miR-27a下调表达对大鼠心肌缺血再灌注后急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨miR-27a下调表达对大鼠心肌缺血再灌注(MI/R)后急性肺损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法 选择8~12周龄成年雄性SD大鼠40只,将其随机分为假手术组(SP组)、模型组(I/R组)、miR-27a抑制剂组(anta-27a+I/R组)和miR-27a抑制剂空白对照组(NC+I/R组),每组10只。结扎冠脉左前降支30 min,再灌注120 min,构建大鼠MI/R所致ALI模型。anta-27a+I/R组与NC+I/R组在建模前连续3 d分别予尾静脉注射antagomir-27a、antagomir-NC。比较四组大鼠肺脏湿干重比(W/D)及病理改变情况。比较四组肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平。比较四组肺组织及血清中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果 与SP组比较,I/R组、anta-27a+I/R组、NC+I/R组大鼠肺组织病理损伤严重,肺W/D值升高;肺组织MDA水平上升,SOD水平降低;肺组织及血清中IL-6、TNF-α水平上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与I/R组比较,anta-27a+I/R组大鼠肺组织病理损伤程度有所减轻,肺W/D值下降;肺组织MDA水平下降,SOD水平上升;肺组织及血清中IL-6和TNF-α水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 下调miR-27a表达可以通过减轻炎症反应与氧化应激缓解大鼠MI/R后所引起的ALI。

miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin轴与胃癌临床特征的关联性及益气化瘀解毒方抑制上皮间质转化的机制

目的:明确miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin与胃癌临床特征的关系,探讨益气化瘀解毒方抑制胃癌上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:生物信息学分析miR-27a-3p、RCBTB1在胃癌中的表达与临床意义;高通量测序检测小鼠肝转移瘤组织内mRNA表达差异;质粒转染构建沉默或过表达miR-27a-3p、RCBTB1的稳定细胞株;Transwell、划痕实验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的改变;脾脏注射MFC细胞建立小鼠胃癌肝转移模型并以益气化瘀解毒方干预,检测肝转移瘤数量,苏木精-伊红染色(HE)染色法检测胃癌细胞肝脏浸润情况;RT-PCR、Western Blot检测miR-27a-3p、RCBTB1、β-catenin、E-cadherin、Snail的表达。结果:miR-27a-3p在胃癌组织中较正常组织升高(P<0.01),且Ⅳ期胃癌组织中miR-27a-3p表达较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期增高(P<0.05)。与对照组比较,miR-27a-3p过表达组胃癌细胞侵袭迁移能力增强,miR-27a-3p沉默组细胞侵袭性减弱(P<0.01)。高通量测序显示,益气化瘀解毒方组小鼠肝转移瘤组织内RCBTB1较对照组升高,且TargetScan预测RCBTB1为miR-27a-3p的潜在靶基因。与对照组比较,过表达miR-27a-3p能抑制RCBTB1(P<0.01),沉默miR-27a-3p能上调RCBTB1表达(P<0.01)。生信分析提示,RCBTB1低表达组胃癌患者PFI、DSS较高表达组降低(P<0.05)。细胞实验提示,沉默RCBTB1可增强胃癌细胞侵袭性(P<0.01),过表达RCBTB1能抑制胃癌细胞侵袭性(P<0.01,P<0.05)。与对照组比较,益气化瘀解毒方含药血清组E-cadherin表达升高(P<0.01),Snail、β-catenin表达降低(P<0.01,P<0.05)。体内实验显示与对照组比较,益气化瘀解毒方组胃癌细胞在肝组织中的浸润减少,肿瘤组织内miR-27a-3p、β-catenin、Snail表达下调(P<0.01),RCBTB1、E-cadherin表达上调(P<0.01,P<0.05)。结论:miR-27a-3p/RCBTB1/β-cateni是促进胃癌EMT的重要信号轴,益气化瘀解毒方能调控miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin信号以抑制EMT,进而发挥抗胃癌转移的作用。

miR-27a过表达的血管内皮细胞来源外泌体改善股骨头坏死实验研究

目的探究miR-27a过表达的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)来源外泌体exo(miR-27a)能否促进骨再生并改善糖皮质激素(glucocorticoids,GC)诱导的股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head,ONFH)(GC-ONFH)。方法构建exo(miR-27a),并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot和实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)进行鉴定。采用qRTPCR评估exo(miR-27a)递送miR-27a至成骨细胞MC3T3-E1的效果,ALP染色、茜素红染色及qRT-PCR评估其对MC3T3-E1细胞成骨的影响。行双荧光素酶报告基因检测验证miR-27a靶向Dickkopf WNT信号通路抑制剂2(Dickkopf WNT signaling pathway inhibitor 2,DKK2)是否为潜在机制,并在MC3T3-E1细胞内通过qRT-PCR、Western blot及茜素红染色进一步验证该机制。最后,通过SD大鼠的GC-ONFH模型验证exo(miR-27a)对ONFH的保护作用。结果透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot和qRT-PCR检测示exo(miR-27a)构建成功。exo(miR-27a)可将miR-27a有效递送至MC3T3-E1细胞并提高其成骨能力。双荧光素酶报告基因检测示miR-27a通过直接靶向DDK2促进成骨。动物实验Micro-CT及HE染色结果显示,尾静脉注射exo(miR-27a)改善了SD大鼠GC-ONFH模型的骨坏死情况。结论exo(miR-27a)可以促进骨再生,并在一定程度上改善GCONFH。

骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中miR-27a、miR-146a表达的影响

目的:探讨骨碎补对骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a表达的影响。方法:选取我院收治的骨性关节炎患者46例,随机分为两组,每组各23例。对照组予抗骨增生治疗,实验组在对照组基础上加以骨碎补治疗。观察和比较两组患者的临床疗效、炎性因子水平的变化以及骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达情况。结果:1治疗后,两组患者的临床症状均有所改善,且实验组疗效高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2治疗后,两组患者的IL-1β、PGE2水平均较治疗前显著降低,且实验组降低较对照组更明显,差异均有统计学意义(P<0.05)。3治疗后,两组患者的骨关节滑膜组织中的mi R-27a、mi R-146a表达均降低,且与对照组比较,实验组较低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:骨碎补能够降低骨性关节炎患者骨关节滑膜组织中mi R-27a、mi R-146a的表达,降低IL-1β、PGE2的水平,提高临床疗效。