miR-150-5p、miR-135b在糖尿病肾病患者中的表达及意义

目的探讨外周血miR-150-5p、miR-135b水平与糖尿病肾病(DN)患者尿白蛋白排泄率(UAER)、预后的关系。方法采用前瞻性研究方法,选取2019年1月至2021年10月延安大学附属医院收治的85例DN患者作为DN组[男46例,女39例,年龄(46.28±4.41)岁,2型糖尿病(T2DM)病程(7.24±2.31)年],另纳入76例单纯T2DM患者作为T2DM组[男40例,女36例,年龄(44.95±6.13)岁,T2DM病程(6.98±3.28)年],80例健康体检者作为对照组[男43例,女37例,年龄(45.74±5.68)岁]。收集3组患者临床资料及外周血miR-150-5p、miR-135b水平,Spearman分析各指标与UAER相关性,绘制受试者操作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC),分析各指标预后的预测效能,采用相对危险度(RR)及95%置信区间(CI)分析各指标对预后的影响。结果DN组外周血miR-150-5p、miR-135b水平>T2DM组>对照组[(3.36±0.68)比(1.03±0.62)比(0.78±0.21)、(3.96±0.51)比(1.24±0.48)比(0.66±0.12)],差异均有统计学意义(F=560.11、1519.26,均P<0.05);DN组UAER>300 mg/24 h患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平>UAER 30~300 mg/24 h患者>UAER<30 mg/24 h患者[(4.10±0.92)比(3.42±0.64)比(2.73±0.51)、(5.40±0.87)比(3.87±0.61)比(3.02±0.49)],差异均有统计学意义(F=23.53、78.25,均P<0.05);DN患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平与UREA呈正相关(r=0.783、0.835,均P<0.05);随访12个月,15例发生终末期肾病(ESRD),发生ESRD患者外周血miR-150-5p、miR-135b水平均高于未发生ESRD患者[(4.41±0.55)比(3.14±0.38)、(4.67±0.61)比(3.81±0.42)],差异均有统计学意义(t=10.67、6.53,均P<0.05);外周血miR-150-5p、miR-135b、联合预测DN并发ESRD的AUC分别为0.733、0.829、0.944。外周血miR-150-5p、miR-135b高水平患者并发ESRD的RR分别为低水平的3.619倍、10.889倍,其95%CI分别为1.105~11.856、1.503~78.872。结论外周血miR-150-5p、miR-135b水平与DN患者UAER呈正相关,联合检测可作为预测DN并发ESRD的重要辅助手段,为临床诊治提供可靠数据支持。

miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年1月至2021年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院行改良根治术的68例乳腺癌患者作为研究对象,收集乳腺癌组织及癌旁正常组织石蜡标本。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-135b-5p的表达水平,以乳腺癌组织miR-135b-5p表达量的平均值作为参考,将患者分为低表达组与高表达组,分析miR-135b-5p表达水平与患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-MeierPlotter分析miR-135b-5p表达对不同分子亚型乳腺癌患者预后的影响。结果乳腺癌组织miR-135b-5p的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组肿瘤直径>2cm、淋巴结转移阳性、分型为三阴性、ER表达阴性、PR表达阴性的患者占比高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、发病部位、组织学分级、HER2表达情况比较差异无统计学意义。Kaplan-MeierPlotter在线生存分析结果显示,在ER阳性的管腔型乳腺癌患者中,miR-135b-5p低表达组总生存率低于高表达组,在三阴性乳腺癌患者中,miR-135b-5p高表达组总生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);在HER2过表达型乳腺癌患者中,低表达组和高表达组总生存率比较差异无统计学意义。结论miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达水平在三阴性和管腔型乳腺癌中存在显著差异,可通过发挥不同的作用参与肿瘤的进展过程,在乳腺癌的预后判断和靶向治疗方面可能具有潜在的应用价值。

姜黄素通过降低miR-135b-5p和FEN1表达增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性

目的:探究姜黄素对卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性的影响及其潜在机制。方法:(1)体外常规培养卵巢癌亲本细胞OVCAR-3并构建顺铂耐药OVCAR-3/DDP细胞,将OVCAR-3细胞分为Control(常规培养)、DDP-1(1μmol/L顺铂)、DDP-5(5μmol/L顺铂)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-15(15μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-1(20μmol/L姜黄素+1μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-5(20μmol/L姜黄素+5μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-15(20μmol/L姜黄素+15μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30组(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为Control(常规处理)、DDP-10(10μmol/L顺铂)、DDP-20(20μmol/L顺铂)、DDP-30(30μmol/L顺铂)、DDP-40(40μmol/L顺铂)、DDP-50(50μmol/L顺铂)、DDP-60(60μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-10(20μmol/L姜黄素+10μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-20(20μmol/L姜黄素+20μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-30(20μmol/L姜黄素+30μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-40(20μmol/L姜黄素+40μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-50(20μmol/L姜黄素+50μmol/L顺铂)、姜黄素+DDP-60组(20μmol/L姜黄素+60μmol/L顺铂),CCK-8法检测细胞活性,计算顺铂半数抑制浓度(IC 50),筛选顺铂和姜黄素的合适作用浓度。(2)将OVCAR-3细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(20.5μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+20.5μg/mL顺铂);将OVCAR-3/DDP细胞分为对照组(常规处理)、DDP组(42.1μg/mL顺铂)、姜黄素组(20μmol/L姜黄素)、姜黄素+DDP组(20μmol/L姜黄素+42.1μg/mL顺铂),采用流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量(qRT)-PCR检测miR-135b-5p表达,qRT-PCR和免疫印迹法分别检测瓣状核酸内切酶-1(flap endonuclease 1,FEN1)mRNA和蛋白表达。结果:相同顺铂浓度时,与DDP组比较,姜黄素+DDP联合组OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞活性明显降低(P均<0.001)。DDP作用于OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞的IC 50分别为20.5μg/mL和42.1μg/mL。与OVCAR组或OVCAR/DDP组相较,姜黄素或顺铂致OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞凋亡率明显增加(P均<0.001),两者联合作用时效果更显著。此外,姜黄素或顺铂处理可明显降低OVCAR-3和OVCAR-3/DDP细胞中miR-135b-5p表达及FEN1表达(P<0.01或<0.001),两者联合时效果更显著。结论:姜黄素可增强卵巢癌OVCAR-3细胞顺铂敏感性,其可能与降低miR-135b-5p和FEN1表达相关。

参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响

目的探究参麦地黄汤联合缬沙坦对糖尿病肾病患者氧化应激、血管内皮功能及血清miR-133b、miR-135b的影响。方法选取2017年1月至2020年10月于江阴市中医院门诊就诊的90例糖尿病肾病患者为研究对象,依据随机数字表法将其分为对照组、观察组各45例。对照组采用缬沙坦分散片口服治疗,观察组在对照组治疗基础上加服参麦地黄汤。2组疗程均为3个月,治疗前后评估2组患者中医证候积分变化,检测2组患者空腹血糖(FPG)和血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)、氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)]、血管内皮功能指标[可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)及内皮素-1(ET-1)]及miR-133b、miR-135b变化。结果治疗后,2组患者中医症候积分、FPG、SCr、BUN、UACR及MDA、sICAM-1、ET-1、miR-133b、miR-135b表达水平均显著下降,SOD活性明显升高(P<0.01),观察组优于对照组(P<0.01)。观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.01)。结论参麦地黄汤联合缬沙坦可有效改善糖尿病肾病临床症状,可能与其调控机体氧化应激、血管内皮功能、血清miR-133b、miR-135b水平有关。

男性不育患者精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平检测的价值

目的探讨精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p表达特征及其在男性不育患者精浆中变化和价值。方法选取2019年1月至2021年12月于江苏省中医院检验科留存的血清、晨尿、胸水、脑脊液和精浆标本各30例;进一步选取2010年至2019年江苏省中医院和南京大学医学院附属金陵医院冻存的非梗阻性无精子症患者精浆标本、弱精子症患者精浆标本及正常对照精浆标本各54例。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同体液、不育患者精浆和正常对照精浆中miR-135a-5p和miR-135b-5p表达。ROC曲线分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平区分男性不育患者及对照的ROC曲线下面积(AUC^(ROC));相关性分析精浆miR-135a-5p、miR-135b-5p水平与精液参数的相关性。结果5种不同体液间miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=64.88,P<0.01和H=64.7,P<0.01),二者在血清和精浆中水平均最高,在尿液中水平均最低。无精子症组、弱精子症组及正常对照组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平差异具有统计学意义(H=32.14,P<0.01;H=21.37,P<0.01)。与正常对照组相比,无精子症组2种miRNA水平均显著降低(U=687,P<0.01;U=843,P<0.01);弱精子症组与正常对照组差异无统计学意义(P均>0.05);无精子症组与弱精子症组精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平具有显著差异(U=635,P<0.01;U=779,P<0.01)。精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p区分无精子症与正常对照及弱精子症患者AUCROC分别为0.764(95%CI:0.675~0.854),0.711(95%CI:0.612~0.810)和0.782(95%CI:0.695~0.869),0.733(95%CI:0.637~0.829)。相关性分析结果显示,精浆miR-135a-5p和miR-135b-5p水平与精子浓度、精子活动率、前向运动精子百分率和非前向运动精子百分率均呈正相关(P均<0.01)。结论miR-135a-5p和miR-135b-5p为精浆高表达miRNA,在无精子症患者中显著降低,二者与男性不育发生关系密切。

miR-135a和miR-135b表达水平在子宫内膜癌预后评估中的价值

目的分析血清miR-135a和miR-135b表达水平预测子宫内膜癌预后的价值。方法选择2018年1月至2019年12月在该院接受子宫内膜癌手术的115例子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组。选择同期该院45例体检健康女性为对照组。比较子宫内膜癌组与对照组、子宫内膜癌患者治疗前后、不同特征和不同预后情况子宫内膜癌患者血清miR-135a和miR-135b表达水平,分析血清miR-135a和miR-135b表达水平预测两年内子宫内膜癌患者出现预后不良的价值。结果入院时,子宫内膜癌组血清miR-135a表达水平明显低于对照组,血清miR-135b表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组术后7 d血清miR-135a表达水平较入院时明显升高,miR-135b表达水平较入院时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平明显低于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);而低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的子宫内膜癌患者血清miR-135b表达水平明显高于中高分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平明显低于预后良好子宫内膜癌患者,而预后不良子宫内膜癌患者血清miR-135b表达水平明显高于预后良好子宫内膜癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-135a和miR-135b联合检测预测子宫内膜癌预后不良的灵敏度为92.3%,特异度为83.1%,曲线下面积(AUC)为0.932,AUC明显大于miR-135a和miR-135b单独检测(P<0.05)。子宫内膜癌患者血清miR-135a表达水平与miR-135b表达水平呈负相关(r=-0.721,P<0.01)。结论miR-135a和miR-135b是子宫内膜癌预后的潜在预测指标。

虫草素通过调控miR-135b-5p表达抑制宫颈癌Hela细胞侵袭、转移的实验研究

目的研究虫草素通过调控miR-135b-5p表达对宫颈癌Hela细胞侵袭、转移的影响及其调控机制。方法用浓度为50μmol/L(虫草素Ⅰ组)和100μmol/L(虫草素Ⅱ组)的虫草素处理宫颈癌Hela细胞,另设空白对照组,用MTT法测定Hela细胞的生长情况。采用Transwell法测定Hela细胞侵袭情况,采用划痕实验检测宫颈癌Hela细胞的转移能力,采用Real-time PCR法测定人永生化表皮细胞Hacat和宫颈癌Hela细胞中miR-135-5p的表达水平及不同浓度虫草素处理后对miR-135-5p的表达水平的影响。转染miR-135b-5p mimic至宫颈癌Hela细胞,并采用Transwell技术和划痕实验检测宫颈癌Hela细胞的侵袭能力和转移能力。结果加入虫草素后宫颈癌Hela细胞生长受到显著的抑制,且高浓度的虫草素抑制作用更明显(P<0.05)。宫颈癌Hela细胞中miR-135b-5p的表达水平为(1.97±0.07),显著高于人永生化表皮细胞Hacat细胞中miR-135b-5p的表达水平(1.01±0.03),组间比较差异具有统计学意义(t=28.187,P=0.000)。加入虫草素后,宫颈癌Hela细胞侵袭率和转移率及miR-135b-5p表达明显降低;且高浓度虫草素处理后,宫颈癌Hela细胞侵袭率和转移率更低,组间比较差异均具有统计学意义(t=138.614~317.100,P<0.05)。过表达miR-135b-5p显著增加宫颈癌Hela细胞的侵袭率和转移率(t=7.145,t=7.465,P<0.05),且Vimentin表达增加、E-cad表达降低(t=8.223,t=7.473,P<0.05)。结论虫草素可通过抑制miR-135b-5p表达进而抑制Hela细胞的侵袭和转移。

miR-135b靶向SIRT1表达对H_(2)O_(2)诱导神经细胞损伤增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨miR-135b靶向沉默信息调节因子1(SIRT1)表达对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导神经细胞损伤增殖和凋亡的影响及作用机制。方法将HT22细胞分为对照组(正常培养的HT22细胞)、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)抑制剂阴性对照组、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂组(转染miR-135b抑制剂)、H_(2)O_(2)+SIRT1过表达组(转染SIRT1过表达载体)、H_(2)O_(2)+空载体对照组(转染空载体)、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂阴性对照组(转染miR-135b抑制剂阴性对照组)、H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂+SIRT1抑制剂组(转染miR-135b抑制剂和SIRT1抑制剂),各组均在转染后经200μmol/L的H_(2)O_(2)作用24 h。采用Western Blot检测miR-135b、SIRT1信使RNA(mRNA)、SIRT1蛋白表达水平,MTT、流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡情况,双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b与SIRT1之间的调控关系。结果与H_(2)O_(2)抑制剂阴性对照组相比,H_(2)O_(2)+miR-135b抑制组miR-135b水平显著降低(0.41±0.05比2.33±0.16)(P<0.05),存活率显著升高[(74.1±5.6)%比(48.3±4.1)%](P<0.05),凋亡率显著降低[(15.4±1.3)%比(33.4±2.6)%](P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,SIRT1野生型质粒(SIRT1-WT)+mimic-阴性对照组、SIRT1-WT+mimic组、SIRT1突变型质粒(SIRT1-MUT)+mimic-阴性对照组、SIRT1-MUT+mimic组双荧光素酶活性分别为1.15±0.09、0.56±0.03、1.08±0.08、1.12±0.10,各组荧光素酶活性比较差异有统计学意义(P<0.01),其中SIRT1-WT+mimic组荧光素酶活性显著低于SIRT1-WT+mimic-阴性对照组(P<0.05)。miR-135b inhibitor组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白水平高于inhibitor-control组(P<0.05),miR-135b mimic组SIRT1 mRNA、SIRT1蛋白水平低于mimic-control组(P<0.05)。与H_(2)O_(2)+空载体对照组相比,H_(2)O_(2)+SIRT1过表达组SIRT1 mRNA和蛋白水平显著升高(1.15±0.06比0.54±0.03、1.13±0.11比0.57±0.04)(P<0.05),存活率显著升高[(75.3±5.5)%比(45.4±3.4)%](P<0.05),凋亡率显著降低[(15.5±1.2)%比(39.4±2.8)%](P<0.05)。与H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂阴性对照组相比,H_(2)O_(2)+miR-135b抑制剂+SIRT1抑制剂组SIRT1蛋白水平显著降低(0.61±0.04比1.12±0.07)(P<0.05),存活率显著降低[(48.3±4.4)%比(69.2±5.4)%](P<0.05),凋亡率显著升高[(36.2±3.6)%比(13.4±1.0)%](P<0.05)。结论抑制miR-135b表达可促进H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞增殖,抑制其凋亡,其机制可能是通过负调控SIRT1表达发挥作用。

miR-135b促进肝癌细胞侵袭和转移

目的探讨miR-135b对肝癌细胞浸润转移的影响及其分子机制。方法分别在肝癌细胞系中过表达和下调miR-135b,通过Transwell^(TM)实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力,利用肝癌移植瘤模型检测肝癌细胞的体内增殖能力和成瘤能力;采用Western blot法结合双荧光素酶基因报告系统预测miR-135b的下游靶基因。结果 miR-135b在高侵袭性的MHCC97肝癌细胞系中高表达;过表达miR-135b能够增强HepG2和Bel-7402肝癌细胞的体外侵袭和转移能力,促进肝癌细胞的体内转移能力;通过靶向miR-135b的干扰载体pcDNA-miR-135b-Sponge下调miR-135b的表达,MHCC97肝癌细胞的体外侵袭转移能力及移植瘤的转移能力明显受到抑制;双荧光素酶基因报告系统和Western blot实验结果显示miR-135b能够靶向Hippo信号通路中的关键分子,包括大型肿瘤抑制因子同源蛋白2(LATS2)、含β转导素重复序列蛋白(β-TrCP)、N-myc下游调节基因2(NDR2)和亮氨酸拉链肿瘤抑制基因1(LZTS1)等。结论 miR-135b可能通过靶向Hippo信号通路相关基因促进肝癌细胞的侵袭和转移。

心房颤动患者血清miR-29b和miR-135b水平表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的相关性研究

目的 观察心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者血清微小核糖核酸(micro RNA,miRNA,miR)-29b和miR-135b的表达变化,探讨二者表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的关系。方法 选取2019年7月~2022年7月于沧州市人民医院心血管内科住院诊治并接受射频消融术治疗的AF患者(病例组,n=158)以及同期体检的健康者(对照组,n=126)。收集AF患者的一般临床资料及生化指标,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-29b和miR-135b相对表达水平。采用多因素Logistic回归分析AF患者术后复发的影响因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-29b和miR-135b水平对AF患者术后复发的预测价值,曲线下面积(area under the curve,AUC)比较采用Z检验。结果 与对照组比较,病例组血清miR-29b(0.64±0.13 vs 1.04±0.24)和mi R-135b水平(0.45±0.08 vs 1.00±0.14)均降低,差异均有统计学意义(t=17.916,41.604,均P<0.05);与低纤维化组比较,高纤维化组血清miR-29b(0.51±0.11 vs 0.76±0.15)和miR-135b水平(0.34±0.07 vs 0.55±0.09)均降低,差异有统计学意义(t=11.896,16.314,均P<0.05)。与未复发组比较,复发组左心房内径(45.34±3.56 mm vs35.23±2.89 mm)和血清尿酸(uric acid,UA)水平(478.15±68.45μmol/L vs 421.75±61.76μmol/L)均升高,血清miR-29b(0.54±0.12 vs 0.72±0.14)和miR-135b水平(0.36±0.06 vs 0.53±0.10)均降低,差异有统计学意义(t=19.702,5.441,8.584,12.642,均P<0.05)。Logistic回归分析显示,左心房直径(OR=1.603,95%CI:1.054~2.439),UA(OR=1.527,95%CI:1.202~1.939),miR-29b(OR=0.657,95%CI:0.515~0.835)和miR-135b(OR=0.318,95%CI:0.141~0.719)水平是影响AF患者术后复发的影响因素(均P<0.05);血清miR-29b和miR-135b预测AF患者射频消融术后复发的AUC分别为0.843(95%CI:0.783~0.902),0.901(95%CI:0.852~0.949),最佳阈值分别为0.43和0.64,灵敏度分别为65.1%和80.2%,特异度分别为88.9%和91.7%,两者联合预测术后复发的AUC为0.947(95%CI:0.914~0.981),灵敏度和特异度分别为90.75%,83.1%。结论 血清miR-29b和miR-135b水平异常表达与AF患者心房纤维化程度及射频消融术后复发有关,二者联合预测AF患者术后复发具有一定的价值。

未破裂颅内动脉瘤患者血清miR-135b和miR-145表达水平及临床价值研究

目的探究血清miR-135b和miR-145在未破裂颅内动脉瘤(unruptured intracranial aneurysm,UIA)患者中的表达水平及临床价值。方法选取2018年5月~2020年3月邯郸市第一医院神外三科收治的102例UIA患者作为研究组,另选同期健康体检者95例作为对照组,同时收集受试者一般资料进行比较。实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清中miR-135b和miR-145表达水平;ROC曲线分析血清miR-135b和miR-145对UIA的诊断价值;Logistic回归分析UIA形成的影响因素。结果研究组中高血压(62.75%)、高血脂(60.00%)、吸烟史(64.76%)、饮酒史(70.59%)患者所占比例高于对照组(46.72%,44.21%,47.37%,53.68%),差异均有统计学意义(χ^(2)=5.361,4.986,6.139,5.993,均P<0.05);研究组患者血清miR-135b(0.79±0.20)表达水平低于对照组(1.03±0.27),血清miR-145水平(1.28±0.24)高于对照组(0.99±0.22),差异均有统计学意义(t=7.122,8.821,均P<0.05);与动脉瘤个数为1及动脉瘤直径<7mm的患者相比,动脉瘤个数≥2及动脉瘤直径≥7mm的患者血清中miR-135b表达水平(0.68±0.18 vs 0.84±0.21,0.71±0.17mm vs 0.85±0.22mm)降低,miR-145水平(1.37±0.31mm vs 1.24±0.21mm,1.37±0.30mm vs 1.21±0.19mm)升高,差异均有统计学意义(t=2.472~3.689,均P<0.05);血清miR-135b,miR-145以及二者联合诊断UIA的曲线下面积(AUC)分别为0.788,0.836和0.907,二者联合的诊断效能优于其各自单独检测(Z=4.236,3.226,均P<0.05);Logistic回归分析结果显示,高血压(OR=1.326,95%CI=1.044~1.684)、吸烟史(OR=1.457,95%CI=1.077~1.970)、饮酒史(OR=1.879,95%CI=1.113~3.171)、血清miR-135b水平<0.94(OR=0.758,95%CI=0.612~0.939)、血清miR-145水平≥1.22(OR=1.433,95%CI=1.113~1.845)均是UIA的影响因素(均P<0.05)。结论UIA患者血清miR-135b水平下调,miR-145水平上调,二者与UIA的形成和发展存在相关性,且二者联合检测对UIA形成的诊断效能较高。

血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的相关性

目的分析血清微小核糖核酸(miR)-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。方法回顾性分析2019年1月至2020年2月在该院接受化疗且化疗结束后产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为耐药组,同期选取在该院接受化疗且化疗结束后未产生耐药性的52例老年乳腺癌患者作为敏感组,全部患者均接受6个周期新辅助化疗方案化疗,其患者资料完整,包括一般资料、实验室指标检测结果资料,重点分析化疗前血清miR-671-3p、miR-135b水平与老年乳腺癌患者化疗耐药性的关系。结果耐药组血清miR-671-3p mRNA相对表达量低于敏感组,miR-135b mRNA相对表达量高于敏感组,差异有统计学意义(P<0.05);组间其他实验室指标比较差异无统计学意义(P>0.05);Spearman相关分析结果显示,老年乳腺癌患者血清miR-671-3p mRNA相对表达量与miR-135b mRNA相对表达量呈负相关(r<0,P<0.05);回归分析结果显示,血清miR-671-3p mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的保护因素(OR<1,P<0.05);miR-135b mRNA相对表达量高表达是老年乳腺癌患者化疗耐药性的危险因素(OR>1,P<0.05);绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),化疗前血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量预测老年乳腺癌患者化疗耐药性风险的曲线下面积均>0.70,预测价值较理想,且联合预测的价值最好。结论血清miR-671-3p mRNA相对表达量、miR-135b mRNA相对表达量与老年乳腺癌患者化疗耐药性有关。

miR-135b-5p抑制脓毒症引起的小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制

目的:探究miR-135b-5p在小鼠脓毒症(sepsis)引起的急性肺损伤(ALI)模型中的表达水平及其对小鼠肺部炎症反应和细胞焦亡的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为6组,每组8只,通过盲肠结扎穿刺法(CLP)手术构建CLP诱导的脓毒症小鼠模型:腹腔注射0.1 mg/kg的巴比妥麻醉,腹部纵向切开暴露盲肠,结扎盲肠并用注射器针头进行穿孔,挤出部分肠道内容物后缝合伤口。假手术组(Sham组)开腹后不做任何处理缝合伤口,无CLP手术处理。治疗组分为CLP+NC mimic组,CLP+miR-135b-5p mimic组,CLP+NC mimic+empty vector组,CLP+消皮素D(GSDMD)组,CLP+miR-135b-5p mimic+GSDMD组。治疗组小鼠在CLP手术前一周皮下注射200μl溶解于生理盐水的NC mimic(200 nmol/L),miR-135b-5p mimic(200 nmol/L),empty vector(100 nmol/L),GSDMD vector(100 nmol/L),每天注射1次,连续一周。术后24 h采用二氧化碳窒息法实施安乐死。采用qRT-PCR检测小鼠肺组织样本中miR-135b-5p和GSDMD mRNA的表达水平;苏木精-伊红(HE)染色检测小鼠肺组织形态和损伤状态;采用5 ml生理盐水冲洗小鼠右肺3次,每次持续约3~5 min,收集肺泡灌洗液(BALF),酶联免疫吸附实验(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中GSDMD、白介素1β(IL-1β)和白介素18(IL-18)的表达水平;蛋白免疫印迹法检测小鼠肺组织内含NLR家族PYRIN域蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase 1)以及切割后的N-端GSDMD端蛋白结构域(cleaved-GSDMD-N)的表达水平。双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-135b-5p与GSDMD的靶向结合关系。结果:与对照组相比,CLP组小鼠肺组织中有大量的炎症细胞浸润,肺泡损伤,细胞间质水肿及肺泡塌陷等病理特征,小鼠肺组织内细胞焦亡相关蛋白(NLRP3,caspase-1和GSDMD)的表达水平明显增加(P<0.01),但miR-135b-5p的表达水平明显下调(P<0.01);与CLP组相比,超表达miR-135b-5p能够明显抑制CLP诱导的小鼠肺组织内细胞焦亡(P<0.01),靶向抑制GSDMD的表达水平(P<0.01);超表达GSDMD能够逆转超表达miR-135b-5p对肺组织细胞焦亡的抑制作用(P<0.01),超表达miR-135b-5p能够通过靶向GSDMD抑制小鼠BALF中IL-1β及IL-18的表达水平(P<0.01)。结论:miR-135b-5p靶向下调GSDMD抑制细胞焦亡,改善脓毒症引起的ALI,为脓毒症诱导的ALI治疗提供了潜在的治疗靶点和理论依据。

miR-135b-3p调控XAF1表达影响甲状腺癌细胞的迁移、侵袭和放射增敏性

目的探讨miR-135b-3p对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和放射敏感性的影响以及其可能的调控机制。方法培养正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、甲状腺癌细胞K1和TPC-1,RT-qPCR检测细胞中miR-135b-3p表达,Western blot检测细胞中X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(XAF1)表达。转染anti-miR-135b-3p至TPC-1细胞抑制miR-135b-3p表达,Transwell、Western blot及克隆形成实验分别检测抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移和侵袭、E-cadherin和MMP-2蛋白表达及对TPC-1细胞放射敏感性的影响。双荧光素酶报告基因实验验证miR-135b-3p与XAF1之间的靶向调控关系。结果与Nthy-ori 3-1细胞相比,K1和TPC-1细胞中miR-135b-3p表达水平显著升高(P<0.05),XAF1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-135b-3p表达可抑制TPC-1细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),促进TPC-1细胞E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MMP-2蛋白表达(P<0.05),增强TPC-1细胞的放射敏感性(P<0.05)。miR-135b-3p靶向负调控XAF1表达。抑制XAF1表达可降低抑制miR-135b-3p表达对TPC-1细胞迁移、侵袭及放射敏感性的影响。结论miR-135b-3p通过下调XAF1表达促进甲状腺癌细胞的迁移和侵袭能力,并降低其放射增敏性,是甲状腺癌的潜在治疗靶点。

miR-135b在鼻咽癌中的表达及其意义

目的探讨mi R-135b在鼻咽癌(NPC)中的表达情况及与临床病理特征的关系。方法收集鼻咽患者活检组织92例,其中NPC组织67例,鼻咽黏膜慢性炎症(CIONM)组织25例。通过q PCR方法检测mi R-135b在NPC组织和CIONM组织中的相对差异表达,利用SPSS软件统计分析mi R-135b与NPC临床病例特征的相关性。结果 (1)mi R-135b在NPC组织中的表达量明显高于CIONM组织(P<0.01);(2)mi R-135b在不同性别中亦存在明显差异,92例鼻咽患者和67例NPC患者中均存在男性的表达明显高于女性(P<0.01);(3)mi R-135b的表达与年龄有相关性(r=0.213,P<0.05);(4)mi R-135b在淋巴结转移中起重要作用,在淋巴结转移患者中mi R-135b的表达高于无淋巴结肿大的患者(P<0.05)。结论在NPC患者中mi R-135b在年龄分组、性别分组及淋巴结是否转移分组中均存在表达差异。mi R-135b是NPC的危险因素,为后续探索NPC早期诊断的分子标记物提供理论基础。

miR-135b-5p靶向CMTM3调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力

目的:探究miR-135b-5p通过靶向CMTM3基因调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌组织和细胞系中CMTM3和miR-135b-5p的表达水平。利用慢性病毒转染技术将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌细胞,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8比色法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖、侵袭和迁移能力;Western blotting检测转染后细胞中CMTM3蛋白表达水平。利用生物信息学网站预测miR-135b-5p潜在靶基因CMTM3,利用荧光素酶实验进行验证。结果:RT-qPCR检测结果表明,miR-135b-5p在胃癌组织和胃癌细胞株中呈现高表达,CMTM3在胃癌组织中呈现低表达(P<0.01)。RT-qPCR检测转染效率,结果显示,转染miR-135b-5p inhibitor敲低了miR-135b-5p的表达水平(P<0.001);CCK-8和Transwell实验结果表明,敲低miR-135b-5p后抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01),Western blotting实验结果表明,敲低miR-135b-5p促进了CMTM3蛋白的表达。生物信息学网站预测CMTM3为miR-135b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验证实了miR-135b-5p直接靶向胃癌细胞中CMTM3基因(P<0.01)。结论:miR-135b-5p作为重要的调节因子,反向调节抑癌靶基因CMTM3,从而促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

miR-135b-5p靶向KLF4基因调控胃癌SGC-7901细胞生物学行为的研究

目的 研究miR-135b-5p通过靶向KLF4基因对人胃癌SGC-7901细胞生物学行为的影响。方法通过RT-PCR检测人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平,将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中,RT-PCR和Western blotting分别检测转染后细胞中miR-135b-5p和KLF4蛋白表达水平,MTT法、流式细胞术、Transwell实验分别检测转染对细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。生物信息学软件预测及双荧光素酶报告基因实验验证KLF4是否为miR-135b-5p的靶基因。结果胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、BGC-823、AGS中miR-135b-5p表达水平显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,且胃癌SGC-7901细胞中miR-135b-5p表达水平最高。在SGC-7901细胞中转染miR-135b-5p inhibitor 48 h 后,miR-135b-5p的表达水平显著降低,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显升高。下调miR-135b-5p后SGC-7901细胞增殖能力下降,凋亡率升高,侵袭和迁移能力减弱。双荧光素酶报告基因实验结果显示,KLF4是miR-135b-5p靶基因。结论 miR-135b-5p能够通过靶向KLF4抑制胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。

miR-135b-5p调控TIMP3的表达对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-135b-5p对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、转移的影响及其可能的机制。方法使用Lipofectamine-2000将miR-135b-5p siRNA转染至SUNE-1细胞,并将NC siRNA转染至SUNE-1细胞中作为对照组。实时定量PCR检测NP69、CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中miR-135b-5p及TIMP3的表达水平。双荧光素酶报告基因检测miR-135b-5p及TIMP3的调控关系,免疫蛋白印迹实验检测TIMP3蛋白的表达含量,CCK-8实验检验SUNE-1细胞的增殖能力,Transwell实验检验SUNE-1细胞的迁移及侵袭能力。miR-135b-5p的表达与鼻咽癌(NPC)患者的临床病理学参数之间的关联。结果 miR-135b-5p在CNE-1、SUNE-1、C666-1细胞系及鼻咽癌组织中表达含量均上升,并且在SUNE-1细胞系中其的表达水平最低;双荧光素酶报告基因结果显示:抑制miR-135b-5p表达可显著增高SUNE-1细胞中TIMP3的荧光素酶活性;抑制miR-135b-5p表达后,TIMP3蛋白的表达相应上调,同时削弱了SUNE-1细胞增殖、迁移、侵袭能力。同时收集整理NPC患者相关临床资料进行对比分析,结果发现miR-135b-5p的表达与NPC的病理分期相关以及淋巴结转移情况呈正相关。结论抑制miR-135b-5p的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并靶向上调TIMP3的表达。

miR-135b-5p通过靶向下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素敏感性的机制

目的探讨miR-135b-5p通过调控X盒结合蛋白(XBP1)对MCF-7/DOXR细胞阿霉素敏感性的机制。方法采用Westernblot检测XBP1的表达水平;RT-qPCR法检测XBP1 mRNA在乳腺癌细胞MCF-7和乳腺癌阿霉素耐药MCF-7/DOXR细胞中的表达水平以及miR-135b-5p的表达水平;CCK-8检测MCF-7/DOXR细胞的增殖情况;Annexin-V-FITC双染流式细胞术检测MCF-7/DOXR细胞的凋亡情况;双荧光素酶报告基因验证miR-135b-5p与XBP1的调控关系。结果XBP1在乳腺癌细胞MCF-7和MCF-7/DOXR细胞中均高表达(P<0.05),敲降XBP1可显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并促进了细胞凋亡(P<0.05)。双荧光素酶报告基因证实,XBP1是miR-135b-5p的潜在靶基因,miR-135b-5p靶向下调XBP1的表达水平(P<0.05)。实验进一步证实,过表达miR-135b-5p下调XBP1进而显著抑制MCF-7/DOXR细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论miR-135b-5p通过下调XBP1增强MCF-7/DOXR细胞对阿霉素的敏感性。

miR-135b在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨miR-135b在宫颈癌及相应癌旁组织中的表达情况及其与宫颈癌临床病理特征的相关性。方法收集26例宫颈癌和相应癌旁组织,运用RT-PCR的方法检测26例宫颈癌及相应癌旁组织中miR-135b的表达,分析miR-135b与宫颈癌临床病理特征的相关性,并评价其临床意义。结果荧光定量PCR显示宫颈癌中miR-135b的表达(8.36±3.67)比癌旁组织(6.19±2.81)明显上调(P<0.05)。miR-135b的表达与宫颈癌淋巴结转移、临床分期(Ⅲb)之间存在相关性(均P<0.05)。结论 miR-135b可能在宫颈癌的发生发展中发挥重要的作用。