重症肺炎肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1的表达及与病情、预后的关系

目的:探讨重症肺炎(SP)肺泡灌洗液微小RNA-127-5p(miR-127-5p)、微小RNA-3686(miR-3686)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)表达及与病情、预后关系。方法:选取2017年3月—2019年8月68例SP患者为观察组,同期68例肺炎患者为对照组。比较两组、观察组不同预后(28 d重症肺炎全因死亡、28 d生存)患者肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686、sTREM-1表达,肺泡灌洗液各指标不同表达(高表达、低表达)SP患者急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)、临床肺部感染(CPIS)评分,应用Pearson相关分析探讨肺泡灌洗液各指标表达与APACHEⅡ、CPIS评分的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及ROC下面积(AUC)探究肺泡灌洗液各指标单一、联合检测对SP重症肺炎全因死亡的预测价值,多元Logistic回归分析SP重症肺炎全因死亡的影响因素。结果:观察组肺泡灌洗液miR-127-5p水平(0.58±0.26)低于对照组(1.23±0.42)(t=10.851,P<0.001),miR-3686水平(1.98±0.46)高于对照组(0.96±0.31)(t=15.163,P<0.001),sTREM-1水平(195.37±48.62)ng/mL高于对照组(26.35±8.20)ng/mL(t=28.268,P<0.001)。肺泡灌洗液miR-127-5p高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均低于低表达患者,肺泡灌洗液miR-3686或sTREM-1高表达SP患者APACHEⅡ、CPIS评分均高于低表达患者(均P<0.05)。肺泡灌洗液miR-127-5p表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈负相关(r=-0.735,P<0.001;r=-0.727,P<0.001),miR-3686表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关(r=0.569,P<0.001;r=0.679,P<0.001),sTREM-1表达与APACHEⅡ、CPIS评分呈正相关(r=0.694,P<0.001;r=0.667,P<0.001)。观察组28 d重症肺炎全因死亡患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达低于生存患者,miR-3686、sTREM-1表达高于生存患者(均P<0.05)。预测SP重症肺炎全因死亡的AUC:miR-127-5p为0.757,miR-3686为0.782,sTREM-1为0.816,miR-127-5p+miR-3686+sTREM-1为0.862(均P<0.05)。肺泡灌洗液miR-127-5p为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要保护因素,肺泡灌洗液miR-3686、sTREM-1为SP 28 d重症肺炎全因死亡的重要危险因素(均P<0.05)。结论:SP患者肺泡灌洗液miR-127-5p表达降低,miR-3686、sTREM-1表达升高,与病情、预后密切相关,检测三者表达能为临床评估患者病情程度、预后情况提供参考。

哌拉西林通过调控miR-127-5p影响重症肺炎大鼠炎症因子的分子机制

目的探讨哌拉西林对重症肺炎大鼠炎症因子的影响及分子机制。方法用肺炎克雷伯菌构建重症肺炎大鼠模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组(50 mg/kg哌拉西林)、中剂量组(100 mg/kg哌拉西林)、高剂量组(200 mg/kg哌拉西林)、anti-miR-con+模型组、anti-miR-127-5p+模型组、anti-miR-con+高剂量组、anti-miR-127-5p+高剂量组。酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β水平;髓过氧化物酶(MPO)活性测定试剂盒检测MPO活性;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-p65蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-127-5p表达水平。结果重症肺炎大鼠模型中炎症因子IL-6、TNF-α、IL-1β水平升高,MPO活性升高,MMP2、MMP9、p-p65蛋白的相对表达水平升高,miR-127-5p相对表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同剂量哌拉西林处理后,重症肺炎大鼠中IL-6、TNF-α、IL-1β水平降低,MPO活性降低,MMP2、MMP9、p-p65蛋白的相对表达水平降低,miR-127-5p相对表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染miR-127-5p抑制载体质粒后,重症肺炎大鼠中IL-6、TNF-α、IL-1β水平升高,MPO活性升高,MMP2、MMP9、p-p65蛋白的相对表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-127-5p表达逆转了哌拉西林对重症肺炎大鼠模型组炎症因子和MMP2、MMP9、p-p65的蛋白表达的影响。结论哌拉西林可降低重症肺炎大鼠炎症因子水平,其可能与上调miR-127-5p表达及抑制NF-κB信号通路有关。

miR-127-5p下调PTEN的表达促进非小细胞肺癌细胞自我更新和侵袭

为探讨miR-127-5p对非小细胞肺癌球形成细胞自我更新和侵袭的影响及机制,通过miR-127-5p模拟物或抑制剂分别转染H358和A549细胞,采用球形成实验检测H358和A549细胞的自我更新能力,transwell小室侵袭实验检测H358和A549细胞的侵袭能力,蛋白质印记检测PTEN和PCNA的表达,荧光素酶报告基因实验验证miR-127-5p的靶点。结果发现H358和A549球形成细胞较亲本细胞高表达miR-127-5p;过表达miR-127-5p促进H358和A549细胞的球形成和侵袭能力,并促进其PCNA的表达;生物信息学分析显示miR-127-5p与PTEN有直接结合位点,包含野生型PTEN 3’-非编码区载体组的荧光素酶活性明显降低;过表达miR-127-5p可明显抑制A549细胞中PTEN的表达。综上,miR-127-5p促进非小细胞肺癌H358和A549细胞系球形成和侵袭能力,其机制可能涉及下调PTEN的表达。

MiR-127-5p通过靶向调节adipoR1促进骨关节炎软骨细胞的增殖

脂联素(adiponection)与骨关节炎(osteoarthritis,OA)的发病密切相关,且主要通过其受体adipoR1发挥作用。而骨关节炎中脂联素的表达是否受miRNA表达的影响却未见报道。本文旨在研究miR-127-5p对骨关节炎软骨细胞中脂联素及细胞增殖的影响。分离培养人原代OA软骨细胞及对应正常细胞,甲苯胺蓝染色和II型胶原免疫细胞化学染色进行鉴定。Real-time PCR结果表明,OA软骨细胞中miR-127-5p的表达与正常软骨细胞中的相比较显著下降。MiR-127-5p转染可显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度(P<0.05),表明adipoR1为miR-127-5p的靶向基因。MiR-127-5p mimic转染软骨细胞后,MTT法研究结果表明,miR-127-5p mimic可显著促进软骨细胞增殖,Western印迹结果表明,脂联素及其受体(adipoR1)表达显著上升,p65的表达以及p38、ERK1/2以及Ik Bα的磷酸化水平显著下降。ELISA结果表明,MMP-1、MMP-3、MMP-13的含量显著下降。实验结果提示,miR-127-5p通过靶向下调adipoR1及脂联素的表达,促进软骨细胞增殖,并且抑制NF-κB信号通路,进而抑制炎性反应。

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。

杜仲调控miR-127-5p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子的影响

目的探讨杜仲对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、炎症因子的影响及其对miR-127-5p的调控作用。方法采用白细胞介素(IL)-1β诱导骨关节炎软骨细胞(HC)-OA建立细胞损伤模型,常规培养的HC-OA细胞标记为Con组,加入不同浓度(0.01、0.10、1.00 mg/mL)杜仲处理细胞,设为IL-1β+杜仲低剂量组、IL-1β+杜仲中剂量组、IL-1β+杜仲高剂量组。anti-miR-NC、miR-127-5p inhibitor转染至HC-OA细胞后加入1 mg/ml杜仲处理细胞,设为杜仲高剂量+anti-miR-NC组、杜仲高剂量+miR-127-5p组,单独IL-1β处理的细胞设为IL-1β组,噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖、细胞周期及胞凋亡率;实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-127-5p的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IL-6、IL-1β的水平。结果与IL-1β组相比,IL-1β+杜仲中剂量组、IL-1β+杜仲高剂量组细胞增殖抑制率、凋亡率及miR-127-5p表达增高,IL-6、IL-1β水平下降,细胞周期阻滞于G0-G1期,差异均有统计学意义(P<0.05);与杜仲高剂量+anti-miR-NC组比较,杜仲高剂量+miR-127-5p inhibitor组细胞增殖抑制率及凋亡率降低,G0-G1期细胞比例降低(P<0.05),S期细胞比例升高,IL-6、IL-1β的水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论杜仲通过上调miR-127-5p的表达而抑制骨关节炎软骨细胞增殖、炎症反应,并可诱导细胞周期阻滞于G0-G1期及促进细胞凋亡。

miR-127-5p对结直肠癌细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨miR-127-5p对结直肠癌细胞增殖的影响及其特异性的作用机制。方法用PCR法检测miR-127-5p在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株中的表达,转染miR-127-5p mimic后采用CCK-8检测结直肠癌细胞株增殖能力,通过生物信息学数据库miRBase预测miR-127-5p的靶基因,转染pcDNA-NEK1后采用CCK-8法检测结直肠癌细胞株增殖能力,蛋白免疫印迹检测鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)蛋白表达,观察过表达miR-127-5p对KRAS蛋白表达的影响。结果miR-127-5p在结直肠癌组织和细胞的表达水平低于癌旁组织和正常结直肠黏膜细胞,过表达miR-127-5p可抑制结直肠癌细胞增殖,NEK1是miR-127-5p的靶基因,过表达NEK1可促进结直肠癌细胞增殖,KRAS蛋白可与NEK1相互作用,过表达NEK1可促进KRAS蛋白的表达,但是过表达miR-127-5p则可抑制KRAS蛋白的表达。结论miR-127-5p通过靶向NEK1调控KRAS抑制结直肠癌细胞增殖,可作为结直肠癌患者潜在治疗靶点。

circ_0000285靶向miR-127-5p调控阿尔茨海默病细胞模型的损伤

目的:探讨环状RNA 0000285(circ_0000285)是否靶向miR-127-5p调控阿尔茨海默病(AD)细胞模型损伤。方法:采用β淀粉样蛋白25-35多肽片段(Aβ25-35)诱导神经细胞瘤细胞SK-N-SH建立AD体外细胞模型。采用实时定量PCR(RT-qPCR)测定circ_0000285和miR-127-5p表达水平。试剂盒测定丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达水平。采用上述方法测定干扰circ_0000285表达或过表达miR-127-5p对AD模型细胞凋亡、损伤的影响。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR用于验证circ_0000285对miR-127-5p的靶向调控作用。结果:Aβ25-35处理显著上调circ_0000285表达及Bax蛋白水平,下调miR-127-5p及Bcl-2蛋白表达水平,增加MDA含量,降低SOD和GSH-Px活性,并提高细胞凋亡率。干扰circ_0000285表达或过表达miR-127-5p可显著下调Bax蛋白水平,上调Bcl-2蛋白表达水平,降低MDA含量,增加SOD和GSHPx活性,并降低细胞凋亡率。circ_0000285靶向负调控miR-127-5p表达。抑制miR-127-5p表达显著减弱了干扰circ_0000285表达对模型细胞凋亡、损伤的影响。结论:干扰circ_0000285表达可通过靶向miR-127-5p减弱Aβ25-35诱导的SK-N-SH细胞损伤。因此,circ_0000285/miR-127-5p途径可能是AD的潜在治疗靶点。

白及多糖通过circ_0006168/miR-127-5p对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨白及多糖对肝癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法不同剂量的白及多糖处理人肝癌细胞HCC9204,实验分组:白及多糖0、50、100、200μg/mL组、si-NC组、si-circ_0006168组、白及多糖+pcDNA组、白及多糖+pcDNA-circ_0006168组;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及凋亡;qRT-PCR法检测circ_0006168、miR-127-5p的表达量;双荧光素酶报告实验检测circ_0006168与miR-127-5p的靶向关系。结果与白及多糖0μg/mL组比较,50、100、200μg/mL组细胞增殖抑制率和细胞凋亡率升高(P<0.05),miR-127-5p的表达量升高(P<0.05),克隆形成数和迁移细胞数减少(P<0.05),circ_0006168的表达量降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;circ_0006168可靶向调控miR-127-5p的表达;与si-NC组比较,si-circ_0006168组miR-127-5p的表达量升高(P<0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P<0.05),克隆形成数和迁移细胞数减少(P<0.05);与白及多糖+pcDNA组比较,白及多糖+pcDNA-circ_0006168组miR-127-5p的表达量降低(P<0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率降低(P<0.05),克隆形成数和迁移细胞数增多(P<0.05)。结论白及多糖可通过调控circ_0006168/miR-127-5p表达而抑制肝癌细胞增殖、克隆形成及迁移,并可诱导细胞凋亡。

miR-127-5p对大鼠视网膜Müller细胞增殖能力影响的实验研究

目的探讨miR-127-5p对大鼠视网膜Müller细胞增殖能力的影响。方法将大鼠视网膜Müller细胞分为实验组和阴性对照组,其中实验组转染miR-127-5p模拟物miR-127-5p mimics(分为10、30、100μM 3种浓度),阴性对照组转染miR-127-5p阴性对照剂miR-127-5p-NC。采用CCK-8法检测两组Müller细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测两组Müller细胞的侵袭能力;Transwell迁移实验检测两组Müller细胞的迁移能力;流式细胞术检测两组Müller细胞的凋亡率。结果与阴性对照组相比,转染10、30、100μM miR-127-5p mimics实验组中Müller细胞吸光度(OD)值均明显降低(均P<0.05),但3种浓度组间OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);实验组细胞侵袭、迁移数目均较阴性对照组明显减少(均P<0.05);实验组细胞凋亡率明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论 miR-127-5p表达水平升高可以抑制大鼠视网膜Müller细胞增殖、侵袭和迁移能力,并促进视网膜Müller细胞的凋亡。

利奈唑胺联合美罗培南治疗重症肺炎疗效观察及对患者肺泡灌洗液中miR-127-5p、miR-3686表达的影响

目的:观察利奈唑胺联合美罗培南治疗重症肺炎的疗效及对患者肺泡灌洗液中miR-127-5p、miR-3686表达的影响。方法:重症肺炎患者102例随机分为联合组和对照组各51例。两组均给予常规治疗,对照组同时给予美罗培南,联合组在对照组基础上再加用利奈唑胺,均治疗2周。观察两组疗效和临床症状、体征改善时间、药品不良反应;比较两组患者治疗前后血气指标[动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、动脉血氧分压(PaO2)、血氧饱和度(SaO2)]、肺功能指标[最大呼气中段流量(MMF)、峰流速(PEF)、最大呼气压(PEmax)、最大吸气压(PImax)]、血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)]水平以及肺泡灌洗液中miR-127-5p、miR-3686水平的变化。结果:联合组总有效率为94.12%,高于对照组的76.47%(P<0.05),联合组患者退热时间、痰液颜色改变时间、肺部炎症吸收>50%时间等均短于对照组(P<0.01);治疗后,两组PaCO2、血清TNF-α、PCT、CRP水平以及肺泡灌洗液中miR-3686水平较治疗前明显下降,PaO2、SaO2、MMF、PEF、PEmax、PImax水平以及肺泡灌洗液中miR-127-5p水平则较治疗前明显提高(P<0.05),且联合组上述各项指标均优于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:利奈唑胺联合美罗培南治疗重症肺炎可较快缓解临床症状、体征,改善血气情况与肺功能,减轻炎症反应,调节肺泡灌洗液miR-127-5p、miR-3686表达,提高疗效,且安全性较好。

真武汤介导lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴抑制慢性心力衰竭进程的机制研究

目的:探讨真武汤通过lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴抑制慢性心力衰竭(CHF)进程的机制。方法:将雄性SD大鼠分为对照组、模型组、阳性对照组和真武汤低、中、高剂量组,每组各10只。除对照组外,其余各组采用腹腔注射阿霉素的方法建立CHF模型,阳性对照组给予美托洛尔灌胃,真武汤低、中、高剂量组给予真武汤(生药含量6、12、18 g/kg)灌胃。检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS),血清脑钠肽(BNP)水平,心脏体重比,心肌病理改变,心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及lncRNA NEAT1、miR-31-5p、IGFBP7表达水平。培养大鼠心肌H9c2细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA NEAT1靶向miR-31-5p、miR-31-5p靶向IGFBP7。结果:与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的LVEF、LVFS增加,血清BNP水平降低(P<0.05);与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的心肌TNF-α、IL-1β、MDA水平降低,SOD水平增加(P<0.05);与模型组比较,真武汤低、中、高剂量组的心肌lncRNA NEAT1、IGFBP7表达降低,miR-31-5p表达增加(P<0.05)。H9c2心肌细胞中,lncRNA NEAT1靶向miR-31-5p、miR-31-5p靶向IGFBP7。结论:真武汤可能通过lncRNA NEAT1/miR-31-5p/IGFBP7分子轴改善CHF大鼠心功能并减轻炎症反应、氧化应激反应。

miR-192-5p在增生性瘢痕组织及成纤维细胞中的表达及调控

背景:研究表明,miRNAs的表达与肝纤维化、肾纤维化及皮肤纤维化发生有关;并证实在痛风性关节炎中miR-192-5p与表皮调节素存在靶向调控关系。目的:探讨miR-192-5p在增生性瘢痕中的表达及调控作用,并验证miR-192-5p与表皮调节素之间存在靶向调控关系。方法:①在新疆医科大学第一附属医院收集6例增生性瘢痕组织及6例正常皮肤组织,采用qRT-PCR法检测miR-192-5p与表皮调节素mRNA表达。②组织块法获取原代增生性瘢痕成纤维细胞,传代培养至3-6代用于后续实验,实验分为3个组:阴性对照组、miR-192-5p模拟物组和miR-192-5p抑制物组,分别转染对应的序列。采用CCK-8法和EdU试剂盒检测细胞增殖活力,划痕实验检测细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR和Western blot法检测表皮调节素、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-SMA的基因和蛋白表达,生物信息学网站预测miR-192-5p靶点,双荧光素酶实验验证靶向结合。结果与结论:①与正常皮肤组织及其成纤维细胞相比,miR-192-5p和表皮调节素在增生性瘢痕和增生性瘢痕成纤维细胞中均呈高表达(P<0.05或P<0.01);②过表达miR-192-5p后,与阴性对照组比较,细胞增殖能力增强(P<0.05),EdU阳性细胞率增加(P<0.01);抑制miR-192-5p后细胞活力降低(P<0.05),EdU阳性细胞率减少(P<0.05);③过表达miR-192-5p 24 h后,与阴性对照组比较,模拟物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率减小(P<0.05),miR-192-5p抑制物组细胞划痕间面积、细胞凋亡率增加(P<0.01);④转染48 h后,miR-192-5p模拟物组表皮调节素mRNA及蛋白水平显著降低、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白mRNA及蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01);miR-192-5p抑制物组上述4项指标呈现相反的变化(P<0.05或P<0.01);⑤Targetscan网站预测表皮调节素与miR-192-5p有潜在结合位点;⑥双荧光素酶实验显示,miR-192-5p能够与表皮调节素靶向结合。结果说明:miR-192-5p过表达可降低表皮调节素的表达,二者可能存在负向调控;提示通过调控表皮调节素可能起到抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

HR-MRI联合miR-433-5p及D-二聚体对缺血性脑卒中预后的预测价值

目的 探讨高分辨磁共振血管壁成像(HR-MRI)联合miR-433-5p及D-二聚体对缺血性脑卒中预后的预测价值。方法 选取缺血性脑卒中患者(A组,80例)、大脑中动脉粥样硬化非卒中患者(B组,40例)为研究对象,行HR-MRI检查,评价薄纤维帽、斑块强化,记录血管面积、管腔面积、管壁面积、血管最狭窄处,以及参考层面的血管面积、管腔面积,计算得到斑块负荷、斑块面积、管腔狭窄率、重构指数、标准化管壁指数。qPCR检测血清miR-433-5p表达水平,免疫比浊法测定D-二聚体浓度。根据随访情况,将mRS≤2分的患者纳入预后良好组,mRS>2分的患者纳入预后不良组。结果 A组患者薄纤维帽比例(P<0.001)、斑块强化比例(P<0.001)、斑块负荷比例(P<0.01)、管腔狭窄率(P<0.01)明显高于B组。A组患者血清miR-433-5p表达水平(0.28±0.07)明显低于B组(P<0.001),D-二聚体浓度(2.35±0.79)mg/L明显高于B组(P<0.01)。预后不良组患者薄纤维帽比例、斑块强化比例及斑块负荷比例、管腔狭窄率明显高于预后良好组(P<0.05)。预后不良组缺血性脑卒中患者血清miR-433-5p表达水平明显低于预后良好组(P<0.001),D-二聚体浓度(2.94±1.03)mg/L明显高于预后良好组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,薄纤维帽、斑块强化、斑块负荷、管腔狭窄率、miR-433-5p、D-二聚体联用对缺血性脑卒中患者预后的预测价值最高(AUC=0.962),其次为miR-433-5p(AUC=0.864)、斑块强化(AUC=0.835)、管腔狭窄率(AUC=0.802)、薄纤维帽(AUC=0.793)、D-二聚体(AUC=0.778)、斑块负荷(AUC=0.741)。结论 HR-MRI参数薄纤维帽、斑块强化、斑块负荷、管腔狭窄率及miR-433-5p、D-二聚体与缺血性脑卒中预后相关,联用对预后具有较高的预测价值。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

安罗替尼通过调控miR-16-5p/PD-1轴抑制人非小细胞肺癌细胞系增殖并促进凋亡

目的 探讨安罗替尼对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法 将非小细胞肺癌细胞系A549和H1299分别采用安罗替尼、miR-16-5p激动剂和/或PD-1过表达载体进行处理。CCK-8实验和EDU实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-16-5p相对表达量;Western blot检测程序性细胞死亡-1蛋白(PD-1)的表达。双荧光素酶报告实验确定miR-16-5p和PD-1的靶向关系。用A549细胞构建裸鼠成瘤模型,检测安罗替尼对体内肿瘤生长的影响。结果 安罗替尼在A549和H1299细胞中以剂量依赖的方式显著增加miR-16-5p表达,同时降低PD-1表达,并且抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p过表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-16-5p能靶向PD-1,且负调控PD-1表达。siRNA下调PD-1表达后明显抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡(P<0.05)。过表达PD-1则可逆转安罗替尼介导的miR-16-5p对A549和H1299细胞的促增殖和抗凋亡作用(P<0.05)。体内实验证实,安罗替尼能够明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。结论 安罗替尼可有效抑制非小细胞肺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,减少体内肿瘤生长,其作用机制与miR-16-5p/PD-1信号轴相关。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。