miR-125a-5p通过靶向STAT3减轻戊四唑诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应

目的:探讨miR-125a-5p通过靶向信号转导与转录激活因子3(STAT3)对戊四唑(PTZ)诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应的影响。方法:采用PTZ点燃法建立大鼠癫痫模型,并将其随机分为6组:Con组、PTZ组、PTZ+agomir NC组、PTZ+miR-125a-5p agomir组、PTZ+miR-125a-5p agomir+pcDNA组和PTZ+miR-125a-5p agomir+pc-STAT3组,评价miR-125a-5p对大鼠癫痫持续时间、潜伏期、惊厥次数和严重程度的影响。qRT-PCR检测miR-125a-5p和STAT3 mRNA表达;改良神经系统严重程度评分(mNSS)、开场实验和Rotarod测试评价癫痫大鼠的神经功能;Morris水迷宫实验评价癫痫大鼠的认知功能;免疫染色观察海马CA1和CA3区域神经元凋亡;ELISA检测海马组织炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)水平;Western blot检测海马组织中STAT3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-125a-5p和STAT3的关系。结果:在PTZ诱导的癫痫大鼠中,miR-125a-5p表达上调,STAT3表达下调,且miR-125a-5p靶向抑制STAT3表达。与PTZ组相比,PTZ+miR-125a-5p agomir组癫痫大鼠的潜伏期缩短,癫痫评分降低,癫痫发作时间和次数减少,mNSS降低,掉落潜伏期及外围区域的移动距离、开放区域的总距离延长,逃避潜伏期显著降低,穿越平台次数及停留在目标象限的时间和游泳距离均增加,海马组织TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18表达降低,CA3和CA1区的NenN+细胞增多(P<0.05);STAT3过表达可逆转miR-125a-5p agomir对癫痫大鼠神经功能障碍及炎症反应的缓解作用(P<0.05)。结论:miR-125a-5p通过靶向下调STAT3,减轻PTZ诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应。

新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p表达变化及其意义

目的观察新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p的表达水平变化,分析其与病情严重程度的关系,并探讨miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能,为临床重症新型冠状病毒感染患者的早期识别提供新的预测指标。方法新型冠状病毒感染患者40例作为观察组,根据病情严重程度分为重症组、轻症组各20例。另择同期体检健康者10例作为对照组。入院时采取鼻黏膜拭子样品,并从中分离上皮脱落细胞,采用qPCR方法检测两组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p。通过Logistic回归分析鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量与重症新型冠状病毒感染的相关性,进一步采用ROC评价miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能。结果观察组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于对照组(P均<0.05);重症组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于轻症组(P均<0.05)。鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量是重症新型冠状病毒感染的独立影响因素(P均<0.05)。miR-125a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.803,最佳截断值为1.83,灵敏度79.1%,特异度80.8%;miR-144a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.609,最佳截断值为2.44,灵敏度73.6%,特异度79.1%;miR-125a-3p和miR-144a-3p联合预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.856,灵敏度86.2%,特异度87.7%。结论新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量升高,重症患者升高更明显。miR-125a-3p和miR-144a-3p是重症新型冠状病毒感染的独立危险因素,均可作为重症新型冠状病毒感染的预测指标,以联合检测预测效能最佳。

缺血性脑卒中患者外周血抗磷脂抗体、miR-125a-3p的检测及临床意义

目的 探究缺血性脑卒中(CIS)患者外周血抗磷脂抗体(aPLs)、miR-125a-3p的检测及临床意义。方法 选取2018年1月至2021年12月该院297例CIS患者为观察组,再选取同期200例健康体检者为对照组。比较两组miR-125a-3p水平及aPLs阳性率,并比较不同神经功能缺损程度患者miR-125a-3p水平及aPLs阳性率,比较不同预后患者一般资料及miR-125a-3p水平、aPLs阳性率,分析预后不良的危险因素,以及miR-125a-3p、aPLs对CIS患者预后不良的预测价值。结果 观察组血清miR-125a-3p水平、aPLs阳性率较对照组高(P<0.05);随着神经功能缺损程度增加,miR-125a-3p水平、aPLs阳性率逐渐增加(P<0.05);预后不良患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、miR-125a-3p、aPLs阳性率较预后良好患者高(P<0.05);miR-125a-3p水平高和aPLs阳性均为预后不良的危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,miR-125a-3p、aPLs联合预测CIS患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.859,高于单独预测(P<0.05)。结论 CIS患者miR-125a-3p水平、aPLs阳性率明显升高,且与神经功能缺损程度密切相关,且miR-125a-3p、aPLs在预后评估方面具有较好价值。

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨miR-125b-5p调控RAB3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过qRT-PCR检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞h FOB1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中miR-125b-5p的表达明显下调(P<0.05)。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05);miR-125b-5p表达量降低,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAB3D的蛋白表达量下降(P<0.05),而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断(P<0.05)。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的关系

目的探讨血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达与脑梗死颈动脉粥样硬化(CAS)斑块的关系。方法选取2019年3月至2021年12月北京市和平里医院收治的120例脑梗死患者,根据CAS斑块稳定性将其分为不稳定组(75例)和稳定组(45例)。收集并比较两组临床资料,同时采用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达。通过logistic回归模型分析脑梗死患者CAS不稳定的影响因素,进一步采用受试者操作特征(ROC)曲线分析其对脑梗死患者CAS斑块稳定情况的预测价值。结果不稳定组吸烟者占比、糖尿病患者占比、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、miR-125a-3p表达高于稳定组,miR-224-3p表达低于稳定组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示,吸烟、糖尿病、LDL-C、miR-125a-3p、miR-224-3p均为脑梗死患者CAS斑块不稳定的影响因素(P<0.05),5项联合预测脑梗死患者CAS斑块不稳定的ROC曲线下面积为0.915,灵敏度、特异度分别为84.00%、91.11%。结论脑梗死患者血清miR-125a-3p、miR-224-3p水平与CAS斑块不稳定有关,可联合吸烟、糖尿病和LDL-C对CAS斑块不稳定进行预测。

miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-125b-2-3p表达对鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR检测miR-125b-2-3p在人永生化鼻咽上皮细胞NP69和鼻咽癌细胞中的表达。荧光定量PCR检测上调和下调miR-125b-2-3p表达转染效率。实验分为control组(未处理)、mimics NC组(Lip 2000+mimics NC)、miR-125b-2-3p mimics组(Lip 2000+miR-125b-2-3p mimics)、inhibitor NC组(Lip 2000+inhibitor NC)和miR-125b-2-3p inhibitor组(Lip 2000+miR-125b-2-3p inhibitor)。CCK-8实验、细胞集落形成实验和活细胞/死细胞双染色实验检测细胞增殖的情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;DAPI细胞核染色检测细胞核的形态变化;线粒体膜电位检测细胞早期凋亡情况。结果与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌细胞中miR-125b-2-3p的表达较高(P<0.05)。与control组和mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组miR-125b-2-3p表达上调(P<0.01);与control组和inhibitor NC组相比,miR-125b-2-3p inhibitor组miR-125b-2-3p表达下调(P<0.01)。与mimics NC组相比,miR-125b-2-3p mimics组细胞增殖能力较强(P<0.01),细胞凋亡能力较弱(P<0.01),线粒体膜电位较高(P<0.01);相较于inhibitor NC组,miR-125b-2-3p inhibitor组细胞增殖能力被抑制(P<0.01),细胞凋亡能力较强(P<0.01),核固缩核碎裂较多,线粒体膜电位较低(P<0.05)。结论下调miR-125b-2-3p能抑制鼻咽癌细胞HNE1的增殖,促进细胞的凋亡。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

miR-125a-3p、IGF-2在NSCLC患者血浆中的表达水平及检验

目的研究miR-125a-3p、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中的表达水平及意义。方法将医院从2018年2月至2021年3月收治的114例NSCLC患者纳入研究,记作研究组。另取同期健康体检者100例作为对照组。分别检测并比较两组人员血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平,并分析血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平和NSCLC患者临床病理特征的关系。此外,将NSCLC患者按照预后的差异分作死亡组51例及存活组63例,对比两组血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平。结果研究组血浆miR-125a-3p相对表达水平为(0.81±0.24),低于对照组的(1.28±0.33),而IGF-2相对表达水平为(987.45±67.12),高于对照组的(781.02±55.03),差异均有统计学意义(均P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期以及有淋巴结转移NSCLC患者的血浆miR-125a-3p相对表达量均低于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期以及无淋巴结转移NSCLC患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。有淋巴结转移NSCLC患者的血浆IGF-2血浆IGF-2高于无淋巴结转移NSCLC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组NSCLC患者血浆中miR-125a-3p相对表达量低于存活组,而IGF-2相对表达量高于存活组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论NSCLC患者血浆miR-125a-3p存在异常低表达,而IGF-2存在异常高表达,两者均和NSCLC患者淋巴结转移以及预后密切相关,且血浆miR-125a-3p表达和NSCLC患者TNM分期有关。

microRNA125a-3p对滋养层细胞功能的调控作用及机制

目的观察microRNA125a-3p(miR-125a-3p)在滋养层细胞中的表达,探讨其对滋养层细胞增殖、侵袭和凋亡的调控及机制。方法荧光实时定量PCR检测人滋养层细胞系HTR-8/SVneo、绒癌细胞系JAR和JEG-3中miR-125a-3p的表达情况。以HTR-8/SVneo和JEG-3细胞为实验对象,分为3组:空白对照组(CK组),未做任何处理;阴性对照组(NC组),转染NC-inhibitor;实验组(inhibitor组),转染miR-125a-3p inhibitor。以Transwell、流式细胞仪、CCK8法分别检测细胞的侵袭、凋亡及增殖能力。Western blot检测Fyn蛋白表达情况及ERK1/2、STAT3磷酸化水平。荧光实时定量PCR检测Fyn mRNA水平,免疫共沉淀法检测Fyn活性水平。结果miR-125a-3p mRNA表达水平在HTR-8/SVneo、JAR和JEG-3细胞中依次降低,两两比较均有统计学差异(P<0.01)。抑制HTR-8/SVneo和JEG-3中miR-125a-3p后,细胞的凋亡水平明显降低,侵袭和增殖能力均明显升高(P<0.05);Fyn mRNA和蛋白的表达及活性水平均明显升高(P<0.05);ERK1/2及STAT3的磷酸化水平均不同程度增加(P<0.05)。结论本研究首次在滋养层细胞中检测到miR-125a-3p的表达。miR-125a-3p通过作用于Fyn和ERK1/2-STAT3信号通路可抑制滋养层细胞的增殖、侵袭,促进其凋亡。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

miR-125b-5p靶向STAT3调控免疫因子IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-125b-5p对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法采用荧光定量PCR检测子宫内膜癌组织中miR-125b-5p的表达,免疫组织化学染色法检测子宫内膜癌组织中STAT3、IL-6/10的表达;双荧光素酶报告基因检测和Western blot检测验证miR-125b-5p和STAT3的靶向调控关系;荧光定量PCR和Western blot检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对子宫内膜癌HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8法、Transwell小室分别检测miR-125b-5p过表达或干扰STAT3表达对HEC-1B细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果与癌旁正常组织相比,子宫内膜癌组织中miR-125b-5p表达明显降低,而STAT3、IL-6/10蛋白的表达水平明显升高(P<0.05)。子宫内膜癌中STAT3表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著正相关(P<0.05),而miR-125b-5p表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级以及TNM分期呈显著负相关(P<0.05)。STAT3是miR-125b-5p的潜在靶基因,miR-125b-5p可负向调控STAT3表达。miR-125b-5p过表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10 mRNA和蛋白表达水平以及细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低;干扰STAT3表达后,HEC-1B细胞中IL-6/10表达及细胞增殖、迁移、侵袭能力与miR-125b-5p过表达的结果相一致。结论miR-125b-5p可通过靶向STAT3调控IL-6/10的表达抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值。方法纳入2018年10月至2020年3月该院收治的早期结直肠癌患者120例为肿瘤组,结直肠良性疾病患者120例为良性组,体检健康者120例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测患者血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量。用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析miR-125a-3p、miR-192、miR-223在早期结直肠癌中的诊断价值。结果肿瘤组、良性组和对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组与良性组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为92%、92%、91%,特异度分别为92%、91%、92%。肿瘤组与对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为99%、99%、97%,特异度分别为92%、93%、94%。血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌的灵敏度为95%,特异度为92%,准确度为93%。结论血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223检测可作为诊断早期结直肠癌的潜在标志物。

miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究miR-125a-5p对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响。方法：通过慢病毒转染技术将含miR-125a-5p的质粒转入SKOV3细胞中，经嘌呤霉素筛选建立稳定表达mi-125a-Sp的SKOV3细胞株。通过实时定量荧光RT-PCR验证miR-125a-5p的表达情况，MTT、流式技术、Transwell、划痕实验检测过表达miR-125a-5p后对SKOV3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移能力的影响。结果：过表达miR-125a-5p后，SKOV3细胞增殖能力较对照组有显著提高；流式细胞检测显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞S期细胞增多，GO／GI期细胞及细胞凋亡率减少；Transwell和划痕实验显示过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞侵袭和迁移能力明显高于对照组。结论：SKOV3细胞miR-125a-Sp过表达可能通过减少G0／G1期细胞及细胞凋亡率从而促进细胞增殖、侵袭和迁移能力。

lncRNA TSIX通过靶向miR-548-a-3p抑制肝细胞癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨lncRNA TSIX通过靶向miR-548-a-3p抑制肝细胞癌(HCC)细胞增殖和侵袭的机制。方法 设肝癌Huh7细胞组、lncRNA TSIX mimics组、lncRNA TSIX inhibitor组;各组细胞培养48 h后,采用MTT法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,transwell腔室测定细胞侵袭水平,RT-PCR法测定细胞lncRNA TSIX、miR-548-a-3p水平。结果 lncRNA TSIX mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数低于Huh7细胞组(t=8.725、5.437、120.834、64.321,P<0.05),lncRNA TSIX inhibitor组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数高于Huh7细胞组和lncRNA TSIX mimics组(t=4.124、3.784、10.462、7.965、37.192、174.632、30.703、104.562,P<0.05)。lncRNA TSIX mimics组细胞凋亡率、lncRNA TSIX高于Huh7细胞组[(18.52±2.45)vs(15.63±2.13),(4.47±0.22)vs(2.89±0.21)](t=10.531、12.372,P<0.05),lncRNA TSIX inhibitor组细胞凋亡率、lncRNA TSIX低于Huh7细胞组和lncRNA TSIX mimics组[(8.14±2.45)vs(15.63±2.13)、(18.52±2.45),(1.58±0.25)vs(2.89±0.21)、(4.47±0.22)](t=37.385、48.021、30.703、104.562,P<0.05)。lncRNA TSIX mimics组miR-548-a-3p低于Huh7细胞组[(2.39±0.19)vs(4.87±0.20)](t=11.265,P<0.05),lncRNA TSIX inhibitor组miR-548-a-3p高于Huh7细胞组和lncRNA TSIX mimics组[(6.32±0.19)vs(4.87±0.20)、(2.39±0.19)](t=6.612、10.058,P<0.05)。结论 lncRNA TSIX明显抑制HCC细胞增殖、侵袭,促进HCC细胞凋亡;其机制可能与lncRNA TSIX负调节miR-548-a-3p有关。

过表达miR-125a-5p靶向STAT3抑制结肠癌体外生长和治疗移植瘤裸鼠的研究

目的:探究过表达miR-125a-5p抑制结肠癌的机制及其对移植结肠癌裸鼠的影响及机制。方法:通过基因预测软件TargetScan、miRanda和TarBase筛选出miR-125a-5p的靶基因STAT3;miR-125a-5p mimic和pcDNA-STAT3转染SW480细胞;RT-PCR检测miR-125a-5p表达,Western blot检测STAT3、Ki67、caspase-3、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Bcl-2、c-Myc和cycD表达,克隆形成实验检测细胞生长,Transwell实验检测细胞侵袭,倒置显微镜观察上皮-间质细胞形态变化;裸鼠皮下注射转染miR-125a-5p mimic的结肠癌SW480细胞构建模型,30 d后检测肿瘤重量,免疫组化检测Ki67、Vimentin表达,RT-PCR检测miR-125a-5p表达,Western blot检测Bcl-2、c-Myc和cycD表达。结果:miR-125a-5p与STAT3在3′UTR区存在结合位点,荧光素酶实验证实miR-125a-5p靶向作用于STAT3,对STAT3表达起抑制作用;在体外,与Control组相比,miR-125a-5p mimic组克隆形成率显著降低,Ki67表达显著下调,caspase-3表达显著上调,侵袭细胞数显著减少,E-cadherin表达显著上调,Vimentin和N-cadherin表达显著下调,Bcl-2、c-Myc和cycD表达显著下调;在体内,与Control组相比,miR-125a-5p mimic组肿瘤重量显著减轻,miR-125a-5p、Bcl-2、c-Myc和cycD表达显著下调,Ki67和Vimentin阳性率显著减少。结论:过表达miR-125a-5p可靶向STAT3抑制结肠癌SW480细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,诱导其凋亡,并抑制STAT3下游靶基因Bcl-2、c-Myc和cycD表达,从而抑制结肠癌。

miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

目的:构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型,并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果:成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除(KO)小鼠,鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型(WT)小鼠,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育,获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比,miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低(P<0.05)。结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠,miR-125a-5p基因的缺失参与靶基因Foxp3的表达调控,为进一步研究miR-125a-5p在自身免疫性疾病中的发生机制提供前期基础。

母体表达基因3通过miR-125a-5p/TET2途径抑制HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达

目的研究发现母体表达基因3（MEG3）对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的调控作用及其机制。方法用荧光素酶报告系统分析MEG3与miR-125a-5p的靶向性结合。采用实时定量PCR（qRT-PCR）检测高表达Apo（a）的HepG2细胞和低表达Apo（a）的SMMC7721细胞中MEG3的表达情况;向HepG2细胞转染MEG3,Western blot和qRT-PCR检测Apo（a）、TET2表达情况;采用小干扰RNA技术沉默TET2的表达。结果 （1）MEG3与hsa-miR-125a-5p能互补性结合,荧光素酶报告基因系统分析结果证实了MEG3与hsa-miR-125a-5p结合的存在。（2）miR芯片结果表明,在HepG2细胞中,hsa-miR-125a-5p表达水平升高,是对照组的近1.5倍,MEG3在HepG2细胞和SMMC7721细胞中均有表达,但前者MEG3的表达水平显著低于后者。（3）MEG3抑制Apo（a）表达。（4）MEG3下调miR-125a-5p的表达,上调TET2的表达; miR-125a-5p的mimics可逆转MEG3对Apo（a）的下调作用及TET2的表达,但可被miR-125a-5p的抑制剂逆转; TET2沉默可逆转MEG3对Apo（a）的下调作用。结论 MEG3通过miR-125a-5p/TET2途径下调HepG2细胞Apo（a）的表达。

MiR-125a-5p抑制3T3-L1前体脂肪细胞分化

MicroRNAs(miRNAs)是一类在脂肪组织发育中发挥重要作用的小非编码RNA.为探明miR-125a-5p在3T3-L1前体脂肪细胞中的作用,采用实时qPCR检测了miR-125a-5p在小鼠各组织及3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中的表达;使用经化学修饰的miR-125a-5p模拟物agomir及抑制剂antagomir转染3T3-L1前体脂肪细胞,采用实时qPCR和Western印迹检测成脂标志基因Pparγ和aP2的表达,油红O染色观察脂肪细胞脂质积累.结果显示,miR-125-5p在小鼠脂肪组织中高丰度表达,在3T3-L1前体脂肪细胞分化过程中表达下降.过表达miR-125a-5p,与对照组相比,成脂标志基因Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均明显下降;油红O染色及定量结果显示脂质积累减少.抑制剂处理结果显示,Pparγ和aP2在mRNA和蛋白质水平均有不同程度上升,但油红O染色及定量结果差异不显著.以上结果表明,miR-125a-5p在脂肪细胞分化中发挥负调控作用.

miR-125b-5p靶向STAT3调控血管内皮细胞凋亡

目的:探讨miR-125b-5p靶向STAT3对血管内皮细胞凋亡影响。方法:过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡,qPCR法测定miR-125b-5p表达。血管内皮细胞中转染miR-125b-5p mimics,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞PCNA和C-caspase-3蛋白水平。靶基因预测软件预测STAT3与miR-125b-5p的靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。血管内皮细胞共转染STAT3过表达载体及miR-125b-5p mimics,检测细胞活力、凋亡及PCNA、C-caspase-3蛋白表达。结果:过氧化氢处理后的血管内皮细胞中miR-125b-5p水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞PCNA蛋白表达降低,C-caspase-3蛋白表达提高。转染miR-125b-5p mimics可提高过氧化氢条件下血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡,提高细胞PCNA蛋白水平,降低细胞C-caspase-3蛋白水平。miR-125b-5p靶向调控STAT3表达。STAT3过表达载体可逆转miR-125b-5p mimics对过氧化氢诱导的血管内皮细胞活力和凋亡的影响。结论:miR-125b-5p靶向STAT3抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡。

miR-125b-5p、miR-122-3p的表达水平对乙型病毒性肝炎治疗效果的预测

目的研究miR-125b-5p、miR-122-3p的表达水平与乙型病毒性肝炎患者肝功能、免疫功能的关系及对治疗效果的预测价值。方法该研究采取前瞻性研究,选取2019年1月至2021年1月在该院进行治疗的乙型病毒性肝炎患者120例为病例组,另选取同期120例体检健康者作为对照组。根据治疗效果分为有效组和无效组,比较病例组与对照组、有效组和无效组的肝功能、免疫功能以及miR-125b-5p、miR-122-3p水平的差异,探讨miR-125b-5p、miR-122-3p与肝功能、免疫功能的相关性及对治疗效果的预测价值。结果病例组的miR-125b-5p、miR-122-3p、总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);无效组的miR-125b-5p、miR-122-3p、HBV DNA、TBIL、ALT、AST水平显著高于有效组,差异有统计学意义(P<0.05),CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IgA、IgM、IgG水平显著低于有效组,差异有统计学意义(P<0.05);通过相关性分析,miR-125b-5p、miR-122-3p与TBIL、ALT、AST、HBV DNA呈正相关,与CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、IgA、IgM、IgG呈负相关;miR-125b-5p、miR-122-3p两指标联合检测对于无效患者的预测值显著高于单独检测。miR-125b-5p、miR-122-3p检测用于评价乙型病毒性肝炎治疗效果的临界值分别为2.41,2.55(2^(-ΔΔCt))。结论miR-125b-5p、miR-122-3p的表达水平与乙型病毒性肝炎患者肝功能、免疫功能呈显著的相关性,miR-125b-5p、miR-122-3p对于乙型病毒性肝炎的治疗效果具有显著的预测价值。