lncRNA FUT8-AS1通过调控miR-142-5p/BCL2轴促进上皮性卵巢癌细胞增殖、侵袭和EMT

目的 观察FUT8-AS1基因在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)组织和细胞株中的表达,探讨影响EOC细胞增殖、侵袭和EMT的机制。方法 采用GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析FUT8-AS1在EOC组织中的表达及与患者生存期的关系。收集74例EOS组织标本和60例正常组织标本,应用RT-PCR法检测FUT8-AS1、miR-142-5p、BCL2和EMT相关基因的表达;运用CCK-8和Transwell实验检测敲低FUT8-AS1基因表达对EOC细胞CAOV3增殖和侵袭的影响。利用双荧光素酶报告分析FUT8-AS1与miR-142-5p的相互作用。结果 GEPIA2和Kaplan-Meier Plotter数据库分析发现,FUT8-AS1在EOC组织中的表达显著高于正常组织(P<0.05),FUT8-AS1高表达组的总生存率显著低于FUT8-AS1低表达组(P<0.01);FUT8-AS1基因在74例EOC组织中的表达明显高于正常组织[(2.547±1.370)vs(1.330±0.831),P<0.01],与大网膜转移、淋巴结转移、FIGO分期和总生存期均相关(P<0.01或P<0.05),敲低FUT8-AS1基因可以抑制CAOV3细胞的体外增殖、侵袭能力和EMT(P<0.01或P<0.05)。双荧光素酶报告分析系统检测显示,共转染miR-142-5p mimics和野生型FUT8-AS1-WT质粒,CAOV3细胞的荧光素酶活性明显降低(P<0.05),同时转染miR-142-5p mimics可抵消CAOV3细胞中由敲低FUT8-AS1导致的BCL2基因表达下调(P<0.05)。结论 FUT8-AS1基因在EOC中呈高表达且导致预后差,敲低FUT8-AS1基因可以抑制CAOV3细胞的体外增殖、侵袭能力和EMT,FUT8-AS1基因可能通过靶向miR-142-5p/BCL2分子轴促进EOC的进展。

血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-181c-5p和miR-142-5p在非小细胞肺癌诊断中的价值。方法前瞻性选取NSCLC患者65例作为研究对象,为NSCLC组;另选取同期体检健康者60例为健康组。收集NSCLC患者的一般资料,包括年龄、性别、病理类型、肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度等。NSCLC患者治疗前、健康组体检时抽取空腹静脉血,血清中提取外泌体,RT-PCR法检测外泌体的miR-181c-5p和miR-142-5p的表达。结果NSCLC组血清中miR-181c-5p和miR-142-5p的表达明显低于健康组(t=7.358、8.613,P<0.001)。NSCLC患者miR-181c-5p和miR-142-5p表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度、浸润程度相关(P<0.05)。miR-181c-5p曲线下面积AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925,P<0.001),当截断值为0.673时,灵敏度为81.54%,特异度为71.67%;miR-142-5p曲线下面积AUC为0.878(95%CI:0.819~0.936,P<0.001),当截断值为0.752时,灵敏度为84.62%,特异度为72.30%;miR-181c-5p和miR-142-5p联合诊断的曲线下面积AUC为0.912(95%CI:0.863~0.961,P<0.001),灵敏度为86.15%,特异度为78.33%。结论miR-181c-5p和miR-142-5p在NSCLC患者血清中低表达,其有望成为临床NSCLC辅助诊断的分子标志物。

强直性脊柱炎模型小鼠踝关节组织和临床患者PBMC中miR-142-5p,SOCS1 mRNA表达及与免疫功能分析研究

目的探究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)模型小鼠和临床患者外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cell,PBMC)中微小RNA-142-5p(miR-142-5p),细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor ofcytokine signaling 1,SOCS1)mRNA表达及其对免疫功能的影响。方法通过实时荧光定量(quantitative real timePCR,qRT-PCR)检测2022年1月~2023年3月商丘市第一人民医院收治的30例确诊的AS患者(患者组)和30例健康体检者(健康组)的PBMC中miR-142-5p和SOCS1 mRNA水平。采用牛蛋白聚糖联合完全弗氏佐剂诱导AS小鼠模型,然后将小鼠分为对照组、模型组、阴性组和拮抗剂组。对照组和模型组小鼠尾静脉注射生理盐水,阴性组和拮抗剂组小鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-142-5p-antagomir。治疗2周后,分别评估各组小鼠的关节炎症状评分。通过苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色评价踝关节形态。采用ELISA法检测小鼠血清中Th1细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、Th17细胞因子白细胞介素-17(IL-17)和Treg细胞因子叉头盒蛋白P3(FOXP3)的表达水平。通过qRT-PCR和Western blot检测PBMC和踝关节组织中miR-142-5p,SOCS1,IFN-γ,IL-4,IL-17和FOXP3的mRNA和蛋白表达水平。结果与健康组比较,患者组PBMC中miR-142-5p水平升高(3.03±0.99 vs1.00±0.21),SOCS1 mRNA水平降低(0.41±0.09 vs 1.00±0.18),差异具有统计学意义(t=10.997,15.956,均P<0.001)。与对照组比较,模型组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(4.00±0.52 vs 1.00±0.04)升高,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均升高,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均降低,差异具有统计学意义(t=23.356,31.420,48.056,47.224,38.035,29.007,54.183,28.123,55.155,26.758,45.346,均P<0.05);关节炎症状评分升高(7.83±0.94 vs 0.00±0.00,t=22.212,P<0.05),踝关节结构破坏明显;血清中IFN-γ,IL-17水平以及IFN-γ/IL-4比值(0.81±0.08 vs 2.08±0.33)和IL-17/FOXP3比值(0.41±0.03 vs 1.27±0.10)均升高,差异具有统计学意义(t=15.382,35.779,15.412,35.130,均P<0.05)。与阴性组比较,拮抗剂组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(1.47±0.10 vs 3.89±0.33)降低,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均降低,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均升高,差异具有统计学意义(t=18.846,22.969,43.454,32.617,23.259,20.881,41.832,11.994,32.977,15.190,35.834,均P<0.05);关节炎症状评分降低(7.42±1.24 vs 2.75±0.75,t=13.233,P<0.05),踝关节形态明显改善;血清中IFN-γ,IL-17水平以及IFN-γ/IL-4比值(1.22±0.11 vs 1.91±0.19)和IL-17/FOXP3比值(0.69±0.05vs 1.23±0.12)均降低,差异具有统计学意义(t=8.688,22.972,8.377,22.007,均P<0.05)。结论miR-142-5p在AS中高表达,使用拮抗剂下调miR-142-5p可能通过上调SOCS1进而降低Th1/Th2和Th17/Treg比值,从而改善AS小鼠的免疫平衡并抑制AS的进展。

LncRNA TUG1调控miR-142-5p/PD-L1轴促进非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)牛磺酸上调基因1(taurine up-regulated gene 1,TUG1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞生物学行为的影响及分子机制。方法采用qRT-PCR、Western blot分别检测组织(NSCLC癌组织、癌旁组织)和细胞(人正常气管上皮细胞HBE及NSCLC细胞A549、H2009、H1975)中TUG1、miR-142-5p及PD-L1的表达。将pcDNA-TUG1、si-TUG1、miR-142-5p mimics、si-TUG1+anti-miR-142-5p分别转染于A549,qRT-PCR、Western blot分别检测细胞中TUG1、miR-142-5p及PD-L1表达;CCK-8检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶基因实验分别检测TUG1和miR-142-5p、miR-142-5p和PD-L1的关系;RNA免疫共沉淀检测miR-142-5p与TUG1的相互作用。结果NSCLC组织中TUG1(2.28±0.23 vs 1.00±0)、PD-L1(0.93±0.11 vs 0.25±0.01)表达高于癌旁组织,miR-142-5p(0.31±0.02 vs 1.00±0)表达低于癌旁组织(P<0.05);与人正常气管上皮细胞HBE比较,NSCLC细胞A549中TUG1(3.21±0.27 vs 1.00±0)、PD-L1(1.12±0.12 vs 0.24±0.01)表达水平最高,miR-142-5p(0.23±0.02 vs 1.00±0)表达水平最低(P<0.05);过表达TUG1促进A549细胞增殖、迁移、侵袭;下调TUG1或上调miR-142-5p表达均对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力发挥抑制作用;TUG1负调控miR-142-5p,miR-142-5p负调控PD-L1;下调miR-142-5p减弱了沉默TUG1对A549细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论TUG1在NSCLC组织和细胞中高表达,沉默TUG1通过miR-142-5p/PD-L1轴抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭。

miR-142-5p对LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性因子释放和增殖、凋亡的影响

本试验旨在探讨miR-142-5p对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性因子释放以及增殖和凋亡的影响。采用小鼠乳腺上皮细胞系经LPS诱发炎症反应,分别经miR-142-5p模拟物或抑制剂处理,检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的释放水平,AKT/p65信号通路关键蛋白磷酸化水平以及细胞增殖和凋亡水平。结果显示:与对照组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8分泌水平显著上调(P<0.05),p-AKT和p-P65蛋白相对表达水平显著上调(P<0.05),G0/G1期细胞比率上调,S期细胞比率降低,细胞增殖活力下降,细胞凋亡率显著增加(P<0.05);与LPS组相比,LPS+抑制剂组上述检测数值变化减弱(P<0.05),而LPS+模拟物组上述检测数值变化则进一步增强(P<0.05),LPS+抑制剂阴性对照组和LPS+模拟物阴性对照组上述检测数值均无显著差异(P>0.05)。结果表明,miR-142-5p可能通过激活AKT/p65信号通路,促进炎性因子的分泌和释放,并抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

阿尔茨海默病患者血清miR-98-5p和miR-142-5p水平变化及其意义

目的探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清微小RNA-98-5p(miR-98-5p)、微小RNA-142-5p(miR-142-5p)水平变化及其临床意义。方法选择AD患者103例(观察组)、体检健康的志愿者50例(对照组),采集两组清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用RT-qPCR法检测血清miR-98-5p、miR-142-5p,采用ELISA法检测血清Aβ1-40、Aβ1-42,同期采用简易精神状态检查量表(MMSE)评分评估认知功能。采用Pearson/Spearman相关分析法分析AD患者血清miR-98-5p、miR-142-5p水平与血清Aβ1-40、Aβ1-42水平和MMSE评分的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-98-5p、miR-142-5p水平对AD的诊断价值。结果观察组血清miR-98-5p、miR-142-5p水平均显著高于对照组(t/Z分别为7.557、5.827,P均<0.01)。观察组血清Aβ1-40水平显著高于对照组(Z=7.519,P<0.01),血清Aβ1-42水平和MMSE评分均显著低于对照组(t/Z分别为5.218、9.616,P均<0.01)。Pearson/Spearman相关分析显示,AD患者血清miR-98-5p、miR-142-5p水平与血清Aβ1-40水平均呈正相关关系(r分别为0.594、0.562,P均<0.05),与血清Aβ1-42水平均呈负相关关系(r分别为-0.517、-0.574,P均<0.05),与MMSE评分亦呈负相关关系(r分别为-0.618、-0.624,P均<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-98-5p、miR-142-5p水平单独和联合诊断AD的曲线下面积分别为0.782、0.791、0.887,血清miR-98-5p、miR-142-5p水平联合诊断AD的曲线下面积高于血清miR-98-5p、miR-142-5p水平单独(Z分别为3.409、3.661,P均<0.05)。结论AD患者血清miR-98-5p、miR-142-5p水平显著升高,其水平升高与Aβ沉积和认知功能降低密切相关;miR-98-5p、miR-142-5p有可能成为诊断AD的血清生物标志物。

miR-142-5p通过影响上皮间质转化抑制肺腺癌H1650细胞的侵袭与迁移

目的:探讨肺腺癌组织中miR-142-5p的表达及其对H1650细胞增殖、侵袭、迁移及上皮间质转化(epithelieal-mesenchymal transition,EMT)的影响及其作用机制。方法:收集2014年1月至2015年1月在河北医科大学第四医院胸外科行肿瘤切除并经病理证实的107例肺腺癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,以及人肺腺癌细胞系H1650、HCC827、A549、H1975、PC9和人支气管上皮细胞BEAS-2B,用qPCR实验检测肺腺癌组织及细胞中miR-142-5p的表达水平及其与患者临床特征的关系。分别用miR-142-5p模拟物(mimics)、miR-阴性对照质粒(miR-NC)转染H1650细胞后,用CCK8、细胞划痕愈合和Transwell侵袭实验分别检测H1650细胞的增殖、侵袭和迁移能力。使用生物信息学工具预测miR-142-5p的靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p对靶基因的调控作用,Western blotting检测细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及EMT相关蛋白的表达水平。结果:肺腺癌组织及细胞系中miR-142-5p表达水平显著低于癌旁组织及BEAS-2B细胞(均P<0.01);107例肺腺癌组织中,61例(57.01%)低表达miR-142-5p,其表达水平与患者的TNM分期、淋巴结转移密切相关(均P<0.01)。转染miR-142-5p模拟物后,H1650细胞中miR-142-5p高表达,细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(均P<0.05或P<0.01)。生物信息学工具预测CDK5是miR-142-5p的靶基因,经双荧光素酶报告基因验证,miR-142-5p可显著降低H1650细胞中CDK5的表达水平,显著提高E-cadherin表达,降低N-cadherin和Snail的表达水平(均P<0.01)。结论:miR-142-5p在肺腺癌组织和细胞中呈低表达状态,其通过下调CDK5表达影响EMT抑制H1650细胞的侵袭与迁移能力。

MiR-142-5p通过靶向IGF2BP3调控多柔比星诱导的肝癌细胞凋亡

目的:探讨miR-142-5p对多柔比星诱导的原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院88例HCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织(距癌灶组织边缘2~5 cm)标本。采用实时荧光定量PCR检测人HCC组织和癌旁组织、人正常肝细胞以及HCC细胞系中miR-142-5p的表达量。向HCC细胞SMMC-7721中转染miR-142-5p mimics,流式细胞术检测过表达miR-142-5p后SMMC-7721细胞在多柔比星(doxorubicin)(1μg/ml)诱导下凋亡的变化;生物信息学方法预测miR-142-5p可靶向结合胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证。采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测过表达miR-142-5p的SMMC-7721细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达情况。结果:与癌旁组织和正常肝细胞相比,HCC组织(-6.91±2.61 vs-11.59±2.59,P<0.01)和多种HCC细胞系中miR-142-5p呈明显低表达(均P<0.01);过表达miR-142-5p可显著促进多柔比星诱导的HCC细胞SMMC-7721的凋亡[(49.40±3.47)%vs(19.50±1.74)%,P<0.01];过表达miR-142-5p可明显降低HCC细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达水平(P<0.01),敲减IGF2BP3表达可进一步促进多柔比星诱导的SMMC-7721细胞的凋亡(P<0.01)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-5p能够抑制IGF2BP3的3'UTR荧光素酶报告基因的活性。结论:miR-142-5p在HCC组织标本和体外培养细胞系中的表达水平均显著降低,转染miR-142-5p mimics后能够促进多柔比星诱导的HCC细胞的凋亡,其机制可能与miR-142-5p靶向作用IGF2BP3从而促进HCC细胞凋亡有关。

血浆mir-142-5p与冠状动脉粥样硬化程度的关系及其作用机制的研究

目的:探讨血浆mir-142-5p与冠状动脉粥样硬化程度的关系及其作用机制。方法:选择42例冠心病患者和45例健康志愿者,冠心病组均进行Gensini评分,抽取空腹静脉血后应用RT-PCR法检测血浆mir-142-5p水平;应用mir-142-5p minics和inhibitor对ox-LDL处理的血管内皮细胞进行转染,Western blot法检测内皮细胞IGF-1R蛋白的表达情况,RT-PCR检测IGF-1R的相对表达量,硝酸盐还原酶法检测细胞培养上清液中NO的含量。结果:(1)冠心病组血浆mir-142-5p水平高于健康对照组(P<0. 05);(2)冠心病组血浆mir-142-5p水平和Gensini评分呈正相关(P<0. 01);(3)ox-LDL处理后内皮细胞IGF-1R的表达和NO的合成升高(P<0. 01); mir-142-5p inhibitor转染的内皮细胞IGF-1R表达上调(P<0. 01)、NO的合成升高(P<0. 05),而mir-142-5p minics转染的内皮细胞IGF-1R表达下调(P<0. 01)、NO的合成减少(P<0. 05)。结论:冠心病患者血浆mir-142-5p水平较健康人群升高,且其升高程度可反映冠脉病变程度; mir-142-5p通过靶定IGF-1R基因损伤血管内皮功能,可能具有促进动脉硬化进展的作用。

miR-142-5p靶向调控TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡

目的探讨miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中的表达及对人巨噬细胞凋亡的作用。方法构建动脉粥样硬化大鼠模型,qRT-PCR检测动脉粥样硬化组织中miR-142-5p的表达水平。50μg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激人巨噬细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)、内皮细胞24 h后,提取细胞RNA,qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p的表达水平。靶基因预测软件预测miR-142-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因鉴定靶基因的正确性。细胞转染miR-142-5p mimic、mimic control、miR-142-5p inhibitor、inhibitor control,Western blot和qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因的调控作用,流式细胞仪检测miR-142-5p和靶基因对巨噬细胞凋亡的作用。结果 miR-142-5p在动脉粥样硬化组织中表达上调,与正常组织相比差异显著(P<0.01)。血管平滑肌细胞和内皮细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平与刺激前没有明显变化,而巨噬细胞经ox-LDL刺激后miR-142-5p的表达水平较刺激前明显升高(P<0.01)。预测miR-142-5p的靶基因为转化生长因子β2(TGF-β2)。miR-142-5p mimic与TGF-β2共转染后荧光素酶活性最低;miR-142-5p mimic组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与mimic control组相比明显下降,miR-142-5p inhibitor组TGF-β2蛋白和mRNA的表达水平与inhibitor control组相比明显升高(P<0.01);miR-142-5p mimic组细胞凋亡率明显高于mimic control组,TGF-β2 siRNA组细胞凋亡率明显高于siRNA control组(P<0.01)。结论 miR-142-5p在动脉粥样硬化中过度表达,miR-142-5p通过下调靶基因TGF-β2促进人巨噬细胞凋亡。

miR-142-5p靶向调控TOP2A基因对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察miR-142-5p靶向调控拓扑异构酶Ⅱα(TOP2A)基因对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法收集前列腺癌组织和相应的癌旁组织40例,采用qPCR方法检测miR-142-5p、TOP2A mRNA表达,Pearson等级相关分析前列腺癌组织中miR-142-5p与TOP2A表达的相关性。常规培养前列腺癌LNCaP细胞,应用TargetScan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验判断miR-142-5p是否对TOP2A基因具有靶向调控作用。将LNCaP细胞分为正常对照组、转染对照组和TOP2A过表达组,正常对照组转染NC质粒,转染对照组转染miR-142-5p mimic,TOP2A过表达组同时转染miR-142-5p mimic和TOP2A过表达质粒。采用MTS实验检测细胞增殖能力,Boyden实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活性。结果与癌旁组织比较,前列腺癌组织中miR-142-5p表达降低、TOP2A基因表达升高(P均<0.05),二者表达呈负相关(r=-0.601,P<0.05)。TargetScan7.1软件在线预测显示,TOP2A启动子区与miR-142-5p具有结合位点;双荧光素酶报告基因试验结果显示,与NC wt组相比,miR-142-5p wt组荧光素酶活性降低(P<0.05);而NC mut组与miR-142-5p mut组间荧光素酶活性无统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比,转染对照组和TOP2A过表达组细胞增殖率降低,穿膜细胞数减少(P均<0.05);与转染对照组相比,TOP2A过表达组细胞增殖率升高,穿膜细胞数增加(P均<0.05)。与正常对照组相比,转染对照组和TOP2A过表达组细胞中Wnt3a、β-catenin蛋白表达降低;与转染对照组相比,TOP2A过表达组细胞中Wnt3a、β-catenin蛋白表达增加(P均<0.05)。结论前列腺癌组织中miR-142-5p表达降低,TOP2A表达增加,二者呈负相关;miR-142-5p能够靶向调控TOP2A表达,从而抑制前列腺癌细胞的增殖与侵袭能力。

gga-miR-142-5p负调控chMDA5抗传染性法氏囊病病毒感染的分子机制

传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种高度危害养鸡业的传染病。chMDA5在识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMPs)及激活宿主的天然免疫应答中具有重要的作用,但chMDA5识别IBDV的分子机制仍然不清楚。本研究用IBDV感染DT40细胞,在IBDV感染的DT40细胞中,chMDA5的表达水平显著升高。chMDA5过表达可以抑制IBDV的复制,并激活IFN-β promoter和Mx promoter活性,chMDA5抑制表达则得到相反的结果;chMDA5激活IFN-β promoter活性主要是通过IRF7通路。用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析发现gga-miR-142-5p可作用于chMDA5的3'UTR;qRT-PCR和免疫印迹分析表明gga-miR-142-5p可以使chMDA5的蛋白水平表达降低,但mRNA水平没有变化;gga-miR-142-5p可依赖IRF7通路使IFN-β promoter和Mx promoter活性降低,IBDV复制水平升高。本研究表明,gga-miR-142-5p可以作用于chMDA5的3'UTR负调控chMDA5的表达从而影响其下游IFN-β promoter和Mx promoter活性来发挥抗IBDV感染的作用。

急性冠脉综合征患者循环miR-142-5p表达水平的临床意义

目的探讨miRNA-142-5p在急性冠脉综合征(ACS)患者中的表达水平和临床意义。方法收集2014年6月—2015年2月就诊的ACS患者、冠心病平稳患者和正常对照组人群,检测miRNA-142-5p、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肌钙蛋白I(cTnI)的表达量,分析各组miRNA-142-5p的表达量以及与cTnI、hs-CRP的相关性。结果 ACS组miRNA-142-5p表达量最高,较对照组显著性升高(P<0.01),冠心病稳定组表达量正常对照组有明显升高(P<0.01),ACS组与冠心病稳定组之间差异无统计学意义(P>0.05)。ACS组患者中miR-142-5p与cTnI呈正相关(P<0.05),冠心病稳定组未发现两者有相关性(P>0.05);在ACS组中和冠心病稳定组中,miR-142-5p与hs-CRP均呈正相关(P<0.05)。结论 miR-142-5p在ACS患者中表达升高,且与心肌的炎症反应和心肌损伤相关,提示miR-142-5p可能对诊断ACS有一定的临床价值。

miR-142-5p靶向转录因子YY1调控非小细胞肺癌上皮间质转化

目的:探究miR-142-5p靶向转录因子YY1调控上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞体外转移的机制。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞系中YY1和miR-142-5p表达水平;利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-142-5p与YY1的结合位点;Transwell实验和划痕愈合实验分析YY1和miR-142-5p过表达对肺癌细胞迁移、侵袭的影响;Western blot与qRT-PCR检测各组细胞内EMT相关蛋白的表达变化。结果:YY1在不同肺癌细胞系中均表达上调,miR-142-5p表现为表达下调;双荧光素酶报告基因实验结果进一步验证了YY1与miR-142-5p的靶向结合相关性;抑制miR-142-5p表达水平能显著提高细胞中YY1表达,而miR-142-5p过表达能显著抑制肺癌细胞中YY1的表达水平,两者表达水平呈负相关;Transwell和划痕实验表明,YY1过表达能够促进肺癌细胞转移,而miR-142-5p过表达会抑制肺癌细胞转移;YY1过表达促进EMT相关蛋白的表达,而miR-142-5p作用相反。结论:miR-142-5p负向调控YY1作用于EMT相关分子表达,进而在体外抑制NSCLC细胞的转移。

miR-142-5p对癫痫发作后神经元损伤的作用机制

目的探讨miR-142-5p/APLN对癫痫发作后神经元损伤的影响及其调控机制.方法构建大鼠海马神经元癫痫模型,正常神经元细胞作为正常对照组,以此神经元细胞为癫痫细胞模型组.取癫痫大鼠神经细胞分为anti-miR-142-5p组(转染anti-miR-142-5p)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、miR-142-5p组(转染miR-142-5p mimics)、miR-con组(转染miR-con),NC组(未经任何处理的细胞);anti-miR-142-5p+si-con组(共转染anti-miR-142-5p与si-con)、anti-miR-142-5p+si-APLN组(anti-miR-142-5p与si-APLN).qRT-PCR与Western blot检测两组神经细胞中miR-142-5p与APLN的表达.ELISA法检测GSH与MDA含量.流式细胞仪检测细胞凋亡能力变化.双荧光素酶报告基因鉴定miR-142-5p的靶基因.Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达.结果miR-142-5p在癫痫细胞模型组神经细胞中表达上调(P<0.05).干扰miR-142-5p表达后大鼠神经细胞中GSH含量明显增加,MDA含量明显减少(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证明miR-142-5p可直接靶向结合APLN;沉默APLN的表达可部分逆转干扰miR-142-5p的表达对大鼠癫痫神经细胞的保护作用.结论干扰miR-142-5p表达可能上调APLN的表达抑制神经细胞凋亡从而减轻癫痫发作后神经元损伤.

lncRNA LOXL1-AS1通过靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭、迁移能力

目的探讨lncRNA LOXL1-AS1对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法 Transwell小室法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达后对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,生物信息学方法预测LOXL1-AS1和miR-142-5p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验验证两者靶向关系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测上调或敲低LOXL1-AS1表达对miR-142-5p表达的影响;免疫印迹法检测EMT标志物蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ZO-1)表达和PIK3CA表达。结果敲低LOXL1-AS1表达可抑制胃癌细胞侵袭、迁移能力,并抑制胃癌细胞EMT;双荧光素酶实验证实LOXL1-AS1直接靶向作用于miR-142-5p;LOXL1-AS1负调控miR-142-5p表达与活性,并通过miR-142-5p正调控PIK3CA表达;过表达LOXL1-AS1可促进胃癌细胞侵袭和迁移,miR-142-5p可逆转LOXL1-AS1过表达对胃癌细胞侵袭和迁移的促进作用。结论 LOXL1-AS1靶向miR-142-5p/PIK3CA调控胃癌细胞侵袭和迁移能力。

高危型HPV阳性患者血清中miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平对宫颈癌发生的临床意义

目的探讨血清miR-130b-5p和miR-142-5p在高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性的宫颈癌患者中的表达水平及其临床价值。方法选取高危型HPV阳性宫颈癌患者76例,另选取80例高危型HPV阳性非宫颈癌患者为对照组。采用ELISA法检测2组的血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平以及分析其与宫颈癌发生的关系。结果高危型HPV阳性患者发生宫颈癌与年龄、是否绝经、有无分娩史、HPV分型无关(P均>0.05),宫颈癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平显著高于对照组(P均<0.05)。多因素结果分析显示血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平是影响高危型HPV阳性患者发生宫颈癌的独立危险因素(P<0.05)。血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平评估宫颈癌诊断AUC分别为0.737,0.746,联合检测AUC为0.833。结论血清miR-130b-5p和miR-142-5p表达水平与宫颈癌的发生有关,可为宫颈癌的诊治提供数据参考。

荧光报告系统验证miR-142-5p的靶基因Becn1

目的验证miR-142-5p的靶基因——自噬相关基因Becn1。方法生物信息学预测miR-142-5p与Becn1的结合位点,构建含有结合位点的Becn1基因3＇UTR野生型和突变型质粒,将重组质粒与miR-142-5p-mimics或miR-NC共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。结果 miR-142-5p与Becn1的3＇UTR存在一个结合位点（123~129）;成功构建野生型重组质粒p GL3-Becn1-3＇UTR和靶位点含3个碱基突变的重组质粒Mut-3＇UTR;与共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Becn1-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组荧光素酶活性显著下降,约为41.2%（P〈0.01）;而与对照组相比,共转染Mut-3＇UTR和miR-142-5p-mimics组的荧光素酶活性下降不明显（P〉0.05）。结论初步验证自噬相关基因Becn1是miR-142-5p的靶基因。

miR-142-5p通过直接靶向ELK1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡

目的探讨微小RNA-142-5p(miR-142-5p)通过直接靶向包含转录激活因子ETS样蛋白(ELK)1调控动脉粥样硬化内皮细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人主动脉内皮细胞(HAEC),氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激HAEC,采用qRT-PCR检测细胞中miR-142-5p及ELK1 mRNA的表达水平,Western印迹检测细胞中ELK1及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,流式细胞术检测HAECs凋亡率。双荧光素酶报告基因鉴定miR-142-5p的靶基因。细胞转染anti-miR-142-5p、anti-miR-con、pcDNA、pcDNA-ELK1,Western印迹与qRT-PCR检测miR-142-5p对靶基因ELK1的调控作用。流式细胞术检测miR-142-5p与ELK1表达变化对HAECs凋亡的作用。Western印迹检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达。结果ox-LDL刺激HAECs后miR-142-5p及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达上调,ELK1与Bcl-2蛋白表达下调,细胞凋亡率增加,与ox-LDL刺激前相比差异显著(P<0.05);双荧光素酶报告基因验证ELK1是miR-142-5p的靶基因;抑制miR-142-5p或ELK1过表达后细胞凋亡率降低,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达下调,而Bcl-2蛋白表达上调;抑制ELK1表达可逆转anti-miR-142-5p对细胞凋亡的抑制作用;抑制miR-142-5p表达后p-GSK-3β、β-catenin、c-myc蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),anti-miR-142-5p与si-ELK1共同转染后p-GSK-3β、β-catenin、c-myc蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论miR-142-5p可通过直接靶向ELK1促进人主动脉内皮细胞凋亡,其可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路而发挥作用。

lncRNA PTENP1通过miR-142-5p/PTEN分子轴调控结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨lncRNA PTENP1(PTENP1)通过miR-142-5p/PTEN轴调控结直肠癌(CRC)HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法:采用RT-qPCR检测CRC组织和细胞系中PTENP1和miR-142-5p的表达水平;在HCT116细胞中转染pcDNA3.1-PTENP1、sh-PTENP1、pcDNA3.1-PTEN、sh-PTEN及miR-142-5p inhibitors,采用Western blot检测HCT116细胞中PTEN蛋白表达水平;Transwell和CCK-8检测HCT116细胞迁移、侵袭和增殖;此外,采用双荧光素酶报告基因验证miR-142-5p与PTENP1/PTEN的靶向关系。结果:CRC组织和细胞系中PTENP1呈低表达;且过表达PTENP1显著抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶结果证实,miR-142-5p靶向结合PTEN及PTENP1的3'UTR;进一步实验结果表明,PTENP1上调PTEN,通过靶向下调miR-142-5p进而抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭。结论:PTENP1可通过竞争性结合miR-142-5p上调PTEN表达,进而抑制HCT116细胞增殖、迁移和侵袭。