miR-126-3p.1通过SLC7A5调控间变性甲状腺癌细胞糖酵解的作用机制

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细胞糖酵解的作用,并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达;将TPC-1细胞分为agomiRNA(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组,各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力;ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力;蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比,SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达,SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比,agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高,TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比,antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达,减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解,具有潜在的治疗价值。

循环miR-126-3p在非小细胞肺癌中表达及诊断价值

目的探讨循环微小核糖核酸(miR)-126-3p在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及诊断价值。方法收集多中心miR芯片及测序数据探讨NSCLC的循环miR-126-3p的表达差异。为了评估循环miR-126-3p综合表达水平,计算标准化均数差(SMD)和综合受试者工作特征(sROC)曲线,分析sROC曲线的曲线下面积(AUC),探讨灵敏度、特异度、阳性阴性似然比,并结合组织进一步综合分析循环miR-126-3p表达。通过miRDB、starBase v2.0和TargetScan 7.1,结合NSCLC中的上调差异基因,利用互补序列方法筛选了循环miR-126-3p潜在靶基因。结果基于6项循环miR数据集发现循环miR-126-3p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),受试者工作曲线显示循环miR-126-3p有较强的诊断效能(AUC>0.5),而在199例NSCLC组中综合表达低于对照组(SMD=-1.46)。sROC曲线显示循环miR-126-3p区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.91),Egger's检验不存在发表偏倚(P>0.05),灵敏度、特异度均≥0.80,阳性似然比、阴性似然比为5.37和0.18。此外,对26个数据集1320例NSCLC循环和组织综合分析显示,循环miR-126-3p在NSCLC组中表达低于对照组(SMD=-2.07)。sROC曲线显示低表达的循环miR-126-3p在区分NSCLC组和对照组有高准确性(AUC=0.97)。此外,筛选得到循环miR-126-3p的潜在靶基因ADAM9和SLC7A5在NSCLC组中表达均高于对照组。结论低表达的循环miR-126-3p可能是NSCLC高准确性筛查的重要生物标志物。

骨髓间充质干细胞外泌体miR-126-3p靶向CCR1抑制非小细胞肺癌细胞恶性增殖及转移

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)来源的外泌体中miR-126-3p靶向趋化因子受体1(chemokine receptor 1,CCR1)对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养BMSCs,提取外泌体并通过外泌体标志蛋白CD63和TSG101进行鉴定;外泌体共培养A549细胞不同时长(0、24、48、72 h)后,CCK-8检测细胞存活率,q RT-PCR检测miR-126-3p和CCR1 m RNA表达,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blotting检测CCR1、上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(Vimentin)相对表达。结果外泌体呈边缘高亮、中间灰暗的圆形或椭圆形杯状结构,粒径分布范围152 nm左右,有CD63、TSG101蛋白表达;外泌体中miR-126-3p表达高于A549细胞,A549细胞中CCR1 m RNA表达高于外泌体,而在A549细胞与外泌体共培养后,A549细胞中miR-126-3p表达升高,CCR1表达降低;A549细胞与外泌体共培养0、24、48、72 h,细胞的存活率、迁移和侵袭能力和CCR1、N-cad和Vimentin蛋白表达及CCR1 m RNA表达均随着培养时间的延长逐渐降低,而miR-126-3p水平和E-cad蛋白表达随着培养时间的延长逐渐升高。结论BMSCs来源的外泌体与A549细胞共培养可提高细胞中miR-126-3p的表达,miR-126-3p通过靶向抑制CCR1表达可降低A549细胞增殖、迁移和侵袭能力。

miR-126-3p过表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及作用机制

目的探究miR-126-3p过表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法研究样本为来自北京生物技术有限公司的宫颈癌HeLa细胞,培养后随机分为对照组(n=9)及miR-126-3p过表达组(n=9),对照组细胞正常培养,miR-126-3p过表达组采用miR-126-3p模拟物转染。使用细胞增殖实验检测两组样本细胞活力,使用流式细胞术检测两组细胞周期,使用划痕实验、Wright染色法检测两组细胞迁移量和细胞迁移率,使用蛋白印迹检测两组Bax、Casepase-3、Bcl-2、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白表达,使用DAPI染色观察两组细胞凋亡小体表达。结果miR-126-3p过表达组miR-126-3p相对表达量比对照组高(3.14±0.28 vs 1.04±0.11,P=0.000),模型构建成功。miR-126-3p过表达组HeLa细胞存活率显著低于对照组(P<0.05)。DAPI染色结果显示,miR-126-3p过表达组细胞显示出凋亡小体,对照组未显示出明显的细胞凋亡。miR-126-3p过表达组G0/G1期细胞占比显著高于对照组,S期细胞占比显著低于对照组(P<0.05);miR-126-3p过表达组细胞迁移量和细胞迁移率显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比,miR-126-3p过表达组侵袭细胞数减少;转染24,48 h后miR-126-3p过表达组平均细胞侵袭率显著低于对照组(P<0.05)。miR-126-3p过表达组Bax、Casepase-3蛋白相对表达量显著高于对照组,Bcl-2、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达显著低于对照组(P<0.05)。结论miR-126-3p过表达可能通过PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控HeLa细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导宫颈癌细胞周期停滞。外源性miR-126-3p可能是宫颈癌患者治疗的新靶点之一。

miR-126-3p在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR检测35例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA法和流式细胞术检测,Transwell小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35例癌组织中miR-126-3p相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.028 vs 0.981±0.039,t=10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1细胞中miR-126-3p相对表达量最低;与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1增殖受到显著的抑制,第3天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC组比较,mimic组甲状腺癌细胞TPC-1凋亡显著增加[(15.32±3.20)%vs(8.12±1.17)%,t=4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t=8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p表达降低,上调miR-126-3p表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR-126-3p可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。

miR-126-3p和SLC7A11在肺癌中的研究进展

在我国乃至全世界常见癌症中肺癌是最常见且最致命的,在广西,其发病率和病死率也仅次于肝癌[1~3],严重危害人类健康。肺癌又可根据组织学分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌,所有亚型均与吸烟有关[4],准确的组织学和分子分型对肺癌的治疗和预后判断至关重要。

人脐间充质干细胞外泌体通过miR-126-3p抑制前列腺癌生长的相关研究

目的探究人脐间充质干细胞外泌体(hucMSCs exo)miR-126-3p对前列腺癌生长的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测RWPE.1､LNCaP､PC-3､C4-2中miR-126-3p表达水平。C4-2细胞中转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后检测细胞的增殖水平。提取并鉴定hucMSCs exo,将hucMSCs exo与C4-2细胞共孵育后检测C4-2细胞中miR-126-3p表达水平和细胞的增殖能力,并且将hucMSCs转染miR-126-3p mimic､inhibitor､negative control后提取外泌体,将外泌体与C4-2共孵育后检测miR-126-3p表达水平及细胞的增殖能力。结果miR-126-3p低表达于LNCaP､PC-3､C4-2细胞。miR-126-3p mimic可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。与hucMSCs exo共孵育后C4-2 miR-126-3p表达水平显著上调,细胞增殖能力下降,hucMSCs exo可传递miR-126-3p至C4-2细胞,并且外泌体miR-126-3p可显著抑制C4-2细胞的增殖能力。结论hucMSCs exo可通过递送miR-126-3p而抑制前列腺癌细胞的生长。

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞存活率降低,迁移、侵袭细胞数明显减少(P<0.05);miR-126-3p过表达可抑制野生型载体WT-AKT2细胞的荧光素酶活性,且miR-126-3p可负向调控AKT2表达(P<0.05);miR-126-3p+pcDNA3.1-AKT2组细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数明显高于miR-126-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。结论miR-126-3p可通过抑制靶基因AKT2表达而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭。

脂肪间充质干细胞来源外泌体miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用

背景:脂肪间充质干细胞衍生外泌体(adipose-derived mesenchymal stem cells released exosomes,AMSC-Exos)中miR-126-3p可作为糖尿病的一种潜在生物标志物,但其对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的作用及其相关机制研究较少。目的:探究AMSC-Exos中miR-126-3p对人脐静脉内皮细胞糖脂毒性的效用及作用机制。方法:①以30 mmol/L葡萄糖与100μmol/L棕榈酸诱导人脐静脉内皮细胞糖脂毒性体外模型;②收集第4代脂肪间充质干细胞上清液提取外泌体,透射电镜观察其形态,纳米颗粒跟踪分析外泌体粒径分布范围;③AMSC-Exos处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,流式细胞术检测活性氧水平及细胞凋亡率,ELISA检测培养上清中炎症因子水平;④RT-qPCR分析AMSC-Exos、与脂肪间充质干细胞共培养后正常人脐静脉内皮细胞中miR-126-3p mRNA相对表达水平;⑤miR-126-3p转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,CCK-8检测细胞增殖情况,Western blot检测凋亡蛋白的表达量;⑥生物信息学软件预测和分析miR-126-3p靶基因,双荧光素酶报告基因实验进行验证,并预测信号通路;⑦CRK转染糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Western blot检测凋亡蛋白及p-AKT的表达量;⑧AKT通路抑制剂RG7440与miR-126-3p过表达/AMSC-Exos共处理糖脂毒性人脐静脉内皮细胞,Western blot检测凋亡蛋白的表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与结论:①AMSC-Exos为形态一致的圆形或椭圆形膜性囊泡,粒径范围30-200 nm;②与模型组相比,AMSC-Exos可明显降低白细胞介素1β、白细胞介素6和白细胞介素8的表达量(P<0.05,P<0.001),并能显著降低活性氧水平和细胞凋亡率(P<0.05);③与单纯脂肪间充质干细胞相比,AMSC-Exos内miR-126-3p的mRNA相对表达量显著升高(P<0.001),与单纯人脐静脉内皮细胞相比,与脂肪间充质干细胞共培养可明显提高人脐静脉内皮细胞中miR-126-3p表达量(P<0.001);④miR-126-3p过表达可明显促进糖脂毒性人脐静脉内皮细胞增殖,降低细胞凋亡率,同时显著降低Cleaved caspase 3,9蛋白表达量(P<0.01,P<0.001);⑤生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验证实CRK为miR-126-3p靶基因,同时确认AKT途径作为下一步研究对象;⑥CRK过表达可激活AKT途径并上调Cleaved caspase 3,9蛋白表达量;与外泌体组相比,外泌体+AKT抑制剂组细胞凋亡率显著升高(P<0.001);⑦结果表明,来源于AMSC-Exos的miR-126-3p能够改善人脐静脉内皮细胞的糖脂毒性,推测其机制可能是miR-126-3p通过靶向CRK基因调节AKT途径而发挥作用。

溃疡性结肠炎组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达与炎症的相关性

目的 分析溃疡性结肠炎(UC)组织中L型氨基酸转运载体1(LAT1)信使RNA (mRNA)、微小RNA-126-3p(miR-126-3p)表达水平与炎症指标的相关性。方法 选取2020年12月-2022年6月在浙江省金华市人民医院收治的UC患者96例作为UC组,按照疾病严重程度分为轻度UC组28例、中度UC组43例、重度UC组25例,另选取同期本院单发息肉切除的肠黏膜组织正常者100例为对照组。手术切除或肠镜取UC组患者结肠病灶组织以及对照组正常结肠组织。采集受试者临床资料;检测受试者炎症指标[血清白细胞介素-1β (IL-1β)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞计数(NEU)、血小板计数(PLT)、红细胞沉降率(ESR)]水平;荧光定量PCR法测定结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平;比较UC组和对照组临床资料、炎症指标、结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平,不同疾病严重程度UC患者临床资料、炎症指标、结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平;Pearson法分析UC患者结肠组织LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平与炎症指标的相关性。结果 与对照组比较,UC组IL-1β、CRP、WBC、NEU、PLT、ESR、结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);轻度UC组、中度UC组、重度UC组IL-1β、CRP、WBC、NEU、PLT、ESR、结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p表达水平依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);UC患者结肠组织LAT1 mRNA与miR-126-3p表达水平呈正相关(P<0.05),LAT1 mRNA和miR-126-3p均与IL-1β、CRP、WBC、WBC、NEU、PLT、ESR呈正相关(P<0.05)。结论 UC患者结肠组织中LAT1 mRNA、miR-126-3p均呈高表达,二者均随UC病情严重程度的增加而升高,且与炎症指标密切相关。

miR-126-3p靶向PIK3R1促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-126-3p/PIK3R1轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将miR-126-3p mimic,miR-126-3pinhibitor和PIK3R1质粒转染入SKOV3、A2780卵巢癌细胞中。采用CCK-8、划痕和Transwell实验评估细胞增殖、迁移。Western blot和qPCR检测PIK3R1、miR-126-3p表达水平,双荧光素酶测定miR-126-3p靶基因PIK3R1。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与正常卵巢上皮细胞系IOSE80相比,卵巢癌细胞系SKOV3、A2780、HO-8910中miR-126-3p的表达水平(2.30±0.18、1.86±0.11、1.26±0.12比1.00±0.07)上调(P均<0.05);抑制miR-126-3p表达可抑制SKOV3、A2780细胞增殖[SKOV3细胞:72 h(0.94±0.13)比(1.14±0.08),A2780细胞:72 h(0.83±0.09)比(1.11±0.12)]、迁移[(23.00±6.08)%比(37.67±6.43)%、(25.67±4.04)%比(40.00±6.58)%]、侵袭[(97.00±17.35)比(134.33±13.32)个、(97.00±7.00)比(127.00±9.17)个](P均<0.05);双荧光素酶报告实验验证miR-126-3p靶向作用于SKOV3、A2780细胞中的PIK3R1基因;过表达miR-126-3p后SKOV3、A2780细胞中PIK3R1蛋白表达下调[(0.50±0.08)比(1.01±0.04)、(0.54±0.03)比(1.00±0.03)](P均<0.001)。与miR-126-3p mimic相比,miR-126-3p mimic+pPIK3R1中SKOV3、A2780细胞增殖[SKOV3细胞:72 h(1.04±0.14)比(1.55±0.12),A2780细胞:72 h(0.87±0.09)比(1.32±0.11)]、迁移能力[(27.00±2.00)%比(34.00±2.00)%、(24.67±3.22)%比(33.00±4.00)%]、侵袭能力[(60.67±7.64)比(135.00±6.00)个、(63.33±10.02)比(125.67±9.87)个]下降,PIK3R1蛋白表达量[(1.92±0.16)比(1.00±0.11)、(3.15±0.06)比(0.99±0.12)]升高(P均<0.05)。结论miR-126-3p靶向PIK3R1促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-126-5p通过靶向TRAF3抑制糖氧剥夺再灌注介导的HT22细胞凋亡和炎症

目的探讨miR-126-5p通过靶向肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor-associated factor 3,TRAF3)对糖氧剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)介导的小鼠海马神经元细胞HT22细胞凋亡和炎症的影响。方法模拟缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion,I/R)损伤在体外建立氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)细胞模型,分析miR-126-5p与TRAF3靶向关系及对HT22细胞凋亡和炎症反应的影响。结果与对照组比较,OGD/R组中miR-126-5p下调而TRAF3 mRNA及蛋白水平上调,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平降低,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平升高(P均<0.05)。与OGD/R+mimic-NC组比较,OGD/R+miR-mimic组、OGD+miR-mimic+pcDNA组TRAF3蛋白水平、LDH释放量、细胞凋亡率、Bax及Cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,细胞存活率及Bcl-2蛋白水平升高,而OGD+miR-mimic+pcDNA-TRAF3组各指标升高,细胞存活率明显下降(P均<0.05)。结论miR-126-5p通过靶向TRAF3,抑制OGD/R介导的HT22细胞凋亡和炎症反应,从而对神经元细胞发挥保护作用。

METTL3调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞焦亡的影响及机制研究

目的:研究甲基转移酶样蛋白3(METTL3)调控miR-126-5p对人肾小球系膜细胞(HRMC)焦亡的影响并探讨潜在机制。方法:将HRMC分为7组,即对照组、高糖处理组、pcD-null组、pcD-METTL3组、pcD-METTL3+miR-126-5p抑制剂(inhibitor)组、pcD-METTL3+inhibitor-NC组、pcD-METTL3+inhibitor+AKT抑制剂(AZD5363)组。用流式细胞仪检测细胞焦亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-126-5p表达,western blotting检测METTL3、Gasdermin D、NLRP3、磷酸化(p-)AKT、p-NF-κB表达。用RNA甲基化免疫沉淀技术(Me-RIP)测定miR-126-5p前体的m6A修饰水平。结果:与对照组比较较,高糖处理组细胞焦亡增多,miR-126-5p前体N6-甲基腺苷(m6A)修饰增加,p-AKT和p-NF-κB表达水平升高,METTL3和miR-126-5p表达水平降低(均P<0.05)。转染METTL3过表达载体后,高糖处理的细胞上述指标发生了显著逆转(均P<0.05)。而在过表达METTL3的基础上加入miR-126-5p inhibitor后,miR-126-5p表达下调,细胞焦亡增多,p-AKT、p-NF-κB表达上调(均P<0.05),但METTL3表达水平和miR-126-5p前体m6A修饰无显著变化(P>0.05)。在过表达METTL3的基础上加入AZD5363后,细胞焦亡减少(P<0.05),p-AKT、p-NF-κB表达下调,METTL3和miR-126-5p表达及miR-126-5p前体m6A修饰无显著改变(P>0.05)。结论:METTL3促进miR-126-5p的m6A甲基化,并通过抑制AKT/NF-κB信号通路减少高糖诱导的肾小球系膜细胞焦亡。

LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

目的探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠(FNI)中施万细胞的调控作用。方法用I-125粒子辐射大鼠施万细胞,并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达,Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。同时,构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子,HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低(P<0.001),抑制细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.001)。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖(P<0.001)和迁移(P<0.05),敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示,miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示,过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达,减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达,促进施万细胞的增殖和迁移,抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。

水飞蓟素通过调控miR-124-3p/WEE1轴影响胶质瘤细胞恶性生长的机制研究

目的探讨水飞蓟素(SM)对胶质瘤细胞恶性生长的影响以及对miR-124-3p/WEE1轴的调控机制。方法将胶质瘤U87细胞分为对照组,SM低、中、高浓度组,SM高浓度+miR-124-3p抑制剂组(SM高+miR-124-3p inhibitor组)。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期变化,Western blotting检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白的表达,实时定量PCR检测细胞中miR-124-3p和WEE1 mRNA水平,荧光素酶活性实验验证miR-124-3p和WEE1之间的靶向关系,建立NOD/SCID小鼠颅内移植瘤模型并进行给药和分析。结果与对照组比较,不同浓度SM处理组的细胞增殖活性、迁移和侵袭细胞数、cyclin D1蛋白表达、WEE1 mRNA表达水平降低,G0/G1周期细胞数、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及miR-124-3p表达升高(P<0.05);进一步转染miR-124-3p inhibitor后发现,SM对胶质瘤细胞恶性行为的抑制作用被逆转。小鼠体内实验显示,SM处理组肿瘤的质量和体积均低于模型组(P<0.05),且小鼠体质量无显著变化(P>0.05)。结论SM可通过上调miR-124-3p靶向下调WEE1抑制胶质瘤细胞的恶性生长。

miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

miR-17-5p靶向B7-H3对结直肠癌细胞生物学特性及免疫调节作用的影响

目的:探究miR-17-5p对B7-H3的调控以及在结直肠癌发展中的免疫调节作用。方法:收集25例人结直肠癌组织及相邻正常组织,通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和免疫组化实验分析miR-17-5p、B7-H3和PD-L1的表达水平。将人结直肠癌HCT-116细胞分为4组:miR-NC组、miR-17-5p mimic组、si-NC组、si-B7-H3组。通过细胞集落形成实验、Transwell实验和流式细胞术分析HCT-116细胞生长、侵袭能力和凋亡率。通过荧光素酶报告基因实验分析miR-17-5p对B7-H3的调控作用。通过ELISA实验分析细胞培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α的细胞因子水平。结果:与癌旁组织比较,结直肠癌组织中miR-17-5p表达下降,B7-H3表达升高。miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够降低HCT-116细胞集落形成数量和侵袭数量,促进HCT-116细胞凋亡,并能降低培养液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α水平。此外,miR-17-5p mimic和si-B7-H3能够抑制HCT-116细胞PD-L1表达。结论:miR-17-5p能够靶向抑制B7-H3表达,影响结直肠癌发展中的免疫调节作用,并能抑制结直肠癌细胞的转移,促进结直肠癌细胞凋亡。

miR-1-3p通过调控STC2抑制人食管鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨miR-1-3p对人食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞的恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法利用基因表达数据库(GEO)筛选ESCC中差异表达的miRNA。采用qRT-PCR检测人ESCC细胞KYSE30、KYSE150、KYSE410、KYSE510和Eca109及正常食管上皮细胞HET-1A中miR-1-3p的表达水平。CCK-8试剂盒、划痕愈合和Transwell实验以及流式细胞术分别检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力的影响。使用生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因,Kaplan-Meier法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中STC2表达水平与患者预后的关系。采用FISH检测miR-1-3p的亚细胞定位,双荧光素酶报告基因验证miR-1-3p与STC2的靶向关系。RNA免疫沉淀(RIP)实验检测miR-1-3phe STC2的结合。Western blot法检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞中STC2及内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4表达水平的影响。CCK-8、划痕愈合、Transwell实验和流式细胞术分别检测过表达和敲低STC2对ESCC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果ESCC细胞中miR-1-3p的表达水平均低于HET-1A细胞(均P<0.05),转染miR-1-3p mimic可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.001)。生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因为STC2,ESCC组织中STC2的表达水平高于正常食管上皮组织,与预后呈负相关(均P<0.05)。miR-1-3p位于胞质,并可直接与STC2 mRNA结合。转染miR-1-3p mimic可下调STC2、p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白的表达水平(均P<0.05)。过表达STC2可促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),抑制ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。敲低STC2可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。结论miR-1-3p通过靶向调控STC2抑制ESCC细胞的恶性生物学行为,促进ESCC细胞凋亡,可能是通过抑制内质网应激发挥作用。