黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响

目的黄芩总黄酮对支气管哮喘大鼠的治疗作用及miR-133a-3p/NOX4/NLRP3信号轴表达的影响。方法清洁级SD大鼠100只分为正常对照组、模型组、地塞米松组(200 mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(100 mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(200 mg/kg),每组20只。除正常对照组外,模型组、地塞米松组、黄芩总黄酮低高剂量组通过卵清蛋白(OVA)建立支气管哮喘模型,并予以相应药物干预。实验结束后,检测肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数,以及肺/体比值、肺损伤评分、动脉血氧分压(PaO_(2))水平;反逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹法检测肺支气管组织微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)、NADPH氧化酶4(NOX4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)水平。结果与正常对照组比较,模型组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、黄芩总黄酮低剂量组和黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平降低,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,黄芩总黄酮低剂量组、黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,以及支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与黄芩总黄酮低剂量组比较,黄芩总黄酮高剂量组肺泡灌洗液淋巴细胞百分比、中性粒细胞百分比、白细胞计数、肺/体比值、肺损伤评分,支气管组织中NOX4、NLRP3蛋白和mRNA表达水平升高,PaO_(2)水平、支气管组织中miR-133a-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芩总黄酮对大鼠支气管哮喘具有明显治疗作用,其机制可能与黄芩总黄酮促进miR-133a-3p的表达进而抑制NOX4/NLRP3信号轴的激活相关。

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的:检测mi R-133a-3p在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法:收集河北医科大学第四医院普外科2012年5月至2013年5月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)法检测mi R-133a-3p在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆(35例)的表达情况,分析mi R-133a-3p的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8法检测过表达或沉默mi R-133a-3p对胃癌SGC7901细胞增殖的影响。结果:mi R-133a-3p在胃癌组织中的表达明显降低(P<0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度(T)、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P<0.01);在胃癌患者血浆中的表达明显升高(P<0.01),其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移(N)及脉管瘤栓相关(P<0.05);与患者血清中CA199的表达水平正相关(P<0.01)。胃癌组织中mi R-133a-3p高表达组患者中位DFS明显高于低表达组(20.8 vs 14.8个月,P<0.05)。血浆中mi R-133a-3p的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组(14.4 vs 20.3个月,P<0.05)。过表达mi R-133a-3p可明显抑制SGC7901细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701细胞的增殖能力(均P<0.05)。结论:mi R-133a-3p可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。

持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p和miR-324-3p表达与射频消融术后房颤复发的关系

目的探讨血清miR-133a-3p、miR-324-3p在持续性心房颤动患者血清中的表达以及与射频消融术后房颤复发的关系。方法收集2019年7月~2022年7月于沧州市人民医院住院诊治并接受射频消融术治疗的180例持续性心房颤动患者(持续性心房颤动组)作为研究对象,根据房颤是否复发,分为无复发组(n=116)和复发组(n=64),另选取同期在该院体检的180例健康人作为对照组。比较各组血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达水平;多因素Logistic回归分析持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的影响因素;ROC曲线分析血清miR-133a-3p,miR-324-3p水平对持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的预测价值。结果持续性心房颤动组血清miR-133a-3p(0.76±0.25),miR-324-3p(0.68±0.21)水平显著低于对照组(1.03±0.32,1.05±0.30),差异具有统计学意义(t=8.921,13.556,均P<0.05)。复发组血清miR-133a-3p(0.58±0.19),miR-324-3p水平(0.50±0.16)均显著低于无复发组(0.86±0.27,0.78±0.25),差异具有统计学意义(t=7.349,8.087,均P<0.055)。多因素Logistic回归分析,结果显示,血清miR-133a-3p[OR(95%CI):0.673(0.534~0.848)],miR-324-3p[OR(95%CI):0.756(0.629~0.909)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的保护因素(均P<0.05),心率[OR(95%CI):2.143(1.265~3.631)]、LAD[OR(95%CI):1.756(1.159~2.661)]为持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的独立危险因素(均P<0.05)。miR-133a-3p,miR-324-3p二者联合预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发的AUC为0.901,敏感度和特异度分别为82.81%,86.21%,优于各自单独预测(Z=4.210,2.804,均P<0.05)。结论持续性心房颤动患者血清miR-133a-3p,miR-324-3p表达显著降低,二者联合对预测持续性心房颤动患者射频消融术后房颤复发有较好的参考价值。

寻常性银屑病患者血清miR-133a-3p和PTPN22水平表达与疾病严重程度的相关性分析

目的探究寻常性银屑病患者血清微小RNA(microRNA,miR)-133a-3p,蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(protein tyrosine phosphatase non-receptor type 22,PTPN22)水平表达与疾病严重程度的相关性。方法收集沧州市人民医院2022年1~6月收治的寻常性银屑病患者86例作为观察组,根据皮损面积和严重程度将其分为进展期组(n=41)和静止期组(n=45),同期选取整形外科体检健康者86例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测患者血清miR-133a-3p和PTPN22相对表达水平;Target Scan Human网站预测PTPN22与miR-133a-3p的靶向关系;运用Spearman法分析寻常性银屑病患者血清miR-133a-3p,PTPN22表达水平与银屑病皮损面积及严重程度指数(the psoriasis area and severity index score,PASI)评分的相关性;行Logistic回归分析寻常性银屑病患者严重度的影响因素。结果与对照组相比,观察组血清miR-133a-3p(1.85±0.46 vs 1.05±0.21)表达水平明显升高,PTPN22 mRNA(0.76±0.13 vs 1.02±0.18)表达水平明显降低,差异具有统计学意义(t=14.671,10.859,均P<0.05);与静止期组比较,进展期组血清miR-133a-3p(2.05±0.52 vs 1.67±0.41)表达水平明显升高,PTPN22 mRNA(0.66±0.11 vs 0.85±0.15)表达水平明显降低,差异具有统计学意义(t=3.780,6.643,均P<0.05)。Target Scan Human网站预测,miR-133a-3p与PTPN22可能存在靶向关系。Spearman分析显示,寻常性银屑病患者血清miR-133a-3p与PASI评分呈正相关性(r=0.469,P<0.05),而血清PTPN22 mRNA水平与PASI评分呈负相关性(r=-0.508,P<0.05);血清miR-133a-3p[OR(95%CI)=2.884(1.261~6.595)]是寻常性银屑病患者严重度的独立危险因素,而PTPN22[OR(95%CI)=0.562(0.367~0.860)]是独立保护因素(均P<0.05)。结论寻常性银屑病患者血清miR-133a-3p表达水平明显升高,PTPN22表达水平明显降低,两者与PASI评分紧密相关,且在一定程度上可反映银屑病患者的严重程度。

胃癌组织中miR-133a-3p、miR-4317的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中微小RNA(miR)-133a-3p和miR-4317表达情况,并探究二者的临床意义。方法收集60例胃癌患者的癌组织及其相对应的癌旁组织,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)技术检测组织样品中miR-133a-3p和miR-4317表达水平,同时分析miR-133a-3p和miR-4317表达与患者临床特征之间的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-133a-3p和miR-4317表达与患者预后的关系。结果RTqPCR试验结果显示,胃癌组织中miR-133a-3p、miR-4317相对表达量均低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织中miR-133a-3p表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);miR-4317表达水平与淋巴结转移、远处转移及肿瘤TNM分期有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-133a-3p高表达胃癌患者的5年生存率高于低表达者,术后生存时间长于低表达者(P<0.05);miR-4317低表达胃癌患者的5年生存率低于高表达者,术后生存时间短于高表达者(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-133a-3p和miR-4317均表现为低表达,二者有可能作为胃癌预测和预后判定的潜在标志物,为胃癌患者的预测和预后判定提供一定的参考价值。

MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系

目的:探讨MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系。方法:收集2018年1月至2019年4月在甘肃省肿瘤医院住院的乳腺癌患者的乳腺癌组织,采用实时定量PCR检测乳腺癌组织中MiR-133a-3p的表达水平。结果:MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达水平明显低于非癌组织中的表达水平(P<0.05);MiR-133a-3p表达水平与患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05),但与淋巴结是否转移、TNM分级、ER阴阳性以及PR阴阳性具有显著负相关(P<0.05)。结论:MiR-133a-3p可以作为乳腺癌早期预测、转移以及预后评估的潜在标志物,为乳腺癌的治疗提供新的思路和研究依据。

miR-133a-3p高表达对ZIKV复制的影响及其潜在机制

目的探究寨卡病毒(ZIKV)感染A549细胞后诱导的小分子非编码RNA-133a-3p(miR-133a-3p)对ZIKV复制的影响及其潜在机制。方法在1×10^5/mL腺癌人类肺泡基底上皮细胞系A549中感染ZIKV,感染复数(MOI)为0.5,感染后在不同时间点收取RNA样品,以荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-133a-3p相对表达变化;同时在1×10^5/mL的A549中,转染3μL的miR-133a-3p模拟物(miR-133a-3p mimic)使miR-133a-3p高表达,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,感染后48 h收取细胞RNA或蛋白样品,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blots)检测ZIKV的RNA的复制水平及宿主抗病毒先天免疫相关基因表达水平;将1μg含干扰素刺激应答元件(ISRE)的萤火虫荧光报告质粒(ISRE-luc)和50 ng海肾荧光报告质粒(pRL-TK)与3μL的miR-133a-3p共转入1×10^5/mL的A549中,转染后24 h,接种MOI=0.5的ZIKV或用终浓度为100μg/L的polyⅠ∶C处理细胞,在处理48 h后通过双荧光报告实验检测含ISRE序列的萤火虫荧光蛋白表达情况。结果ZIKV感染可影响A549细胞内miR-133a-3p表达,相对于0 h,在8、16、24、36、48和72 h,miR-133a-3p值分别为:0.45±0.048、0.4±0.084、0.52±0.004、0.82±0.229、1.41±0.167、2.86±0.219;miR-133a-3p过表达使miR-133a-3p mimic组的ZIKV NS5 RNA相对于mimic control组值为:0.3355±0.031,使IFN-α/β、ISG15、IFIT1(按图A→H的顺序)相对值为:3.46±1.10^5、1.329±0.198、2.723±0.966、1.48±0.0595、3.3±0.4、2.83±0.442、5.79±0.277、1.98±0.362、5.96±0.796、5.94±1.007、7.07±0.1115、5.96±0.7957、5.96±0.796、7.16±0.42、2.2±0.491、1.92±0.189。结论ZIKV感染A549细胞影响miR-133a-3p表达;miR-133a-3p过表达抑制ZIKV复制并激活Jak/STAT信号通路。

LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β1/Smads轴促进骨髓间充质干细胞成骨分化的作用机制

目的 探究LncRNA MEG3调控miR-133a-3p/TGF-β_(1)/Smads信号轴对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell, hBMSC)成骨分化中的影响。方法 通过构建慢病毒载体及慢病毒包装,将含有目的基因的慢病毒感染细胞。将hBMSC分为Control组、NC组、MEG3、sh-MEG3、MEG3+miR-133a-3p sponge及MEG3+miR-133a-3p组,成骨诱导后,采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色和茜素红染色检测ALP活性及钙盐沉积,qRT-PCR检测各组细胞中MEG3、miR-133a-3p、TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA表达水平,Western blot检测TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN蛋白表达量。结果 与NC组比较,MEG3组的ALP活性及茜素红钙盐沉积明显减弱,MEG3 mRNA上调,miR-133a-3p mRNA表达显著升高,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);sh-MEG3组的ALP活性及茜素红钙盐沉积明显增强,MEG3 mRNA下调,miR-133a-3p mRNA表达显著降低,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。与MEG3组比较,MEG3+miR-133a-3p sponge组ALP活性及茜素红钙盐沉积明显增强,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著升高(P均<0.05);MEG3+miR-133a-3p组ALP活性及茜素红钙盐沉积明显减弱,TGF-β_(1)、TGF-βR1、smad2、smad3、smad4、Runx2及OPN mRNA和蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。结论 LncRNA MEG3可能通过调控miR-133a-3p/TGF-β_(1)/Smads信号轴促进hBMSC成骨分化。

miR-133a-3p通过抑制氧化还原因子1抑制肝癌细胞恶性生物学行为

目的:通过多种实验途径探讨miR-133a-3p通过调节氧化还原因子1(Ref-1)对肝癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:收集2017年2月~2018年12月来本院就诊的肝癌手术患者的癌组织和癌旁相邻正常组织标本,用qRT-PCR检测miR-133a-3p在癌组织和癌旁相邻正常组织中以及在肝癌细胞系HepG2、Huh-7、SK-Hep1、SMMC-7721和肝正常细胞Hep-3B中的表达;构建miR-133a-3p-mimics(miR-mimics)组、miR-NC转染质粒组和正常对照组(Control),qRT-PCR检测转染前后miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验检测HepG2细胞转染前后增殖能力变化;细胞划痕和Transwell实验分别检测转染前后HepG2细胞的迁移和侵袭能力变化;RNA转录组测序检测HepG2细胞转染前后转录组RNA表达差异并作通路富集分析;qRT-PCR检测筛选RNA-seq中RNA表达差异较大的基因;qRT-PCR和Western blot检测Ref-1在HepG2细胞转染前后中的表达。免疫组化和qRT-PCR分别检测Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中表达;最后HepG2细胞同时转染了miR-mimics和Ref-1 miR-inhibitors,进行联合干预,随后CCK-8、细胞划痕和Transwell分别检测了联合干预后细胞增殖、迁移和侵袭能力变化。结果:miR-133a-3p在肝癌患者癌组织中的表达显著低于癌旁组织,同时其在肝癌细胞HepG2中的表达最低;qRT-PCR结果表明miR-mimics可有效促进miR-133a-3p在HepG2中的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示miR-133a-3p过表达后可以显著抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为;RNA-seq结果显示HepG2转染前后Ref-1的表达差异最大;qRT-PCR和Western blot结果显示HepG2转染成功后,Ref-1表达随miR-133a-3p的过表达而降低。免疫组化和qRT-PCR结果显示Ref-1在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达均显著高于阴性对照组;联合干预后HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学抑制作用更加强烈。结论:miR-133a-3p可能通过抑制Ref-1表达从而抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。

超声造影联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值

目的探究超声造影(CEUS)联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法选取45例HCC患者及45例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采集患者血液标本,分离血清,采用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测患者血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达量。同时为患者进行CEUS,评估其诊断价值。另外绘制受试者工作曲线(ROC)、进行COX多因素分析评估CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值。结果HCC组始消时间、持续时间、达峰时间及始增时间均低于对照组(P<0.05);绘制CEUS各项指标诊断HCC的ROC曲线显示,单独检测时始增时间的敏感度最高,始消时间、持续时间的特异度最高,联合检测的AUC为0.978,特异度及敏感度均处于较高水平。HCC组血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达水平均明显低于对照组;绘制血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线,单独检测时,miR-133a-3p的敏感度最高,miR-122-5p的特异度最高,两者联合检测具有较高的敏感度及特异度。CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线显示,AUC为0.999,截断值为0.712,敏感度、特异度分别为97.78%,99.99%,约登指数为0.9778,95%CI为0.958~1.000。行多因素COX分析显示,始消时间、达峰时间、始增时间、血清miR-122-5p、miR-133a-3p均为影响HCC诊断的因素(P<0.05)。结论CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌具有较高的诊断价值。

FGD5-AS1调控miR-133a-3p对脓毒症血管内皮细胞的细胞活性、凋亡及炎症因子表达的影响

目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(LncRNA FGD5-AS1)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及其分子机制。方法:原代培养大鼠血管内皮细胞,10 mg/ml LPS处理细胞24 h构建脓毒症模型。采用qRT-PCR检测FGD5-AS1与微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)的表达水平。分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-FGD5-AS、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-NC、pcDNA3.1-FGD5-AS1与miR-133a-3p转染至血管内皮细胞。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告实验验证FGD5-AS1与miR-133a-3p的相互作用;Western blot检测P21、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达量。结果:与control组相比,LPS组血管内皮细胞中FGD5-AS1的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),miR-133a-3p的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著升高(P<0.05);与LPS+pcDNA3.1组相比,LPS+pcDNA3.1-FGD5-AS组血管内皮细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),P21、Caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-1、IL-6水平显著降低(P<0.05);miR-133a-3p过表达可抑制野生型质粒WT-FGD5-AS1细胞的荧光素酶活性,且FGD5-AS1可负向调控miR-133a-3p的表达(P<0.05);miR-133a-3p过表达可逆转FGD5-AS1过表达对LPS诱导的血管内皮细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响。结论:LncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-133a-3p抑制LPS诱导的血管内皮细胞凋亡及炎症反应,促进细胞存活。

lncRNA MIR155HG通过调控miR-133a-3p/Furin轴对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成的影响

目的探讨长链非编码RNA MIR155宿主基因(lncRNA MIR155HG)对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成的影响及分子机制。方法构建小鼠心肌梗死模型。分离心肌成纤维细胞,然后分为沉默对照组、沉默MIR155HG组、沉默MIR155HG和抑制物对照组、沉默MIR155HG和干扰miR-133a-3p组、沉默MIR155HG和过表达弗林蛋白(Furin)组。实时荧光定量PCR检测MIR155HG、miR-133a-3p和Furin表达水平;MTT法检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移;Western blot检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、血管内皮生长因子(VEGF)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;荧光素酶报告实验检测MIR155HG和miR-133a-3p以及miR-133a-3p和Furin的靶向关系。结果在心肌梗死模型小鼠心脏组织中MIR155HG、Furin高表达,miR-133a-3p低表达(P<0.05)。抑制MIR155HG表达后心肌成纤维细胞的细胞活力、迁移细胞数及Cyclin D1、VEGF、Col-1、α-SMA表达水平显著降低,P21表达水平显著升高(P<0.05)。MIR155HG靶向调控miR-133a-3p,miR-133a-3p靶向调控Furin。抑制miR-133a-3p表达和过表达Furin逆转了抑制MIR155HG表达对心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成相关蛋白的抑制作用。结论抑制MIR155HG表达可抑制心肌成纤维细胞增殖、迁移、分化和胶原合成,其机制可能与调节miR-133a-3p/Furin轴有关。

胃癌组织miR-1236-3p、miR-133a-3p与临床病理特征的关系及预后影响因素分析

目的探究胃癌患者微小RNA(miR)-1236-3p、miR-133a-3p的表达与临床病理特征及预后的关系,并分析胃癌患者预后的影响因素。方法收集2012年1月至2014年8月入住我院的115例胃癌患者的手术组织样本,分别取患者的癌组织及癌旁正常组织,采用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测两种组织中miR-1236-3p、miR-133a-3p的表达水平;分析胃癌患者miR-1236-3p、miR-133a-3p的表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线评估miR-1236-3p、miR-133a-3p的表达对患者术后总生存率的影响,应用Cox回归模型分析胃癌患者预后的影响因素。结果RT-PCR实验结果显示,胃癌患者癌组织中miR-1236-3p相对表达量为0.684±0.327,低于癌旁正常组织的1.519±0.404,(P<0.05);癌组织中miR-133a-3p相对表达量为0.512±0.232,低于癌旁正常组织的1.493±0.374,(P<0.05)。胃癌组织中miR-1236-3p的表达与肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05);miR-133a-3p的表达与肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线结果表明,miR-1236-3p低表达组、miR-133a-3p低表达组患者术后5年总生存率均分别低于miR-1236-3p高表达组、miR-133a-3p高表达组(均P<0.05)。Cox回归模型发现,淋巴结转移、TNM分期、miR-1236-3p低表达、miR-133a-3p低表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05)。结论胃癌组织中miR-1236-3p、miR-133a-3p水平降低,监测患者术后组织样本中miR-1236-3p、miR-133a-3p的水平有利于患者预后的判断。

miR-133a-3p靶向调控CD2AP基因减轻RSV感染的人支气管上皮细胞系16-HBE损伤

目的探讨miR-133a-3p对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的支气管上皮细胞凋亡、炎性反应的影响及其对CD2相关蛋白(CD2AP)的调控作用。方法收集59例支气管哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为AsP组,同时选取59例支气管扩张非哮喘儿童的支气管黏膜组织标本为NC组,用RT-qPCR法检测组织中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;RSV感染支气管上皮细胞(16-HBE)建立细胞损伤模型(RSV组),分别将miR-NC、miR-133a-3p mimics、si-NC、si-CD2AP、pcDNA-NC、pcDNA-CD2AP、miR-133a-3p mimics与pcDNA-NC、miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP转染至感染RSV的16-HBE细胞;用RT-qPCR法与Western blot法分别检测细胞中miR-133a-3p、CD2AP的表达量;用ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α的水平;用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与CD2AP的靶向关系;Western blot法检测cleaved-caspase-3蛋白表达量。结果与NC组比较,AsP组支气管黏膜组织中miR-133a-3p的表达水平降低(P<0.05),CD2AP mRNA的表达水平升高(P<0.05);RSV感染的16-HBE细胞中miR-133a-3p的表达水平降低(P<0.05),CD2AP的表达水平及TNF-α、IL-6、IL-1α的水平升高(P<0.05),凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平升高(P<0.05);RSV感染的16-HBE细胞中转染miR-133a-3p mimics或转染si-CD2AP可明显降低TNF-α、IL-6、IL-1α的水平、凋亡率及cleaved-caspase-3蛋白水平(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实CD2AP是miR-133a-3p的靶基因;共转染miR-133a-3p mimics与pcDNA-CD2AP可明显逆转miR-133a-3p mimics对16-HBE细胞凋亡及炎性反应。结论miR-133a-3p过表达可通过负向调控CD2AP的表达而抑制RSV感染的支气管上皮细胞炎性反应及凋亡,从而减轻细胞损伤。

异丙酚通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞增殖、迁移及凋亡

目的:探讨异丙酚是否通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路影响胃癌细胞的增殖、迁移及凋亡。方法:将胃癌MKN-28细胞系分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、异丙酚组、miR-NC组、miR-133a-3p mimics组、anti-miR-NC组、anti-miR-133a-3p组、si-NC组、si-FTL组、异丙酚+anti-miR-NC+si-NC组、PBS+anti-miR-NC+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-NC组、异丙酚+anti-miR-133a-3p+si-FTL组。应用RT-qPCR检测miR-133a-3p和铁蛋白轻链(FTL)mRNA的表达水平;应用MTT法与克隆形成实验测细胞增殖;应用流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡及蛋白表达水平;应用双荧光素酶报告实验检测miR-133a-3p与FTL的靶向关系;应用划痕实验与Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭。结果:与PBS组比较,异丙酚组细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移、侵袭细胞数均减少(P<0.05);细胞凋亡率、p53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、miR-133a-3p、GADD45A及p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05),FTL表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-133a-3p靶向调控FTL。敲低FTL或过表达miR-133a-3p后,细胞凋亡率升高,细胞活性、划痕愈合率、细胞克隆形成数、迁移和侵袭细胞数降低;细胞中GADD45A、p-JNK、p53、Bax表达水平升高(P<0.05)。敲低FTL逆转了使用异丙酚及抑制miR-133a-3p表达对GADD45A/JNK信号通路以及MKN-28细胞恶性生物学行为的影响。结论:异丙酚可能通过miR-133a-3p/FTL轴调控GADD45A/JNK通路继而抑制胃癌细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡。

miR-133a-3p靶向BMP9调控人颌骨骨髓间充质干细胞增殖、分化和凋亡的研究

目的:探讨miR-133a-3p靶向骨形态发生蛋白9(BMP9)对人颌骨骨髓间充质干细胞(hOBMSCs)增殖、分化和凋亡的影响。方法:体外成骨诱导培养hOBMSCs,RT-qPCR和Western blot检测hOBMSCs成骨分化过程中miR-133a-3p和BMP9的表达。MTT法、流式细胞术检测miR-133a-3p和BMP9表达对hOBMSCs活力和凋亡的影响;Western blot runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)和p-Smad1/5/8蛋白的表达。结果:hOBMSCs成骨分化过程中miR-133a-3p表达降低,BMP9表达升高(P<0.05)。抑制miR-133a-3p表达可增加hOBMSCs活力,抑制细胞凋亡,并上调Runx2、OCN、OPN和p-Smad1/5/8蛋白表达(P<0.05)。干扰BMP9表达显著逆转miR-133a-3p抑制对hOBMSCs增殖、凋亡、分化和p-Smad1/5/8蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:miR-133a-3p可能通过Smad通路调控BMP9表达抑制hOBMSCs增殖和分化,促进细胞凋亡。

下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达抑制口腔鳞癌细胞SCC15侵袭和迁移的分子机制

目的 研究下调长链非编码RNA(lncRNA)锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链(ZEB1-AS)1靶向促进miR-133a-3p体外调控口腔鳞癌细胞SCC15迁移及侵袭的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(Rt-PCR)分析并检测不同的口腔鳞癌细胞HN-6、SCC15、CAL27及正常口腔上皮细胞HOK中ZEB1-AS1表达变化。将口腔鳞癌细胞SCC15分成Control组、sh-NC(转染shRNA control)组、sh-ZEB1-AS1(转染ZEB1-AS1 shRNA)组,利用CCK-8方法分析检测细胞的增殖情况,利用Transwell小室分析并检测细胞的迁移及侵袭能力变化,Western印迹并检测N-钙黏蛋白(cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、E-cadherin的表达情况。利用Starbase生物信息学软件预测ZEB1-AS1靶基因,荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在口腔鳞癌细胞SCC15中将ZEB1-AS1 shRNA、miR-133a-3p inhibitor转染,同样分析并检测各组细胞的增殖水平及迁移、侵袭能力变化和各组细胞内N-cadherin、MMP-2、E-cadherin、MMP-9蛋白的表达情况。结果 口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6、SCC15中ZEB1-AS1水平明显高于正常口腔上皮细胞HOK(P<0.05)。口腔鳞癌细胞CAL27、HN-6中ZEB1-AS1水平明显低于口腔鳞癌细胞SCC15(P<0.05)。与Control、sh-NC组比较,sh-ZEB1-AS1组口腔鳞癌细胞SCC15中ZEB1-AS1水平明显降低,增殖能力明显降低,同时细胞的迁移及侵袭能力也明显下降,蛋白MMP-9、N-cadherin、MMP-2的表达水平明显降低,而E-cadherin表达水平明显升高(P<0.05)。下调ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p表达。miR-133a-3p inhibitor逆转下调ZEB1-AS1对口腔鳞癌细胞SCC15增殖、迁移、侵袭和MMP-2、MMP-9、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达作用。结论 下调lncRNA ZEB1-AS1靶向促进miR-133a-3p抑制口腔鳞癌细胞SCC15增殖、侵袭和迁移。

MiR-133a-3p在膀胱癌中的表达及其分子机制研究

目的:利用生物信息学方法研究miR-133a-3p在膀胱癌组织中的表达和临床意义,并鉴定其靶基因和信号通路。方法:来自多个公共高通量数据库的514例膀胱癌组织和78例非癌组织样本用于评估miR-133a-3p的表达水平和临床意义。MiR-133a-3p的靶基因用于检测与膀胱癌进展相关的信号通路及其枢纽基因,并进一步验证枢纽基因与miR-133a-3p的相关性。结果:与非癌组织相比,miR-133a-3p在膀胱癌组织中表达显著下调(SMD=-1.604,p=0.015),且对膀胱癌具有鉴别意义(AUC=0.910,95%CI:0.880至0.930),miR-133a-3p高表达的膀胱癌患者预后相对较差(HR=1.383,p=0.030)。不同的患病年龄(t=2.414,p=0.0162)、疾病分期(T分期:t=2.488,p=0.0133;N分期:t=3.153,p=0.0017)、病理等级(t=2.067,p=0.0393)、肿瘤亚型(t=3.118,p=0.0048)的膀胱癌患者之间,其miR-133a-3p表达水平存在显著差异。富集分析结果表明miR-133a-3p的靶基因通过癌症、胞吞、Rap1等信号通路在膀胱癌中发挥影响。通过蛋白互作网络共筛选出9个枢纽基因(EGFR、CLTA、ARPC5、TFRC、NUDT21、FPR3、LAMC1、GNAI3、CAP1),其中CLTA、TFRC、NUDT21、CAP1与miR-133a-3p呈显著负相关。结论:miR-133a-3p在膀胱癌中表达下调且对膀胱癌具有良好的鉴别、预后价值,它可通过多种信号途径影响膀胱癌的进程。

lncRNA LINC02381通过miR-133a-3p/MGMT轴对脑胶质瘤细胞替莫唑胺抵抗的影响

目的:探讨lncRNA LINC02381通过miR-133a-3p/MGMT轴对脑胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)耐药性的影响。方法:体外培养人脑胶质瘤细胞株U251、耐TMZ细胞U251/TR,将U251/TR细胞分为U251/TR组、si-NC组、si-LINC02381组、mimics NC组、miR-133a-3p mimics组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1 LINC02381组、miR-133a-3p mimics+pcDNA3.1 MGMT组。CCK-8法检测U251、U251/TR细胞对TMZ的耐药性;qRT-PCR检测LINC02381、miR-133a-3p、MGMT水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证LINC02381与miR-133a-3p、miR-133a-3p与MGMT的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3、MGMT蛋白表达。结果:与U251细胞相比,U251/TR细胞中IC 50、LINC02381和MGMT mRNA、MGMT蛋白表达升高(P<0.05),miR-133a-3p表达降低(P<0.05);与U251/TR组、mimics NC组相比,miR-133a-3p mimics组Bcl-2表达降低(P<0.05),miR-133a-3p表达、细胞凋亡率、Bax和Cleaved-caspase 3表达升高(P<0.05);与U251/TR组、si-NC组相比,si-LINC02381组LINC02381、Bcl-2表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和Cleaved-caspase 3表达升高(P<0.05);miR-133a-3p与LINC02381、MGMT均存在靶向关系;LINC02381、MGMT过表达均可逆转miR-133a-3p过表达对U251/TR细胞TMZ耐药性的影响。结论:lncRNA LINC02381沉默可能通过使miR-133a-3p表达升高,进而抑制MGMT表达,降低U251/TR细胞对TMZ的耐药性。

DCE-MRI减影联合血清miR-133a-3p及CCR3预测TACE治疗肝细胞癌早期效果

目的观察动态增强MRI(DCE-MRI)减影联合血清微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)及CC趋化因子受体3(CCR3)预测TACE治疗肝细胞癌(HCC)早期效果的效能。方法对107例HCC行TACE,1个月后根据实体肿瘤疗效评价标准将其分为疗效良好组(部分缓解+完全缓解)和疗效不良组(稳定+进展)。对比2组术前DCE-MRI减影参数动脉期、门静脉期对比噪声比(CNR)及血清miR-133a-3p、CCR3水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CNR联合血清miR-133a-3p及CCR3预测TACE治疗早期效果的效能。结果62例疗效良好,45例疗效不良。TACE前,疗效不良组动脉期CNR高于、门静脉期CNR低于疗效良好组,血清miR-133a-3p水平低于、CCR3水平高于疗效良好组(P均<0.001)。ROC曲线结果显示,动脉期CNR、门静脉期CNR、血清miR-133a-3p和CCR3以及四者联合预测TACE治疗早期效果的曲线下面积(AUC)分别为0.785、0.761、0.692、0.707及0.919,特异度分别为88.7%、74.2%、51.6%、77.4%及95.2%,敏感度分别为64.4%、71.1%、82.2%、57.8%及75.6%,四者联合的AUC高于各单独指标(P均<0.05)。结论DCE-MRI减影参数CNR及血清miR-133a-3p、CCR3均可用于预测TACE治疗HCC早期效果,且联合预测效能更高。