miR-100在人类癌症中的研究新进展

miR-100在人类多种癌症中表达严重失调,在细胞代谢、周期、迁移、上皮间质转化、分化等方面发挥着重要作用,其表达失调还与癌症的诊断与预后密切相关。近年来,关于miR-100的研究取得了一些新进展,本文将对miR-100在人类癌症中的研究新进展进行简要阐述。

金银花多酚粗提物调控miR-100-5p参与非小细胞肺癌细胞NCI-H1299侵袭迁移

目的:探讨金银花多酚粗对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞恶性生物学行为的影响及分子机制。方法:将非小细胞肺癌NCI-H1299细胞分为NC组、紫杉醇组、金银花多酚粗提物低、中、高剂量组、miR-100-5p组、miR-NC组、anti-miR-100-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-100-5p表达水平。结果:不同浓度金银花多酚粗提物处理后,NCI-H1299细胞活性降低,细胞迁移和侵袭数量减少,E-Cadherin、miR-100-5p表达水平升高,N-Cadherin、Vimentin表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-100-5p后,NCI-H1299细胞活性升高,细胞迁移[(226±20.03)个]和侵袭数量[(171±15.03)个]增加,E-Cadherin表达水平(0.34±0.03)降低,N-Cadherin(0.88±0.08)、Vimentin表达水平(0.95±0.09)升高(P<0.05)。下调miR-100-5p可逆转金银花多酚粗提物对NCI-H1299细胞增殖、迁移侵袭及Wnt/β-catenin通路的影响。结论:金银花多酚粗提物可能通过上调miR-100-5p表达,抑制Wnt/β-catenin通路活化,进而抑制非小细胞肺癌NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-100-5p调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程

目的:探讨miR-100-5p对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:通过GEO数据库下的miRNA微阵列数据集(GSE104006、GSE73182、GSE151180),选取变化倍数[|log2Fold Change(FC)|>1]和adj.P.Val<0.05的miRNA进行交集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-100-5p在PTC细胞系(TPC-1和B-CPAP)和人正常甲状腺细胞系(Nthy-ori 3-1)中的表达趋势。合成miR-100-5p相关的模拟物(mimics-100-5p)、抑制剂(inhibitor-100-5p)以及对应的对照组(mimics-NC和inhibitor-NC)。分别转染PTC细胞系,通过Edu实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验深入研究miR-100-5p对PTC细胞的影响。通过蛋白印迹实验检测转染mimics-100-5p、inhibitor-100-5p及对应NC组MMP-9和EMT相关标志蛋白的表达趋势。结果:三个miRNA微阵列数据库共同交集于miR-100-5p。与人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1相比,miR-100-5p在PTC细胞系中低表达。qRT-PCR验证转染成功。Edu实验、平板克隆实验显示过表达miR-100-5p细胞的增殖速率明显降低,而敲低miR-100-5p后结果与之相反。划痕愈合实验和Transwell实验显示过表达miR-100-5p的TPC-1细胞的迁移和侵袭能力受限,而敲低miR-100-5p的结果与之相反。蛋白印记实验显示过表达miR-100-5p后MMP-9、VIM蛋白表达趋势明显降低,而E-cad蛋白表达上升,敲低miR-100-5p可以逆转过表达miR-100-5p的结果。结论:miR-100-5p负调控PTC细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,miR-100-5p还参与介导PTC的上皮间质转化进程。

has-miR-100-5p靶向含7A的锌指和BTB结构域是绝经后骨质疏松的潜在靶标

背景:miRNAs在骨质疏松症的发病机制中起重要作用,因此可以成为重要的治疗靶点。其中,靶向miR-100-5p调控轴促进成骨细胞分化是骨质疏松的潜在治疗靶标。目的:探讨has-miR-100-5p和has-miR-101-3p在绝经后骨质疏松中的靶向调控作用。方法:比较GSE56814和GSE56815数据中高骨矿物质密度和低骨矿物质密度之间的差异表达基因,并进行富集分析。预测差异表达基因中has-miR-100-5p和has-miR-101-3p的靶向调控的基因。随后,收集40例绝经后骨质疏松患者和40例健康对照者的外周血样本,采用qRT-PCR法检测has-miR-100-5p和has-miR-101-3p以及靶标基因的差异表达。最后,通过双荧光素酶报告基因检测has-miR-100-5p对靶标基因3’UTR的结合作用。结果与结论:①富集分析显示,高骨矿物质密度和低骨矿物质密度之间鉴定到81个共同差异表达基因,显著富集于免疫、核因子κB复合物、肿瘤坏死因子信号通路等;②miRTargetbase数据库和miRTarget数据库预测显示,has-miR-100-5p和has-miR-101-3p均靶向调控含7A的锌指和BTB结构域(zinc finger and BTB domain containing,ZBTB7A);③qRT-PCR检测显示,与健康对照组比较,骨质疏松组has-miR-100-5p mRNA表达上调(P<0.001),has-miR-101-3p和ZBTB7A mRNA表达下调(P<0.001);双荧光素酶报告系统显示,野生型ZBTB7A-3’UTR共转染has-miR-100-5p后,293T细胞的荧光活性下调;④结果显示,has-miR-100-5p靶向ZBTB7A可能是绝经后骨质疏松症的潜在靶标。

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照(NC)组(未处理)、低剂量组(12.5μmol/L羽扇豆醇)、中剂量组(25μmol/L羽扇豆醇)、高剂量组(50μmol/L羽扇豆醇)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-100-5p组(转染miR-100-5p)、anti-miR-NC+高剂量组(转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理)、anti-miR-100-5p+高剂量组(转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理)。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达降低(P<0.05),miR-100-5p表达逐渐升高(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-100-5p组miR-100-5p表达升高,NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达降低(P<0.05);与anti-miR-NC+高剂量组比较,anti-miR-100-5p+高剂量组miR-100-5p表达下降,NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达升高(P<0.05)。结论 羽扇豆醇通过上调miR-100-5p表达抑制NSCLC细胞NCI-H1299增殖、迁移和侵袭。

循环肿瘤细胞、miR-100、鳞状细胞癌抗原与局部晚期宫颈癌放疗患者生存预后的关系研究

目的评估循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)、miR-100联合鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag)检测对局部晚期宫颈癌(locally advanced cervical cancer,LACC)放疗患者预后的影响。方法选择2017-01/2022-04月作者医院145例接受放疗或同步放化疗(concurrent chemoradiotherapy,CCRT)的LACC患者为研究对象。检测初次就诊时CTC、miR-100水平与临床病理参数之间的关系。使用Cox比例风险回归模型进行单变量和多变量生存分析。随访主要终点为无进展生存期(progression-free survival,PFS),次要终点包括总生存期(overall survival,OS)、骨盆PFS(pelvic progression-free survival,PPFS)和远处无转移生存期(distant metastasis-free survival,DMFS)。结果145例LACC患者CTC的阳性率为55.86%(81/145),即CTC≥3 CTC/3.2 ml。放疗前miR-100水平为0.23(0.18,0.29)。miR-100<0.23的患者国际妇产科联盟(international federation of obstetrics and gynecology,FIGO)Ⅲ~ⅣA期比例更高(P=0.004),CTC≥3 CTC/3.2 ml的LACC患者的肿瘤直径更大(P=0.032)。42例(28.97%)患者获得疾病进展。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示,SCC-Ag、CTC和miR-100预测LACC进展的最佳截断值为4.35 ng/ml、4.50 CTC/3.2 ml和0.23,三者联合预测疾病进展的灵敏度和特异度分别为73.80%和75.70%。SCC-Ag水平升高、CTC增加、miR-100水平降低与LACC患者PFS、OS、PPFS、DMFS较差有关(P<0.05)。多变量分析表明,SCC-Ag、CTC、miR-100是PFS的独立危险因素(P<0.05)。结论SCC-Ag、CTC和miR-100是预测LACC患者预后的潜在生物标志物,三者联合检测可显著提高LACC患者生存预测能力。

MiR-100基因敲除小鼠的建立及造血表型初步分析

目的建立miR-100基因敲除小鼠模型,初步探索miR-100基因缺失对小鼠造血系统发育的影响。方法通过将EIIa-Cre-;miR-100fl/fl小鼠和EIIa-Cre+;miR-100+/+小鼠进行配繁,培育出EIIa-Cre+;miR-100fl/fl(miR-100-/-)小鼠,也就是miR-100全身敲除小鼠。通过PCR技术以及q-PCR技术鉴定小鼠基因型并验证miR-100基因在小鼠骨髓和脾的敲除效率。分离小鼠外周血、骨髓、脾,制备单细胞悬液,利用血细胞计数、流式细胞术、甲基纤维素血细胞集落形成实验分析该基因缺失对小鼠造血系统的影响。并通过q-PCR和RNA结合蛋白免疫沉淀实验(RIP)验证miR-100与Mospd2之间的关系。结果PCR和q-PCR结果表明,成功构建miR-100基因敲除小鼠。血细胞计数、流式细胞术及甲基纤维素血细胞集落形成实验结果表明,miR-100基因缺失小鼠外周血髓系细胞比例增多,但其对小鼠骨髓和脾的髓系细胞,T/B淋巴细胞、红细胞的比例和绝对细胞计数无影响,并且miR-100基因缺失对小鼠骨髓造血干祖细胞群体比例和数量及骨髓单个核细胞集落形成能力无影响。q-PCR结果表明,miR-100缺失可以促进小鼠骨髓细胞中Mospd2的表达。RIP实验表明,miR-100以AGO2蛋白复合物的形式与Mospd2结合在一起,进而调控Mospd2的表达。结论本研究成功建立了miR-100基因敲除小鼠模型,发现该基因缺失影响小鼠外周血髓系细胞占比,验证了miR-100与Mospd2之间的关系。本研究为进一步了解该基因在小鼠造血调控中的作用提供指导。

血清miR-25和miR-100作为食管鳞状细胞癌诊断和预后标志物研究

目的 探讨血清miR-25和miR-100对食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）的诊断和预后价值.方法 收集2011年6月～2014年5月南京军区南京总医院及徐州市肿瘤医院63例ESCC患者术前、术后及随访血清,并收集63例年龄、性别匹配的非癌健康人血清作为对照;实时荧光定量PCR法检测血清miR-25和miR-100含量.用非参数Mann-Whitney U检验ESCC患者组和对照组血清miR-25和miR-100表达水平的差异,配对t检验分析ESCC患者术前术后血清中miR-25和miR-100的表达量变化,受试者工作特征曲线（ROC）评估血清miR-25和miR-100对ES-CC的诊断价值,单因素Kaplan-Meier法分析对ESCC患者生存的影响.结果 与健康对照相比,ESCC患者血清miR-25（0.40±0.20 vs 0.02±0.01）和miR-100的相对含量（0.10±0.02 vs 0.04±0.00）显著升高,差异具有统计学意义（U值分别为885.0和1 006.0,P值均＜0.01）;血清miR-25和miR-100的ROC曲线下面积AUC均明显大于癌胚抗原;ESCC患者术后血清miR-100含量较术前明显降低（0.07±0.01 vs 0.10±0.02）,差异具有统计学意义（t=2.367,P=0.021）;单因素Kaplan-Meier法分析显示血清miR-25和miR-100表达阴性的ESCC患者的生存期明显高于阳性患者（P＜0.05）.结论 血清miR-25和miR-100可作为ESCC诊断及预后评估的潜在标志物.

上调miR-100降低宫颈癌细胞侵袭和迁移及顺铂耐药性

【目的】在宫颈癌Hela、Siha细胞中上调mi R-100后,研究细胞侵袭及迁移功能及顺铂耐药性变化并探讨其机制。【方法】将mi R-100 mimic通过lipomax试剂转染至宫颈癌细胞Hela、Siha中,细胞主要分为两组:NC组,为空白对照;mir100组,为上调mi R-100后的细胞。transwell法观察细胞侵袭性,划痕实验观察迁移性;WB测定上皮间质变相关蛋白ECadherin、Snail、Vimintin及MMP2、u PA的表达;CCK8法测定顺铂耐药性。【结果】1两系宫颈癌细胞上调mi R-100后,细胞的侵袭、迁移性降低;2上调mi R-100后的宫颈癌细胞中上皮相关分子E-Cadherin表达上调,间质表型分子Snail、Vimintin表达下调,MMP-2表达无差异,u PA表达下降;3不同浓度顺铂作用(P<0.001)及是否转染mir-100 si RNA(P<0.001)对细胞存活率的改变均具有显著统计学意义,且浓度因素与处理因素间相对独立;在Siha细胞中得出相同结论 (P<0.001)。Hela NC、Hela 100细胞株顺铂IC50(μmol/L)分别为:8.19±0.34、5.38±0.47,Siha NC、Siha 100的IC50分别为8.86±0.92、6.19±0.23,P<0.05。【结论】mi R-100在宫颈癌细胞Hela及Siha中通过降低上皮间质变过程起抑制侵袭和转移的作用,该功能可能与u PA的改变有关。上调mi R-100可降低宫颈癌细胞对顺铂的耐药性。

miR-100通过抑制PLK1提高胰腺癌细胞株SW1990吉西他滨敏感性的影响及作用机制

目的在胰腺癌治疗中,吉西他滨的化疗耐受机制目前仍不清楚。文中探讨miR-100对胰腺癌患者吉西他滨化疗敏感性的影响及作用机制。方法通过实时荧光定量PCR和Western blot检测miR-100对PLK1基因水平和蛋白水平的影响。利用荧光素酶试验验证PLK1是miR-100的靶基因。通过流式细胞仪检测miR-100对人胰腺癌细胞株SW1990吉西他滨敏感性的影响。结果 PCR结果显示,过表达miR-100能够降低PLK1基因水平。Western blot结果显示,过表达miR-100能够使PLKA1蛋白表达降低。荧光素酶试验结果显示,miR-100能够显著降低PLK1-3'-UTR质粒的荧光素活性。流式细胞仪结果显示,过表达miR-100能使细胞凋亡率明显升高。结论 miR-100能提高人胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨的敏感性,miR-100抑制PLK1的表达可能是其作用机制。

hsa-miR-100的生物信息学分析

目的对hsa-miR-100进行靶基因、功能预测等生物信息学分析,为深入研究hsa-miR-100功能提供理论和试验基础。方法利用Pubmed检索miRNA-100相关文章,通过miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析hsa-miR-100序列,应用miRanda、TargetScan及PicTar预测hsa-miR-100靶基因,结合已证实的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果 hsa-miR-100与多种肿瘤发生、发展有关,其序列在各物种间具有高度保守性。hsa-miR-100靶基因功能富集于基因沉默、染色质沉默、细胞生物合成负性调节等(P<0.01),涉及肿瘤信号通路、溶酶体信号通路、凋亡信号通路等信号转导通路(P<0.05)。结论 hsa-miR-100可能参与肿瘤发生相关的生物学过程。

miR-100靶基因BAZ2A在肝癌迁移侵袭中的机制研究

目的:探讨miR-100和BAZ2A基因在肝癌细胞中的表达及对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。方法:以qRT-PCR检测和Western blot分析miR-100与BAZ2A在肝癌细胞中的表达情况;以miR-100 mimics转染肝癌细胞SMMC-7721,检测miR-100对BAZ2A表达的影响,细胞划痕实验和Transwell小室实验验证miR-100对肝癌细胞迁移侵袭能力的影响。结果:miR-100在肝癌细胞中呈低表达,BAZ2A表达与其呈负相关,上调miR-100可以降低BAZ2A的表达,抑制肝癌细胞的迁移侵袭能力。结论:miR-100可以通过抑制BAZ2A的表达来降低肝癌细胞的迁移侵袭能力,达到抗肿瘤的效果。

结直肠癌miR-100和miR-125b表达在西妥昔单抗联合FOLFOX治疗中的临床意义

目的探究结直肠癌miR-100和miR-125b表达在西妥昔单抗联合FOLFOX治疗的临床意义。方法收集2014年10月至2016年10月在石嘴山市第一人民医院就诊的结直肠癌患者98例,应用实时定量PCR方法检测miR-100和miR-125b表达水平,分为miR-100低表达65例,高表达33例;miR-125b低表达71例,高表达27例,所有患者均给予西妥昔单抗联合FOLFOX化疗,随访2年,比较miR-100和miR-125b不同表达水平结直肠癌患者的临床病理表现以及化疗效果,并应用Kaplan-Meier法绘制生存曲线比较其预后情况。结果miR-100和miR-125b不同表达水平患者的肿瘤部位、病理类型、肿瘤直径差异均无统计学意义(P均>0.05),淋巴结转移、分化程度在miR-100和miR-125b不同表达水平间差异均有统计学意义(P均<0.05)。miR-100低表达组的化疗总有效率高于miR-100高表达组(58.46%vs 33.33%,P=0.019),miR-125b低表达组的化疗总有效率低于miR-125b高表达组(29.58%vs 62.96%,P=0.037)。miR-100低表达组患者的死亡风险低于miR-100高表达组[HR=0.503,95%CI(0.259~0.975),P=0.021],miR-125b低表达组患者的死亡风险高于miR-125b高表达组[HR=2.183,95%CI(1.215~3.922),P=0.027]。miR-100低表达组患者的疾病进展风险低于miR-100高表达组[HR=0.508,95%CI(0.275~0.939),P=0.014],miR-125b低表达组患者的疾病进展风险高于miR-125b高表达组[HR=2.070,95%CI(1.234~3.475),P=0.014]。结论结直肠癌miR-100低表达和miR-125b高表达患者应用西妥昔单抗联合FOLFOX治疗可获得更好的疗效。

宫颈癌组织中miR-100表达量与顺铂耐药的关系研究

目的:研究宫颈癌组织中miR-100表达量与顺铂耐药的关系。方法:收集在本院接受顺铂化疗的107例宫颈癌组织作为临床样本,根据化疗效果分为化疗有效的顺铂敏感宫颈癌组织和化疗无效的顺铂敏感宫颈癌组织。检测miR-100的表达量及耐药相关基因、细胞周期相关基因及细胞侵袭相关基因的表达量。结果:顺铂耐药的宫颈癌组织中miR-100的表达量显著低于顺铂敏感的宫颈癌组织,Nek2、P-gp、GST-π、Topo-II、SP2、CyclinD1、CyclinG1、CDK4、CDK5、MMP1、PAR1、RbAp48、Vimentin、N-cadherin的表达量显著高于顺铂敏感的宫颈癌组织;miR-100的表达量与Nek2、P-gp、GST-π、Topo-II、SP2、CyclinD1、CyclinG1、CDK4、CDK5、MMP1、PAR1、RbAp48、Vimentin、N-cadherin的表达量呈负相关。结论:宫颈癌组织中miR-100的低表达与顺铂耐药密切相关。

miR-100表达与乳腺癌患者淋巴结转移及FZD-8表达的相关性研究

目的考察临床乳腺癌病理组织中mi R-100和Wnt通路关键因子卷曲蛋白(FZD)-8表达之间的关系,并分析mi R-100表达与乳腺癌患者淋巴结转移的关系。方法选取中国医科大学附属第一医院乳腺外科术后的50例乳腺癌患者,通过原位杂交检测乳腺癌患者病理组织及其配对的癌旁组织中mi R-100的表达;免疫组化检测2种组织中FZD-8的表达;比较有无淋巴结转移患者癌组织中mi R-100表达情况,分析乳腺癌组织mi R-100与FZD-8表达的相关性。结果 mi R-100在乳腺癌组织中的表达明显低于其配对的癌旁组织[2.00(1.00,3.00)vs.6.00(3.50,8.00)];有淋巴结转移者癌组织中mi R-100低表达[1.50(1.00,2.75)vs.3.00(2.00,4.00)];与癌旁组织相比,FZD-8在乳腺癌组织中高表达[8.00(6.00,9.00)vs.6.00(3.75,9.00)],且其表达水平与mi R-100的表达呈负相关(rs=-0.592,P<0.001)。结论 mi R-100作为抑癌mi RNA参与乳腺癌转移的调节,可能与其调控FZD-8的表达有关。

miR-100抑制肝癌细胞恶性生物学行为的分子机制

目的:研究miR-100对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:采用实时定量PCR检测miR-100在36例原发性肝细胞癌和对应癌旁组织中的表达及其与患者临床病理参数之间的关系;在肝癌细胞系中上调/下调miR-100的表达,检测其对肝癌细胞增殖能力及成瘤能力的影响。miRNA靶基因预测软件分析miR-100下游靶基因。结果:miR-100在肝癌组织中低表达并且与肝癌的恶性程度与患者的预后相关。过表达miR-100能够抑制肝癌细胞的恶性生物学行为;干扰miR-100促进肝癌细胞的恶性生物学行为。靶基因预测软件分析显示miR-100能够靶向IGF1R抑制该基因的表达。结论:miR-100在肝癌组织中低表达,能够抑制肝癌细胞的恶性生物学行为并且与患者的预后相关,有望成为潜在的肝癌治疗的分子靶点。

miR-100-5p下调mTOR抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移与侵袭

目的观察miR-100-5p对前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并探讨其相关调控机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌细胞系LNCaP和人前列腺上皮细胞系RWPE-1中miR-100-5p的表达。分别用脂质体转染法将NC-mimics和miR-100-5p mimics转染LNCaP细胞,用CCK-8增殖实验、细胞划痕实验和Transwell小室法检测miR-100-5p对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。用生物信息学方法预测miR-100-5p的可能作用靶基因;用qRT-PCR和Western blot检测miR-100-5p对mTOR mRNA和蛋白水平的影响。结果miR-100-5p在LNCaP细胞中的表达较RWPE-1细胞明显降低(P<0.01)。转染miR-100-5p mimics后,LNCaP细胞中miR-100-5p表达水平显著增高(P<0.01),细胞增殖能力、迁移能力及侵袭能力明显降低(P<0.01)。生物信息学结果显示,mTOR可能是miR-100-5p的作用靶基因。miR-100-5p mimics组LNCaP细胞中mTOR mRNA的表达明显低于NC-mimics组(P<0.01)。结论miR-100-5p在PCa细胞系LNCaP中呈现低表达,体外实验发现miR-100-5p能够抑制LNCaP细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其机制与下调mTOR基因的表达有关。

卵巢癌患者血清miR-200家族和miR-100检测的临床价值

目的探讨血清microRNA的表达差异在卵巢癌诊断和治疗中的临床价值。方法收集149例卵巢肿瘤患者和30例健康体检者,采用qRT-PCR检测受检者血清miR-200a、miR-200b、miR-200c和miR-100的表达情况,对检测结果进行统计学分析。结果 miR-200a、miR-200b和miR-200c在卵巢癌患者血清中表达水平均高于正常对照者,而miR-100在卵巢癌患者血清中表达水平低于对照组,且差异均有统计学意义(P均<0.001)。miR-200a、miR-200b、miR-200c及miR-100在良性肿瘤患者与正常对照者血清中表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。miR-200a、miR-200b和miR-200c在透明细胞癌的表达水平明显高于浆液性和黏液性癌,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。miR-200b在浆液性癌中的表达水平高于黏液性癌,miR-200c在透明细胞癌中的表达水平高于子宫内膜癌,且差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论血清miR-200家族的表达可用于卵巢癌的诊断、疗效监测及预后评估。

大鼠肝脏发育成熟及癌变时miR-100的表达

目的探讨microRNA-100(miR-100)在大鼠肝脏发育成熟和癌变时的表达。方法取新生SD乳鼠、成年SD大鼠肝组织以及经连续喂饲2-乙酰氨基芴加部分肝切除术(2-AAF/PH)诱导的SD大鼠肝癌组织,分别采用实时荧光定量PCR及FISH技术检测miR-100的表达。结果同新生SD乳鼠相比,miR-100在成年SD大鼠肝组织中表达明显升高(P<0.05)。大鼠肝脏癌变组织的miR-100表达较成年大鼠肝组织明显下降(P<0.05),接近于新生SD乳鼠miR-100的表达水平。结论 miR-100可作为SD大鼠肝脏发育成熟的标志,其表达降低可能与肿瘤形成有关。

miR-100通过Akt/mTOR信号通路对胃癌细胞增殖的负调控作用

目的探讨miR-100对胃癌细胞的生物学作用及对蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的调控作用。方法应用定量反转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测人胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901、MKN-45和胃黏膜上皮细胞株GES-1中miR-100的表达差异;将人工合成的miR-100模拟剂(mimics)及阴性对照转染至人胃癌细胞株BGC-823中,使用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;应用双荧光素酶报告基因验证miR-100靶基因,应用qRT-PCR和蛋白质印迹法分析Akt/mTOR信号通路相关基因及蛋白表达水平。结果胃癌细胞株miR-100的表达水平显著低于胃黏膜上皮细胞株(P<0.05);转染后48h、72h,miR-100 mimcs组吸光度值均显著低于对照组(P<0.05);流式细胞术显示miR-100 mimics组G_(0)/G_(1)期细胞比率显著高于对照组(P<0.05),S期、G_(2)/M期细胞比率均显著低于对照组(P<0.05);miR-100 mimics组细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);双荧光素酶报告显示miR-100 mimics组野生型mTOR荧光酶活性被抑制(P<0.05);miR-100 mimics组胃癌细胞Akt、mTOR、p70S6K的mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论miR-100在胃癌细胞中表达降低,miR-100可靶向调控mTOR抑制胃癌细胞增殖,阻碍细胞周期进程。