键调控分子、调节机制以及其异常所造成的疾病。

基于线粒体动力学探讨暖心康改善心力衰竭小鼠心功能的作用及机制

目的:探索暖心康如何通过调控线粒体动力学改善小鼠心肌缺血再灌注损伤(IR)后心力衰竭小鼠心功能的作用和机制。方法:选取成年健康雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为3组:假手术组、心肌缺血再灌注组、暖心康组,通过可逆性的结扎冠状动脉左前降支建立模型,假手术组行同样手术但不结扎冠状动脉。暖心康组给予暖心康灌胃,假手术组和心肌缺血再灌注组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,均1次/d,持续6周。然后分别对每组小鼠的心功能进行测定。使用H9c2心肌细胞建立缺氧复氧(H/R)模型,Mito-Tracker Green荧光染色观察心肌细胞内线粒体形态变化。Real-time PCR及Western Blot检测心脏内DRP1、FIS1、MFN1、MFN2 mRNA及蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,心肌缺血再灌注组心功能下降,EF、FS显著减少(P<0.01),与心肌缺血再灌注组比较,暖心康组小鼠EF、FS得到不同程度的改善(P<0.01)。随后,Mito-Tracker Green荧光染色观察到暖心康能调控线粒体动力学平衡,保护心肌细胞线粒体。同时,心肌缺血再灌注组小鼠心脏DRP1、FIS1 mRNA及蛋白表达水平较假手术组显著升高(P<0.01),而暖心康组较心肌缺血再灌注组得到显著抑制(P<0.01);暖心康组对促进线粒体融合的MFN1、MFN2在mRNA和蛋白水平同样存在同样的抑制作用(P<0.01)。结论:暖心康可能通过调控DRP1、FIS1、MFN1、MFN2的表达水平控制线粒体的融合、裂解,调节线粒体动力学平衡,进而对IR后的小鼠心功能起保护作用。

基于线粒体融合探讨血府逐瘀汤抗心肌缺血损伤的作用及机制

目的 基于线粒体融合探讨血府逐瘀汤抗心肌缺血损伤的作用及机制。方法 结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血大鼠模型,然后将造模成功的30只大鼠,随机分成模型组[灌胃生理盐水20ml/(kg·d)]、阿托伐他汀组[0.9mg/(kg·d)]、血府逐瘀汤低、中、高剂量组[分别灌胃血府逐瘀汤3.51g/(kg·d)、7.02g/(kg·d)、14.04g/(kg·d)];另取6只大鼠作为正常组、6只大鼠为假手术组(只穿线不打结)。造模24h后灌胃,于灌胃第7天后取材。TTC染色检测心肌梗死面积;HE染色观察心肌组织病理学改变;透射电镜观察心肌细胞线粒体超微结构;免疫组化检测心肌组织Mfn1、Mfn2的表达。结果 与模型组比较,血府逐瘀汤可以减少心肌缺血面积,改善心肌组织病理状态,改善心肌细胞线粒体超微结构,促进心肌细胞线粒体融合,减轻心肌细胞线粒体损伤,上调Mfn1表达(P<0.01),下调Mfn2的表达(P<0.01)。结论 血府逐瘀汤可以上调Mfn1表达,下调Mfn2的表达,促进心肌缺血大鼠心肌细胞线粒体融合,减轻心肌缺血损伤,以高剂量组效果最佳。