系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞Mg^(2+)转运蛋白1水平表达及临床价值研究

目的探讨Mg^(2+)转运蛋白1(magnesium transporter protein 1,MagT1)在系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞中的表达情况,并阐述其临床意义。方法选取西双版纳傣族自治州人民医院2019年1月~2021年6月收治的79例SLE患者作为研究对象,依据SLE疾病活动指数(SLE disease activityindex,SLEDAI)评分将SLE患者分为中重度组(SLEDAI≥10,n=32)和轻度组(SLEDAI<10,n=47),另选取同期体检健康者40例作为对照组。记录患者临床生化和血清免疫相关指标水平;采用实时定量PCR(quantitative realtimePCR,qRT-PCR)法和Western Blot法检测患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达情况;Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白与生化免疫相关指标表达的关系;绘制受试者工作特征(receiver operatingcharacteristic,ROC)曲线分析外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达对SLE及其严重程度的诊断价值。结果与对照组比较,轻度组和中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA[0.65(0.36,0.99),0.23(0.07,0.36)vs 1.20(0.83,1.37)]和MagT1蛋白[0.35(0.22,0.42),0.22(0.15,0.27)vs 0.53(0.40,0.63)]表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.247,7.078;5.128,7.257,均P<0.05);与轻度组比较,中重度组患者外周血T淋巴细胞中MagT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(Z=5.169,3.599,均P<0.05)。Pearson相关性结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平与血清血红蛋白(hemoglobin,HGB)及补体3(complement 3,C3)和补体4(complement 4,C4)水平呈正相关(r=0.496,0.637,0.588,均P<0.05);与红细胞沉降速率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、超敏C反应蛋白(hypersensitive-C reactive protein,hs-CRP)、免疫球蛋白(immunoglobulin G,IgG)水平和SLEDAI呈负相关(r=-0.598,-0.476,-0.646,-0.514,均P<0.05)。ROC曲线结果显示,外周血T淋巴细胞MagT1蛋白表达水平诊断SLE曲线下面积为0.893(95%CI:0.838~0.948),敏感度和特异度分别为90.0%,67.1%,诊断SLE严重程度曲线下面积为0.739(95%CI:0.631~0.848),敏感度和特异度分别为57.4%,84.4%。结论外周血T淋巴细胞MagT1在SLE患者中表达下调,且与SLE严重程度呈负相关,对SLE诊断和病情严重程度具有一定的诊断价值。

组织桥接整合因子1、Ⅰ型胶原蛋白基因、核转运蛋白基因2与三阴性乳腺癌术后复发关系

目的探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义。方法选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS)。结果复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织BIN1mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P<0.05),复发组组织COL1A1mRNA、KPNA2mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P<0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P<0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P<0.001),COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P<0.001);BIN1mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1mRNA、KPNA2mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P<0.05)。结论BIN1mRNA、COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息。

钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂联合利拉鲁肽对2型糖尿病患者临床疗效及纤溶酶原激活物抑制物-1和胱抑素C水平的影响

目的探究钠-葡萄糖共转运蛋白2(sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2)抑制剂联合利拉鲁肽对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者的临床疗效及对纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、胱抑素C(cystatin C,CysC)水平的影响。方法选取2021年11月至2022年11月鹰潭市人民医院收治的70例T2DM患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组与实验组,每组35例。对照组予以利拉鲁肽治疗,实验组在对照组基础上加用SGLT-2抑制剂治疗。比较两组治疗前后炎症因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorɑ,TNF-α)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)]、糖代谢相关指标[餐后2 h血糖(postprandial 2 h blood glucose,2 h PBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)]、其他生化指标[纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)、胱抑素C(cystatin C,CysC)水平]、生命质量评分、临床疗效及不良反应发生情况。结果治疗后,两组TNF-α、hs-CRP、IL-6、2 h PBG、FBG、HbA1c、PAI-1、CysC水平均低于治疗前,且实验组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组总体健康、心理健康、活力、躯体功能评分均高于治疗前,且实验组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组治疗总有效率为97.14%,高于对照组的80.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义。结论SGLT-2抑制剂联合利拉鲁肽治疗T2DM疗效更佳,可减轻机体炎症反应,控制血糖,降低PAI-1、CysC水平,并提高患者的生命质量,且安全性较高。

水稻磷转运蛋白OsPHT2;1在提高磷素利用率方面的作用

植物对磷的吸收与体内再分配需要多种磷酸盐转运系统共同作用。应用公开的植物基因组数据库和生物信息学分析确定了一个水稻低亲和磷酸盐转运蛋白基因OsPHT2；1。经半定量RT—PCR技术分析发现，OsPHT2；1在叶片强烈表达，在根系中微弱表达。OsPHT2；1在叶片中的表达量受光照调控并受低磷诱导。利用农杆菌介导Ubiquitin启动子过量表达OsPHT2；1，研究该基因在水稻中的生理功能。结果表明，水培试验中，正常供磷条件下OsPHT2；1-Oe植株叶部可溶性磷含量较野生型提高40．9％～48．5％，根部可溶性磷含量提高35．6％～51．2％，生物量提高25．1％～30．3％。缺磷条件下OsPHT2；1Oe植株叶部可溶性磷含量较野生型提高53．1％～70．3％，根部可溶性磷含量没有显著改变，生物量提高25．6％～28．5％。大田试验中，OsPH7＂2；1-Oe植株的上3叶和穗柄的全磷含量较野生型显著提高。表明0sPHT2；1可能参与磷素在叶部的积累以及植株体内磷的再分配过程。

植物Mg^(2+)转运蛋白与相关基因及其功能的研究进展

镁离子是植物细胞中最丰富的二价阳离子,在植物的生长发育中起着重要的作用.对Mg2+独特的几何和化学性质,Mg2+对植物细胞体内中动态平衡的影响,植物中Mg2+转运相关蛋白与相关基因及其功能的研究进展进行了综述.

断奶仔猪小肠钠葡萄糖转运蛋白1和葡萄糖转运蛋白2 mRNA表达变化及饲粮添加谷氨酰胺对其的影响

本试验旨在研究仔猪断奶后小肠黏膜钠葡萄糖转运蛋白1（SGLT1）和葡萄糖转运蛋白2（GLUT2）mRNA表达的发育性变化规律及谷氨酰胺是否对SGLT1和GLuT2mRNA的表达产生影响。选择21日龄断奶的杜×长×大仔猪69头，断奶当天屠宰3头猪，其余66头随机分成2组，每组3个重复，每个重复11头仔猪。对照组饲喂基础饲粮（不添加谷氨酰胺），试验组饲喂基础饲粮＋1％谷氨酰胺。断奶后第3、5、7、14天每组分别屠宰3头。取十二指肠、空肠和回肠黏膜样品，通过荧光定量RT—PCR方法测定SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量。结果表明：1）SGLT1和GLUT2 mRNA的表达量在不同肠段之间无显著差异（P〉0．05）。2）十二指肠、空肠中SGLT1 mRNA表达量在断奶后先降低，断奶后第3天开始升高，第14天达峰值，回肠SGLT1 mRNA表达量在断奶后先升高，断奶后第7天较低，第14天为峰值；GLUT2 mRNA在十二指肠和空肠中的表达量从断奶后第3～7天呈现持续上升的趋势，第7天达峰值，但在第14天降至断奶当天水平，回肠GLUT2 mRNA表达量在断奶后逐渐升高，第5天达峰值，而后逐渐回落至断奶当天水平。3）饲粮添加1％谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著影响。结果提示：断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠SGLT1和GLUT2 mRNA表达量无显著差异，但均随断奶后的时间而变化，谷氨酰胺对SGLT1和GLUT2在转录水平上无显著影响。

脑泰方对脑缺血/再灌注大鼠海马区Nrf2、HO-1和膜铁转运辅助蛋白表达的影响

目的研究益气活血中药脑泰方通过Keap1-Nrf2/ARE信号通路对脑缺血/再灌注后大鼠海马区血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和膜铁转运辅助蛋白(hephaestin,Heph)表达的影响。方法将80只♂大鼠随机分为假手术组、模型组、脑泰方低剂量组(4.5 g·kg^(-1))、中剂量组(9 g·kg^(-1))和高剂量组(18 g·kg^(-1))。各组大鼠术前连续灌胃给药3 d,每日1次,再行大脑中动脉线栓法脑缺血/再灌注模型制备术,术后连续灌胃给药2 d。术后72 h采用Zea Longa神经功能学评分标准记录大鼠行为活动,TTC染色法测定脑梗死体积,real-time PCR检测大鼠海马区Nrf2、HO-1、Heph的mRNA表达,Western blot检测Nrf2、HO-1、Heph的蛋白表达。结果与模型组比较,脑泰方中、高剂量组的神经行为学评分明显下降(P<0.01),各脑泰方组脑梗死体积明显缩小(P<0.01);HO-1 mRNA表达均增加(P<0.05)。脑泰方中、高剂量组Heph mRNA表达增加(P<0.05);Nrf2和Heph蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01)。各脑泰方组HO-1蛋白表达增高(P<0.01)。结论脑泰方能减轻脑缺血/再灌注损伤,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2/ARE信号通路,促进HO-1生成,上调Heph的表达,减少脑铁沉积,发挥脑缺血/再灌注后神经元的保护作用。

COPD患者血清脂质转运蛋白1、2水平变化及意义

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清脂质转运蛋白1(LCN1)和脂质转运蛋白2(LCN2)的水平变化,并探讨其临床意义。方法将103例COPD患者根据病情分为急性加重期56例(加重期组)和稳定期47例(稳定期组),健康志愿者50例作为对照组。测算各组吸烟量,分别于患者入院24 h内、对照组体检时用酶联免疫吸附法检测血清C反应蛋白(CRP)、LCN1、LCN2水平,用血液分析仪检测白细胞计数、中性粒细胞百分比,用肺功能仪检测呼吸功能;用Pearson相关分析血清LCN1、LCN2水平与相关指标的相关性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析血清LCN1及LCN2对COPD的诊断价值。结果与对照组比较,加重期组和稳定期组吸烟量、血清CRP水平、白细胞计数及中性粒细胞百分比高(P均<0. 05),血氧分压、第1秒用力呼气容积(FEV1)/用力肺活量低(P均<0. 05),且加重期组以上指标变化更明显(P均<0. 05)。与对照组比较,加重期组和稳定期组血清LCN1、LCN2水平高(P均<0. 05);与稳定期组比较,加重期组血清LCN1、LCN2水平高(P均<0. 05)。COPD患者血清LCN1、LCN2水平与吸烟量、CRP、白细胞计数、中性粒细胞百分比呈正相关(P均<0. 05),与氧分压及FEV1/FVC呈负相关(P均<0. 05)。血清LCN1诊断COPD及加重期COPD的阈值分别为30、80μg/L,血清LCN2的诊断阈值分别为20、90μg/L,曲线下面积均> 0. 80。结论 COPD患者血清LCN1及LCN2水平升高,二者水平变化可反映患者病情危急程度,对COPD诊断有较高价值。

慢性乙型肝炎病毒感染者Mg2+转运蛋白1表达水平对CD8+T细胞耗竭的影响

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD8^+T细胞中Mg^2+转运蛋白1(MagT1)的表达水平及其表达对CD8^+T 细胞耗竭的影响。方法选取2016年6月至2018年1月本院收治的未经抗病毒治疗的HBV感染者86例,根据外周血HBV DNA水平将慢性HBV感染者分为高病毒载量组(45例)与低病毒载量组(41例),并设置健康对照组(20例)。采集外周血、分离CD8^+T细胞,检测各组外周血及CD8^+T 细胞中Mg^2+含量;采用Western blot 和实时荧光定量PCR 法检测各组CD8^+T 细胞中MagT1 蛋白和mRNA表达水平;采用流式细胞术检测各组CD8^+T细胞表面分子T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)、程序性死亡受体1(PD-1)、自然杀伤细胞活化受体(NKG2D)和CD38的表达水平;并分析MagT1蛋白表达水平与CD8^+T细胞表面分子表达水平的相关性。结果各组外周血中Mg^2+浓度差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照组比较,慢性HBV 感染者CD8^+T细胞中Mg^2+浓度、MagT1 蛋白和mRNA 表达水平以及表面分子NKG2D和CD38均显著下降(均P<0.05),PD-1和Tim-3表达显著增加(均P<0.05)。并且,CD8^+T细胞中MagT1蛋白与PD-1、Tim-3表达呈负相关(均P<0.05),与NKG2D、CD38表达呈正相关(均P<0.05)。结论慢性HBV感染者CD8^+T细胞耗竭与CD8^+T细胞中MagT1表达下调所致的Mg^2+内流障碍有关。

单羧酸转运蛋白1、2在乳腺浸润性导管癌中的表达变化及其与病理级别之间的关系

目的探讨单羧酸转运蛋白(MCT)1、2在人不同病理级别乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达变化及其对增殖、生长的分子机制。方法收集人不同病理级别乳腺IDC标本37例,以肿瘤周围相对正常乳腺组织作为对照,运用苏木素-伊红(HE)染色作病理诊断分级,石蜡切片免疫组织化学显色,并用Western印迹方法观察MCT 1、2的表达变化。结果与正常乳腺组织相比,MCT 1、2在乳腺IDC中均有高表达;其表达量随病理级别的升高逐渐增强。结论 MCT 1、2在乳腺IDC组织中表达增强,其强度变化与肿瘤的恶性程度呈正相关。

ABCG2/Bcrp1转运蛋白:侧群干细胞的表型标记与功能调控蛋白

在骨髓、骨骼肌及神经组织均发现侧群干细胞 (SPSCs)。ABC转运蛋白ABCG2 /Bcrp1基因在不同来源侧群 (SP)干细胞均呈高表达 ,且该基因表达与SP细胞表型密切相关。SP细胞能向不同类型或不同胚层的组织细胞分化 ,很可能代表了一群更原始的干细胞 ,且与干细胞可塑性相关。而ABCG2 /Bcrp1在造血及神经等组织来源的SP干细胞中的特异表达 ,使得该转运蛋白成为从不同组织中分选多潜能干细胞的一种新的表型标记。

兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白多肽抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定兔抗弓形虫CorA家族Mg^(2+)转运蛋白(TgMg)的特异性多克隆抗体。方法:设计并合成一段的具有较好免疫原性的、来源于TgMg氨基酸序列的短肽,短肽与KLH偶联后免疫新西兰大耳白兔,收集兔血清并分离纯化TgMg多克隆抗体,利用间接ELISA、Western印迹、间接免疫荧光等多种分子生物学方法鉴定多抗的效价、特异性及TgMg蛋白的亚细胞定位。结果:间接ELISA测定多抗效价为1∶160000;Western印迹显示该多抗能识别相对分子质量约为174×103的单一条带,表明抗体的特异性较好;用间接免疫荧光法发现TgMg定位于细胞质,与预期结果相符。结论:运用人工合成多肽结合经典的多克隆抗体制备技术制备了抗TgMg多克隆抗体,为深入研究TgMg蛋白的生物学特性及代谢功能提供了有效工具。

2014—2018年我国七城市二肽基肽酶Ⅳ抑制剂和胰高血糖素样肽1受体激动剂及钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂使用情况调查

目的通过调查我国7个城市二肽基肽酶Ⅳ抑制剂(DPP-4i)和胰高血糖素样肽1受体激动剂(GLP-1RA)及钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)的使用情况及用药趋势,为促进药物合理使用提供基础参考数据。方法数据来源于2014年1月至2018年12月中国药学会医院药学专业委员会"医院处方分析合作项目"收集的我国7个城市中87家各级样本医疗卫生机构的抽样处方,对患者用药情况进行分析。结果5年来,7个城市DPP-4i,GLP-1RA,SGLT2i这3类降糖药物的销售金额呈逐年上升趋势,2018年药品销售金额中,DPP-4i(1643.81万元)>GLP-1RA(394.56万元)>SGLT2i(48.23万元)。药品销售金额排名前5位分别为西格列汀(828.63万元)、沙格列汀(393.12万元)、利拉鲁肽(375.97万元)、维格列汀(188.15万元)、利格列汀(131.15万元)。结论2014-2018年我国7城市DPP-4i、GLP-1RA和SGLT2i这3类新型降糖药物的使用较为合理,临床治疗中医师优先选择疗效和经济性较好的品种。

丙酮酸激酶M2蛋白、葡萄糖转运蛋白-1在胃腺癌中的表达意义

目的探讨丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在胃腺癌中的表达意义。方法选取收治的胃腺癌患者132例作为研究对象,取癌组织作为观察组、癌旁组织作为对照组,对比两组及不同TNM分期PKM2蛋白、GLUT-1表达水平,分析其在胃癌组织中的表达意义。结果观察组PKM2蛋白阳性表达率为75.76%(100/132)、GLUT-1阳性表达率为78.79%(104/132),高于对照组的9.09%(12/132)、10.61%(14/132),差异显著(P<0.05);Ⅳ期PKM2蛋白、GLUT-1阳性表达率高于Ⅲ期,Ⅲ期高于Ⅱ期,Ⅱ期高于Ⅰ期(P<0.05);经Spearman分析,PKM2蛋白、GLUT-1阳性表达率与TNM分期呈正相关(P<0.05)。结论 PKM2蛋白、GLUT-1表达水平与胃腺癌TNM分期关系密切,检测二者表达水平可为临床诊断及预后评估提供数据支持。

稳定敲低Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)的BV2细胞系建立

目的构建Mg^(2+)/Mn^(2+)依赖性蛋白磷酸酶1A(PPM1A)基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体,并建立稳定敲低PPM1A表达的BV2小鼠脑小胶质细胞系。方法针对PPM1A基因的编码序列(CDS)区,设计合成2对短发卡RNA(shRNA)序列shRNA1、shRNA2,分别将其克隆到GV493载体中,并转化至感受态大肠杆菌DH5α菌株,培养后挑取阳性克隆子进行测序,最后包装慢病毒并进行滴度测定。将2组慢病毒分别转染BV2小鼠脑小胶质细胞,并给予嘌呤霉素筛选,使用荧光显微镜及流式细胞术观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,评估转染结果,分别采用实时定量PCR和Western blot法检测PPM1A的mRNA和蛋白水平。结果 PPM1A基因shRNA慢病毒表达载体经过测序鉴定构建成功,转染BV2小鼠脑小胶质细胞后GFP表达率大于80%;与对照组相比,shRNA1及shRNA2敲低组PPM1A mRNA及蛋白水平均显著降低。结论利用慢病毒shRNA方法成功构建PPM1A敲低的BV2细胞系。

生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na^+-K^+-2Cl^-联合转运蛋白1型的影响

目的:研究生姜对缺血性脑水肿大鼠脑组织Na^+-K^+-2Cl^-联合转运蛋白1型(Na^+-K^+-2Cl^- combined transporter type 1,NKCC1)表达水平的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型对照组,生姜高、中、低剂量组。通过线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型。各组在造模前、后均给药5d。生姜高、中、低剂量组依次给予生姜10,20,40μL/g,假手术组、模型对照组给予等容积生理盐水10μL/g,灌胃给药,1d1次,连续给药10d。进行神经功能评分,通过病理组织学检查大脑病变情况,干湿重法测大脑含水量,免疫荧光染色法和Western-Blot法研究NKCC1的表达水平。结果:与假手术组对比,模型对照组大鼠出现明显的神经功能障碍,脑组织出现明显梗死灶,脑组织含水量明显升高,NKCC1蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型对照组对比,生姜高、中剂量组神经功能评分降低,脑梗死面积缩小,脑组织含水量降低,NKCC1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:生姜可能通过降低NKCC1水平,对缺血性脑水肿大鼠产生保护作用。

缺氧缺血对O-2A祖细胞膜铁转运蛋白1表达的影响

目的观察膜铁转运蛋白1(FPN1)在O-2A祖细胞缺氧缺血损伤后的表达变化,探讨其在O-2A祖细胞缺氧缺血损伤中的作用。方法体外培养O-2A祖细胞,以特异性抗体A2B5鉴定,观察FPN1在O-2A祖细胞上的定位表达;以糖氧剥夺(OGD)法建立缺氧缺血细胞模型,CCK8法检测细胞存活率;应用免疫荧光染色法、实时荧光定量PCR法和Western blotting法观察FPN1在细胞缺氧缺血后的表达变化。结果 FPN1定位表达于O-2A祖细胞的细胞膜、细胞质和突起;OGD3h、6h、12h及24h细胞存活率呈时间依赖性降低(P<0.05);OGD12h内细胞FPN1免疫荧光强度进行性减弱;与OGD0h相比,FPN1 mRNA和蛋白水平在OGD3h表达下调,OGD6h进一步降低,OGD12h最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 O-2A祖细胞缺氧缺血损伤后FPN1表达明显下调,细胞存活率显著降低,提示FPN1可能参与O-2A祖细胞的缺氧缺血损伤过程。

不同铜源对Caco-2细胞内铜-ATP酶二价金属离子转运体1和金属硫蛋白含量的影响

利用Caco-2细胞模型研究不同浓度硫酸铜,微米氧化铜,纳米氧化铜(铜水平2、4、8、16 mg/L)对细胞铜-ATP酶、二价金属离子转运体1(Divalent Metal Transporter 1,DMT1)、金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量的影响。结果显示,培养液中添加铜离子能提高Caco-2细胞铜-ATP酶、MT含量,低浓度铜离子能提高细胞DMT1含量,高浓度铜离子降低细胞DMT1含量。纳米氧化铜对几种铜转运蛋白的作用与硫酸铜类似,但纳米氧化铜对铜-ATP酶、MT、DMT1含量的影响更加明显。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂联合胰岛素治疗1型糖尿病疗效与安全性的Meta分析

目的:系统评价钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT-2)抑制剂联合胰岛素治疗1型糖尿病(T1DM)的疗效与安全性,为临床T1DM治疗提供循证参考。方法:计算机检索PubMed、Cochrane图书馆、Embase、ClinicalTrials、中国知网、中国生物医学文献数据库与万方数据库,检索时限均为各数据库自建库起至2020年2月,收集在胰岛素基础治疗的基础上,SGLT-2抑制剂(试验组)对比安慰剂(对照组)治疗T1DM的随机对照试验(RCT)。对符合纳入标准的文献进行资料提取,采用Cochrane风险偏倚评估工具5.1.0进行质量评价后,采用Stata 12.0软件进行Meta分析。结果:共纳入11项RCT,合计7003例患者。Meta分析结果显示,试验组患者糖化血红蛋白(HbA1c)水平降低值[SMD=-0.49,95%CI(-0.53,-0.44),P<0.001]、HbA1c水平降低值≥0.5%且未发生严重低血糖的患者比例[OR=3.93,95%CI(3.49,6.21),P<0.001]、HbA1c水平降低值≥0.5%的患者比例[OR=2.65,95%CI(2.25,3.12),P<0.001]、HbA1c水平<7.0%的达标率[OR=2.85,95%CI(2.44,3.33),P<0.001]、体质量降低值[SMD=-0.83,95%CI(-0.96,-0.70),P<0.001]均显著大于或高于对照组,每日胰岛素用量、空腹血糖、餐后血糖、收缩压、舒张压的降低值均显著大于对照组,差异均有统计学意义(P≤0.011)。试验组患者总体不良反应发生率[OR=1.14,95%CI(1.04,1.26),P=0.007]、SGLT-2抑制剂相关的不良反应发生率[OR=2.17,95%CI(1.75,2.99),P<0.001]、严重不良反应发生率[OR=1.48,95%CI(1.24,1.77),P<0.001]、生殖器感染发生率[OR=3.84,95%CI(3.14,4.69),P<0.001]、腹泻发生率[OR=1.47,95%CI(1.09,1.97),P=0.011]、体液减少相关不良反应发生率[OR=2.05,95%CI(1.37,3.08),P=0.001]、酮症相关不良反应发生率[OR=4.18,95%CI(3.15,5.55),P<0.001]、酮症酸中毒发生率[OR=4.33,95%CI(3.01,6.23),P<0.001]、严重酮症酸中毒发生率[OR=5.06,95%CI(2.61,9.81),P<0.001]均显著高于对照组,差异均有统计学意义;两组患者低血糖、严重低血糖、尿路感染、肾损伤的发生率比较,差异均无统计学意义。结论:SGLT-2抑制剂用于T1DM的联合治疗,可显著改善患者血糖水平,降低体质量、减少每日胰岛素用量、降低收缩压和舒张压,且不增加低血糖、尿路感染、肾损伤的发生风险,但总体不良反应、生殖器感染、腹泻、酮症酸中毒等不良反应的发生风险增加,需予以关注。

人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。