miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平联合检测对急性髓系白血病患者复发的预测价值

目的探讨微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、微小RNA-217-5p(miR-217-5p)、微小RNA-370-3p(miR-370-3p)水平联合检测对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者复发的预测价值。方法 回顾性选取2021年6月至2022年12月西安国际医学中心医院收治的AML患者78例,纳入观察组,根据1∶1选例原则,另选取同期单纯贫血患者78例,纳入对照组。比较两组、不同疗效及不同复发情况患者骨髓细胞miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平,分析各指标水平与疗效及复发的关系。结果 观察组miR-10a-5p水平高于对照组,miR-217-5p、miR-370-3p水平低于对照组(P<0.05);不同疗效患者miR-10a-5p水平比较:未缓解>部分缓解>完全缓解,miR-217-5p、miR-370-3p水平比较:未缓解<部分缓解<完全缓解(P<0.05);复发患者miR-10a-5p水平高于未复发患者,miR-217-5p、miR-370-3p水平低于未复发患者(P<0.05);AML患者miR-10a-5p水平与疗效及复发情况均呈正相关,miR-217-5p、miR-370-3p水平与疗效及复发情况均呈负相关,且联合预测AML患者复发AUC为0.913,约登指数为12.32,最佳诊断敏感度为84.21%,特异度为88.14%。结论 miR-10a-5p、miR-217-5p、miR-370-3p水平与AML患者疗效及复发均具有一定相关性,联合检测对复发具有一定预测价值,可作为临床评估疗效及复发情况的辅助指标。

LncRNA KCNQ1OT1调控miR-10a-5p加重缺氧复氧H9c2细胞损伤的机制

目的探讨长非编码RNA KCNQ1重叠转录本1(KCNQ1OT1)调控缺氧复氧(H/R)心肌细胞(H9c2)增殖、凋亡的作用机制。方法成功建立H/R H9c2细胞模型;采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒(CCK8)、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素和碘化丙锭(Annexin V-FITC/PI)凋亡检测试剂盒、蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中KCNQ1OT1、miR-10a-5p的表达、细胞活性、细胞凋亡率及P65、PHB、Bcl-2、Bax的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与H9c2组比较,H/R H9c2组细胞KCNQ1OT1表达显著升高,miR-10a-5p表达显著降低(P<0.05);过表达KCNQ1OT1或抑制miR-10a-5p具有相同的加重H/R对H9c2细胞的活性抑制、凋亡促进及P65、Bcl-2下调,PHB、Bax上调作用。miR-10a-5p明显抑制野生型KCNQ1OT1细胞的荧光活性,并负向调控KCNQ1OT1的表达。过表达miR-10a-5p部分逆转KCNQ1OT1对H/R H9c2细胞的活性抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA KCNQ1OT1抑制H/R H9c2细胞增殖,促进凋亡,其机制与靶向miR-10a-5p有关。

乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平对预后的预测价值

目的探讨乳腺癌组织中微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、同源异型盒基因B3(HOXB3)水平对患者预后的预测价值。方法选取2016年1月至2017年5月于该院就诊的75例乳腺癌患者,收集患者的乳腺癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-10a-5p水平,免疫组织化学染色观察乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3表达,蛋白质印迹法检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中HOXB3水平;对患者进行5年随访,将生存的59例患者(生存组)记为预后良好,死亡的16例患者(死亡组)记为预后不良;比较乳腺癌组织和癌旁正常组织、生存组和死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平;采用Spearman相关分析乳腺癌组织miR-10a-5p与HOXB3水平的相关性;采用受试者工作特征曲线评估乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3水平及二者联合检测对患者5年内死亡的预测价值;采用Logistic回归分析乳腺癌患者5年内死亡的影响因素。结果乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于癌旁正常组织,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于癌旁正常组织(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p水平与HOXB3呈负相关(P<0.05);与生存组比较,死亡组低分化、淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期患者比例均较高(P<0.05);死亡组乳腺癌组织miR-10a-5p水平低于生存组,HOXB3高表达比例和HOXB3水平均高于生存组(P<0.05);乳腺癌组织miR-10a-5p、HOXB3、二者联合检测预测患者5年内死亡的曲线下面积(AUC)分别为0.881、0.836、0.948,二者联合检测的AUC优于miR-10a-5p、HOXB3单独检测的AUC(P<0.05);肿瘤分化程度低分化、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、miR-10a-5p低水平、HOXB3高水平均是影响乳腺癌患者5年内死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论乳腺癌组织中miR-10a-5p表达下调,HOXB3表达上调,二者与患者预后密切相关,可作为预测乳腺癌患者预后的指标。

miR-10a-5p敲低通过靶向THBS2抑制胃癌细胞的生长和转移

背景在胃癌(gastric cancer,GC)的发病和进展中,已经发现许多miRNAs可发挥抑癌或促癌的作用.但miRNAs数量众多,在GC中仍有众多miRNAs的作用并不明确,因此,继续筛选具有影响GC细胞生长和转移的miRNAs仍十分必要.目的探究miR-10a-5p对GC细胞生长和转移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中miR-10a-5p表达;miR-10a-5p-inhibitor转染入MGC-803和AGS细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.采用Western-blot和RT-qPCR检测GC组织和GC细胞(MGC-803和AGS)中THBS2表达;采用TargetScan在线软件筛选miR-10a-5p的潜在靶基因THBS2,并进一步验证.NC+pcDNA-Con,miR-10a-5pinhibitor+pcDNA-Con和miR-10a-5p-inhibitor+pcDNATHBS2共转染入MGC-803细胞,CCK-8实验,集落形成实验和Transwell实验分别检测各组细胞的增殖,集落形成,迁移和侵袭.结果miR-10a-5p在GC组织,MGC-803和AGS细胞中表达异常上调;miR-10a-5p敲低显著降低了MGC-803和AGS细胞的增殖,集落形成和侵袭.THBS2 mRNA和蛋白水平在GC组织、MGC-803和AGS细胞中表达均异常下调;THBS2是miR-10a-5p的靶基因;过表达THBS2能逆转miR-10a-5p敲低对MGC-803细胞增殖,集落形成,迁移和侵袭的抑制作用.结论miR-10a-5p敲低通过靶基因THBS2来抑制GC细胞的生长和转移.

LncRNA SNHG7调控miR-10a-5p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)是否通过调控微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)的表达而参与高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的过程。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为8组:对照组、高糖组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-SNHG7组、高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-10a-5p组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-10a-5p的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证SNHG7与miR-10a-5p的靶向结合关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组比较,高糖组SNHG7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-10a-5p的表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,高糖组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与高糖+pcDNA组比较,高糖+pcDNA-SNHG7组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向调控miR-10a-5p的表达及活性;与高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组比较,高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:SNHG7过表达可能通过靶向调控miR-10a-5p的表达从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

miR-10a-5p靶向ITSN1对宫颈癌细胞增殖和顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨miR-10a-5p对宫颈癌细胞增殖及对化疗药物顺铂敏感性的影响及机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测23对宫颈癌及配对癌旁组织miR-10a-5p的相对表达水平。利用空载体病毒(阴性对照组)或miR-10a-5p过表达慢病毒(miR-10a-5p过表达组)感染人宫颈癌细胞株Caski,同时设置不作处理的空白对照组。使用CCK-8法检测各组细胞增殖及对顺铂敏感性的影响,检测指标为吸光度和细胞生长抑制率。qRT-PCR和Western blot检测三组细胞中ITSN1的mRNA和蛋白水平。使用荧光素酶报告基因验证miR-10a-5p的潜在靶点。结果与宫颈癌癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-10a-5p表达显著降低(P<0.05)。与空白对照组及阴性对照组相比,miR-10a-5p过表达组细胞吸光度显著减小,细胞增殖能力显著降低(P<0.05),对顺铂的化疗敏感性显著增强(P<0.05),空白对照组和阴性对照组间细胞增殖能力和对顺铂的化疗敏感性差异无统计学意义(P>0.05)。miR-10a-5p可与ITSN1靶向结合,降低ITSN1表达水平。结论miR-10a-5p可能通过靶向ITSN1抑制Caski细胞增殖,并增强Caski细胞对顺铂的药物敏感性。

miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移

目的探讨miR-10a-5p是否通过靶向维甲酸受体相关孤儿受体A(RAR-related orphan receptor A,RORA)对胃癌细胞侵袭、迁移产生影响及其作用机制。方法qRT-PCR检测人正常胃黏膜细胞GES-1与三株胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823中miR-10a-5p的表达水平。以miR-10a-5p高表达的胃癌细胞株SGC-7901作为后续实验研究胃癌细胞株,分为control组(只转染Lipofectamine 2000)、NC组(转染Lipofectamine 2000和NC序列,即转染无关序列)和miR-10a-5p inhibitor组(转染Lipofectamine 2000和miR-10a-5p inhibitor),qRT-PCR检测转染后各组细胞株中miR-10a-5p的表达水平。生物信息学网站Target Scan预测miR-10a-5p与RORA的靶向结合位点。qRT-PCR、Western blot实验分析miR-10a-5p与RORA的靶向调控关系。集落克隆和Transwell实验分别检测下调miR-10a-5p对SGC-7901细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。为探究RORA基因对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,实验分为control组(只转染Lipofectamine 2000)、RORA NC转染组(转染Lipofectamine 2000及NC序列)、RORA过表达组(转染Lipofectamine 2000及RORA过表达序列),Transwell实验检测上调RORA对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响。Western blot法检测侵袭、迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail的相对表达水平。结果miR-10a-5p在胃癌细胞株中相对于正常胃黏膜细胞中高表达(P<0.05)。生物信息学软件Target Scan预测结果显示,RORA 3′UTR上存在潜在与miR-10a-5p靶向结合的位点(P<0.05),miR-10a-5p能够负向调控RORA基因表达。下调miR-10a-5p后SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移显著被抑制(P<0.05)。过表达RORA能抑制SGC-7901细胞侵袭、迁移能力(P<0.05)。过表达RORA后N-cadherin、Snail蛋白表达降低,E-cadherin表达增加(P<0.05)。结论miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移,侵袭、迁移机制可能与上皮间质转化有关。

猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建及其与miR-10a-5p的靶向验证

为了鉴定miR-10a-5p与猪E2F3基因的靶向关系,试验从生物信息miRNA Base数据库查询miR-10a-5p的相关信息,并运用MEGA 6.0软件分析其保守性,通过Target Scan生物信息学网站预测其潜在的靶基因及结合位点,然后PCR扩增E2F3基因3′非编码区(3′UTR)片段,构建E2F3的野生型(E2F3-3′UTR-wt)和突变型(E2F3-3′UTR-mut)双荧光素酶报告基因质粒,并分别与miR-10a-5p mimics、mimics NC共转染至293T细胞中,检测双荧光素酶活性变化。结果表明:miR-10a-5p在7个物种间具有高度保守性,成熟序列均为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU;Target Scan生物信息学网站预测到miR-10a-5p具有包括E2F3基因在内的共241个潜在的靶基因;E2F3基因片段经PCR扩增获得大小约1 288 bp的清晰条带,测序结果与预期一致;转染miR-10a-5p mimics能显著降低猪E2F3基因野生型质粒双荧光素酶活性(P<0.05)。说明猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建成功,且其与miR-10a-5p之间存在靶向关系。

hsa-miR-10a-5p在重症社区获得性肺炎中的应用研究

目的探究hsa-miR-10a-5p在重症社区获得性肺炎(SCAP)中的作用,评估hsa-miR-10a-5p作为SCAP标志物的潜能。方法利用microRNA测序(27个SCAP血样和10个健康对照血样)和生物信息学方法探究hsa-miR-10a-5p指示社区获得性肺炎严重性的能力。结合mRNA测序(41个SCAP血样和10个健康对照血样)和靶基因预测及基因功能富集分析来探究hsa-miR-10a-5p在SCAP中的作用。结果hsa-miR-10a-5p水平在SCAP中显著下调,且死亡组下调更多。hsa-miR-10a-5p水平与急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分呈负相关,且microRNA水平预测SCAP预后的受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.776。SCAP发生时,hsa-miR-10a-5p预测靶向的基因能调控与肺炎发展密切相关的生物学过程和通路。结论hsa-miR-10a-5p能提示社区获得性肺炎严重性,且能预测预后。hsa-miR-10a-5p可作为SCAP的潜在标志物。

骨髓间充质干细胞外泌体miR-10a-5p下调紫外线抵抗相关基因(UVRAG)的表达调控系统性红斑狼疮

目的:探讨BMMSCs移植对SLE外周血单个核细胞增殖和凋亡的调控机制,为SLE的靶向治疗提供理论支持。方法:超速离心分离BMMSCs来源外泌体。CCK-8检测SLE外周血单个核细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。qRT-PCR检测外周血单个核细胞和外泌体中miRNA水平。双荧光素酶报告基因验证miR-10a-5p与紫外线抵抗相关基因(UVRAG)靶向关系。Western blot检测外泌体表面标记物和外周血单个核细胞中UVRAG的表达水平。结果:成功分离BMMSCs来源外泌体,并发现其抑制SLE外周血单个核细胞增殖,促进其凋亡。qRT-PCR检测结果表明BMMSCs来源外泌体可显著上调SLE外周血单个核细胞中miR-10a-5p表达水平。双荧光素酶报告基因检测以及Western blot检测结果表明miR-10a-5p靶向下调UVRAG表达水平。结论:BMMSCs来源外泌体miR-10a-5p通过靶向下调UVRAG水平,抑制SLE外周血单个核细胞增殖并促进细胞凋亡。

Hsa-miR-10a-5p靶基因预测及生物信息学分析

利用生物信息学对miR-10a-5p的靶基因进行预测及相关分析,为miR-10a-5p靶基因的实验验证及其调控机制提供理论基础。通过 miRBase获取并分析人、大鼠,小鼠等物种的miR-10a-5p的碱基序列特征;使用在线数据库 Targetscan7.1,miRDB,mirDIP和DIANA TOOLS等预测miR-10a-5p的靶基因,并用Venny 2.1绘制韦恩图取交集。用在线工具DAVID对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG pathway分析。结果表明 miR-10a-5p成熟序列在各物种间高度保守。获得的79个靶基因在分子功能上主要涉及染色质结合,转录活性激活等,并显著富集于肝脏发育,脂肪组织发育等生物学过程,涉及cAMP信号通路,TNF信号通路及AMPK信号通路。miR-10a-5p通过调控靶基因参与了生命活动和疾病过程中多个方面,尤其生长发育和癌症过程,为进一步研究提供了生物学基础。

急性髓系白血病患者血清miR-10a-5p、miR-203表达与临床指标及预后的关系

研究miR-10a-5p和miR-203在 AML中的表达水平与 AML的临床意义和预后之间的相关性。方法:对2014年7~2018年7月间,本院血液内科首诊的100名初治 AML (初治组)进行回顾性调查,初步治疗组30名(完全缓解),18名完全缓解后复发(复发组),选择体检合格的50名健康体检者作为健康对照,并应用荧光定量 PCR技术进行对比。(1)miR-10a-5p在 AML初治组中的表达水平明显增高(P<0.05);(2)miR-10a-5p高表达的血清miR-10a-5p表达水平较低的miR-10a-5p表达水平低(P<0.05);(3)Kaplan-Meier存活分析结果表明,miR-10a-5p高表达的 AML病人的总体生存期(OS)明显缩短(P=0.011),表明miR-10a-5p的含量增加,miR-203的下降可作为评价病情的参考。

急性髓系白血病患者血清miR-10a-5p、miR-203表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨急性髓系白血病(AML)患者血清中微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)、miR-203表达与临床病理特征及预后的关系。方法收集2014年7月至2018年1月期间在西安市中心医院住院治疗的100例初治AML患者(初治组),其中经治疗后获得完全缓解者30例(完全缓解组),治疗后获得部分缓解者27例(部分缓解组),治疗后未获得缓解者43例(未缓解组),另选取我院体检中心同期50例体检正常者作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR法测量并比较各组受试者的血清miR-10a-5p、miR-203表达水平;以miR-10a-5p、miR-203中位表达水平为界,分析miR-10a-5p、miR-203表达水平与初治组患者临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同miR-10a-5p、miR-203表达AML患者的预后情况。结果初治组患者的血清miR-10a-5p表达水平为0.36±0.11,明显高于正常对照组的0.11±0.03,而miR-203的表达水平为0.56±0.12,明显低于正常对照组的0.73±0.14,差异均有统计学意义(P<0.05);完全缓解组和部分缓解组患者的血清miR-10a-5p表达水平明显低于未缓解组,且完全缓解组明显低于部分缓解组,完全缓解组和部分缓解组的miR-203表达水平明显高于未缓解组,且完全缓解组明显高于部分缓解组,差异均有统计学意义(P<0.05);单因素分析结果显示,AML患者的血清miR-10a-5p和miR-203表达水平与脾肿大及白细胞计数(WBC)有关(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析结果显示,miR-10a-5p高表达的AML患者生存率为27.78%(15/54),明显低于miR-10a-5p低表达的65.22%(30/46),而miR-203高表达的AML患者生存率为55.77%(29/52),明显高于miR-203低表达的33.33%(16/48),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论AML患者血清miR-10a-5p水平异常升高,miR-203水平异常降低,其表达水平与脾肿大及WBC有关,对评估患者的预后有一定临床价值。

LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

背景长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)生长停滞特异性转录本5反义RNA(growth arrest specific transcript 5 antisense RNA,GAS5-AS1)被发现在多种癌症中扮演肿瘤抑制因子的作用.但是其在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用和机制尚不清楚.目的探讨LncRNA GAS5-AS1靶向miR-106a-5p在CRC进展中的作用.方法实时荧光定量聚合酶链反应分析LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p在43对CRC组织和癌旁组织样本中的表达.分别转染pcDNA、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、si-NC、si-LncRNA GAS5-AS1、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC、pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics至HCT8细胞.细胞计数试剂盒-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数.通过双荧光素酶报告实验确定LncRNA GAS5-AS1和miR-106a-5p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,CRC组织中LncRNA GAS5-AS1表达降低(P<0.05),miR-106a-5p表达升高(P<0.05).与转染pcDNA比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1后HCT8细胞活力、迁移、侵袭、miR-106a-5p表达显著降低(P<0.05).与转染anti-miR-NC比较,转染anti-miR-106a-5p后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05).与转染si-NC比较,转染si-LncRNA GAS5-AS1后miR-106a-5p表达水平显著升高(P<0.05).与转染miR-NC比较,转染miR-106a-5p能显著降低LncRNA GAS5-AS1-WT载体的荧光素酶活性,表明miR-106a-5p是LncRNA GAS5-AS1的直接靶点.与转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-NC比较,转染pcDNA-LncRNA GAS5-AS1+miR-106a-5p mimics后HCT8细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05).结论LncRNA GAS5-AS1通过靶向miR-106a-5p来抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭.

益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠miR-126a-5p及VEGF信号通路的影响

目的探讨益气活血通络方对脊髓型颈椎病模型大鼠微小RNA-126a-5p(miR-126a-5p)及血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法30只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法均分为假手术组、模型组和中药组。模型组、中药组均制备脊髓型颈椎病模型。中药组给予益气活血通络方灌胃,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,均为12周。各组干预结束后进行大鼠行为学测试,测定机械性刺激阈值和热刺激回缩时间。处死大鼠,HE染色观察各组椎间盘软骨终板结构的差异。TUNEL染色观察大鼠椎间盘纤维环细胞变化。实时荧光定量聚合酶链式反应检测大鼠椎间盘纤维环组织miR-126a-5p和VEGF mRNA。采用Western blot法检测大鼠椎间盘纤维环组织VEGF蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠椎间盘血管芽数目减少,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏明显、大量凋亡且细胞密度降低;模型组和中药组机械性刺激阈值降低,热刺激回缩时间缩短,miR-126a-5p水平降低,VEGF mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组比较,中药组大鼠椎间盘血管芽数目增加,大鼠椎间盘纤维环细胞破坏减轻,大鼠椎间盘纤维环细胞凋亡减少且细胞密度增加,机械性刺激阈值升高,热刺激回缩时间延长,miR-126a-5p水平增加,VEGF mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论益气活血通络方治疗脊髓型颈椎病的机制可能与上调miR-126a-5p、下调VEGF表达有关。

骨髓间充质干细胞来源的miR-199a-5p通过抑制ZIK1/MAP3K11调节肾细胞癌细胞的增殖和侵袭

目的:研究骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)来源的外泌体(exsome)中miR-199a-5p对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞增殖和侵袭的影响。方法:分离骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BM-MSCs-Exo),电子显微镜观察外泌体形态,Western blot方法检测外泌体标志蛋白CD9和CD63。CCK-8法检测RCC细胞在不同条件下的增殖速度,Transwell法检测RCC细胞的侵袭能力,q-PCR法检测miR-199a-5p以及ZIK1和MAP3K11的mRNA表达,双荧光素酶实验验证miR-199a-5p以及ZIK1和MAP3K11基因的3’UTR区域靶向结合。结果:BM-MSCs-Exo电镜下呈圆形囊泡状,直径约100 nm,且高表达CD9和CD63,RCC细胞摄取BM-MSCs-Exo后增殖和侵袭能力均被抑制,过表达miR-199a-5p的BM-MSCs-Exo能显著抑制RCC细胞的增殖和侵袭能力,抑制BM-MSCs-Exo中的miR-199a-5p后能缓解BM-MSCs-Exo对RCC的抑制作用,且发现过表达miR-199a-5p的BM-MSCs-Exo能显著降低ZIK1和MAP3K11的mRNA表达,而在BM-MSCs-Exo中抑制miR-199a-5p有相反作用。结论:BM-MSCs-Exo通过向RCC细胞转运miR-199a-5p抑制ZIK1和MAP3K11的表达,进而抑制RCC细胞的增殖和侵袭。

胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的实验研究

目的:探究胡黄连提取物通过miR-26a-5p/NF-κB通路影响缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和氧化应激的作用。方法:通过缺氧/复氧(H/R)诱导H9C2细胞建立心肌细胞损伤模型,细胞分为空白对照组、模型组、胡黄连提取物低浓度(250μg/mL)组、胡黄连提取物中浓度(500μg/mL)组、胡黄连提取物高浓度(1000μg/mL)组、miR-NC组、miR-26a-5p组、anti-miR-NC+胡黄连提取物高浓度组、anti-miR-26a-5p+胡黄连提取物高浓度组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡;Western Blot检测cleaved Caspase-3、Bax、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达;ELISA检测MDA、SOD、CAT水平;qRT-PCR检测miR-26a-5p表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA、p-NF-κB/NF-κB水平及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,细胞增殖能力、SOD、CAT水平及miR-26a-5p表达显著降低(P<0.05)。与模型组比较,胡黄连提取物可显著降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡率及MDA、p-NF-κB/NF-κB水平和cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达,显著升高细胞增殖能力及SOD、CAT水平和miR-26a-5p表达(P<0.05)。抑制anti-miR-26a-5p可逆转胡黄连提取物对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。结论:胡黄连提取物可能通过调控miR-26a-5p/NF-κB通路抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激。

黄芪甲苷经由miR-125a-5p/NLRP1轴减轻椎间盘突出髓核细胞损伤

目的在白介素-1β(IL-1β)诱导退变的人髓核细胞中,探究黄芪甲苷对miR-125a-5p及其靶基因介导的信号通路的作用,揭示黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对髓核细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-125a-5p和核苷酸寡聚化结构域(NOD)样受体蛋白1(nucleotide oligomerization domain(NOD)-like receptor protein 1,NLRP1)在椎间盘突出患者髓核组织中的表达,用IL-1β诱导髓核细胞退变,在20、50和80μg·mL^(-1)黄芪甲苷干预浓度下检测miR-125a-5p和NLRP1的表达,在IL-1β和80μg·mL^(-1)黄芪甲苷处理的髓核细胞中单独或共同转染miR-125a-5p模拟物和NLRP1过表达质粒,然后分别检测细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌情况,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中信号通路相关蛋白p56和p38的磷酸化水平。结果椎间盘突出(lumbar disc herniation,LDH)患者的髓核组织中miR-125a-5p表达下调,NLRP1表达上调。黄芪甲苷促进IL-1β处理的髓核细胞中miR-125a-5p表达,减少NLRP1表达以及p56和p38蛋白的磷酸化水平。黄芪甲苷促进髓核细胞增殖,减少凋亡和炎症反应。结论黄芪甲苷通过上调miR-125a-5p表达,抑制NLRP1的表达和NF-κB/MAPK信号通路,减少IL-1β诱导的髓核细胞损伤。

Linc01419调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖与侵袭

目的:探讨长链非编码RNA Linc01419对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法:通过UALCAN软件(https://ualcan.path.uab.edu/)分析TCGA数据库中Linc01419在膀胱癌组织与正常膀胱组织中的表达差异;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测Linc01419在不同膀胱癌细胞系、22例经病理证实为膀胱癌的手术患者的肿瘤组织及癌旁正常膀胱组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)实验和Transwell小室侵袭实验检测敲低Linc01419表达对膀胱癌细胞增殖与侵袭的影响;采用双荧光素酶报告基因检测法分析Linc01419与miR-34a-5p及miR-34a-5p与E2F3之间的靶向调控关系。结果:UALCAN数据库分析显示相较正常膀胱组织,Linc01419在膀胱癌组织中显著高表达(P<0.001);RT-qPCR分析结果显示相较癌旁正常膀胱组织,Linc01419在22例膀胱癌组织中表达明显上调(P<0.001),与UALCAN数据库分析结果一致;Linc01419在4株膀胱癌细胞中的表达明显高于正常膀胱上皮细胞(P<0.01);敲低Linc01419表达,可显著抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭及N-cadherin、PCNA蛋白的表达,而显著促进E-cadherin的蛋白表达(P<0.05);miR-34a-5p过表达对膀胱癌细胞具有类似的抑制作用;双荧光素酶报告基因实验、RIP及Pull-down实验证实Linc01419可靶向结合miR-34a-5p,而后者进一步介导了对E2F3的靶向调控;抑制miR-34a-5p表达,可显著削弱Linc01419沉默对膀胱癌细胞生物学行为及E-cadherin、N-cadherin、PCNA、E2F3表达的影响。结论:Linc01419在膀胱癌中异常高表达,其通过调控miR-34a-5p/E2F3轴促进膀胱癌细胞增殖和侵袭,很可能是膀胱癌发生、发展过程中的一个重要环节。

miR-25a-5p促进乳腺癌蒽环类药物治疗所致的心肌损伤

目的:探讨蒽环类药物诱导心肌毒性的机制和新的治疗靶点。方法:106例乳腺癌患者根据超声心动图检查鉴别出肿瘤治疗相关心功能障碍,分为心功能障碍组及对照组。通过微阵列技术高通量筛选两组患者差异表达miRNA。体外构建蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤模型,通过调控miR-25a-5p的表达,观察miR-25a-5p在蒽环类药物诱导H9C2心肌细胞损伤中的作用。结果:乳腺癌患者中9例发生肿瘤治疗相关心功能障碍,并从两组患者中鉴定出9个差异表达的miRNA。其中8个miRNA在体外模型中进一步得到验证,尤其是miR-25a-5p。通过上调miR-25a-5p,可进一步加重蒽环类药物诱导心肌细胞氧化损伤。结论:miR-25a-5p促进蒽环类药物诱导的心肌损伤,可能是新的生物标志物及治疗靶点。