新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p表达变化及其意义

目的观察新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p的表达水平变化,分析其与病情严重程度的关系,并探讨miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能,为临床重症新型冠状病毒感染患者的早期识别提供新的预测指标。方法新型冠状病毒感染患者40例作为观察组,根据病情严重程度分为重症组、轻症组各20例。另择同期体检健康者10例作为对照组。入院时采取鼻黏膜拭子样品,并从中分离上皮脱落细胞,采用qPCR方法检测两组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p。通过Logistic回归分析鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量与重症新型冠状病毒感染的相关性,进一步采用ROC评价miR-125a-3p、miR-144a-3p单独及联合检测对重症新型冠状病毒感染的预测效能。结果观察组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于对照组(P均<0.05);重症组鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量高于轻症组(P均<0.05)。鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p、miR-144a-3p相对表达量是重症新型冠状病毒感染的独立影响因素(P均<0.05)。miR-125a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.803,最佳截断值为1.83,灵敏度79.1%,特异度80.8%;miR-144a-3p预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.609,最佳截断值为2.44,灵敏度73.6%,特异度79.1%;miR-125a-3p和miR-144a-3p联合预测重症新型冠状病毒感染的ROC下面积为0.856,灵敏度86.2%,特异度87.7%。结论新型冠状病毒感染患者鼻黏膜上皮脱落细胞中miR-125a-3p和miR-144a-3p相对表达量升高,重症患者升高更明显。miR-125a-3p和miR-144a-3p是重症新型冠状病毒感染的独立危险因素,均可作为重症新型冠状病毒感染的预测指标,以联合检测预测效能最佳。

环状RNA MAPK4通过吸附miR-125a-3p对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨环状RNA MAPK4(circ-MAPK4)对神经胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法 使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测人神经胶质瘤细胞株(U138、U373、U87、A172、U251)和人正常性星形胶质细胞(HA1800)中circ-MAPK4、微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)表达水平,将U138细胞分为circ-MAPK4低表达组(si-circMAPK4组)、阴性对照组(si-NC组)、无转染组(control组),si-circMAPK4组、si-NC组U138细胞分别转染circ-MAPK4 siRNA及其阴性对照siRNA-NC,control组细胞不做转染处理;采用circNet、StarBase分析预测circ-MAPK4与miR-125a-3p的靶向关系并使用荧光素酶实验进行验证;将si-circMAPK4组U138细胞分为circ-MAPK4+miR-inhibitor组、circ-MAPK4+NC-inhibitor组2个亚组并完成相关转染,采用CCK-8法检测U138细胞活力、细胞集落实验检测细胞克隆形成率、Transwell检测细胞侵入细胞数目、流式细胞法检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞增殖蛋白(Ki67、cycD)、侵袭蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)、凋亡蛋白(Ceaved-caspase3/caspase3)表达水平。结果 与HA1800细胞比较,U138、U373、U87和A172细胞的circ-MAPK4表达水平升高(P<0.05),miR-125a-3p表达水平下降(P<0.05);荧光素酶实验结果显示circ-MAPK4-mut/miR-125a-3p mimics、circ-MAPK4-mut/NC-mimics、circ-MAPK4-WT/NC-mimics细胞的荧光素酶相对活性均高于circ-MAPK4-WT/miR-125a-3p mimics细胞(F=437.659,P<0.001);与si-NC组比较,si-circMAPK4组细胞活力、克隆形成率、细胞侵入细胞数目、Ki67、cycD、N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),而细胞凋亡率、Ceaved-caspase3/caspase3和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与circ-MAPK4+NC-inhibitor组比较,circ-MAPK4+miR-inhibitor组细胞活力、克隆形成率、细胞侵入细胞数目、Ki67、cycD、N-cadherin和Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、Ceaved-caspase3/caspase3和E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论 circ-MAPK4低表达能减弱人神经胶质瘤细胞U138细胞增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,可能与吸附miR-125a-3p作用有关。

口腔鳞状细胞癌组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达变化及临床意义

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)癌症易感性候选基因9(CASC9)、微小核糖核酸-125a-3p(miR-125a-3p)的表达变化及临床意义。方法选取OSCC患者80例,术中收集OSCC组织及对应癌旁组织,实时荧光定量PCR法检测组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p。用Pearson相关法分析OSCC组织中LncRNA CASC9与miR-125a-3p表达的相关性,并分析LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达与OSCC患者临床病理参数的关系。术后随访3年,比较LncRNA CASC9、miR-125a-3p高/低表达者总生存率;Cox回归模型分析LncRNA CASC9、miR-125a-3p对OSCC患者预后的影响。结果与癌旁组织比较,OSCC组织中LncRNA CASC9表达高,miR-125a-3p表达低(P均<0.05)。Pearson相关法分析显示,OSCC组织中LncRNA CASC9与miR-125a-3p表达呈负相关(r=-0.754,P<0.05)。不同分化程度、TNM分期及是否有淋巴结转移的OSCC组织中LncRNA CASC9、miR-125a-3p表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,患者死亡24例,总生存率为70.00%(56/80)。LncRNA CASC9高表达者(≥1.20,42例)3年总生存率59.52%(25/42)低于LncRNA CASC9低表达者(<1.20,38例)81.58%(31/38),miR-125a-3p高表达者(≥1.04,39例)3年总生存率79.49%(31/39)高于miR-125a-3p低表达者(<1.04,41例)60.98%(25/41),比较差异有统计学意义(P均<0.05)。低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移和LncRNA CASC9≥1.20为OSCC患者预后的独立危险因素(P均<0.05),miR-125a-3p≥1.04为OSCC患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论LncRNA CASC9高表达、miR-125a-3p低表达与OSCC患者组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移和预后有关。

缺血性脑卒中患者外周血抗磷脂抗体、miR-125a-3p的检测及临床意义

目的 探究缺血性脑卒中(CIS)患者外周血抗磷脂抗体(aPLs)、miR-125a-3p的检测及临床意义。方法 选取2018年1月至2021年12月该院297例CIS患者为观察组,再选取同期200例健康体检者为对照组。比较两组miR-125a-3p水平及aPLs阳性率,并比较不同神经功能缺损程度患者miR-125a-3p水平及aPLs阳性率,比较不同预后患者一般资料及miR-125a-3p水平、aPLs阳性率,分析预后不良的危险因素,以及miR-125a-3p、aPLs对CIS患者预后不良的预测价值。结果 观察组血清miR-125a-3p水平、aPLs阳性率较对照组高(P<0.05);随着神经功能缺损程度增加,miR-125a-3p水平、aPLs阳性率逐渐增加(P<0.05);预后不良患者总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、miR-125a-3p、aPLs阳性率较预后良好患者高(P<0.05);miR-125a-3p水平高和aPLs阳性均为预后不良的危险因素(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线显示,miR-125a-3p、aPLs联合预测CIS患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.859,高于单独预测(P<0.05)。结论 CIS患者miR-125a-3p水平、aPLs阳性率明显升高,且与神经功能缺损程度密切相关,且miR-125a-3p、aPLs在预后评估方面具有较好价值。

血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块的关系

目的探讨血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达与脑梗死颈动脉粥样硬化(CAS)斑块的关系。方法选取2019年3月至2021年12月北京市和平里医院收治的120例脑梗死患者,根据CAS斑块稳定性将其分为不稳定组(75例)和稳定组(45例)。收集并比较两组临床资料,同时采用实时荧光定量PCR检测两组血清miR-125a-3p、miR-224-3p表达。通过logistic回归模型分析脑梗死患者CAS不稳定的影响因素,进一步采用受试者操作特征(ROC)曲线分析其对脑梗死患者CAS斑块稳定情况的预测价值。结果不稳定组吸烟者占比、糖尿病患者占比、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、miR-125a-3p表达高于稳定组,miR-224-3p表达低于稳定组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示,吸烟、糖尿病、LDL-C、miR-125a-3p、miR-224-3p均为脑梗死患者CAS斑块不稳定的影响因素(P<0.05),5项联合预测脑梗死患者CAS斑块不稳定的ROC曲线下面积为0.915,灵敏度、特异度分别为84.00%、91.11%。结论脑梗死患者血清miR-125a-3p、miR-224-3p水平与CAS斑块不稳定有关,可联合吸烟、糖尿病和LDL-C对CAS斑块不稳定进行预测。

lncRNA CASC9通过调节miR-125a-3p/VEGF对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究长链非编码RNA癌症易感性候选基因9(lncRNA CASC9)对口腔鳞癌(OSCC)CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法:构建lncRNA CASC9敲低的CAL-27细胞,并在lncRNA CASC9敲低细胞系中进行microRNA-125a-3p(miR-125a-3p)的回复。检测细胞中lncRNA CASC9、miR-125a-3p和VEGF mRNA水平,检测细胞增殖、迁移及侵袭能力以及细胞中VEGF蛋白表达。结果:敲低lncRNA CASC9表达后,CAL-27细胞增殖活性、迁移与侵袭能力、VEGF mRNA和蛋白水平降低(P<0.05),miR-125a-3p水平升高(P<0.05)。敲低lncRNA CASC9可显著抑制细胞在体内移植瘤生长和血管生成(P<0.05)。下调miR-125a-3p表达可减弱lncRNA CASC9敲低对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭以及对体内移植瘤生长和血管生成的抑制作用(P<0.05)。结论:lncRNA CASC9可能通过调节miR-125a-3p/VEGF促进OSCC细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

miR-125a-3p、IGF-2在NSCLC患者血浆中的表达水平及检验

目的研究miR-125a-3p、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆中的表达水平及意义。方法将医院从2018年2月至2021年3月收治的114例NSCLC患者纳入研究,记作研究组。另取同期健康体检者100例作为对照组。分别检测并比较两组人员血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平,并分析血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平和NSCLC患者临床病理特征的关系。此外,将NSCLC患者按照预后的差异分作死亡组51例及存活组63例,对比两组血浆miR-125a-3p、IGF-2表达水平。结果研究组血浆miR-125a-3p相对表达水平为(0.81±0.24),低于对照组的(1.28±0.33),而IGF-2相对表达水平为(987.45±67.12),高于对照组的(781.02±55.03),差异均有统计学意义(均P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期以及有淋巴结转移NSCLC患者的血浆miR-125a-3p相对表达量均低于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期以及无淋巴结转移NSCLC患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。有淋巴结转移NSCLC患者的血浆IGF-2血浆IGF-2高于无淋巴结转移NSCLC患者,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组NSCLC患者血浆中miR-125a-3p相对表达量低于存活组,而IGF-2相对表达量高于存活组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论NSCLC患者血浆miR-125a-3p存在异常低表达,而IGF-2存在异常高表达,两者均和NSCLC患者淋巴结转移以及预后密切相关,且血浆miR-125a-3p表达和NSCLC患者TNM分期有关。

血清miR-125a-3p、BMP-2水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折术后延迟愈合的关系

目的探讨血清微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)水平与骨质疏松性椎体压缩性骨折(OVCF)术后延迟愈合的关系。方法选择OVCF患者147例,均接受经皮椎体后凸成形术治疗,术后延迟愈合67例(延迟愈合组)、正常愈合80例(正常愈合组)。采集所有研究对象术前空腹外周静脉血,离心留取血清,采用RT-qPCR法检测血清miR-125a-3p,采用化学发光免疫分析法检测血清BMP-2。比较两组血清miR-125a-3p、BMP-2水平,采用Spearman相关分析法分析OVCF患者血清miR-125a-3p、BMP-2水平的关系。采用多因素Logistic回归模型分析OVCF术后延迟愈合的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-3p、BMP-2水平对OVCF术后延迟愈合的预测价值。结果延迟愈合组血清miR-125a-3p水平高于正常愈合组,血清BMP-2水平低于正常愈合组(P均<0.01)。Spearman相关分析显示,OVCF患者血清miR-125a-3p水平与血清BMP-2水平呈负相关关系(r=-0.786,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,年龄增加(OR=1.101,95%CI:1.017~1.192)、ODI评分增加(OR=1.460,95%CI:1.229~1.734)及血清miR-125a-3p水平升高(OR=1.724,95%CI:1.243~2.390)为OVCF术后延迟愈合的独立危险因素,而骨密度增加(OR=0.965,95%CI:0.939~0.991)及血清BMP-2水平升高(OR=0.936,95%CI:0.904~0.969)则为其独立保护因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-125a-3p、BMP-2水平单独与联合预测OVCF术后延迟愈合的曲线下面积(AUC)分别为0.798、0.796、0.883,血清miR-125a-3p、BMP-2水平联合预测OVCF术后延迟愈合的AUC高于二者单独(P均<0.05)。结论血清miR-125a-3p水平升高和血清BMP-2水平降低与OVCF患者术后延迟愈合密切相关;血清miR-125a-3p、BMP-2水平对OVCF术后延迟愈合均有一定预测价值,二者联合时预测价值更高。

miR-125a-3p和miR-17-5p在激素性股骨头坏死中的作用

目的探讨激素性股骨头坏死中miRNA的差异性表达变化。方法取激素性股骨头坏死的坏死区域骨组织为实验组,其股骨颈基底部骨组织为对照组;分别提取总RNA并进行质检;采用miRNA芯片技术检测miRNAs的表达并对其表达谱进行分析;运用实时定量PCR对差异明显的miR-125a-3p和miR-17-5p进行验证。结果对激素性股骨头坏死中miRNA表达谱进行差异性分析。和对照组相比,实验组中倍数大于2倍,P<0.05的miRNA共有11个。8个miRNA表达上调,3个表达下调。实时定量PCR证实miR-125a-3p在坏死标本中高表达,而miR-17-5p呈现低表达,与miRNA芯片结果一致。结论激素性股骨头坏死区域骨组织与对照组相比miRNAs表达发生明显变化,以miR-125a-3p和miR-17-5p差异最为明显。这表明了它们最有可能参与了激素性股骨头坏死病理过程的调控。

血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值。方法纳入2018年10月至2020年3月该院收治的早期结直肠癌患者120例为肿瘤组,结直肠良性疾病患者120例为良性组,体检健康者120例为对照组。通过实时荧光定量PCR检测患者血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量。用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析miR-125a-3p、miR-192、miR-223在早期结直肠癌中的诊断价值。结果肿瘤组、良性组和对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组与良性组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为92%、92%、91%,特异度分别为92%、91%、92%。肿瘤组与对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为99%、99%、97%,特异度分别为92%、93%、94%。血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌的灵敏度为95%,特异度为92%,准确度为93%。结论血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223检测可作为诊断早期结直肠癌的潜在标志物。

hsa-miR-125a-3p是RhoA-肌动蛋白途径的负性调节因子

为了探讨hsa-miR-125a-3p调控肺癌细胞侵袭的作用机制,分别检测了转染正义和反义hsa-miR-125a-3p的人肺癌A549细胞中Rho A mRNA和蛋白水平表达情况,结果显示,两种方式处理的细胞中Rho A mRNA均无明显变化,但Rho A蛋白浓度分别下降和增加;再用包含Rho A 3’-未翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因与hsa-miR-125a-3p mimics共转染发现,当hsa-miR-125a-3p异常表达时,报告基因活性降低。进一步的实验显示,hsa-miR-125a-3p下调可诱导A549细胞侵袭;Rho抑制剂CT04阻断Rho A后,转染反义或正义hsa-miR-125a-3p的A549细胞侵袭率均无变化;转染正义的hsa-miR-125a-3p的A549细胞中活化Rho A(Rho A-GTP)、Rho A和肌动蛋白丝聚集表达均降低;相反,当转染反义的hsa-miR-125a-3p时,Rho A-GTP、Rho A和肌动蛋白丝聚集表达均增强。上述研究表明,hsa-miR-125a-3p可能通过Rho A-肌动蛋白途径影响肺癌细胞系A549的侵袭能力。

miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响

目的探讨miR-125a-3p对大耳兔动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法15只成年雄性健康日本大耳兔,随机分为3组,每组5只,对照组给予普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组给予牛血清白蛋白注射和高胆固醇饲料喂养,miR-125a-3p抑制剂干预组给予动脉粥样硬化兔注射miR-125a-3p干扰慢病毒载体。油红O染色后图像分析法测定斑块面积,免疫组化法测定MMP-9和VEGF,免疫荧光法检测斑块组织中M1标记物CD11c和M2标记物CD206。结果与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂组斑块面积百分比显著降低(P<0.0001)。与对照组相比,动脉粥样硬化组MMP-9(P<0.001)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平显著升高,CD206水平显著降低(P<0.001);与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂干预组MMP-9(P<0.01)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平有所降低,CD206水平有所升高(P<0.001)。结论抑制miR-125a-3p可减轻动脉粥样硬化斑块的形成,平衡M1/M2巨噬细胞,降低斑块组织中MMP-9和VEGF的表达,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。

miR-125a-3p在急性髓细胞白血病患者外周血中的表达及其意义

目的探讨miR-125a-3p在急性髓细胞白血病（Acutemyeloidleukemia，AML）患者外周血中的表达及其意义。方法采用实时荧光定量PCR检测119例AML患者外周血标本中miR-125a-3p的表达水平，其中，初诊组53例，复发组12例，治疗组54例。另选择12例正常人作为对照。随机选择初诊组中7例患者进行外周血miR-125a-3p动态监测。结果与正常对照组比较，初诊组和复发组患者外周血miR-125a-3p的表达水平明显减低，且差异有统计学意义（P〈0．05），而治疗组患者外周血miR-125a-3p的表达水平增高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。对初诊组和治疗组中不同FAB分型的AML患者miR-125a．3p的表达水平进行比较，发现初诊组内各型患者之间miR-125a-3p表达的差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗组内M4型AML患者miR-125a-3p表达明显高于M0型，差异有统计学意义（P〈0．05），其他各型之间miR-125a-3p表达差异无统计学意义（P〉0．05）。7例患者miR-125a-3p动态监测结果显示，在治疗过程中，miR-125a-3p表达一直维持在较高的水平；1例患者缓解4～5个疗程后复发，其miR-125a-3p表达再次降低。结论miR-125a-3p在AML初发及复发患者外周血中低表达，诱导治疗后表达量升高，这可能与AML的发生发展有关，miR-125a-3p有望成为AML疗效评价和复发监测的生物学指标。

恒河猴miR-125a-3p慢病毒载体的构建、鉴定以及功能研究

构建携带miR-125a-3p过表达与抑制表达shRNA的慢病毒,研究miR-125a-3p对轮状病毒感染乳鼠导致的腹泻的影响,为进一步研究miR-125a-3p对轮状病毒增殖过程中的影响及探究其机制提供前期研究基础。设计miR-125a-3p前体序列及其反向互补序列,与慢病毒骨架质p LVshRNA-EGFP(2A)Puro载体进行酶切连接,构建过表达与抑制表达miR-125a-3p的慢病毒表达载体。利用HEK293Ta细胞包装慢病毒颗粒,测定病毒滴度后,将获得的miR-125a-3p过表达慢病毒颗粒感染MA104细胞和灌胃感染乳鼠,检测miR-125a-3p的表达。同时对乳鼠进行轮状病毒攻毒试验,观察腹泻情况。研究成功构建了过表达及抑制miR-125a-3p表达的慢病毒载体,获得高效的过表达及抑制miR-125a-3p的慢病毒颗粒,成功感染MA104细胞,以及在乳鼠小肠组织有表达。同时发现miR-125a-3p过表达慢病毒感染乳鼠后对轮状病毒引起的腹泻有明显的抑制作用。

lncRNA GAS6-AS2靶向miR-125a-3p调控肺癌A549细胞紫杉醇敏感性

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GAS6-AS2对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭及紫杉醇(paclitaxel,PTX)敏感性的影响及其分子机制。方法:用qPCR法检测肺癌A549和A549/PTX细胞中GAS6-AS2和miR-125a-3p的表达水平。用脂质体转染技术,分别将si-NC、si-GAS6-AS2、miR-NC、miR-125a-3p、pcDNA、pcDNA-GAS6-AS2、si-GAS6-AS2+anti-miR-NC、si-GAS6-AS2+anti-miR-125a-3p等转染入A549/PTX细胞,同时用不同浓度(1、5、10、20、40 nmol/L)PTX处理A549和A549/PTX细胞,WB法检测细胞中增殖、迁移与侵袭相关蛋白cyclin D1、p21、MMP2和MMP9的表达水平,MTT法检测PTX对A549/PTX细胞的增殖抑制作用,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力。用双荧光素酶报告基因实验验证GAS6-AS2和miR-125a-3p之间的调控关系。结果:GAS6-AS2在A549/PTX细胞中表达水平显著高于A549细胞(P<0.01),miR-125a-3p在A549/PTX细胞中表达水平显著低于A549细胞(P<0.01)。不同浓度PTX处理后A549/PTX细胞的增殖抑制率显著低于A549细胞(均P<0.01),且呈浓度依赖性。抑制GAS6-AS2或过表达miR-125a-3p联合PTX处理均可抑制A549/PTX细胞的迁移和侵袭能力,增强PTX对细胞的增殖抑制,上调p21表达量,下调cyclin D1、MMP2和MMP9表达量(均P<0.01)。GAS6-AS2靶向负调控miR-125a-3p的表达。干扰miR-125a-3p可逆转抑制GAS6-AS2对A549/PTX细胞增殖、迁移、侵袭和PTX敏感性的作用(均P<0.01)。结论:抑制GAS6-AS2通过靶向miR-125a-3p抑制肺癌A549/PTX细胞的增殖、迁移和侵袭,增强细胞PTX敏感性,GAS6-AS2是肺癌潜在的分子靶点。

miR-125a-3p下调胃癌细胞NRG1表达并抑制细胞增殖

目的:探讨microRNA-125a-3p(miR-125a-3p)在胃癌细胞恶性增殖中的作用及调控机制。方法:qRT-PCR法检测各肿瘤细胞系及正常对照细胞系中miR-125a-3p的表达,应用microRNA类似物(Mimic及Inhibitor)转染技术改变细胞内miR-125a-3p表达。Western-blot检测NRG1蛋白表达水平的改变。XTT、平板克隆及裸鼠成瘤试验检测处理后胃癌细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果:miR-125a-3p在多个胃癌细胞系中表达均低于永生化胃黏膜上皮细胞系(P<0.01)。利用类似物转染可以有效改变肿瘤细胞miR-125a-3p的表达(P<0.01)。miR-125a-3p过表达可以降低NRG1蛋白的表达、抑制细胞周期进展,并降低胃癌细胞系的体外和在体增殖能力,抑制miR-125a-3p表达可以见到相反结果。结论:miR-125a-3p可通过调控NRG1表达在胃癌中起到抑癌作用。miR-125a-3p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,因此具有成为胃癌治疗新策略候选靶点的可能。

miR-125a-3p靶向作用P2RX7抑制糖尿病肾病小鼠肾纤维化发展

目的 探究miR-125a-3p靶向作用P2RX7对糖尿病肾病(DN)小鼠肾纤维化发展的影响。方法 60只小鼠均分为对照组、模型组、miR-125a-3p NC组和miR-125a-3p mimic组,构建DN小鼠模型,腹腔注射miR-125a-3p NC或mimic。qRT-PCR检测肾组织miR-125a-3p表达,Western blotting检测P2RX7、Col-I、α-SMA蛋白表达,ELISA检测血肌酐(Cr)和血尿素氮(BUN),HE染色和Masson染色检测肾脏病理改变和胶原蛋白体积分数(CVF),双荧光素酶报告检测miR-125a-3p与P2RX7的靶向关系。结果 与对照组比较,模型组和miR-125a-3p NC组P2RX7、Cr、BUN和CVF、Col-I和α-SMA蛋白升高,miR-125a-3p表达降低(P<0.05);与模型组和miR-125a-3p NC组比较,miR-125a-3p mimic组上述趋势得到逆转(P<0.05)。miR-125a-3p可与P2RX7靶向结合(P<0.05)。结论 miR-125a-3p高表达靶向抑制P2RX7蛋白,缓解DN小鼠的肾纤维化,保护肾功能。

miR-125a-3p介导DUSP1信号通路对急性髓系白血病细胞化疗敏感度的影响

目的 分析沉默微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)介导双特异性磷酸酶1(DUSP1)信号通路对急性髓系白血病细胞化疗敏感性的影响。方法 购买人急性白血病细胞株进行培养,分为空白组、耐药组、沉默组、过表达组。检测每组细胞增殖、细胞凋亡、细胞DUSP1信号通路蛋白表达情况,并分析其作用机制。结果 与耐药组相比,沉默组miR-125a-3p表达量降低,过表达组miR-125a-3p表达量升高(均P<0.05),与沉默组相比,过表达组miR-125a-3p表达量升高(P<0.05),说明miR-125a-3p转染成功。与耐药组相比,沉默组细胞增殖抑制率、凋亡率降低,过表达组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(均P<0.05);与沉默组相比,过表达组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(均P<0.05)。与耐药组相比,沉默组化疗敏感性降低,过表达组化疗敏感性升高(均P<0.05),与沉默组相比,过表达组化疗敏感性升高(P<0.05)。与耐药组相比,沉默组DUSP1蛋白表达量升高,p38、MAPK蛋白表达量降低,过表达组DUSP1蛋白表达量降低,p38、MAPK表达量升高(P<0.05);与沉默组相比,过表达组DUSP1蛋白表达量降低,p38、MAPK表达量升高(均P<0.05)。结论 过表达miR-125a-3p可抑制急性髓性白血病细胞凋亡、促进增殖、增强敏感性,其作用机制可能与DUSP1信号通路被激活相关。

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组(转染miR-125a-3p mimics)、miR-NC组(未转染细胞)、inhibitor-NC组(转染空inhibitor)、miR-125a-3p inhibitor组(转染miR-125a-3p inhibitor)、siPLK4组(转染siPLK4)、miR-125a-3p+Vector组(miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染)、miR-125a-3p+PLK4组(miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染)以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低(P<0.05);与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低(P<0.05);PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。