miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的作用

旨在探究miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的影响。本试验收集180日龄健康母猪的卵巢组织,每次试验取20对卵巢进行颗粒细胞的分离培养,将miR-24-3p的mimics及inhibitor转染进颗粒细胞,通过ELISA、RT-qPCR、Western blot、双荧光素酶报告试验等技术探究miR-24-3p对猪颗粒细胞雌二醇合成的作用。结果表明,过表达miR-24-3p可显著促进雌二醇的合成(P<0.01),并加快StAR、CYP19A1和CYP11A1的转录和翻译(P<0.05);而干扰miR-24-3p则显著抑制雌二醇的合成(P<0.05),并显著下调CYP11A1、CYP19A1的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。进一步研究发现,TOP 1是miR-24-3p的直接靶基因,过表达miR-24-3p可显著抑制TOP1的表达(P<0.05),干扰miR-24-3p可显著上调TOP1的表达(P<0.05)。而过表达TOP 1则可减弱miR-24-3p对颗粒细胞雌二醇合成的促进作用(P<0.05)。综上所述,miR-24-3p通过靶向TOP 1抑制其mRNA和蛋白水平,促进雌二醇合成相关基因的表达水平从而促进颗粒细胞的雌二醇合成。鉴于颗粒细胞的雌二醇合成能力直接影响卵巢卵泡的发育状态,因此本研究为筛选提高母猪繁殖性能的miRNA提供理论依据。

重症肺炎合并呼吸衰竭患者外周血miR-24表达与病情及预后的关系

目的探讨外周血miR-24表达水平对重症肺炎合并呼吸衰竭患者病情及预后的评估价值。方法选取2018年10月至2020年12月河北北方学院附属第一医院收治的106例重症肺炎合并呼吸衰竭患者作为重症肺炎组,同期本院收治的184例普通肺炎患者作为普通肺炎组,同期在本院体检的100名健康志愿者作为对照组。采用荧光定量PCR法检测3组研究对象外周血miR-24表达水平。根据治疗结局将重症肺炎合并呼吸衰竭患者的预后分为存活和死亡。采用Pearson相关分析重症肺炎组患者miR-24表达水平与病情评价指标的相关性;采用多因素Cox回归分析重症肺炎组患者预后的影响因素;采用ROC曲线评估miR-24表达水平对重症肺炎组患者预后的预测价值。结果重症肺炎组患者外周血miR-24表达水平低于普通肺炎组及对照组(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,重症肺炎组患者miR-24表达水平与CRP、降钙素原(PCT)、APACHEⅡ评分均呈负相关(均P<0.05),与PaO_(2)呈正相关(P<0.01)。重症肺炎组死亡患者CRP、PCT、APACHEⅡ评分均高于存活患者,PaO_(2)、miR-24表达水平均低于存活患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,PaO_(2)、APACHEⅡ评分、miR-24均是重症肺炎组患者预后的影响因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,miR-24表达水平预测重症肺炎组患者预后的AUC为0.780(95%CI:0.711~0.889),灵敏度和特异度分别为0.659和0.826。结论重症肺炎合并呼吸衰竭患者外周血miR-24表达降低与病情加重及预后恶化有关,miR-24可能成为评价病情并预测预后的新标志物。

miR-23a/27a/24基因簇g.65307469G>A突变对大白猪产仔数和启动子活性的影响

[目的]本文旨在研究大白猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点多态性与产仔数性状的关系及潜在机制,为母猪繁殖性状的分子育种提供新的潜在遗传标记。[方法]利用混池测序技术筛选猪miR-23a/27a/24基因簇启动子突变位点,直接测序法对大白猪群体(n=345)miR-23a/27a/24基因簇突变位点进行基因分型,计算遗传多样性;用线性模型对突变位点多态性与产仔数性状进行关联性分析;构建不同等位基因类型启动子载体,转染猪卵巢颗粒细胞,通过检测荧光素酶活性分析突变对启动子活性的影响;用生物信息学方法预测不同等位基因类型启动子潜在结合的差异转录因子,用荧光素酶活性分析差异转录因子对不同等位基因类型启动子活性的影响。[结果]在猪miR-23a/27a/24基因簇启动子-648 nt(Chr.2,65307469 nt)处发现1个新的G/A突变,命名为g.65307469G>A。在大白猪群体中发现3种基因型(GG、GA和AA),其中GG为优势基因型(89.57%),G等位基因为优势等位基因(94.64%)。关联性分析发现,GA基因型母猪的总产仔数(TNB)比GG基因型母猪每胎高0.56头(P<0.05)。荧光素酶活性分析结果显示G等位基因类型启动子活性显著高于A等位基因类型(P<0.05)。在不同等位基因类型启动子间发现1个潜在结合的差异转录因子死亡相关蛋白1(THAP1),成功构建猪THAP1基因过表达载体,共转试验结果显示转录因子THAP1对不同等位基因类型启动子活性均无显著影响(P>0.05)。[结论]miR-23a、miR-27a和miR-24是大白猪产仔数性状的候选基因,g.65307469G>A突变抑制miR-23a/27a/24基因簇的启动子活性,但与转录因子THAP1无关。

血清miR-155、miR-24检测对宫颈癌同步放化疗后肿瘤残留的早期预测价值

目的分析血清miR-155、miR-24表达水平对宫颈癌同步放化疗(CCRT)后肿瘤残留的早期预测价值。方法回顾性选取行CCRT治疗的宫颈癌患者300例为研究对象,按照7∶3的分配比例分为建模组210例和验证组90例。建模组患者根据术后MRI结果分为残留组81例与非残留组129例。收集建模组患者CCRT前临床基线资料与实验室检验指标,筛选独立影响因素,构建宫颈癌CCRT后早期肿瘤残留列线图预测模型,并通过验证组资料收集配合完成预测模型的验证与价值分析。结果宫颈癌患者血清miR-155、宫旁浸润、FIGO分期是影响患者CCRT后早期肿瘤残留的独立危险因素,血清miR-24是影响患者CCRT后早期肿瘤残留的独立保护因素(OR分别=1.77、3.22、8.55、0.18,P均<0.05)。基于以上独立影响因素构建了宫颈癌CCRT后早期肿瘤残留预测模型。建模组ROC曲线下面积(AUC)为0.84(95%CI:0.79~0.89),区分度良好;验证组ROC曲线AUC为0.90(95%CI:0.81~0.98)。内、外部校准曲线与标准曲线均有较好贴合度。内、外部决策曲线显示模型能提供显著的临床净收益。结论血清miR-155、miR-24表达水平对宫颈癌CCRT后早期肿瘤残留具有良好的预测价值,结合宫旁浸润、FIGO分期等临床特征构建列线图预测模型可为早期肿瘤残留高风险患者的有效筛选提供数据支持。

miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路及EMT过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制

目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-24通过调控蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及上皮间充质转化(epithhelial-mesenchymal transition, EMT)过程对涎腺腺样囊性癌细胞生物学功能的影响及机制。方法:通过收集2021年6月~2024年3月本院收治的60例涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma, SACC)患者。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测SACC组织病理类型。培养人SACC细胞系(SACC-83和SACC-LM),通过荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)及实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测SACC组织及细胞中miR-24表达。通过细胞转染将miR-24抑制剂(miR-24 inhibitor)转染至SACC细胞中,通过细胞计数试剂盒-8(cell count kit-8,CCK-8)、克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell实验检测SACC细胞生物学行为,Western blot检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及AKT/β-catenin信号通路蛋白表达情况。结果:HE染色结果发现,本研究SACC患者癌组织包含3种主要病理类型:实体型、筛状型和管状型。与正常组织相比,miR-24在SACC组织、SACC-83细胞和SACC-LM细胞中高表达,且miR-24在SACC-LM中的表达程度高于SACC-83。miR-24 inhibitor显著抑制SACC-83和SACC-LM的细胞活力、细胞克隆数量、细胞划痕细胞迁移率、迁移、侵袭。miR-24 inhibiotr转染后SACC-83和SACC-LM细胞中上皮细胞钙粘蛋白(epithelial-cadherin, E-cadherin)水平明显升高,而波形蛋白(Vimentin)和神经钙粘蛋白(neural-cadherin, N-cadherin)水平降低。结论:miR-24通过调控AKT/β-catenin信号通路调节SACC细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

异甘草素通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移的机制研究

目的 肺鳞癌(Lung squamous cell carcinoma,LUSC)是全世界范围内高频率发生的恶性肿瘤。最近的研究表明,异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)在肿瘤增殖和转移中发挥抗肿瘤活性。因此,研究旨在探讨ISL在抗LUSC转移中的作用机制。方法 利用梯度浓度ISL处理LUSC细胞,探究ISL在LUSC细胞增殖、迁移和侵袭中的抗癌特性。随后,利用生物信息学手段探寻了长链非编码RNA(Long non-coding RNAs, lncRNA)MIR22HG/miR-24-3p/Fas配体基因(Fas ligand Gene,FASLG)之间可能的互作关系。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测LUSC细胞中lncRNA MIR22HG、miR-24-3p、FASLG的表达,细胞计数盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、克隆形成、划痕愈合和Transwell实验分别检测细胞活力、增殖、迁移和侵袭。蛋白质免疫印迹法(Western blot, WB)检测上皮间充质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)和转移相关蛋白的表达。RNA免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation, RIP)实验和双萤光素酶实验验证lncRNA MIR22HG与miR-24-3p、miR-24-3p与FASLG的结合关系。结果 ISL可以显著抑制LUSC细胞增殖、迁移和侵袭。生信分析及临床样本分析发现lncRNA MIR22HG在LUSC中低表达,ISL可以促进lncRNA MIR22HG的表达,抑制LUSC细胞的恶性行为。此外,lncRNA MIR22HG可以海绵吸附miR-24-3p进而调节FASLG的表达。miR-24-3p在LUSC中上调表达,FASLG在LUSC中下调表达。过表达FASLG可以逆转miR-24-3p过表达对LUSC增殖、转移以及EMT进程的促进作用。结论 这些结果表明,ISL通过lncRNA MIR22HG/miR-24-3p/FASLG轴抑制肺鳞癌转移,表明ISL有潜力作为治疗LUSC的新型药物。

急性髓系白血病患者血清miR-24,miR-106a水平表达及其临床诊断价值

目的探究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者血清微小RNA(micro RNA,miR)-24,miR-106a水平表达及其临床诊断价值。方法选取四川大学华西医院2018年6月~2020年6月收治的急性髓系白血病患者98例作为研究组,根据疗效将患者分为完全缓解组、部分缓解组和未缓解组,另选取同期健康体检者98例作为对照组;血清miR-24,miR-106a采用qRT-PCR检测;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-24,miR-106a与急性髓系白血病患者预后的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-24,miR-106a对急性髓系白血病患者的诊断价值。结果与对照组相比,研究组血清miR-24表达水平(0.62±0.16 vs 1.01±0.21)显著降低,miR-106a表达水平(1.64±0.38vs 1.02±0.24)显著升高,差异具有统计学意义(t=14.624,13.656,均P<0.05)。完全缓解组、部分缓解组和未缓解组血清miR-24水平依次降低,血清miR-106a水平依次升高,差异具有统计学意义(F=65.207,24.280,均P<0.05)。miR-24,miR-106a表达水平与脾肿大和WBC有关(χ^(2)=5.029,6.153;9.216,8.151,均P<0.05)。miR-24高表达组生存率显著高于低表达组(59.57%vs 39.22%,χ^(2)=9.851,P<0.05),miR-106a高表达组生存率显著低于低表达组(38.00%vs 60.42%,χ^(2)=21.728,P<0.05)。根据ROC曲线得知,血清miR-24,miR-106a诊断急性髓系白血病患者的曲线下面积(AUC)分别为0.894,0.880,二者联合诊断急性髓系白血病患者的AUC为0.929,二者联合诊断优于各自单独诊断(Z=2.624,2.735,均P<0.05)。结论急性髓系白血病患者血清miR-24水平显著降低,miR-106a水平显著升高,二者联合检测可提高其诊断价值。

血清miR-22和miR-24表达在高龄老年慢性心力衰竭近期预后中的应用

目的探讨血清微小核糖核酸(miR)-22和miR-24表达在高龄老年慢性心力衰竭(CHF)近期预后的临床价值。方法收集2020年9月~2022年9月在东部战区总医院入院治疗的107例高龄老年CHF患者,根据随访6个月内是否发生主要不良心血管事件(MACE)分为MACE组(n=43)和非MACE组(n=64);qRT-PCR法检测血清miR-22和miR-24表达水平;Logistic回归分析高龄老年CHF患者发生MACE的影响因素;ROC曲线分析血清miR-22和miR-24对高龄老年CHF近期预后的评估价值。结果MACE组尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平高于非MACE组,MACE组舒张早期二尖瓣血流速度与晚期的比值(E/A)低于非MACE组,差异均具有统计学意义(均P<0.01);MACE组血清miR-22水平高于非MACE组,miR-24水平低于非MACE组(均P<0.01);miR-22是高龄老年CHF患者发生MACE的危险因素,miR-24是保护因素(均P<0.01);血清miR-22和miR-24两者联合诊断CHF患者预后的AUC为0.921,敏感度为86.05%,特异性为89.94%,优于血清miR-22和miR-24各自单独诊断(Z二者联合-miR-22=2.783、Z二者联合-miR-24=2.147)。结论血清miR-22是高龄老年CHF患者发生MACE的危险因素,miR-24是保护因素,对高龄老年CHF预后评估具有较好的临床应用价值。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路的miR-24调控ox-LDL诱导的HUVECs自噬机制研究

目的探讨miR-24对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导下的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响及其相关机制,为进一步阐明miR-24在动脉粥样硬化(AS)中的作用提供理论依据。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-24的表达;应用蛋白免疫印迹法(western blot)和qRT-PCR法检测Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、p-mTOR、p-PI3K、p-Akt的蛋白和mRNA表达水平;应用透射电子显微镜技术检测细胞的自噬小体生成情况;应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、细胞划痕法、Caspase-3比色法和Hoechst 33258染色法分别检测细胞活性、迁移和凋亡情况。结果应用ox-LDL诱导HUVECs后,发现HUVECs中miR-24的表达显著降低(P<0.05)。miR-24过表达可明显抑制ox-LDL诱导的HUVECs自噬(P<0.05),而miR-24低表达则会增加ox-LDL诱导的HUVECs自噬(P<0.05)。miR-24过表达可显著降低Beclin-1的表达水平,上调LC3Ⅰ/LC3Ⅱ的水平(P<0.05),同时,miR-24过表达可显著促进p-PI3K、p-Akt和p-mTOR的表达(P<0.05)。此外,miR-24过表达显著抑制HUVECs的活力和迁移,增加Caspase-3活性并促进其凋亡(P<0.05)。结论miR-24的过表达可激活PI3K/Akt/mTOR信号通路而降低ox-LDL诱导的HUVECs的自噬水平并促进其凋亡,miR-24可能成为AS的潜在治疗新靶点。

鼻咽癌患者血浆miR-24异常表达的临床意义

目的：探讨miR-24在鼻咽癌患者血浆中的表达及临床意义。方法收集2007年12月~2011年6月在南方医院耳鼻喉科住院的初诊鼻咽癌患者血浆217例，以同期住院的慢性化脓性中耳炎或慢性鼻窦炎患者血浆73例作为对照，利用荧光定量PCR的方法进行miR-24表达的检测并结合临床资料分析其临床意义。结果血浆miR-24在鼻咽癌组的相对表达水平为对照组的4.808倍，差异具有显著统计学意义（P〈0.001）；血浆miR-24在不同T分期之间有统计学差异（P=0.007），miR-24与N分期呈负相关（P=0.028）；鼻咽癌病人血浆EBV-DNA与血浆miR-24呈负相关（P=0.048）；治疗后血浆miR-24含量较治疗前下降差异有显著统计学意义（P=0.001）。结论血浆miR-24可作为肿瘤分子标志物用于鼻咽癌早期诊断及预后分析。

TRIM11靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞系MCF7增殖和侵袭

目的探讨TRIM11靶向调控miR-24-3p对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响,明确TRIM11高表达与乳腺癌预后的相关性。方法免疫组化法检测TRIM11在31例乳腺癌和31例癌旁正常组织中的表达。用siRNA TRIM11和miR-24-3p慢病毒转染人乳腺癌MCF7细胞,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western bolt检测TRIM11、miR-24-3p mRNA和蛋白表达变化及相关性分析;荧光素酶报告实验验证miR-24-3p为TRIM11的潜在靶点;MTT法和Transwell检测细胞增殖数量、增殖活力和侵袭。结果 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达显著增高(P<0.05)。TRIM11高表达患者生存率显著降低(P<0.05)。siRNA TRIM11转染显著抑制MCF7细胞中TRIM11表达,而且抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P<0.05)。miR-24-3p显著降低野生型3'-UTR TRIM11荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型没有作用。miR-24-3p mRNA在MCF7细胞下调,miR-24-3p抑制MCF7细胞TRIM11蛋白和mRNA表达,miR-24-3p mRNA与TRIM11 mRNA在MCF7细胞中表达显著负相关(P<0.05),miR-24-3p抑制MCF7细胞增殖数量、增殖活力和侵袭能力(P<0.05)。结论 TRIM11在乳腺癌组织及MCF7细胞中表达上调,并可能通过靶向调控miR-24-3p促进乳腺癌细胞增殖和侵袭,进而影响乳腺癌预后,TRIM11/miR-24-3p轴有望成为治疗乳腺癌的新靶点。

miR-24对肺癌生物学功能的抑制作用

目的探讨miR-24调节肺癌发生发展的机制。方法实时PCR检测30例肺癌组织中miR-24的含量,分析miR-24与患者生存期的关系。肺癌细胞系A549细胞中分别过表达或沉默miR-24后,通过MTT实验观察miR-24对其增殖的影响。Transwell实验观察miR-24对其迁移能力的影响。Western blotting检测miR-24对于A549细胞中增殖和迁移相关蛋白(CDK4/6、MMP2)的影响。结果生存分析发现,miR-24表达低的患者5年生存率较低。MTT检测显示,miR-24过表达后可以显著抑制A549细胞的增殖,反之,当miR-24受到抑制后A549细胞的增殖受到促进。Transwell实验显示,miR-24过表达后可以显著抑制A549细胞的迁移,反之,当miR-24受到抑制后A549细胞的迁移受到促进。Western blotting检测结果显示,过表达miR-24可以抑制A549细胞中CDK4/6和MMP2的表达,miR-24受到抑制后A549细胞中CDK4/6和MMP2的表达受到促进。结论 miR-24可以抑制肺癌细胞的增殖和迁移。

益气逐瘀方对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响

目的:观察益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠miR-24表达及心肌细胞凋亡的影响。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周。治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达情况,TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:实验结束时,与模型组相比,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P<0.05,P<0.01),升高心肌组织miR-24 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),同时降低心肌细胞凋亡指数(P<0.05,P<0.01)。结论:益气逐瘀方参元丹能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与上调心梗大鼠缺血心肌组织miR-24基因表达有关。

血清miR-24联合动态心电图在冠心病无症状心肌缺血患者中的诊断价值

目的探讨血清miR-24联合动态心电图(DCG)在冠心病无症状心肌缺血(SMI)患者中的诊断价值。方法选取我院2020年10月—2021年6月疑似SMI患者73例,所有研究对象均进行冠状动脉造影检查、DCG检查和血清miR-24检测。以冠脉造影结果为金标准,比较血清miR-24联合DCG诊断SMI患者的准确度、灵敏度和特异度;比较该检查方法对冠脉病变程度的诊断效果。结果血清miR-24联合DCG诊断SMI的灵敏度,特异度,准确度高于DCG诊断方法(P<0.05),与冠脉造影结果具有较好一致性;对于冠脉单支病变、双支病变、三支病变的检出率比较,二者联合诊断的检出率均高于血清miR-24、DCG检查方法(P<0.05)。结论血清miR-24联合DCG诊断方法对SMI患者的早期筛查具有重要的诊断价值,可在临床进一步研究和推广。

miR-24基因家族进化及其在猪睾丸组织中的表达变化分析

通过miRBase数据库检索miR-24基因家族序列,利用Ensembl数据库信息确定miR-24家族在不同物种中的基因组定位,采用MEGA 5.0构建miR-24基因家族的系统进化树,并利用RT-qPCR检测miR-24-1及miR-24-2在沙子岭猪睾丸组织不同发育期(E90、D1、D30、D60、D90、D120、D150、D180)的表达变化。在miRBase数据库检索32个物种共66条序列,且各序列均具有高度保守性。基因组定位显示大部分物种的miR-24基因位于常染色体上。RT-qPCR结果显示,miR-24基因家族2个成员(miR-24-1、miR-24-2)在沙子岭猪睾丸不同发育阶段呈现出协同表达的规律。本研究对miR-24基因家族进行系统进化分析并检测其在沙子岭猪睾丸组织中表达变化规律,为进一步探明miR-24基因家族的功能及作用机制奠定基础。

miR-24-2对人骨肉瘤细胞系U-2OS体外增殖能力的影响

目的探讨miR-24-2对人骨肉瘤细胞系U-2OS体外增殖能力的影响。方法用脂质体法将miR-24-2模拟物转染入人骨肉瘤细胞系U-2OS。将U-2OS细胞分为miR-24-2模拟物转染组、miR-24-2抑制剂转染组、阴性对照组和正常对照组4组。转染后采用实时定量RT-PCR检测各组细胞miR-24-2的表达水平,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况。结果与阴性对照组和正常对照组比较,miR-24-2模拟物转染组细胞增殖能力显著下降,而miR-24-2抑制剂转染组细胞增殖能力显著增强。结论 miR-24-2能够抑制人骨肉瘤细胞系U-2OS的体外增殖能力,可望成为骨肉瘤治疗的分子标志物。

miR-24对大鼠脊髓损伤后运动功能的影响

目的观察miR-24对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为miR-24组、对照组和假手术组(Sham组),每组20只。Sham组只暴露脊髓,不打击。对照组和miR-24组采用Allen’s方法损伤大鼠T9脊髓节段,制备脊髓损伤动物模型。造模成功后30 min,miR-24组鞘内注射agomir-24(0.5 nmol/L,5μL),对照组鞘内注射等量的agomir对照,每日1次,共3次。采用BBB评分法分析大鼠后肢运动功能,实时PCR检测脊髓组织中miR-24表达水平,HE染色观察大鼠脊髓组织病理形态学变化,实时PCR和Western blot检测脊髓组织中Bim mRNA和蛋白的表达水平。结果与Sham组相比,对照组大鼠损伤后1、3、7和14 d脊髓组织中miR-24表达均降低,其中3、7及14 d差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,miR-24组大鼠损伤后3、7和14 d BBB评分均显著升高(P<0.05);损伤后1和3 d脊髓损伤形态学均有改善,损伤后3 d改善更明显;损伤后1和3 d脊髓组织Bim mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-24可能通过抑制Bim的表达,促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。

miR-24-3p在骨肉瘤中的表达及其抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭迁移的实验研究

目的:探讨miR-24-3p在骨肉瘤中的表达及调控骨肉瘤细胞生物学行为的作用。方法:收集我院骨肉瘤标本及配对癌旁组织标本10例,RT-qPCR检测骨肉瘤组织及癌旁组织中miR-24-3p的相对表达量。MG-63细胞转染miR-24-3p mimics或miR-24-3p inhibitor后,RT-qPCR检测miR-24-3p干扰及过表达效率。通过CCK-8及EdU实验评估骨肉瘤细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞迁移与侵袭能力。Western blot检测PCNA蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡变化。结果:与癌旁组织相比,骨肉瘤组织及细胞中miR-24-3p表达显著下调。敲降miR-24-3p表达后,CCK-8及EdU实验结果表明MG-63细胞增殖能力增加,划痕实验和Tranwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加,流式细胞术结果显示细胞凋亡降低(P<0.001)。过表达miR-24-3p表达后,CCK-8、划痕实验和Tranwell实验结果显示MG-63细胞增殖、迁移与侵袭能力减弱,细胞凋亡增加(P<0.01)。Western blot结果显示miR-24-3p mimics组PCNA蛋白表达降低,miR-24-3p inhibitor组PCNA蛋白表达增加。结论:miR-24-3p在骨肉瘤组织及细胞中表达下调,并且可以抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡,发挥抑癌作用,有望成为骨肉瘤治疗的靶点之一。

西黄胶囊辅助体外延伸野放疗对老年宫颈癌生存周期及血清miR-155、miR-24水平的作用

目的探讨西黄胶囊辅助体外延伸野放疗对老年宫颈癌患者生存周期及血清miR-155、miR-24水平的作用。方法选取2015年6月—2017年1月医院老年宫颈癌患者60例进行前瞻性随机对照研究,以随机数字表将患者分为联合组(30例)、对照组(30例)。对照组予以体外延伸野放疗,联合组予以西黄胶囊辅助体外延伸野放疗。对比两组疗效、不良反应与治疗前后血清免疫功能指标(CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)、CD_(3)^(-)-CD_(56)^(+))、肿瘤标志物指标[鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)、癌胚抗原(CEA)]、miR-155、miR-24水平,治疗后随访3年对比两组治疗后1年、2年、3年生存率。结果(1)疗效与不良反应:联合组总有效率高于对照组,Ⅲ~Ⅳ度血小板降低、白细胞降低、Ⅰ~Ⅱ度胃肠道反应、骨髓抑制发生率低于对照组(P<0.05);(2)免疫功能:治疗后两组血清CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)、CD_(3)^(-)-CD_(56)^(+)水平均有所改善,联合组优于对照组(P<0.05);(3)肿瘤标志物:治疗后两组血清SCC-Ag、CYFRA21-1、CEA水平均有所降低,联合组降低幅度高于对照组(P<0.05);(4)miR-155、miR-24:治疗后联合组血清miR-155水平低于对照组,miR-24水平高于对照组(P<0.05);(5)生存周期:联合组治疗后2年、3年生存率较对照组高(P<0.05)。结论西黄胶囊辅助体外延伸野放疗在老年宫颈癌患者中的临床疗效显著,可有效改善患者免疫功能,下调肿瘤标志物水平,调控基因表达,控制病情发展,同时有效缓解治疗期间不良反应,延长患者生存周期。

益气逐瘀方改善心肌梗死大鼠心肌损伤及对miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨益气逐瘀方参元丹对急性心肌梗死大鼠心肌损伤及miR-24/Bim通路相关蛋白表达的影响。方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、参元丹高、中、低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法复制心肌梗死模型,参元丹高、中、低剂量组从术后第2天开始给予参元丹药液灌胃,假手术组和模型组给予等剂量生理盐水灌胃,共给药2周。治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平及心肌组织miR-24基因表达,超声心动图检测左室功能,Western-blot检测心肌组织Bim、Bcl-2、Bax、caspase-9蛋白表达。结果:实验结束时,与模型组比较,参元丹高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P<0.05,P<0.01),升高心肌组织miR-24基因表达(P<0.05,P<0.01),降低左室舒张和收缩末期内径(P<0.05,P<0.01),升高左室短轴缩短率及射血分数(P<0.05,P<0.01),升高心肌组织Bcl-2蛋白表达(P<0.05),降低Bim、Bax、caspase-9蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:益气逐瘀方参元丹可能通过调控miR-24/Bim信号通路相关细胞因子蛋白表达改善心肌梗死细胞损伤。