清肾颗粒对大鼠NRK-52E细胞转分化模型miR-23b和PINK1/Parkin通路的影响

目的 探讨TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型中miR-23b对PINK1/Parkin通路的靶向调节机制,并阐明清肾颗粒含药血清对NRK-52E细胞转分化的干预机理。方法 采用超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱法对清肾颗粒进行全指纹图谱分析。构建TGF-β1诱导大鼠NRK-52E细胞转分化模型,转染siRNA后分为模拟物空载对照组、miR-23b-5p模拟物组、抑制剂空载对照组、miR-23b-5p抑制剂组,观察miR-23b-5p对PINK1表达量的影响。再将NRK-52E细胞分组为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组,Western blot法检测NRK-52E细胞中Pink1、Parkin、LC3Ⅱ、Beclin-1、P62、α-SMA蛋白表达,RT-qPCR法检测NRK-52E细胞中miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、α-SMA mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与PINK1的靶向关系。结果 UPLC指纹图谱法鉴定出清肾颗粒中11个活性成分。miR-23b-5p过表达后,PINK1 mRNA表达量也显著增加(P<0.05);而miR-23b-5p表达沉默后,PINK1 mRNA表达量也显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告显示,Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-PINK1-WT荧光素酶活性(P<0.05),但未能下调突变Rno-PINK1-mut荧光素酶活性(P>0.05)。清肾颗粒含药血清干预实验发现,TGF-β1组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显低于正常组,P62和α-SMA表达明显高于正常组(P<0.05)。清肾颗粒组和miR-23b-mimic组的miR-23b-5p、Pink1、Parkin、Beclin-1、LC3Ⅱ表达及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显高于TGF-β1组,P62和α-SMA表达明显低于TGF-β1组(P<0.05)。miR-23b-mimic+清肾颗粒组的表现更优于miR-23b-mimic组(P<0.05)。结论 清肾颗粒能够上调NRK-52E细胞内miR-23b-5p表达,并通过增强PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬活性,抑制NRK-52E细胞转分化进程。

血清miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎和乳腺癌中的差异性表达及意义

目的 探讨miR-155、miR-23b在特发性肉芽肿乳腺炎(IGM)和乳腺癌(BC)鉴别诊断中的作用。方法 选取2018年10月至2021年11月我院收治的32例IGM患者(ICM组)和40例BC患者(BC组),所有患者均经活检确诊。另外纳入33例健康女性作为对照组。比较患者的临床资料。采用实时荧光定量PCR检测血清miRNAs表达水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-155、miR-23b对IGM和BC的诊断价值。采用Pearson相关系数法评估相关性。结果 3组CRP、WBC、Hb、Hct、CA19-9、CA15-3、CA125水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。IGM组患者血清miR-155、miR-16-5p、miR-21-5p、miR-210-3p、miR-222-3p、miR-29c-3p表达水平较对照组升高(P<0.001),血清miR-23b表达水平低于对照组(P<0.001);BC组患者血清中以上miRNAs表达水平均高于对照组(P<0.001)。BC组患者血清miR-155表达水平低于IGM组(P<0.001),血清miR-23b表达水平高于IGM组(P<0.001)。血清miR-155和miR-23b水平鉴别诊断IGM和BC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.722(95%CI:0.601~0.843)、0.765(95%CI:0.657~0.874),敏感度分别为81.00%、77.50%,特异度分别为65.00%、59.40%;二者联合鉴别诊断的AUC为0.869(95%CI:0.786~0.951),敏感度和特异度分别为84.10%和92.50%。IGM组血清miR-155与WBC、CRP水平均呈正相关(P<0.05),而血清miR-23b与WBC、CRP水平均呈负相关(P<0.05)。结论 血清miR-155和miR-23b有助于区分IGM和BC,可成为IGM和BC早期鉴别诊断的靶标。

miR-146a、miR-23b水平与前列腺癌患者术前临床分期及预后的关系

目的 探索miR-146a、miR-23b表达水平与前列腺癌(PCa)患者术前临床分期及预后的关系。方法 选取2019年3月-2020年3月期间重庆市丰都县人民医院收治的70例PCa患者和70例良性前列腺增生症(BPH)患者,设为PCa组和BPH组,入组后分别进行前列腺组织取样,检测两组前列腺中miR-146a、miR-23b表达水平,分析miR-146a、miR-23b表达与PCa患者临床病理特征及预后的相关性。结果 PCa组miR-146a、miR-23b表达低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);术前PCa患者miR-146a、miR-23b水平随Gleason评分和临床T分期升高而逐次下降(P<0.05);PCa患者术前存在淋巴结转移者miR-146a、miR-23b水平低于无转移者,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,PCa患者术前前列腺组织miR-146a、miR-23b表达水平分别与临床分期呈现负相关(r=-0.758、-0.760,均P<0.05);截止随访,预后不良的PCa患者miR-146a、miR-23b低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-146a、miR-23b联合检测预测PCa预后AUC高于单一检测指标(P<0.05)。结论 PCa患者前列腺组织中miR-146a、miR-23b表达较低,且与临床分期相关,miR-146a、miR-23b表达水平对患者不良预后有一定预测价值。

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒(pcDNA3.1-KLF3)或空载质粒(Vector)单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),并与患者TNM分期和远处转移有关(均P<0.05);miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.326,P=0.013),双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达,KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。

miR-23b-5p通过靶向下调FN1缓解支气管哮喘气道重塑

目的探讨miR-23b-5p靶向下调纤维连接蛋白1(FN1)对支气管哮喘(简称哮喘)气道重塑的影响。方法将BALB/c小鼠随机分为正常对照组和哮喘组,每组6只。Masson染色观察气道壁周围胶原沉积水平。ELISA测定白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织中miR-23b-5p表达水平。免疫组织化学染色、Western blotting检测FN1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在肺组织中的表达。TargetScan网站预测miR-23b-5p靶基因,双荧光素酶报告实验验证。转染miR-23b-5p模拟物和抑制剂于人支气管平滑肌细胞(HBSMC)后,Western blotting检测FN1表达水平。结果与正常对照组相比,哮喘组小鼠气道上皮下胶原沉积,IL-6、TNF-α、TGF-β1、VEGF表达显著增高(P<0.001),miR-23b-5p表达显著降低(P<0.05)。免疫组织化学染色、Western blotting结果显示,FN1、α-SMA在哮喘组小鼠肺组织中的表达显著升高(P<0.05)。FN1受miR-23b-5p靶向调控,并且与miR-NC组相比,转染miR-23b-5p模拟物后FN1表达水平显著下调(P<0.05),而转染miR-23b-5p抑制剂后FN1表达水平显著升高(P<0.01)。结论miR-23b-5p可通过靶向下调FN1,缓解哮喘气道重塑。

清肾颗粒含药血清通过miR-23b-5p靶向Nrf2通路减轻NRK-52E细胞转分化

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导NRK-52E(大鼠肾小管上皮细胞)细胞转分化模型中miR-23b-5p是否能对Nrf2通路靶向调节,并阐明清肾颗粒含药血清减轻NRK-52E细胞转分化的机制。方法构建TGF-β1诱导的NRK-52E细胞转分化模型,分别使用miR-23b-5p mimic、inhibitor以及阴性对照(NC)siRNA转染细胞;采用清肾颗粒含药血清进行干预,分为正常组、TGF-β1组、清肾颗粒组、miR-23b-mimic-NC组、miR-23b-mimic组、miR-23b-mimic+清肾颗粒组。采用CCK8法测定NRK-52E细胞活性;双荧光素酶报告基因实验检测miR-23b-5p与Nrf2间的靶向关系;Westernblot法检测细胞中Nrf2、Keap1、α-SMA蛋白表达;RT-qPCR法检测细胞中miR-23b、Keap1、Nrf2、α-SMAmRNA表达;流式细胞术检测ROS。结果根据CCK8结果筛选得出清肾颗粒含药血清的最佳浓度和时间分别为20%和24h,TGF-β1刺激的最佳浓度和时间分别为10ng/mL和24h。转染miR-23b-5p mimic和inhibitor发现,当miR-23b-5p过表达后,Nrf2 mRNA表达量也增加;而miR-23b-5p表达沉默后,Nrf2 mRNA表达量也减少。双荧光素酶报告显示,Rno-miR-23b-5p能显著下调Rno-Nrf2-wt荧光素酶活性(P<0.05),但未能下调突变Rno-Nrf2-mu荧光素酶活性(P>0.05)。清肾颗粒含药血清的干预实验发现,与正常组比较,TGF-β1组的miR-23b-5p、Nrf2表达降低,Keap1、α-SMA和ROS表达升高(P<0.05)。与TGF-β1组比较,清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高,Keap1、α-SMA和ROS表达降低(P<0.05);miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高,Keap1、α-SMA和ROS降低(P<0.05)。与miR-23b-mimic-NC组比较,miR-23b-mimic组miR-23b-5p、Nrf2表达升高,Keap1、α-SMA和ROS降低(P<0.05)。与miR-23b-mimic组比较,miR-23b-mimic+清肾颗粒组的miR-23b-5p、Nrf2表达升高,Keap1、α-SMA和ROS降低(P<0.05)。结论清肾颗粒含药血清能通过miR-23b-5p靶向Nrf2通路机制减轻NRK-52E细胞转分化。

miR-23b-3p对结直肠癌奥沙利铂化疗敏感性的影响

目的:探讨miR-23b-3p对结直肠癌奥沙利铂(OXA)化疗敏感性的影响。方法:选取68例行结直肠癌根治术并实施OXA同种联合化疗的患者,根据实体瘤疗效评价标准分为耐药组(n=32)和非耐药组(n=36)。采用qPCR技术检测两组患者血清及人结直肠癌细胞株(SW620)、OXA耐药株(SW620/OXA)中miR-23b-3p表达水平。比较miR-23b-3p高、低表达组患者的生存率。采用双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p与HMGB2的靶向关系。SW620/OXA细胞按实验Ⅰ分为空白对照组、miR-23b-3p mimic组、mimic-NC组,按实验Ⅱ分为sh-NC组、sh-HMGB2组和sh-HMGB2+miR-23b-3p抑制剂组。采用CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,另根据OXA细胞毒性实验计算半数抑制浓度(IC50);采用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率;采用Western blot检测各组细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:与非耐药组比较,耐药组血清miR-23b-3p表达水平降低;与SW620细胞比较,SW620/OXA细胞中miR-23b-3p表达水平降低(P<0.05)。miR-23b-3p高表达组的生存率高于miR-23b-3p低表达组(P<0.001)。双荧光素酶报告实验证实miR-23b-3p靶向调控HMGB2的表达。过表达miR-23b-3p或抑制HMGB2的表达能有效抑制SW620/OXA细胞增殖,降低OXA杀伤细胞的IC50,促进细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白的表达;但同时抑制HMGB2和miR-23b-3p的表达则能促进SW620/OXA细胞增殖,降低细胞对OXA的化疗敏感性,抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-23b-3p过表达可逆转结直肠癌SW620/OXA细胞对OXA的化疗耐药性,其机制可能与靶向下调HMGB2的表达有关。

过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。方法 qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。结果 ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。结论 过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。

miR-23b对风湿关节炎大鼠滑膜组织转化生长因子β1及破骨细胞的影响

背景:研究表明,miR-23b水平升高与风湿关节炎的发生发展密切相关,故抑制miR-23b的表达可作为治疗该病的一个新靶点。目的:探究miR-23b对风湿关节炎大鼠滑膜组织转化生长因子β1调节及对破骨细胞活性的抑制作用。方法:选取60只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、模型组、miR-NC组、miR-23b inhibitor组。除正常对照组外,其他3组大鼠采用弗氏完全佐剂法进行风湿关节炎建模,建模成功后,对miR-NC组尾静脉注射20μL 1×10^(8) L^(-1)的miR-NC,miR-23b inhibitor组尾静脉注射20μL 1×10^(8) L^(-1)的miR-23b inhibitor,正常对照组、模型组同期尾静脉注射同体积生理盐水。21 d后,苏木精-伊红染色法检测大鼠关节组织病理形态;Real-time PCR法检测大鼠血清中miR-23b的mRNA相对表达;免疫组化法检测大鼠滑膜组织中转化生长因子β1蛋白表达;抗酒石酸酸性磷酸酶染色法及鬼笔环肽染色法检测破骨细胞活性。结果与结论:①正常对照组大鼠关节滑膜细胞结构正常且排列整齐,模型组、miR-NC组出现明显滑膜细胞增生且排列紊乱,同时可见毛细血管及纤维结缔组织明显增生,且出现大量炎性细胞浸润现象,miR-23b inhibitor组可见滑膜细胞轻度增生及少量炎性细胞浸润,水肿、充血情况明显改善;②与正常对照组比较,模型组大鼠血清中miR-23b相对表达明显升高(P<0.05),模型组与miR-NC组相比无明显差异(P>0.05),miR-23b inhibitor组血清中miR-23b相对表达较miR-NC组明显降低(P<0.05);③与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜组织转化生长因子β1蛋白表达显著升高(P<0.05),模型组与miR-NC组相比无明显差异(P>0.05),miR-23b inhibitor组滑膜组织转化生长因子β1蛋白表达较miR-NC组明显降低(P<0.05);④与正常对照组比较,模型组大鼠滑膜成纤维细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色可见大量阳性表达的典型多核破骨细胞(P<0.05),模型组与miR-NC组相比无明显差异(P>0.05),miR-23b inhibitor组破骨细胞体积及数目较miR-NC组明显减少(P<0.05);⑤与正常对照组比较,模型组大鼠破骨细胞鬼笔环肽染色可见明显纤维肌动蛋白环形成(P<0.05),模型组与miR-NC组相比无明显差异(P>0.05),miR-23b inhibitor组纤维肌动蛋白环面积较miR-NC组明显缩小(P<0.05);⑥上述结果说明,降低miR-23b表达可对风湿关节炎起到治疗作用,其可有效抑制大鼠滑膜组织转化生长因子β1表达,降低破骨细胞活性。

miR-23b-3p调控肾间质成纤维细胞成骨样分化参与Randall斑形成的机制研究

目的探究miR-23b-3p对肾间质成纤维(hRIFs)细胞成骨样分化和Randall斑形成的影响及其可能机制。方法采用qRT-PCR技术检测草酸钙(CaOx)结石患者Randall斑组织(RP)和接受肾切除术的肾肿瘤患者正常乳头状组织(nRP)的miR-23b-3p和肌细胞特异性增强子因子2C(MEF2C)、成骨标志物人骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)的mRNA表达水平;体外分离、培养hRIFs细胞,将miR-23b-3p过表达质粒pSi-miR-23b-3p及空载质粒pSi-NC和MEF2C慢病毒过表达质粒Lv-MEF2C及空载质粒Lv-NC转染至hRIFs细胞中,并诱导细胞成骨分化14 d;ELISA法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色观察各组细胞矿化结节形成情况;qRT-PCR检测细胞中miR-23b-3p和MEF2C、OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;Western blot检测细胞中MEF2C蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p与MEF2C的靶向关系。结果①与nRP组比较,RP组中miR-23b-3p低表达,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA高表达;②hRIFs成骨诱导14 d后,细胞中ALP活性升高,矿化结节形成能力增强,miR-23b-3p表达水平降低,而MEF2C、OCN、OPN和Runx2 mRNA表达水平及MEF2C蛋白表达水平升高;③miR-23b-3p过表达降低成骨诱导后hRIFs细胞中ALP活性,抑制细胞矿化结节形成能力,下调细胞中OCN、OPN、Runx2 mRNA表达水平;④MEF2C过表达可逆转miR-23b-3p过表达对hRIFs细胞成骨分化的抑制作用;⑤MEF2C是miR-23b-3p下游靶基因。结论miR-23b-3p在RP组织及hRIFs细胞成骨样分化过程中低表达,上调miR-23b-3p可抑制hRIFs细胞的成骨样分化,其作用机制可能与靶向沉默MEF2C有关。

SNHG17通过调节miR-23b-3p和ZHX1对胶质母细胞瘤恶性表型的调控作用研究

目的研究小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)通过miR-23b-3p和锌指结构同源框蛋白1(ZHX1)调控胶质母细胞瘤(GBM)的恶性表型的作用。方法选取2020年1月至2022年10月广西壮族自治区脑科医院神经外科诊断为GBM的33例患者的手术标本,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测GBM样本和癌旁正常组织中的SNHG17、miR-23b-3p和ZHX1的表达,通过Pearson相关分析评估SNHG17,miR-23b-3p及ZHX1之间的表达相关性。使用GBM细胞系A172和DK-MG作为细胞模型,利用细胞转染技术将细胞分为si-NC组(转染空白抑制剂)、si-SNHG17组(转染si-SNHG17#2)、si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组(转染si-SNHG17#2+miR-23b-3p inhibitor),采用CCK-8和EdU法检测GBM细胞的增殖能力,使用Transwell实验评估GBM细胞的迁移和侵袭能力。使用qRT-PCR技术及Western blot实验检测SNHG17和miR-23b-3p的相互调节及两者对ZHX1的调控作用。结果GBM组织中的SNHG17和ZHX1表达水平高于癌旁正常组织,miR-23b-3p表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。在GBM组织中,SNHG17与miR-23b-3p的表达呈负相关(r=-0.711,P<0.05),而与ZHX1的表达呈正相关(r=0.648,P<0.05);miR-23b-3p和ZHX1的表达呈负相关(r=-0.637,P<0.05)。si-SNHG17组中miR-23b-3p表达高于si-NC组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平均低于si-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。si-SNHG17+miR-23b-3p inhibitor组中miR-23b-3p表达低于si-SNHG17组,GBM细胞的增殖、迁移、侵袭能力及ZHX1的表达水平高于si-SNHG17组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SNHG17通过调节miR-23b-3p/ZHX1轴促进GBM细胞的增殖、迁移和侵袭进程,提示SNHG17可能是GBM的一个潜在的治疗靶点。

miR-23b通过靶定TAB2/3抑制糖尿病肾病纤维化

MicroRNAs(miRNAs)通过与靶基因的相互作用发挥其生物学功能.miR-23b作为抑癌基因,参与了许多肿瘤和自身免疫疾病的发生过程,但其在糖尿病肾病中的作用尚不清楚.为了探讨miR-23b与靶基因TAB2/3作用对糖尿病肾病纤维化的影响,本实验通过建立糖尿病小鼠模型和糖尿病HK-2细胞模型,利用实时定量荧光PCR方法,检测糖尿病小鼠模型肾mRNA表达,发现miR-23b在糖尿病组(Dia组)表达低于正常组(P<0.001).利用Western印迹检测相关蛋白,结果显示,与正常组相比,TAB2/3,FN和α-SMA在糖尿病组高表达,并且TAB2/3在糖尿病组中持续高表达.利用基因转染技术过表达miR-23b可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制TAB2/3,P38和ERK1/2的表达,FN表达也显著降低.以上结果显示:miR-23b可能通过作用靶基因TAB2/3及其信号通路下游,抑制糖尿病肾病纤维化.

miR-23b-3p调控脂蛋白(a)抑制同型半胱氨酸诱导的冠状动脉血管内皮细胞损伤

目的 探讨miR-23b-3p作为一种高效降低载脂蛋白（a）[apolipoprotein（a）,Apo（a）]的内源性miR,对高同型半胱氨酸引起的冠状动脉内皮细胞损伤抑制效果及作用机制。方法 通过生物信息学、miR芯片及基础实验筛选ETS1为靶基因,设计miR-23b-3p mimic/inhibitor。构建pmir GLOETS1 3＇-UTR质粒分6组转染人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells,HCAECs）,分别为A组（pmirGLO-ETS1 3＇-UTR转染）、B组（miR-23b-3p inhibitor＋pmir GLO-ETS1 3＇-UTR转染）、C组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR转染）、D组（pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）、E组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）和F组（miR-23b-3p inhibitor＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）,经双荧光素酶报告基因实验验证。HCAECs分为：对照组（无干预）、阴性对照组（miR-23b-3p inhibitor转染）和实验组（miR-23b-3p mimic转染）。3组细胞均置于含1. 0 mmol/L同型半胱氨酸（homocysteine,hcy）培养基中培养7 d。检测各组HCAECs存活率、miR-23b-3p和Apo（a） mRNA表达、akt、p-akt和eNOS蛋白表达。结果 双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p能够和ETS13＇-UTR直接结合,可得ETS1是miR-23b-3p直接靶基因。实验组HCAECs存活率（66. 22±5. 17）%、阴性对照组（42. 12±2. 35）%和对照组（38. 36±2. 21）%均显著低于正常HCAECs（P 〈0. 01）,实验组HCAECs存活率显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组miR-23b-3p mRNA表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）,实验组Apo（a） mRNA表达显著低于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组p-akt表达和eNOS蛋白相对表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。结论 miR-23b-3p能够以ETS1为靶基因,可能通过akt/eNOS信号通路下调hcy诱导损伤的内皮细胞中Apo（a）表达,从而保护冠状动脉血管内皮细胞。

胆酸通过上调miR-23b-3p抑制载脂蛋白A表达

目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

miR-23b过表达对高糖诱导近端肾小管上皮细胞EMT及PI3K-AKT通路的影响

目的研究过表达miR-23b对高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化(EMT)及PI3K-AKT通路的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞HK-2分为4组:正常葡萄糖(NG)组、高糖(HG)组、miR-23b阴性对照(NC)组和miR-23b过表达(mimic)组,转染48 h后,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-23bmRNA的表达,光学显微镜观察细胞形态,qRT-PCR检测波形蛋白(VIM)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-CD) mRNA的表达,蛋白免疫印迹(WB)检测VIM、α-SMA、E-CD、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。结果与NG组比较,HG组中miR-23b表达显著下调,差异有统计学意义(P <0. 05);转染miR-23b mimic后,HK-2细胞中miR-23b表达显著上调(P <0. 05)。与NG组比较,HG组、NC组和mimic组HK-2细胞出现大量纺锤形细胞,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达显著上调(P <0. 05),E-CDmRNA和蛋白表达显著下调(P <0. 05),PTEN蛋白表达上调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达下调(P <0. 05);与HG组、NC组比较,mimic组HK-2细胞纺锤形细胞数量明显减少,细胞中VIM、α-SMA mRNA和蛋白表达下调(P <0. 05),E-CD、PI3K mRNA和蛋白表达上调(P <0. 05),PTEN蛋白表达下调(P <0. 05),PI3K、p-Akt蛋白表达上调(P <0. 05)。结论过表达miR-23b抑制高糖诱导近端肾小管上皮细胞间充质转化作用,其机制可能与抑制PI3K-AKT通路激活有关。

系统性红斑狼疮患者血清中miR⁃23b表达水平与疾病活动性的关系及作用机制

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)中miR⁃23b表达与疾病活动性的关系及作用机制。方法选取2016年3月至2018年4月于恩施土家族苗族自治州中心医院及湖北民族学院附属民大医院收治的SLE患者92例作为研究对象,根据疾病活动评分标准将其分为活动期组(≥10分)和缓解期组(0~9分),分别为54例和38例;并选取同期50例健康体检者作为对照组。采用实时荧光免疫PCR检测三组血清miR⁃23b表达水平;采用毛细管光度计成像法、免疫比浊法和化学发光法分别检测SLE患者血液红细胞沉降率(ESR)、补体C3、C4及抗dsDNA抗体,并分析miR⁃23b与血液ESR、补体C3、C4及抗dsDNA抗体的相关性;采用酶联免疫吸附法检测SLE患者血液TGF⁃β1和Smad3蛋白表达水平,并分析miR⁃23b与其相关性。结果对照组、缓解期组及活动期组血清miR⁃23b表达水平差异有统计学意义(F=10.67,P<0.001),活动期组<缓解期组<对照组。活动期组ESR和抗dsDNA抗体均明显高于缓解期组,补体C3、C4、TGF⁃β1和Smad3蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson法分析得知,miR⁃23b与ESR、补体C3、C4及抗dsDNA相关分析的r值分别为-0.803、0.847、0.471和-0.929,miR⁃23b与TGF⁃β1和Smad3蛋白相关分析的r值分别为0.911和0.927,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR⁃23b在系统性红斑狼疮中低表达,可能通过介导TGF⁃β1/Smad3通路参与其发生发展,与疾病活动性呈明显负相关。

苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达

目的前期工作发现苦瓜蛋白（MD28）可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚。文章拟从转录后水平分析其作用机制。方法首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的micro RNA（miRNA）,并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系。qRT-PCR检测ABCA1 m RNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积。结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因。MD28剂量（0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L）和时间（0 h、6 h、12h、24 h、48 h）依赖性地上调ABCA1 m RNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h最为显著。ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用。结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用。

miR-23b对口腔癌转移影响

口腔癌转移是威胁全世界生命健康的问题,有效的靶向治疗对口腔癌患者尤为重要.近年来,microRNA(miRNA)作为一种微小的非编码RNA在肿瘤转移中发挥着重要的作用,因此,开展了体外探究miR-23b在口腔癌转移中的作用.利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qRT-PCR)检测了miR-23b在口腔正常细胞和口腔癌细胞中的表达差异,结果显示miR-23b在口腔癌细胞中的表达明显高于口腔正常细胞中的表达,且随着口腔癌转移程度的增加而增高( P <0.05).在此基础上,通过给细胞转染miR-23b mimics的方法过表达miR-23b,以探究该miRNA对口腔癌转移的作用.实验结果发现,增加口腔原位癌细胞Um-2中miR-23b的表达后,该细胞的转移能力显著增强,表明miR-23b在口腔癌转移中发挥着重要作用,可能成为临床口腔癌的治疗靶点和口腔癌检测标志物.

苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达

目的 研究苦瓜蛋白（MD28）对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响,探索其作用机制。 方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白；MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot分别检测Apo（a）、法尼酯X受体（FXR）、肝细胞核因子4α（HNF4α）的mRNA和蛋白表达水平；qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小干扰RNA转染沉默FXR。 结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异；与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo（a）表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果最为显著；苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4α的下调作用,但对FXR的表达无影响。 结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo（a）的表达,有望成为临床降低脂蛋白（a）的候选药物。