miR-330-5p靶向调控OY-TES-1抑制胶质母细胞瘤的迁移

目的 探究胶质母细胞瘤中miR-330-5p对OY-TES-1的靶向调控关系以及miR-330-5p/OY-TES-1轴对胶质母细胞瘤的迁移能力的影响。方法 生物信息学分析胶质母细胞瘤患者中miR-330-5p的表达水平及其对患者预后生存的影响。将胶质母细胞瘤细胞U251分为miR-330-5p minics组、minics-NC组和miR-330-5p+OY-TES-1过表达组(miR-330-5p minics+pcDNA3.1-OY-TES-1)。使用双荧光素酶报告基因实验检测miR-330-5p对OY-TES-1 3'UTR区域活性的影响;使用qRT-PCR检测OY-TES-1mRNA表达;采用Transwell迁移实验检测miR-330-5p/OY-TES-1轴对胶质母细胞瘤细胞迁移能力的影响。结果 胶质母细胞瘤组织中miR-330-5p的表达明显低于非瘤脑组织和低级别胶质瘤组织(P<0.05)。高表达miR-330-5p的胶质母细胞瘤患者生存期显著长于低表达miR-330-5p患者(P<0.05)。过表达miR-330-5p后OY-TES-1 3'UTR区域活性下降(P<0.05)。与minics-NC组相比,miR-330-5p minics组U251和U87MG细胞中OY-TES-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。与minics-NC组相比,miR-330-5p minics组及miR-330-5p+OY-TES-1过表达组迁移细胞数显著减少(P<0.05);与miR-330-5p minics组相比,miR-330-5p+OY-TES-1过表达组迁移细胞数显著增加(P<0.01)。结论 miR-330-5p靶向调控OY-TES-1抑制胶质母细胞瘤的迁移。

局部晚期食管癌患者血清miR-193b、miR-330-5p水平与新辅助放化疗疗效的关系

目的探讨局部晚期食管癌患者血清微小RNA-193b(miR-193b)、miR-330-5p水平与新辅助放化疗疗效的关系。方法选取局部晚期食管癌患者180例,qRT-PCR法检测患者血清miR-193b、miR-330-5p。于新辅助放化疗后评估放化疗疗效,将完全缓解+部分缓解患者定义为放化疗有效者,疾病进展+稳定患者定义为放化疗无效者。比较新辅助放化疗有效与无效的局部晚期食管癌患者临床资料,取有统计学差异的临床资料进一步纳入多因素Logistic回归分析。采用多因素Logistic回归分析局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的影响因素,并通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-193b、miR-330-5p对局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的预测价值。结果180例局部晚期食管癌患者中行新辅助放化疗有效者84例、无效者96例,新辅助放化疗有效与无效的局部晚期食管癌患者肿瘤分化程度、肿瘤N分期、血清miR-193b、血清miR-330-5p比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,低血清miR-193b、低血清miR-330-5p是局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-193b、血清miR-330-5p预测局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的AUC依次为0.752、0.777,两项指标联合预测局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的AUC为0.829。结论行新辅助放化疗有效的局部晚期食管癌患者血清miR-193b、miR-330-5p水平高于放化疗无效的患者,血清miR-193b、miR-330-5p低水平是局部晚期食管癌患者新辅助放化疗无效的独立危险因素,两者联合对局部晚期食管癌新辅助放化疗疗效具有一定预测价值。

circ_0114427靶向微小RNA-330-5p调控脂多糖诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症反应

目的探讨circ_0114427对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症的影响及其机制。方法体外培养人肺泡上皮细胞,分别转染si-circ_0114427、微小RNA(miR)-330-5p mimics或共转染si-circ_0114427与anti-miR-330-5p后,用10 mg/L LPS处理24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中circ_0114427和miR-330-5p表达量;采用蛋白免疫印迹评估活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase3)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(Cleaved-caspase9)蛋白水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达;采用流式细胞术分析细胞凋亡。采用双荧光素酶报告实验验证circ_0114427和miR-330-5p的互作关系。结果肺泡上皮细胞经LPS处理后,细胞中circ_0114427表达升高,miR-330-5p表达降低(P<0.05)。敲减circ_0114427或上调miR-330-5p可以抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡、Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9表达以及IL-6和TNF-α水平(P<0.05)。circ_0114427靶向结合并负调控miR-330-5p。miR-330-5p下调可以逆转circ_0114427敲低对LPS诱导的细胞凋亡和炎症的抑制作用。结论敲减circ_0114427可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症,这可能与miR-330-5p上调有关。

结直肠癌组织miR-330-5p、PTBP1的表达与病理参数和预后的关系

目的分析结直肠癌组织微小核糖核酸-330-5p(miR-330-5p)、多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)的表达与病理参数及预后的关系。方法选取2018年1月—2020年5月南通市中医院肛肠科收治的结直肠癌患者101例,收集术中部分癌组织及其癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-330-5p、PTBP1 mRNA表达。通过Targetscan数据库预测miR-330-5p与PTBP1的结合位点,分析miR-330-5p、PTBP1 mRNA在结直肠癌组织不同临床病理参数中的差异;采用K-M法绘制其生存曲线;多因素Cox回归分析患者预后影响因素。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织miR-330-5p表达降低,PTBP1 mRNA表达升高(t/P=24.000/<0.001、19.233/<0.001)。miR-330-5p与PTBP1存在结合位点,二者在结直肠癌组织表达呈负相关(r/P=-0.679/<0.001)。与低分化程度、TNMⅢ期、有淋巴结转移比较,中高分化程度、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌组织miR-330-5p升高、PTBP1 mRNA表达降低(t/P=2.490/0.014、2.479/0.015,2.837/0.006,2.953/0.004,3.319/0.001、3.307/0.001)。101例结直肠癌患者3年总生存率为83.17%(84/101)。miR-330-5p高表达组、PTBP1 mRNA低表达组3年总生存率分别高于miR-330-5p低表达组、PTBP1 mRNA高表达组(χ^(2)/P=6.466/0.011、11.697/0.001)。结直肠癌患者死亡的独立危险因素为低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和PTBP1 mRNA≥1.50,独立保护因素为miR-330-5p≥0.57[OR(95%CI)=3.642(1.278~10.381)、3.817(1.375~10.598)、4.013(1.418~11.351)、2.684(1.025~7.029)、0.338(0.129~0.890)]。结论结直肠癌组织miR-330-5p低表达和PTBP1 mRNA高表达,与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

miR-330-5p通过抑制MAPK通路发挥对心肌缺血再灌注的保护作用

目的:探究miR-330-5p保护心肌缺再灌注的分子机制及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:体外培养人心肌细胞AC16,转染miR-330-5p模拟剂(mimic),在1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2)条件下构建心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,以模拟心肌缺血再灌注。采用流式细胞技术检测细胞凋亡;采用ELISA法检测心肌细胞中4-羟基壬烯醛(4-HNE)、丙二醛(MDA)的含量;采用WesternBlot法检测凋亡相关因子Bcl-2相关的X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的蛋白表达、乙醛脱氢酶2(ALDH2)和MAPK信号通路相关因子脯氨酸导向的细胞外调节激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达。结果:在OGD/R模型中,心肌细胞凋亡率增加,4-HNE、MDA含量均显著升高,而ALDH2则显著降低;凋亡标志Bax显著升高,而Bcl-2显著降低。转染miR-330-5p mimic后,心肌细胞中4-HNE、MDA显著降低,ALDH2可见显著升高,且细胞凋亡显著抑制。对于MAPK信号通路,在转染miR-330-5pmimic后,ERK1/2、JNK1、p38MAPK蛋白表达均显著降低。结论:miR-330-5p通过抑制MAPK信号通路,调控ALDH2表达,抑制心肌缺血再灌注过程中心肌细胞的氧化应激和细胞凋亡,从而保护心肌细胞。

CircFOXK2调节miR-330-5p/SLC1A5轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨CircFOXK2对卵巢癌(ovarian cancer, OC)细胞恶性生物学行为的影响以及在此过程中对miR-330-5p/SLC1A5轴的调节机制。方法:将人OC细胞系的SKOV3细胞分为NC组(未转染)、 si-CircFOXK2-NC组(转染si-CircFOXK2-NC)、si-CircFOXK2组(转染si-CircFOXK2)、 si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p-NC组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p-NC)、si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p)。qRT-PCR检测细胞中CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5 mRNA的表达;Western blot检测细胞中SLC1A5蛋白表达水平;CCK-8检测SKOV3细胞增殖;克隆形成实验检测SKOV3细胞克隆数量;流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况;Transwell小室实验测定SKOV3细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5三者的靶向关系。结果:与NC组和si-CircFOXK2-NC组相比,转染si-CircFOXK2组OC细胞中CircFOXK2、SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05),miR-330-5p的表达、细胞凋亡率均升高(P<0.05);anti-miR-330-5p回补实验结果显示,si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组细胞中SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达升高,细胞增殖活性及迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论:敲低CircFOXK2能够上调miR-330-5p表达,下调SLC1A5的表达,抑制OC细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。

LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

miR-330-5p调控Nox4对缺氧复氧大鼠胚胎心肌细胞损伤影响的实验研究

目的研究miR-330-5p调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,Nox4)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)大鼠胚胎心肌细胞损伤的影响及可能机制。方法将大鼠胚胎心肌细胞H9C2分为对照组(Con)、模型组(H/R)、H/R+anti-miR-NC组、H/R+anti-miR-330-5p组、H/R+pcDNA3.1组、H/R+pcDNA3.1-Nox4组、H/R+anti-miR-330-5p+si-NC组和H/R+anti-miR-330-5p+si-Nox4组。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-330-5p在H/R诱导心肌细胞中的表达;MTT法和流式细胞术检测心肌细胞增殖活力和细胞凋亡;Western blot检测Nox4蛋白及凋亡相关蛋白[细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X,Bax)、P21]表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-330-5p和Nox4的靶向关系。结果与Con组比较,H/R组细胞中miR-330-5p表达(1.96±0.20 vs1.01±0.11),P21(0.89±0.07 vs 0.21±0.03)和Bax(0.80±0.05 vs 0.18±0.02)蛋白水平及细胞凋亡率(26.67%±2.68%vs 7.22%±0.68%)明显升高(t=7.029,12.591,12.790,12.102),而Cyclin D1(0.20±0.03 vs 0.78±0.06)和Bcl-2(0.11±0.02vs 0.71±0.06)蛋白水平及细胞增殖活性显著降低(t=13.671;11.047;11.333,11.485,12.511),差异具有统计学意义(均P<0.01)。Nox4是miR-330-5p的靶基因,miR-330-5p负调控Nox4表达。抑制miR-330-5p表达或过表达Nox4可促进Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达(t=9.664,7.548),抑制P21和Bax蛋白表达(t=10.184,10.314),增强心肌细胞增殖活力(t=6.667~9.126)、抑制细胞凋亡(t=10.341),差异具有统计学意义(均P<0.01)。抑制Nox4表达能够逆转抑制miR-330-5p对H/R心肌细胞增殖(t=4.146~7.941)和凋亡(t=6.285~11.358)的影响(均P<0.01)。结论H/R诱导的大鼠心肌细胞中miR-330-5p表达上调,抑制miR-330-5p可能通过靶向Nox4抑制心肌细胞凋亡,对H/R大鼠心肌细胞损伤起到保护作用。

血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平与急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级的相关性

目的分析血清微小RNA-330-5p(miR-330-5p)、miR-34a-5p、血管内皮生长因子(VEGF)水平与急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级的相关性。方法选取2019年7月—2021年1月在石家庄市第三医院神经内科住院治疗且建立脑侧支循环的急性缺血性脑卒中患者104例为研究组,数字减影血管造影(DSA)检测脑侧支循环情况,根据开放层次分为一级侧支循环亚组(一级亚组)36例,二级侧支循环亚组(二级亚组)51例,三级侧支循环亚组(三级亚组)17例,同期选取医院健康体检者40例为健康对照组。检测血清miR-330-5p、miR-34a-5及VEGF水平,Pearson法分析急性缺血性脑卒中患者血清miR-330-5p、miR-34a-5p与VEGF水平的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)评价血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平对急性缺血性脑卒中患者三级脑侧支循环建立的预测价值。结果研究组血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平均高于健康对照组(t/P=17.045/0.000、26.347/0.000、6.736/0.000);一级亚组、二级亚组、三级亚组血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平依次升高(F/P=54.260/0.000、161.507/0.000、11.309/0.000);Pearson分析结果显示,急性缺血性脑卒中患者血清miR-330-5p、miR-34a-5p与VEGF水平均呈正相关(r/P=0.674/0.000、0.624/0.000);ROC分析结果显示,血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平及三者联合预测急性缺血性脑卒中患者三级脑侧支循环建立的曲线下面积(AUC)分别为0.874、0.903、0.870、0.951,三者联合诊断效能更高。结论血清miR-330-5p、miR-34a-5p、VEGF水平随急性缺血性脑卒中患者脑侧支循环分级增加而升高,对三级脑侧支循环的建立有一定的预测价值。

circ_0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨circ_0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织;A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ_0081666组(转染si-circ_0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ_0081666组(转染pcDNA-circ_0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ_0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ_0081666和anti-miR-con)、si-circ_0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ_0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ_0081666和miR-330-5p表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ_0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果非小细胞肺癌组织和A549细胞中circ_0081666表达水平显著升高,miR-330-5p表达水平显著降低(P<0.05)。敲低circ_0081666或过表达miR-330-5p后,A549细胞活性显著降低,迁移、侵袭细胞数显著减少(P<0.05)。circ_0081666靶向调控miR-330-5p;敲低miR-330-5p逆转了抑制circ_0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论敲低circ_0081666可能通过上调miR-330-5p抑制非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

circ_0001785与miR-330-5p在结直肠癌中的表达及其生物学意义

背景结直肠癌(colorectal cancer,CRC)发病机制尚未cular RNA,circRNA)在CRC等肿瘤中表达异常并可调控细胞增殖、迁移及侵袭等生物学过程,但关于其具体作用机制尚未完全阐明,因而探寻新型circRNA分子并探究其可能作用机制对进一步揭示CRC发病机制具有重要意义.目的探讨circ_0001785与miR-330-5p在CRC中的表达及其生物学意义.方法采用qRT-PCR法检测CRC组织、癌旁组织中circ_0001785、miR-330-5p的表达量;采用Pearson法检测CRC中circ_0001785与miR-330-5p的相关性;根据circ_0001785、miR-330-5p表达量的平均值将患者分为circ_0001785高表达组41例、circ_0001785低表达组39例与miR-330-5p高表达组45例、miR-330-5p低表达组35例,观察circ_0001785、miR-330-5p表达量与CRC患者临床病理参数的相关性;体外培养人CRC细胞SW480,分别将si-NC、si-circ_0001785、sicirc_0001785与anti-miR-NC、si-circ_0001785与antimiR-330-5p转染至SW480细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中circ_0001785、miR-330-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ_0001785与miR-330-5p的靶向关系;Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达量.结果circ_0001785在CRC组织及细胞系中表达水平显著升高(P<0.05),miR-330-5p的表达水平显著降低(P<0.05);circ_0001785与miR-330-5p呈负相关(r=-0.985,P<0.0001);circ_0001785、miR-330-5p表达量与分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期密切相关(P<0.05);与si-NC组比较,si-circ_0001785组细胞活力及MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数显著减少(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实circ_0001785可靶向结合miR-330-5p;下调miR-330-5p表达可降低干扰circ_0001785表达对CRC细胞SW480增殖、迁移及侵袭的作用.结论circ_0001785在CRC中表达上调,而miR-330-5p表达下调,干扰circ_0001785表达可通过上调miR-330-5p的表达从而抑制CRC细胞增殖、迁移及侵袭.

山慈菇提取物调控circ_0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ_0003998和miR-330-5p表达有关。方法采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ_0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ_0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ_0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ_0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ_0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ_0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ_0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ_0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ_0003998/miR-330-5p分子轴有关。

血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p联合检测对妊娠期糖尿病的诊断价值

目的探讨血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p对妊娠期糖尿病的诊断价值。方法选择2018年5—6月该院收治的妊娠期糖尿病患者10例和妊娠24~28周的健康孕妇10例,采用转录组测序技术(RNA-seq)分析血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平。选择2018年5月至2020年5月该院收治的妊娠期糖尿病患者100例为观察组,妊娠24~28周的健康孕妇100例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测2组受试者血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p单独或联合检测对妊娠期糖尿病的诊断价值。结果RNA-seq检测结果显示,10例妊娠期糖尿病患者血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平较10例健康孕妇高8倍以上。观察组血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p的相对表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p单独检测对妊娠期糖尿病的诊断灵敏度分别为95%、97%、94%,特异度分别为95%、96%、95%,血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p联合检测对妊娠期糖尿病的诊断灵敏度为98%,特异度为93%,准确性为96%。结论血清miR-16-5p、miR-17-5p和miR-330-3p可作为妊娠期糖尿病的潜在诊断标志物。

circ_POLA2靶向miR-330-5p对脑胶质瘤细胞生长及转移能力的影响

目的探讨circ_POLA2对脑胶质瘤细胞生长及转移能力的影响及其可能作用机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测脑胶质瘤组织与癌旁组织中circ_POLA2、miR-330-5p的表达量;Pearson法分析脑胶质瘤组织中circ_POLA2、miR-330-5p表达量的相关性;体外培养人脑胶质瘤细胞T98G,si-NC、si-circ_POLA2、miR-NC、miR-330-5p mimics、si-circ_POLA2与anti-miR-NC、si-circ_POLA2与anti-miR-330-5p分别转染至T98G细胞(si-NC组、si-circ_POLA2组、miR-NC组、miR-330-5p组、si-circ_POLA2+anti-miR-NC组、si-circ_POLA2+anti-miR-330-5p组);CCK-8实验检测细胞增殖;氧化酶法检测葡萄糖消耗量;比色测定法检测乳酸生成量;划痕实验、Transwell小室实验别检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验检测circ_POLA2与miR-330-5p的靶向关系;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达量。结果与癌旁组织比较,脑胶质瘤组织中circ_POLA2表达量明显升高,miR-330-5p表达量明显降低(P<0.05);circ_POLA2与miR-330-5p呈负相关(r=-0.8964,P<0.001);与si-NC组比较,si-circ_POLA2组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05);circ_POLA2能够靶向结合miR-330-5p;与miR-NC组比较,miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05);与si-circ_POLA2+anti-miR-NC组比较,si-circ_POLA2+anti-miR-330-5p组细胞活力、划痕愈合率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、葡萄糖消耗量和乳酸生成量明显升高,侵袭细胞数明显增多(P<0.05)。结论干扰circ_POLA2表达可能通过靶向miR-330-5p而降低糖酵解水平进而抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭。

微小RNA-330-5p转染对宫颈癌细胞C33A增殖的影响

目的观察微小RNA-330-5p(miR-330-5p)过表达对宫颈癌细胞C33A中肿瘤坏死因子受体相关因子4 (TNF receptor associated factor 4,TRAF4)基因表达的抑制作用和对C33A细胞增殖的影响。方法通过Lipofectamine 2000转染试剂分别向宫颈癌细胞系C33A瞬时转染miR-330-5p模拟物(设为实验组)或者转染miR-NC(设为对照组),通过荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测TRAF4基因的表达情况,集落形成实验检测细胞增殖能力。结果与对照组相比,实验组C33A细胞中TRAF4 mRNA下降57.8%(p<0.01),TRAF4蛋白下降77.9%(p<0.01)。集落形成实验显示,与对照组相比,实验组C33A细胞的增殖能力明显下降(p<0.05)。结论 miR-330-5p可通过降低宫颈癌细胞C33A中TRAF4的表达抑制宫颈癌细胞C33A的增殖。

LncRNA GAS6-AS1调节miR-330-5p/PTBP1轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异基因转录的反义RNA(GAS6-AS1)调节miR-330-5p/多聚嘧啶串结合蛋白1(PTBP1)轴对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响。方法本实验于2023年2月至12月实施。收集2021年7月至2023年6月期间在陕西中医药大学附属医院接受手术治疗的26例宫颈癌患者癌组织和癌旁组织,将宫颈癌MS751细胞分为control组、sh-NC组、sh-GAS6-AS1组、sh-GAS6-AS1+inhibitor NC组、sh-GAS6-AS1+miR-330-5p inhibitor组、sh-GAS6-AS1+oe-NC组、sh-GAS6-AS1+oe-PTBP1组;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞和组织中的GAS6-AS1、miR-330-5p和PTBP1 mRNA表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中肿瘤增殖抗原(Ki67)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、PTBP1蛋白表达量。验证miR-330-5p与GAS6-AS1和PTBP1的靶向关系。采用t检验、单因素方差分析和SNK-q检验进行统计分析。结果宫颈癌组织GAS6-AS1、miR-330-5p和PTBP1 mRNA表达水平与癌旁组织比较(1.84±0.17比1.03±0.09、0.34±0.03比0.98±0.07、2.13±0.22比1.06±0.10),差异均有统计学意义(均P<0.05)。癌组织中PTBP1阳性表达率为(68.46±7.82)%,高于癌旁组织的(21.83±2.79)%(P<0.05)。宫颈癌细胞中GAS6-AS1和PTBP1 mRNA表达高于正常人宫颈上皮细胞H8,miR-330-5p表达低于正常人宫颈上皮细胞H8(均P<0.05);sh-GAS6-AS1组MS751细胞中GAS6-AS1和PTBP1 mRNA表达、A450(24 h、48 h)值、细胞迁移和侵袭数量、Ki67、Bcl-2、MMP-2、PTBP1蛋白表达均低于sh-NC组,miR-330-5p表达、凋亡率和Bax蛋白表达均高于sh-NC组(均P<0.05);在下调GAS6-AS1的同时敲低miR-330-5p表达或上调ANXA2表达,均可减弱下调GAS6-AS1对MS751细胞行为的抑制作用(均P<0.05)。结论干扰GAS6-AS1表达可调控miR-330-5p/PTBP1轴,进而抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进凋亡。

circHIPK3/miR-330-5p对人晶状体上皮细胞损伤的影响及其调控机制研究

目的探究环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3(circHIPK3)、微小RNA-330-5p(miR-330-5p)表达对人晶状体上皮细胞损伤的影响及其调控机制。方法研究对象为人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)SRA01/04,采用过氧化氢(H_(2)0_(2))诱导构建SRA01/04细胞损伤模型,随机分为正常对照组(NC)组、模型组(A)组、过表达质粒(OE-Vector)+H,O,组(B组)、circHIPK3过表达质粒(OE-circHIPK3)+H_(2)0_(2)组(C组)、OE-circHIPK3+miR-330-5p阴性对照mimicNC序列(miR-NC)+H_(2)0_(2)组(D组)、OE-circHIPK3+miR-330-5p寡核苷酸模拟物(miR-330-5pmimics)+H_(2)0_(2)组(E组),共5组。qRT-PCR法检测各组细胞中circHIPK3、miR-330-5p水平。双荧光素酶报告法验证circHIPK3与miR-330-5p的靶向关系。分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞存活率、调亡率。分析细胞中氧化应激[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)]水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(BCL2-associated X,Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)]。结果A组细胞中circHIPK3水平低于NC组,miR-330-5p水平高于NC组(P<0.05);与NC组比较,A组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平及SOD、GSH-Px水平降低,凋亡率、Bax蛋白水平及MDA水平升高(P<0.05);与A组比较,D组细胞存活率升高,凋亡率、Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低(P<0.05);circHIPK3可靶向调控miR-330-5p表达。与D组比较,E组miR-330-5p水平升高,细胞存活率、Bcl-2蛋白水平及SOD、GSH-Px水平降低,凋亡率、Bax蛋白水平及MDA水平升高(P<0.05)。结论circHIPK3过表达可靶向抑制miR-330-5p表达,促进LECs存活,抑制LECs调亡,增强其抗氧化应激能力,减轻LECs损伤。

转染microRNA-330-5p对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

[目的]探讨miR-330-5p表达对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,揭示miR-330-5p的作用机制。[方法]分析非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95C和95D的miRNA表达谱芯片中miR-330-5p的表达情况并用靶标软件预测其靶基因;转染miR-330-5p类似物(mimics)至95D、转染miR-330-5p抑制剂(inhibitor)至95C中,应用CCK-8法、transwell小室法检测miR-330-5p对肺癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响;应用Western blot法检测miR-330-5p表达对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平的影响。[结果]miRNA表达谱芯片显示miR-330-5p在95D中表达明显低于95C;靶标预测软件预测mTOR mRNA可能是miR-330-5p的靶基因;转染miR-330-5p mimics后95D细胞增殖能力显著降低,其24h侵袭穿膜细胞数明显低于对照组,mTOR蛋白表达明显下调(P<0.01);而转染miR-330-5p inhibitor后95C细胞的增殖能力增强,其24h侵袭穿膜细胞数较对照组明显增加,mTOR蛋白表达上调(P<0.01)。[结论]提高miR-330-5p表达能够明显抑制肺癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力,mTOR mRNA可能是其重要的靶基因。

Circ_0001666通过靶向miR-330-5p/HMGA2轴促进非小细胞肺癌细胞的增殖并抑制凋亡

许多研究表明环状RNA (circular RNAs, circRNAs)在肿瘤的整个生物过程中发挥着关键的调控作用。本研究旨在探讨circ_0001666在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞中的生物学功能及其分子机制,以期为NSCLC的早期诊断和治疗提供新的靶点。在公共基因芯片数据库GEO (Gene Expression Omnibus)中下载GSE101586数据集,通过GEO2R分析得到差异基因。采用实时定量聚合酶链反应检测NSCLC细胞中circ_0001666的表达水平。采用细胞计数试剂盒-8和细胞凋亡检测试剂盒分别检测敲低circ_0001666对NSCLC细胞增殖和凋亡的作用。通过生物信息学预测、双荧光素酶报告实验、RNA结合蛋白免疫沉淀实验和RNA pull down实验研究微小RNA 330-5p (microRNA 330-5p, miR-330-5p)与circ_0001666、高迁移率蛋白A2 (high mobility group A2 protein, HMGA2)之间的靶向关系。结果显示:circ_0001666在NSCLC细胞系中的表达显著高于正常肺上皮细胞。敲低circ_0001666显著降低了NSCLC细胞的增殖活力,并促进了细胞凋亡,而转染miR-330-5p抑制剂可逆转此作用。miR-330-5p是circ_0001666的下游靶点,可以被circ_0001666吸附;HMGA2是miR-330-5p的靶基因,可以被circ_0001666间接正向调控。以上结果提示,circ_0001666通过靶向调控miR-330-5p/HMGA2轴促进NSCLC细胞的增殖并抑制凋亡。

微小miR-330-5p基因在先天性胆道闭锁中的研究初探

目的探讨微小miR-330-5p基因在先天性胆道闭锁中的生物学功能。方法应用RT-qPCR方法检测近2年来我院23例胆道闭锁患儿和25例胆道扩张症患儿肝脏组织中miR-330-5p含量;然后摸索研究miR-330-5p对胆管上皮细胞存活数量的影响,分别向胆管上皮细胞转染miR-330-5p模拟物和miR-330-5p阴性对照物,并采纳CCK8法和AnnexinV/PI法来研究验证其对胆管上皮细胞的增殖和凋亡现象的影响。结果与胆道扩张症的患儿肝脏组织比较,miR-330-5p表达水平在胆道闭锁患儿肝脏组织中明显下降(0.481±0.0712vs.1.602±0.178,P<0.01)。转染miR-330-5p模拟物后可以发现,胆管上皮细胞中miR-330-5p的表达能有效的提高。CCK8法检测细胞增殖现象的结果显示,转染miR-330-5p模拟物组的细胞存活数明显低于转染miR-330-5p阴性对照组的,两组间的差别具备统计学意义(P<0.05);AnnexinV/PI法分别在转染48h后检测两组胆管上皮细胞凋亡现象的结果显示,两组胆管上皮细胞的凋亡情况没有统计学差别(P>0.05)。结论 miR-330-5p在胆道闭锁患儿的肝脏组织中呈低表达状态。miR-330-5p能够对胆管上皮细胞的增殖产生抑制而对细胞的凋亡没有显著的影响。