miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期患者中的表达水平及与病情的相关性

目的分析miR-21、miR-26a及miR-200a在子痫前期(PE)患者血清中的表达,并探讨其临床意义。方法选取2019年3月至2021年3月在南京市妇幼保健院治疗的PE患者103例,分为轻度PE组(57例)和重度PE组(46例),另选取同期正常孕妇50例作为对照组。检测各组孕妇血清miR-21、miR-26a及miR-200a表达水平,分析其与年龄、孕周、BMI、血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局的相关性,并分析血清miR-21、miR-26a及miR-200a对PE的诊断价值。结果重度PE组BMI、舒张压、收缩压以及24h尿蛋白高于轻度PE组及对照组,且差异具有统计学意义(F值分别为4.116、141.063、143.118和342.736,P<0.05)。对照组、轻度PE组及重度PE组孕妇血清中miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平依次升高。Pearson相关性分析结果显示,血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达水平与血压、24h尿蛋白及不良妊娠结局发生率呈正相关(r值介于0.446~0.832之间,P<0.001)。经受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析发现,血清miR-21、miR-26a及miR-200a联合诊断PE的曲线下面积(AUC)为0.967,敏感度为98.10%,特异性为92.30%。结论PE患者血清miR-21、miR-26a及miR-200a的表达高于正常孕妇,且与患者的临床指标及不良妊娠结局相关,检测血清miR-21、miR-26a、miR-200a水平对早期诊断PE及评估患者预后具有十分重要的意义。

miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死患者诊疗中的价值研究

目的 探讨miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死(ACI)患者诊疗中的应用价值。方法 选取2020年1月至2022年12月南通市第三人民医院全科医学科收治的ACI患者100例作为研究对象,定义为ACI组,根据ACI患者3个月改良Rankin评分量表(mRS评分)将其分为预后良好组(mRS评分≤2分)68例与预后不良组(mRS>2分)32例,另选同期于南通市第三人民医院全科医学科体检的健康者100例作为对照组。记录各组miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平并进行比较,采用Pearson相关分析探讨两变量的相关性,通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测在ACI诊断中的效能,采用多因素Logistic回归分析探讨ACI预后的危险因素。结果 ACI组平均年龄、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-140-3p与miR-128-3p及miR-27-3p表达水平均明显高于对照组(均P<0.05)。miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的曲线下面积(AUC值)为0.965,敏感度为99.00%,特异度为98.00%,表明miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的效能更高。预后不良组平均年龄、入院时NIHSS评分、梗死体积、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平及3个月mRS评分均明显高于预后良好组(均P<0.05)。经Pearson相关分析表明ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平均分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析表明年龄(OR:1.546;95%CI:1.124~1.969)、入院时NIHSS评分(OR:1.721;95%CI:1.229~2.308)、梗死体积(OR:1.853;95%CI:1.436~2.786)、吸烟史(OR:1.517;95%CI:1.168~1.825)、miR-27-3p (OR:2.481;95%CI:1.452~3.201)、miR-128-3p (OR:1.692;95%CI:1.288-2.431)及miR-140-3p (OR:2.032;95%CI:1.141~1.976)均为ACI患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论 ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平均明显升高,通过三指标联合检测可提高对ACI的诊断效能,而预后不良ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平则升高更为明显,并分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关,且miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p均为ACI患者预后的独立危险因素,应予以重点关注。

miR-421和miR-196b-3p在胃癌癌前病变和早期胃癌诊断中的潜在价值

目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3例,用作miRNA微阵列分析。借用TCGA数据证实候选miRNA在癌症组织中的表达。(2)验证集:于2019年1月1日至2023年1月1日共采集90例胃癌患者(胃癌组)、89例癌前病变患者(癌前病变组)和45例健康志愿者(NC组)的血浆标本。通过定量实时聚合酶链反应测定候选miRNA水平。比较各组候选miRNA及常规肿瘤标志物[铁蛋白、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA211、CA50、CA125、CA199、CA153、CA242、CA724]水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析比较候选miRNA与常规肿瘤标志物的诊断价值。结果(1)发现集:通过miRNA微阵列筛选,与NC组相比,miR-421和miR-196b-3p水平在早期胃癌组和癌前病变组明显上调(P<0.05)。TCGA数据证实,与正常胃黏膜相比,miR-421在胃癌组织中呈高表达(P<0.001)。(2)验证集:与NC组相比,癌前病变组和胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平明显上调(P<0.05),且胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平高于癌前病变组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血浆miR-421对胃癌的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.972),高于CEA、CA125、CA199、CA724、CA211、CA50诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-196b-3p诊断胃癌的AUC[0.804(95%CI:0.733~0.875)]也高于CEA、CA125、CA199和CA724诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-421和miR-196b-3p也可用于早期胃癌诊断,AUC分别为0.942(95%CI:0.886~0.997)和0.809(95%CI:0.708~0.910);血浆miR-421和miR-196b-3p诊断癌前病变的AUC分别为0.788(95%CI:0.714~0.863)和0.648(0.556~0.741),miR-421诊断癌前病变的AUC均高于miR-196b-3p、铁蛋白、CA50诊断癌前病变的AUC(P<0.05)。血浆miR-421和miR-196b-3p在胃癌Ⅰ期病例中的水平与Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期相比,差异无统计学意义(P>0.05),但在胃癌发病早期(Ⅰ~Ⅱ期)的水平明显高于NC组和癌前病变组(P<0.05)。结论血浆miR-421和miR-196b-3p在早期胃癌患者中过表达,有希望成为诊断癌前病变和早期胃癌的新型生物标志物。

番鸭VIPR1和miR-317以及MAP3K7和miR-244靶向关系的研究

试验旨在验证番鸭就巢相关miRNA与靶基因靶向关系。试验利用miRanda、PITA和RNAhybrid三个软件的交集预测miR-317和miR-244靶基因,构建VIPR1-pmirGLO/MAP3K7-pmirGLO野生型和突变型双荧光素酶重组载体,将miR-317/VIPR1-Wt和miR-244/MAP3K7-Wt分别共转染至鸭胚成纤维细胞,检测双荧光素酶活性。结果显示:与miR-NC组相比,miR-317/VIPR1-Wt共转染组相对荧光值显著降低(P<0.05);VIPR1突变后,miR-NC组与miR-317组的相对荧光值不显著(P>0.05),说明突变后完全抑制miR-317对VIPR1的结合作用,VIPR1与miR-317之间存在相互结合作用。与miR-NC组相比,miR-244/MAP3K7-Wt共转染组相对荧光值无显著性差异(P>0.05);MAP3K7突变后,miR-NC组与miR-244组的相对荧光值差异不显著(P>0.05),表明MAP3K7与miR-244之间不存在相互结合作用。研究提示,miR-317与VIPR1存在确切靶向结合位点,即VIPR1是miRNA miR-317的靶基因,而miR-244与MAP3K7不存在靶向关系。

子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a及miR-181c表达水平及其临床意义

目的观察子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达变化,探讨其临床意义。方法选取84例子宫内膜癌患者为研究组,同期收治的51例子宫肌瘤患者为对照组。检测两组血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达,分析miR-145、miR-200a、miR-181c表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-145、miR-200a、miR-181c对子宫内膜癌的诊断效能。结果研究组血清miR-145、miR-181c水平低于对照组,miR-200a水平高于对照组(P<0.05);血清miR-145、miR-200a、miR-181c表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-145、miR-200a、miR-181c诊断子宫内膜癌的AUC分别为0.954、0.987、0.908。结论子宫内膜癌患者血清miR-145、miR-181c表达下调,miR-200a表达上调,且三者均与淋巴结转移、临床分期有关,可能作为子宫内膜癌诊断的辅助指标。

外周血miR-4465和miR-6089在亚临床糖尿病性心肌病诊断中的价值

目的评估外周血miR-4465和miR-6089水平诊断亚临床糖尿病性心肌病(DCM)的临床价值。方法选择266例亚临床Ⅱ型糖尿病受试者,通过超声心动图检查,49例患者被选入DCM组,另选取49例非DCM患者纳入对照组。单因素和多因素Logistic回归分析DCM发生的危险因素。ROC评价miR-4465和miR-6089对DCM的诊断价值。Pearson相关性分析miR-4465、miR-6089与糖尿病病程、糖化血红蛋白(HbA1C)的相关性。结果DCM组糖尿病病程长于对照组,HbA1c水平高于对照组,外周血miR-4465和miR-6089水平低于对照组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,糖尿病病程、HbA1c、外周血miR-4465和miR-6089均为DCM的危险因素(P<0.05)。外周血miR-4465和miR-6089对DCM具有良好的诊断价值。Pearson相关性分析显示糖尿病病程、HbA1c均与外周血miR-4465和miR-6089呈负相关(P<0.05)。结论外周血miR-4465和miR-6089为DCM的危险因素,且与糖尿病病程和HbA1c呈负相关,可以作为诊断DCM的生物学标志物。

多发性骨髓瘤组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨多发性骨髓瘤(MM)组织中miR-29c、miR-195表达水平变化及其与临床病理特征及预后的关系。方法 选取75例MM患者作为病例组,另选取同期就诊的75例骨髓象检查为正常的非血液系统疾病患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测骨髓组织中miR-29c、miR-195表达水平,根据检测平均值将miR-29c、miR-195分为高水平组和低水平组,分析miR-29c、miR-195表达水平与临床病理特征及预后的相关性。结果 病例组骨髓组织miR-29c、miR-195表达水平低于对照组(P<0.05)。miR-29c低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-195低水平组中ISS分期Ⅲ期及血清白蛋白水平<35 g/L的患者占比高于高水平组(P<0.05);miR-29c低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05),miR-195低水平组的生存期低于高水平组(P<0.05)。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈负相关(P<0.05),与血清白蛋白、生存期呈正相关(P<0.05)。结论miR-29c、miR-195均在MM患者骨髓组织中低表达,且低表达miR-29c、miR-195患者的生存期较短。miR-29c、miR-195表达水平与ISS分期呈正相关,与血清白蛋白、生存期呈负相关。

miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

血清miR-375、miR-155与原发性肝癌临床分期及预后的关系

目的探讨原发性肝癌患者血清miR-375、miR-155与其临床分期及预后的关系。方法回顾性分析86例原发性肝癌患者资料,比较不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平,应用Spearman相关系数分析相关性;将患者以肝外转移分成转移组、非转移组,比较两组患者血清miR-375、miR-155差异,应用受试者曲线(ROC)分析两者诊断临床分期效能;随访1年内生存情况,应用Kaplan-Meier法、COX比例风险模型进行生存分析。结果不同临床分期患者血清miR-375、miR-155表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375表达水平与肿瘤临床分期呈负相关(P<0.05),miR-155表达水平与临床分期呈正相关(P<0.05);转移组血清miR-375表达水平低于非转移组,miR-155表达水平高于非转移组,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155及联合诊断肿瘤转移的AUC分为0.898、0.847、0.941;miR-375高表达患者平均生存时间均长于miR-375低表达患者,miR-155高表达患者平均生存时间均短于miR-155低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清miR-375、miR-155表达水平是患者预后独立影响因素(P<0.05)。结论血清miR-375、miR-155与患者临床分期密切相关,是预后独立影响因素指标,可作为原发性肝癌肿瘤转移的重要标志物,对临床诊疗提供参考与指导。

不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达及其临床意义

目的:观察不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。方法:回顾性分析2020年01月至2022年12月我院92例甲状腺癌患者临床资料,患者均进行甲状腺癌组织、癌旁组织病理检查,采用定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)测定miR-197、miR-221和miR-222表达水平,对比不同病理类型、分期等病理特征的甲状腺癌患者miR-197、miR-221和miR-222表达状况,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。结果:甲状腺癌组织中miR-197、miR-221、miR-222表达高于癌旁组织(t=14.696、14.004、15.351,P<0.05);淋巴结转移、未分化癌、Ⅲ-Ⅳ期的甲状腺癌患者miR-197、miR-221、miR-222表达分别高于未发生淋巴结转移、乳头状癌/髓样癌/滤泡癌、Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌患者(P<0.05)。经Logistic回归分析,结果显示,miR-197、miR-221、miR-222高表达是甲状腺癌患者发生淋巴结转移、发生未分化癌及是Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达存在差异,三者将有助于判断甲状腺癌是否淋巴结转移、不同病理类型及临床分期。

血浆miR-320c、miR-126及miR-34c联合检测对慢性阻塞性肺疾病严重程度的预测价值

目的探讨血浆miRNA水平与慢性阻塞性肺疾病(COPD)严重程度的相关性。方法利用荧光定量PCR(qPCR)检测健康人群(10例)及COPD患者(10例)血浆miRNA的表达水平,筛选与COPD患者密切相关的miRNA。进一步在健康人群(28例)和COPD慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)Ⅰ级(30例)、Ⅱ级(32例)、Ⅲ级(30例)及Ⅳ级(28例)患者中明确候选miRNA单独及联合检测对COPD严重程度的预测价值。结果COPD患者血浆miR-320c、miR-126及miR-34c水平显著高于健康人群(P<0.01)。随着COPD级别的增加,血浆miR-320c、miR-126及miR-34c的表达水平亦增加。miR-320c、miR-126、miR-34c单独及联合检测预测中重度COPD患者的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))分别为0.822、0.705、0.783及0.892。结论血浆miR-320c、miR-126及miR-34c可预测COPD严重程度,其联合检测的预测效能显著高于单项miRNA。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

梅山猪和杜洛克猪卵泡中差异表达lncRNA克隆鉴定及与miRNAs相关性分析

【目的】通过克隆鉴定梅山猪和杜洛克猪卵泡期第4天M2卵泡中差异表达的lncRNA-ALDBSSCT0000005583,分析其在猪颗粒细胞与miRNAs表达量的相关性,为探究lncRNA调控miRNA在母猪卵泡发育过程中的作用提供理论依据。【方法】对课题组前期在梅山和杜洛克M2卵泡中筛选出的差异表达lncRNA-ALDBSSCT0000005583,进行RT-qPCR验证,并利用RACE克隆其全长序列;根据编码潜力评估工具CPAT、CPC对该lncRNA的编码能力进行预测,原核表达试验进一步鉴定其编码能力;核质分离试验对lncRNA-ALDBSSCT0000005583进行亚细胞定位,RT-qPCR检测其在各组织中的表达水平;利用miRBase网站查找猪的miRNA数据库,结合RNAhybrid、miRanda在线软件预测与lncRNA-ALDBSSCT0000005583有相互作用的物种间保守miRNA,使用TargetScan和miRanda预测与lncRNA-ALDBSSCT0000005583具有相互作用miRNA的靶基因,并对其靶基因进行GO富集和KEGG信号通路分析;通过过表达以及干扰lncRNA验证其对miRNA表达量的影响。【结果】lncRNAALDBSSCT0000005583在杜洛克猪M2卵泡中的表达量显著高于梅山猪,lncRNA 5’RACE和3’RACE片段大小为569 bp和546 bp,测序分析表明lncRNA-ALDBSSCT0000005583大小为588 bp。生物信息学预测其编码潜能较低,同时原核表达试验结果进一步证明其不编码蛋白质。组织表达谱分析表明,lncRNA-ALDBSSCT0000005583在肾上腺、脾肝和卵巢中表达量较高,在下丘脑和心脏中的表达量较低,亚细胞定位结果显示该lncRNA主要存在于细胞质中。生物信息学分析后共筛选出9个物种间保守的miRNA与lncRNA-ALDBSSCT0000005583具有潜在的相互作用,其中有两个与卵巢发育相关的miRNA:miR-193a-5p、miR-361-3p;KEGG和GO富集分析显示miR-193a-5p、miR-361-3p的靶基因与系统进程和细胞与细胞信号传导等生物学过程有关,并显著参与到催产素、Ras、NF-κB、促性腺激素释放激素分泌等通路。随后在颗粒细胞中过表达lnc RNA-ALDBSSCT0000005583,经RT-qPCR发现miR-193a-5p、miR-361-3p的表达量均显著下调(P<0.05),但干扰lncRNA-ALDBSSCT0000005583后无显著影响。【结论】lncRNA-ALDBSSCT0000005583是一个不具备编码蛋白质能力的lncRNA,在梅山与杜洛克猪中等卵泡间表达量有极显著差异,在肾上腺、脾肝和卵巢中表达量较高,主要存在于颗粒细胞的细胞质中,可能与miR-193a-5p、miR-361-3p相互作用,从而参与猪卵巢颗粒细胞的发育过程。

Ku70作为RNA解旋酶调节miR-124的加工成熟及神经细胞的分化

目的Ku70蛋白主要通过其DNA结合特性参与双链DNA断裂(DSB)的非同源端连接(NHEJ)修复,有报道称其具有RNA结合功能,本文探索Ku70是否具有RNA解旋酶活性并影响miRNA加工成熟。方法利用RNA免疫共沉淀(RIP)测序结合生物信息学分析Ku蛋白结合的RNA;蛋白质印迹法(Western blot,WB)结合定量反转录PCR(qRTPCR)检测Ku蛋白与miRNAs的表达关系;生物膜干涉技术(BLI)实验分析Ku蛋白与RNA的结合能力;电泳迁移率变动分析(EMSA)实验确定Ku70及Ku80的RNA解旋酶活性;形态学检测结合WB分析Ku70调节miR-124引起的神经细胞功能变化;免疫荧光结合形态学分析寨卡病毒(ZIKV)感染后Ku70及miR-124的变化与神经元分化关联。结果研究发现,Ku70蛋白具有RNA解旋酶活性,并通过其RNA解旋酶活性影响miRNA加工成熟。Ku70缺失引起许多miRNAs上调,其中包括神经细胞特异的miR-124。在人神经前体细胞(h NPCs)和人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中敲低Ku70可促进miR-124的成熟,从而导致上述细胞向神经元分化。本文进一步发现,ZIKV感染影响了Ku70及miR-124的表达,导致细胞形态的分化。结论本研究揭示了Ku70的一种新功能,即Ku70有可能参与miRNA的成熟调控和神经细胞的分化,并且可能是ZIKV病毒致小头症的原因之一。

益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠miR-126a-5p及VEGF信号通路的影响

目的探讨益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠微小RNA-126a-5p(miR-126a-5p)及血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法30只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法均分为假手术组、模型组和中药组。模型组、中药组均制备脊髓型颈椎病模型。中药组给予益气活血通络方灌胃,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,均为12周。各组干预结束后进行大鼠行为学测试,测定机械性刺激阈值和热刺激回缩时间。处死大鼠,HE染色观察各组椎间盘软骨终板结构的差异。TUNEL染色观察大鼠椎间盘纤维环细胞变化。实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠椎间盘纤维环组织miR-126a-5p和VEGF mRNA。采用Western blot法检测大鼠椎间盘纤维环组织VEGF蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠椎间盘血管芽数目减少,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏明显、大量凋亡且细胞密度降低;模型组和中药组机械性刺激阈值降低,热刺激回缩时间缩短,miR-126a-5p水平降低,VEGF mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠椎间盘血管芽数目增加,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏减轻,大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡减少且细胞密度增加,机械性刺激阈值升高,热刺激回缩时间延长,miR-126a-5p水平增加,VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论益气活血通络方治疗脊髓型颈椎病的机制可能与上调miR-126a-5p、下调VEGF表达有关。

急性脑梗死患者血清miR-27b和miR-146a表达及其与颈动脉狭窄的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者血清miR-27b和miR-146a表达并分析其与颈动脉狭窄的相关性。方法 选取120例ACI患者作为观察组,再选取同期65名健康体检者作为对照组。根据颈动脉狭窄程度将ACI患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、完全闭塞组。检测被试者血清miR-27b和miR-146a表达,分析ACI患者血清miR-27b和miR-146a的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-27b和miR-146a表达对ACI的诊断价值,再以Pearson相关性分析法分析血清miR-27b和miR-146a表达与颈动脉狭窄的相关性,行多因素Logistic回归分析探讨影响ACI发生的危险因素。结果 观察组患者血清miR-27b表达高于对照组,血清miR-146a表达低于对照组(P<0.01)。血清miR-27b和miR-146a表达对ACI诊断价值的ROC曲线显示,单独检测时血清miR-27b的敏感度最高,miR-146a的特异度最高,两者联合检测时曲线下面积可达0.986。不同颈动脉狭窄程度ACI患者血清miR-27b和miR-146a表达水平不同,其中轻度狭窄组miR-27b表达最低,miR-146a表达最高,而完全闭塞组miR-27b表达最高,miR-146a表达最低,各组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-27b表达与颈动脉狭窄程度呈正相关(r=0.775,P<0.01),血清miR-146a表达与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.622,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-27b、miR-146a表达为ACI患者发生中、重度颈动脉狭窄的影响因素(P<0.01)。结论 ACI患者血清miR-27b表达升高,miR-146a表达降低,可作为临床诊断ACI的潜在指标,且两者联合检测的价值高于单独检测。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

miR-145-5p调控Survivin通过凋亡通路对食管癌生物学行为的影响

目的:探讨miR-145-5p靶向调控Survivin及凋亡信号通路对食管癌凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管癌组织和细胞系中miR-145-5p、Survivin mRNA相对表达量。双荧光素酶报告基因分析验证miR-145-5p和Survivin的靶向调控关系。通过RT-qPCR法测定细胞转染后miR-145-5p和Survivin mRNA的相对表达量。Western blot检测凋亡通路中BCL2、MDM2和Caspase-3蛋白的表达。通过MTT、流式细胞术、划痕愈合实验及Transwell小室实验检测TE-1细胞存活能力、凋亡率、迁移率及侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,miR-145-5p在癌组织中表达低,而Survivin表达高(P<0.05)。与正常食管黏膜上皮HEEC细胞相比,食管癌TE-1细胞中miR-145-5p低表达,Survivin高表达(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-145-5p和Survivin间存在靶向调控关系。与未转染和转染miR-145-5p对照物的TE-1细胞相比,转染miR-145-5p模拟物后可显著增加miR-145-5p的表达,抑制Survivin mRNA的表达,同时BCL2和MDM2蛋白的表达下降,Caspase-3表达上升,促进细胞凋亡,抑制了细胞活性、侵袭和迁移能力(P<0.05)。结论:通过miR-145-5p的负向调控,Survivin表达被抑制,凋亡通路被激活,从而促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞存活,侵袭和迁移能力。

血清miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎和乳腺癌中的差异性表达及意义

目的 探讨miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎(IGM)和乳腺癌(BC)鉴别诊断中的作用。方法 选取2018年10月至2021年11月我院收治的32例IGM患者(ICM组)和40例BC患者(BC组),所有患者均经活检确诊。另外纳入33例健康女性作为对照组。比较患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR检测血清miRNAs表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-155、miR-23b对IGM和BC的诊断价值。采用Pearson相关系数法评估相关性。结果 3组CRP、WBC、Hb、Hct、CA19-9、CA15-3、CA125水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。IGM组患者血清miR-155、miR-16-5p、miR-21-5p、miR-210-3p、miR-222-3p、miR-29c-3p表达水平较对照组升高(P<0.001),血清miR-23b表达水平低于对照组(P<0.001);BC组患者血清中以上miRNAs表达水平均高于对照组(P<0.001)。BC组患者血清miR-155表达水平低于IGM组(P<0.001),血清miR-23b表达水平高于IGM组(P<0.001)。血清miR-155和miR-23b水平鉴别诊断IGM和BC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.722(95%CI:0.601~0.843)、0.765(95%CI:0.657~0.874),敏感度分别为81.00%、77.50%,特异度分别为65.00%、59.40%;二者联合鉴别诊断的AUC为0.869(95%CI:0.786~0.951),敏感度和特异度分别为84.10%和92.50%。IGM组血清miR-155与WBC、CRP水平均呈正相关(P<0.05),而血清miR-23b与WBC、CRP水平均呈负相关(P<0.05)。结论 血清miR-155和miR-23b有助于区分IGM和BC,可成为IGM和BC早期鉴别诊断的靶标。

miR-183、miR-720诊断结直肠癌的价值及与TNM分期、p53和Ki67表达的关系

目的探讨miR-183、miR-720诊断结直肠癌的价值及与TNM分期、p53和Ki67表达的关系。方法选取2020年1月至2023年1月在南通市肿瘤医院就诊的结直肠癌患者102例,同时选取结直肠息肉患者100例作为对照,比较结直肠癌和息肉患者miR-183、miR-720水平差异,分析miR-183、miR-720诊断结直肠癌的价值,同时分析miR-183、miR-720与结直肠癌临床病理特征的关系。结果结直肠癌患者外周血miR-183、miR-720相对表达量分别为(1.12±0.35)和(1.10±0.30),明显高于结直肠息肉患者(P<0.05);外周血miR-183、miR-720诊断结直肠癌的ROC曲线下面积分别为0.708(95%CI:0.638~0.779)和0.722(95%CI:0.652~0.792),P<0.05;TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者外周血miR-183和miR-720相对表达量分别为(1.31±0.29)和(1.31±0.18),高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05);p53阳性表达患者外周血miR-183和miR-720相对表达量分别为(1.19±0.27)和(1.19±0.20),高于p53阴性表达患者(P<0.05);Ki-67阳性表达患者外周血miR-183和miR-720相对表达量分别为(1.22±0.20)和(1.21±0.19),高于Ki-67阴性表达患者(P<0.05);肿瘤大小>5 cm患者外周血miR-720相对表达量为(1.19±0.17),高于肿瘤大小≤5 cm患者(P<0.05);外周血miR-183、miR-720与TNM分期、p53和Ki-67呈正相关(P<0.05)。结论结直肠癌患者外周血miR-183、miR-720水平升高,在诊断结直肠癌方面有一定应用价值,两者水平与结直肠癌TNM分期、p53表达、Ki67表达等存在相关性。