水杨酸诱导湖北海棠全长cDNA文库的构建及应用

以湖北海棠为材料,经水杨酸处理后,用改良CTAB法提取总RNA,纯化后构建全长cDNA文库,并进行PGIP基因的克隆.结果表明：（1）提取的总RNA无降解,无污染;mRNA弥散带主要集中在500～2 000 bp左右,没有rRNA残留.（2）ds cDNA弥散带主要分布于300～2 000 bp之间,PCR验证后片段大小分布于200～2 000bp之间,说明合成ds cDNA质量较好,成功地构建了全长cDNA文库.（3）通过PCR从该cDNA文库中克隆了PGIP基因,命名为MhPGIP,GenBank登录号为FJ449708;其核苷酸序列及推导氨基酸序列与苹果的一致性分别为98%和97%,该序列含有两个串联的亮氨酸重复序列.综上所述,构建的全长cDNA文库质量很好,该文库的建成可以用于今后抗病新基因的挖掘、克隆和利用,为苹果抗病机理的研究奠定基础.