基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒调控线粒体自噬抑制肝星状细胞活化的机制

目的基于miR-135a/FOXO1/PINK1通路探讨柔肝化纤颗粒通过调控线粒体自噬来抑制肝星状细胞活化与增殖的影响及其机制。方法HSC-T6分为空白组、H_(2)O_(2)组、miR-135a-NC组、miR-135a-mimic组、miR-135a-in-hibitor-NC+H 2 O2组、miR-135a-inhibitor+H_(2)O_(2)组、柔肝化纤颗粒含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清对照组、H_(2)O_(2)+含药血清组、H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-NC组及H_(2)O_(2)+含药血清+miR-135a-mimic组。分别采用Real-time PCR、Western Blot、ELISA及流式细胞术检测miR-135a、FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Smad2、p-Smad2、转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)、NF-κB p65、p-NF-κB p65、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TNF-α表达及线粒体膜电位、活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。结果给予H_(2)O_(2)及过表达miR-135a可显著上调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);下调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒及抑制miR-135a表达可显著下调HSC-T6 miR-135a、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成(P<0.01);上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达与线粒体膜电位(P<0.01)。给予柔肝化纤颗粒同时过表达miR-135a可抑制柔肝化纤颗粒对HSC-T6的影响(P<0.01)。结论线粒体自噬可抑制HSC-T6活化,其机制与线粒体自噬抑制ROS生成,进而抑制TGF-β1/Smad2通路及炎症反应有关;柔肝化纤颗粒亦可抑制HSC-T6活化,其机制与柔肝化纤颗粒抑制miR-135a表达,活化FOXO1/PINK1通路,从而促进线粒体自噬有关。

柔肝化纤颗粒依赖miR-135a/FOXO1通路调控线粒体自噬抑制大鼠肝纤维化进程

目的探讨柔肝化纤颗粒对肝纤维化的影响及机制。方法SD大鼠分为正常组、模型组、生理盐水对照组、柔肝化纤颗粒低、中、高剂量组、柔肝化纤颗粒中剂量+3-MA组。腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,分别灌胃柔肝化纤颗粒低、中、高剂量(2.5 g·kg^(-1)、5 g·kg^(-1)、10 g·kg^(-1))和3-MA(15 mg·kg^(-1))。采用Real-time PCR、Western Blot、及ELISA检测大鼠肝组织miR-135a、FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Smad2、pSmad2、TGF-β1、NF-κB p65、p-NF-κB p65、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、TNF-α表达及ROS含量。结果模型组miR-135a、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS含量显著上调(P<0.05);FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达显著下调(P<0.05)。柔肝化纤颗粒低剂量组可明显抑制miR-135a、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成;上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达(P<0.05)。柔肝化纤颗粒中、高剂量组可显著抑制miR-135a、α-SMA、CollagenⅠ、CollagenⅢ、p-Smad2、TGF-β1、p-NF-κB p65、TNF-α表达及ROS生成;上调FOXO1、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ表达(P<0.05)。柔肝化纤颗粒中剂量组药效明显强于低剂量组(P<0.05),中、高剂量组药效无明显差异。线粒体自噬抑制剂(3-MA)可明显抑制柔肝化纤颗粒药效(P<0.05)。结论柔肝化纤颗粒可抑制肝纤维化,其机制与柔肝化纤颗粒抑制miR-135a表达,激活FOXO1/PINK1通路,进而促进线粒体自噬,抑制氧化应激反应,抑制TGF-β1/Smad2活化有关。

miR-135a-5p通过调控CXCL12表达降低吗啡耐受

目的研究miR-135a-5p调控CXCL12对C57BL/6J小鼠吗啡耐受的影响。方法将64只小鼠随机分为:对照(NS)组、吗啡耐受(MT)组、CXCL12沉默(CXCL12-siRNA)组、沉默阴性对照(NC-siRNA)组、miR-135a-5p激动剂(miR-agomir)组、激动剂阴性对照(miR-NC)组、miR-135a-5p激动剂+CXCL12过表达(miR-agomir+LV-CXCL12)组、miR-135a-5p激动剂+过表达阴性对照(miR-agomir+LV-control)组。通过皮下注射给药建立吗啡镇痛耐受模型,采用温水甩尾法测定各组小鼠给药前和给药后的热甩尾时间(TL);造模结束后麻醉处死小鼠并取L4~L5脊髓组织,RT-qPCR检测miR-135a-5p及CXCL12 mRNA的表达,Western blot检测CXCL12蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-135a-5p、CXCL12的靶向关系。结果1)成功建立吗啡耐受小鼠模型,与NS组相比,MT组CXCL12 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-135a-5p显著下调(P<0.05)。2)沉默Cxcl12及过表达miR-135a-5p均提高吗啡耐受小鼠热痛阈值,显著减缓吗啡耐受的发生发展(P<0.05)。3)与miR-NC相比,miR-agomir组CXCL12 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05)。4)双荧光素酶报告基因实验显示miR-135a-5p靶向作用于Cxcl12。5)过表达CXCL12可逆转miR-135a-5p对吗啡耐受小鼠的热痛保护作用。结论miR-135a-5p通过靶向抑制CXCL12表达进而缓解吗啡耐受的形成。

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05),而转染miR-135a-5p mimics的作用与之相反;转染anti-miR-135a-5p可增强白山毛桃根提取物对HeLa细胞增殖、迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论 白山毛桃根提取物可通过降低miR-135a-5p表达使PI3K/Akt通路失活,进而抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

miR-135a通过下调SOX2抑制喉癌Hep-2细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

目的:探讨敲降miR-135a对人喉癌上皮Hep-2细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法:收集2018年1月至2018年6月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2细胞中miR-135a的表达水平。miR-135 inhibitor转染喉癌Hep-2细胞后,采用CCK-8检测Hep-2细胞活性,集落形成实验检测Hep-2细胞集落形成能力,Transwell实验检测Hep-2细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor的Hep-2细胞,CCK-8实验检测Hep-2细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测Hep-2细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor质粒、对照pcDNA空载体(SOX2-Con)质粒、pcDNA-SOX2(SOX2-OE)质粒共转染Hep-2细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果:与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高(P<0.01);与正常NHP细胞比较,miR-135a在Hep-2细胞中表达水平明显上调(P<0.01);转染miR-135a inhibitor导致Hep-2细胞中miR-135a表达水平明显降低(P<0.01)。敲降miR-135a明显降低Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2表达(均P<0.01);明显增强细胞对奥沙利铂敏感性(P<0.01);与miR-135a inhibitor+SOX2-Con组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加(均P<0.01);同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞存活率显著升高(P<0.01)。结论:敲降miR-135a可能通过下调转录因子SOX2的表达抑制Hep-2细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。

miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响。方法收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(h FOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-time PCR法检测miR-135a和SP1的表达,Western blot法检测SP1表达。转染miR-135a mimics和inhibitor,MTT法和Brd U-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase 3的表达。双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响。结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高。转染miR-135a mimics可降低OS细胞活性,减少Brd U阳性标记率。同时,miR-135a mimics增加OS细胞Bax和Caspase 3的表达,减少BCL-2的表达。miR-135a mimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高。上调miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平。miR-135a inhibitor作用均与mimics相反。结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化。

miR-224、miR-135a在非小细胞肺癌中的表达及与临床病理的关系

目的:检测miR-224与miR-135a两种microRNA(miRNA)在非小细胞肺癌中的表达,探讨其与肺癌临床病理的关系。方法:采用Real time RT-PCR法对31例非小细胞肺癌组织及癌旁正常肺组织的miR-224与miR-135a进行定量分析,结果由2(-△△CT)处理,并分析与临床病理资料的关系。结果:相对内参U6,miR-224在非小细胞肺癌组织中表达量为4.2761±0.8731,在正常肺组织中的表达量为0.8967±0.2154,两者相比P<0.05,miR-135a在非小细胞肺癌组织中表达量为0.3551±0.0985,在正常肺组织中的表达量为1.7443±0.3125,两者相比P<0.05。miR-224与miR-135a的表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关。结论:miR-224高表达及miR-135a低表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分级密切相关,miR-224有可能作为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物。

miR-135a在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用

目的:探讨miR-135a在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)多药耐药中的作用。方法:收集2008年1月至2013年12月本院肿瘤科及呼吸内科就诊的48例SCLC患者外周血液标本,将其分为化疗敏感组(28例)和耐药组(20例),采用QRT-PCR法检测患者血液标本、SCLC敏感细胞株H69及耐药细胞株H69AR中miR-135a的表达,分析其与临床预后的关系,并应用miR-135a模拟物和抑制剂分别上、下调细胞株中miR-135a的表达,采用CCK-8法检测细胞对各种化疗药物(ADM、DDP和VP-16)敏感性的影响。结果:与化疗敏感组相比,miR-135a在化疗耐药患者血液标本中的表达明显增高[(2.174±3.981)vs(-1.963±3.750),P<0.001];在临床患者血液标本中,miR-135a的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05),与疾病的分期、化疗敏感性及患者的生存时间相关(均P<0.01)。miR-135a在H69AR细胞中的表达明显高于H69细胞[(7.841±0.392)vs(1.047±0.081),P<0.01];通过miR-135a抑制剂下调H69AR中miR-135a的表达能够显著增加细胞对化疗药物的敏感性,H69AR细胞对DDP、ADM及VP-16的IC50值明显下降[(247.09±11.55)vs(76.64±10.00)、(150.83±8.03)vs(40.72±5.06)、(436.63±61.19)vs(163.35±20.00);H69细胞转染miR-135a mimics后对化疗药物DDP、ADM和VP-16的IC50值明显增加[(18.58±1.37)vs(159.27±3.29)、(24.37±2.63)vs(129.19±2.64),(48.55±2.59)vs(359.87±2.92)μg/ml,P<0.01]。结论:miR-135a参与调节SCLC的多药耐药,下调miR-135a基因的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性。

miR-135a-5p抑制胆囊癌细胞增殖的研究

目的:探讨miR-135a-5p对胆囊癌的作用及其机制。方法:采用实时PCR检测miR-135a-5p和VLDLR在23对胆囊癌与癌旁组织的表达。采用miR-135a-5p模拟物转染胆囊癌细胞,通过细胞增殖(CCK-8)曲线、单克隆集落形成实验和细胞周期实验(流式细胞仪),检测miR-135a-5p对胆囊癌细胞增殖的影响。用Western印迹和Luciferase双荧光素酶报告系统验证和VLDLR受miR-135a-5p的调控。结果:在23对胆囊癌与癌旁组织中,癌组织的miR-135a-5p表达水平低于癌旁组织。体外实验证实miR-135a-5p通过G1期阻滞抑制胆囊癌细胞的增殖,且可通过作用于VLDLR mRNA降低其蛋白质水平。结论:miR-135a-5p抑制胆囊癌的增殖,可能是胆囊癌治疗靶点。

miR-135a/b逆转肺癌A549/CDDP细胞对顺铂耐药性及相关机制研究

目的:研究miR-135a/b对肺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP顺铂耐药的影响。方法:运用实时荧光定量PCR检测miR-135a/b在A549和A549/CDDP细胞株中的差异表达;MTT法检测转染后A549及A549/CDDP细胞对CDDP的敏感性;构建MCL1-3′-UTR荧光素酶报告质粒验证miR-135a/b的靶基因;Western blot检测转染前后细胞MCL1蛋白的表达差异;流式细胞术检测转染后耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响。结果:miR-135a/b在A549/CDDP细胞中表达量降低;在耐药株中上调miR-135a/b后显著增加细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶实验证实MCL1是miR-135a/b的靶基因;抗凋亡蛋白MCL1在A549/CDDP细胞中呈高表达,上调miR-135a/b明显抑制耐药细胞中MCL1蛋白的表达;miR-135a/b显著增加A549/CDDP细胞对顺铂诱导的凋亡。结论:miR-135a/b通过靶向调控MCL1蛋白表达增加NSCLC细胞对顺铂的敏感性和凋亡。

miR-135a和miR-146a在阿尔茨海默病患者中的表达及诊断效能评价

目的探讨miR-135a和miR-146a在阿尔茨海默病(AD)患者中的表达及临床意义,为AD的诊断提供依据。方法选取2017年6月—2019年5月浙江省台州市第一人民医院(以下简称“我院”)神经内科住院的65例AD患者为AD组,另选取同期在我院体检的30名健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测miR-135a和miR-146a表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-135a和miR-146a对AD诊断效能。结果AD组miR-135a表达低于对照组,miR-146a表达高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-135a诊断AD的临界值为0.825,敏感度为0.923,特异性为0.700;miR-146a诊断AD的临界值为2.065,敏感度为0.877,特异性为0.900。结论AD患者中miR-135a表达下调,miR-146a表达上调,对AD有较高的诊断效能。

宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义

目的探讨宫颈癌癌组织中miR-365、miR-135a-5p及STAT3的表达水平及意义。方法选取2016年6月-2018年7月在医院行宫颈癌手术切除的存档蜡块和癌旁正常组织(距病变部位>5cm处,且证实为无癌浸润)石蜡标本各90例作为研究对象。采用免疫组化法检测宫颈癌组织中STAT3的表达,实时定量荧光聚合酶链反应(qPCR)检测miR-365、miR-135a-5p表达水平,分析miR-365、miR-135a-5p及STAT3与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。结果miR-365在宫颈癌组织中的相对表达量低于癌旁组织,miR-135a-5p的相对表达量、STAT3的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移、高分化、直径≥5cm的宫颈癌组织中miR-365相对表达量分别高于FIGO分期I~II期、未合并淋巴结转移、低分化、直径<5cm的宫颈癌组织(P<0.05);FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、合并淋巴结转移的宫颈癌组织中miR-135a-5p相对表达量分别高于FIGO分期I~II期、未合并淋巴结转移的癌组织(P<0.05)。宫颈癌组织中miR-135a-5p的表达与STAT3呈显著正相关(r=0.388,P<0.05)。90例宫颈癌患者2年总生存率为66.67%(60/90),ROC曲线分析显示miR-365、miR-135a-5p及STAT3的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.735、0.549。结论miR-365、miR-135a-5p的表达水平均与临床分期、淋巴结转移相关,miR-365还与肿瘤大小、分化程度有关,miR-135a-5p的表达与STAT3具有显著相关性;其中miR-365、miR-135a-5p对患者预后的预测价值较高。

宫腔镜术治疗宫腔黏连后患者miR-543、miR-135a表达与再复发关系

目的:探究宫腔黏连宫腔镜术治疗后患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达及复发关系。方法:回顾性选取2017年9月-2019年9月本院收治的行宫腔镜术治疗的中、重度宫腔黏连患者78例,根据宫腔镜治疗1年后复发情况分为复发组23例、未复发组55例。采用实时荧光定量PCR法检测患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达,Pearson法分析miR-543、miR-135a与SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA表达相关性;logistic回归模型分析影响宫腔镜治疗后复发的危险因素;ROC曲线分析miR-543、miR-135a表达对宫腔镜治疗后复发的预测价值。结果:复发组重度黏连、术前月经量过少、术前闭经比例、术前宫腔操作次数及SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA水平等均高于未复发组,miR-543、miR-135a表达低于未复发组(均P<0.05)。miR-543、miR-135a均与SIRT1 mRNA、TGF-βmRNA水平呈负相关(P<0.05)。重度黏连、术前宫腔操作次数多、高SIRT1 mRNA水平、高TGF-βmRNA水平、低miR-543水平、低miR-135a水平是影响宫腔镜术治疗后复发的独立危险因素(P<0.05),二者联合预测治疗后复发的曲线下面积为0.856(95%CI:0.771~0.924),敏感度为91.3%,特异度为74.5%。结论:宫腔黏连患者子宫内膜组织中miR-543、miR-135a表达降低,且对宫腔镜术治疗黏连复发有一定评估价值。

男性不育患者精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平检测的价值

目的探讨精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p表达特征及其在男性不育患者精浆中变化和价值。方法选取2019年1月至2021年12月于江苏省中医院检验科留存的血清、晨尿、胸水、脑脊液和精浆标本各30例;进一步选取2010年至2019年江苏省中医院和南京大学医学院附属金陵医院冻存的非梗阻性无精子症患者精浆标本、弱精子症患者精浆标本及正常对照精浆标本各54例。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同体液、不育患者精浆和正常对照精浆中miR-135a-5p和miR-135b-5p表达。ROC曲线分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平区分男性不育患者及对照的ROC曲线下面积(AUC^(ROC));相关性分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平与精液参数的相关性。结果5种不同体液间miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=64.88,P<0.01和H=64.7,P<0.01),二者在血清和精浆中水平均最高,在尿液中水平均最低。无精子症组、弱精子症组及正常对照组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=32.14,P<0.01;H=21.37,P<0.01)。与正常对照组相比,无精子症组2种miRNA水平均显著降低(U=687,P<0.01;U=843,P<0.01);弱精子症组与正常对照组差异无统计学意义(P均>0.05);无精子症组与弱精子症组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平具有显著差异(U=635,P<0.01;U=779,P<0.01)。精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p区分无精子症与正常对照及弱精子症患者AUCROC分别为0.764(95%CI:0.675~0.854),0.711(95%CI:0.612~0.810)和0.782(95%CI:0.695~0.869),0.733(95%CI:0.637~0.829)。相关性分析结果显示,精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平与精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率和非前向运动精子百分率均呈正相关(P均<0.01)。结论miR-135a-5p和miR-135b-5p为精浆高表达miRNA,在无精子症患者中显著降低,二者与男性不育发生关系密切。

猪miR-135a-5p预测靶基因APC的鉴定

本研究旨在鉴定猪miR-135a-5p靶向脂肪发育的相关基因。首先,利用生物信息学软件分析发现,结肠腺瘤性息肉病(APC)基因的3′非翻译区(3′UTR)具有两个与猪miR-135a-5p结合的潜在位点。其次,构建APC基因野生型(APC3′UTR)和突变型(APC3′UTR m1、APC3′UTR m2、APC3′UTR m3)3′UTR双荧光素酶载体,并分别将其与miR-135a-5p mimics、阴性对照(NC)共转染PK-15细胞后检测荧光活性。结果显示:miR-135a-5p mimics显著降低APC3′UTR和APC3′UTR m2载体的荧光活性(P<0.05),而APC3′UTR m1和APC3′UTR m3载体的荧光活性得到完全恢复,表明miR-135a-5p主要结合在预测的第一个位点。进一步的分析表明,miR-135a-5p抑制猪前体脂肪细胞内源APC基因的mRNA和蛋白质表达水平。研究结果证实,猪miR-135a-5p靶向APC基因,且调控其表达。本试验为深入研究猪miR-135a-5p的生物学功能及其调控脂肪形成的作用机制提供了基础。

miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子6的相关性研究

目的探讨miR-135a与前列腺癌细胞增殖相关因子信号转导及转录激活因子(STAT6)的相关性。方法选取前列腺癌DU145细胞,随机分为miR-135a转染组和空白转染组,miR-135a转染组细胞转染miR-135a序列,空白转染组转染空白序列,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,采用Transwell细胞迁移侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-STAT6和STAT6蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-135a表达。结果转染后48h,miR-135a转染组miR-135a相对表达量为(0.932±0.061),明显高于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组培养24、48h的OD值分别为(0.210±0.045)和(0.281±0.052),明显低于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组G0/G1期细胞比例为(60.02±6.39)%,明显高于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组迁移细胞数和侵袭细胞数分别为(116.93±30.02)个和(133.02±28.51)个,明显低于空白转染组(P<0.05);miR-135a转染组p-STAT6和STAT6蛋白相对表达量分别为(0.947±0.114)和(0.437±0.077),明显低于空白转染组(P<0.05)。结论miR-135a可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与其抑制前列腺癌细胞STAT6表达有关。

miR-135a及17-β雌二醇对着床期子宫内膜的作用及其和HOXA10甲基化状态关系

目的探讨分析miR-135a及17-β雌二醇对着床期子宫内膜的作用及其和HOXA10甲基化状态关系。方法体外培养人子宫内膜细胞,根据本次实验目的加入miR-135a、1×10-6、1×10-7、×10-8 mol/L17-β雌二醇,培养48 h之后借助荧光定量RT-PCR及Western blot检测HOXA 10基因甲基化及mRNA蛋白表达,使用甲基化特异性聚合酶链反应完成对HOXA10基因CpG岛DNA甲基化现状态检测。结果经研究发现相较对照组,加入miR-135a、不同浓度17-β雌二醇后,会有效提升HOXA10基因内mRNA蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。并且在17-β雌二醇产生作用后HOXA10的部分基因呈甲基化状态。结论发现miR-135a、17-β雌二醇能够针对人体内HOXA10的基因启动因子CpG岛DNA甲基化逆转,改变HOXA10基因表达。

胃癌细胞中miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响

目的研究胃癌细胞中miR-135a表达与紫杉醇敏感性的关系,并探索可能的作用机制。方法运用Taqman microRNA芯片筛选接受紫杉醇化疗有效及无效胃癌患者血清中差异表达microRNAs,选择与紫杉醇敏感性关系较大的microRNA-135a(miR-135a)为研究对象,在体外培养的胃癌细胞中转染miR-135a mimic与miR-Ctrl,用细胞增殖曲线、流式细胞仪、Western blot等方法探索miR-135a表达对紫杉醇敏感性的影响及可能的作用机制。结果miR-135a在紫杉醇化疗无效患者血清中的表达水平明显高于化疗有效患者(P<0.05),可能与紫杉醇耐药有关。miR-135a通过抑制紫杉醇诱导的细胞周期G2期阻滞及细胞凋亡(P<0.05)而降低胃癌细胞对紫杉醇的敏感性。结论 miR-135a有望成为临床胃癌紫杉醇化疗疗效的预测标志物。

血清miR-21、miR-135a对胃癌患者化疗后复发和转移的预测价值

目的探讨血清miR-21和miR-135a表达对胃癌患者化疗后复发和转移的预测价值。方法选取行化疗的胃癌患者100例(胃癌组),以50名体检健康者作为正常对照组。收集所有患者的临床资料,化疗后1个月开始随访,随访时间为24个月。检测正常对照者和胃癌患者化疗前及化疗后第3、8、13、18、24个月的血清miR-21、miR-135a相对表达量。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-21和miR-135a判断胃癌预后的效能。结果与正常对照组比较,胃癌组化疗前血清miR-21相对表达量升高(P<0.05),miR-135a相对表达量降低(P<0.05)。化疗前血清miR-21和miR-135a相对表达量与胃癌患者淋巴结转移、分化程度、浸润深度有关(P<0.05),与年龄、性别、TNM分期、有无远处转移无关(P>0.05)。100例胃癌患者失访3例,有66例(68%)出现复发或转移。复发或转移患者化疗后血清miR-21相对表达量随随访时间的延长而升高(P<0.05),血清miR-135a相对表达量随随访时间的延长而降低(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,随访24个月时的miR-21和miR-135单项检测结果判断胃癌预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.789、0.826。以患者出现复发或转移为阳性,无复发或转移为阴性;以随访24个月时的miR-21和miR-135检测结果均阳性为联合检测阳性,均阴性为联合检测阴性,miR-21和miR-135a联合检测判断胃癌预后的敏感性和特异性分别为91.2%和67.8%。结论胃癌患者血清miR-21和miR-135a表达异常,且表达水平与淋巴结转移、分化程度、浸润深度密切相关。血清miR-21和miR-135a联合检测对胃癌化疗后复发或转移的判断具有较好的价值。

miR-135a在消化系统肿瘤中的研究进展

microRNAs(miRNAs)是由17~27个核苷酸组成的非编码小RNA,它通过信使RNA(messenger RNA,mRNA)降解目标RNA或抑制蛋白质的翻译来调节基因的表达,大多数microRNAs都参与肿瘤细胞的增殖、扩散、转移和凋亡,并在肿瘤的发生、发展过程中扮演着重要角色。消化系统肿瘤的发生率和死亡率呈上升趋势,对人们的身体健康存在着严重威胁。相关研究表明miR-135a在肿瘤的早期诊断和相关治疗中都起到重要作用,本文将对miR-135a在消化系统肿瘤中的研究进展作一概述。