miR-146b-5p调控CD82介导食管鳞状细胞癌恶性表型

目的探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146b-5p的下游靶基因;Western-blot实验结果显示,相比NC组,KD组CD82在蛋白水平显著性上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,wt+mimic组荧光强度较mut+mimic组显著性下降(P<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向调控CD82促进食管鳞状细胞癌细胞的迁移,为食管鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

血清miR-155-5p和miR-146b-5p与继发性急性髓系白血病染色体畸变及预后的关系

目的探究血清微小RNA(miR)-155-5p和miR-146b-5p与继发性急性髓系白血病(sAML)染色体畸变及预后的关系。方法选择2017-05至2020-04空军军医大学第二附属医院血液内科收治的sAML患者26例,另外纳入同期在医院进行体检的健康人25名作为健康对照组。根据国际人类细胞遗传命名系统,将sAML患者分为染色体畸变组和染色体正常组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平,并记录患者随访期间的总生存期。结果与健康对照组相比,sAML组患者血清miR-155-5p显著升高[4.69(1.87,30.83)vs.1.13(0.79,1.78),Z=-4.070,P<0.001],而miR-146b-5p显著降低[1.79(1.55,2.44)vs.3.02(2.58,3.43),Z=-4.561,P<0.001]。二者联合诊断sAML的曲线下面积为0.922(95%CI:0.846~0.997)。与染色体正常组相比,染色体畸变组sAML患者血清miR-155-5p明显升高[19.26(4.45,46.65)vs.1.51(0.79,3.27),Z=-3.585,P<0.001],miR-146b-5p明显降低[1.55(1.50,1.97)vs.2.16(1.79,3.00),Z=-2.954,P=0.003]。血清miR-155-5p和miR-146b-5p水平识别染色体畸变的AUC分别为0.925(95%CI:0.826~1.000)、0.850(95%CI:0.703~0.997),联合AUC可提高至0.919(95%CI:0.812~1.000)。血清miR-155-5p和miR-146b-5p是染色体畸变的独立影响因素(P<0.05)。血清miR-155-5p高表达(≥4.27)和miR-146b-5p低表达(<1.62)患者的总生存率更低,中位生存时间更短(P<0.05)。Cox回归分析结果表明,血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达是sAML患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论血清miR-155-5p高表达和miR-146b-5p低表达与sAML患者染色体畸变和预后不良密切相关,二者有希望成为sAML染色体畸变和预后不良的风险预测指标。

miR-146b过表达对脂多糖刺激仔猪肠上皮细胞Toll样受体4基因表达和促炎因子产生的影响

本研究旨在探讨miR-146b过表达对脂多糖(LPS)刺激仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)Toll样受体4(TLR4)基因表达和促炎因子产生的影响。首先利用LPS刺激IPEC-J2细胞,然后使用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测LPS刺激对IPEC-J2细胞中TLR4和促炎因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和干扰素-γ(IFN-γ)等的mRNA表达以及对分泌到细胞培养液中促炎因子含量的影响。在此基础上,通过miR-146b mimic细胞转染试验,探讨miR-146b过表达对LPS刺激的IPEC-J2细胞中TLR4的mRNA表达和促炎因子产生的抑制作用。结果表明:1)与未刺激处理相比,LPS刺激处理的IPEC-J2细胞中TLR4、IL-1β、TNF-α、IL-8和IFN-γ的mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01),细胞培养液中TNF-α、IL-8和IFN-γ含量极显著升高(P<0.01)。2)与LPS处理相比,LPS+miR-146b mimic处理的miR-146b的相对表达量极显著升高(P<0.01),IPEC-J2细胞中TLR4、TNF-α、IL-8和IFN-γ的mRNA相对表达量分别显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞培养液中TNF-α、IL-8和IFN-γ含量极显著降低(P<0.01)。由此可见,miR-146b在LPS刺激的IPEC-J2细胞中可通过抑制促炎因子的产生发挥抗炎作用。

miR-146b-5p靶向E3泛素蛋白连接酶促进高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮间质转化

目的探讨miR-146b-5p与E3泛素蛋白连接酶(ZNRF3)对高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞上皮间质转化(EMT)进程的影响及作用机制。方法正常培养的小鼠为对照组,采用4.25%葡萄糖透析液和0.1 mg/kg的脂多糖诱导腹膜纤维化小鼠模型,收集小鼠腹膜组织,Masson染色观察腹膜组织胶原纤维变化,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(COL I)表达。Western blot检测腹膜组织上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、α-SMA和COL I表达。qRT-PCR检测腹膜组织中miR-146b-5p和ZNRF3表达。双荧光素酶报告基因检测验证miR-146b-5p和ZNRF3靶向关系。分离对照组小鼠腹膜间皮细胞,高糖诱导构建小鼠腹膜间皮细胞纤维化模型,将细胞分为对照组、模型组、mimic-NC组、miR-146b-5p-mimic组和miR-146b-5p-inhibitor组。Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot检测EMT相关蛋白表达。结果与对照组小鼠比较,模型组小鼠腹膜组织增厚,胶原纤维增多,α-SMA和COL I表达增加(P<0.05),miR-146b-5p表达升高(P<0.05),E-cadherin和ZNRF3表达降低(P<0.05)。miR-146b-5p靶向负调控ZNRF3表达。细胞水平检测结果显示,与对照组比较,模型组和mimic-NC组小鼠腹膜间皮细胞迁移和侵袭细胞数增多(P<0.05),E-cadherin表达降低(P<0.05),波形蛋白(Vimentin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达升高(P<0.05)。与模型组比较,miR-146b-5p-mimic组小鼠腹膜间皮细胞变化趋势更为显著,miR-146b-5p-inhibitor组细胞EMT进程受到抑制。结论miR-146b-5p可靶向ZNRF3基因促进高糖诱导的小鼠腹膜间皮细胞EMT进程。

miR-146b-5p和TRIM29在子宫内膜癌中的表达

目的探讨miRNA-146b-5p(miR-146b-5p)和三结构域蛋白29(TRIM29)在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法选取2019年10月—2020年10月徐州医科大学附属医院、徐州医科大学第二附属医院手术切除的子宫内膜癌组织60例、正常增生期子宫内膜组织30例。采用免疫组化法检测组织中TRIM29表达水平,qRT-PCR法检测miR-146b-5p、TRIM29 mRNA表达水平,Spearman法分析两者相关性,Kaplan-Meier法及Cox比例风险回归模型进行预后分析。结果免疫组化显示,TRIM29在子宫内膜癌组织中的阳性表达率(55.0%)低于正常增生期子宫内膜组织(76.7%)(P<0.05)。qRT-PCR检测显示,子宫内膜癌组织中miR-146b-5p的表达显著高于正常增生期子宫内膜组织,而TRIM29的表达明显低于正常增生期子宫内膜组织(P<0.05)。Spearman分析提示,miR-146b-5p与TRIM29的表达呈负相关(r=-0.595,P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,miR-146b-5p高表达组、TRIM29低表达组患者的预后较差(P<0.05)。Cox多因素回归分析显示,miR-146b-5p、TRIM29是影响子宫内膜癌患者预后的独立影响因素。结论子宫内膜癌组织中miR-146b-5p高表达,TRIM29低表达,二者的表达失调可能共同参与子宫内膜癌的发生发展。

miR-146b-3p通过靶向结合LCN1抑制肺鳞癌生物学行为

目的探讨miR-146b-3p通过靶向结合脂质运载蛋白1(LCN1)抑制肺鳞癌生物学行为的效果。方法构建稳定过表达miR-146b-3p和稳定敲低LCN1的NCI-H2170和NCI-H226细胞系,CCK-8法和克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。生物信息学分析miR-146b-3p和LCN1与肺鳞癌临床病理特征的关系,并预测两者之间的靶向关系。双荧光素酶报告实验验证miR-146b-3p和LCN1的靶向关系。RT-PCR检测miR-146b-3p在肺鳞癌细胞中的表达。裸鼠成瘤实验检测肿瘤体质量、体积和肺鳞癌组织中miR-146b-3p的表达。Western blot检测细胞蛋白表达。结果miR-146b-3p在肺鳞癌组织中低表达,肺鳞癌细胞miR-146b-3p过表达后,细胞增殖能力降低,克隆数减少,细胞周期受到阻滞,细胞凋亡率增加,裸鼠移植瘤生长受到抑制,BCL2、CCNB1和CDK2蛋白减少,BAX蛋白增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。LCN1在肺鳞癌组织中高表达,敲低LCN1表达可抑制肺鳞癌细胞增殖,影响细胞周期,促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析显示,LCN1是miR-146b-3p的靶基因;双荧光素酶报告实验显示miR-146b-3p mimic与LCN1-WT共转染使荧光素酶活性降低(P<0.05)。肺鳞癌细胞共转染miR-146b-3p和LCN1后,可以逆转miR-146b-3p抑制细胞增殖和克隆、促凋亡的作用。结论miR-146b-3p可能是通过下调LCN1表达抑制肺鳞癌细胞增殖,影响细胞周期,促进细胞凋亡。

外周血miR-146a与miR-146b表达在儿童抗NMDAR脑炎诊断中的临床意义

目的 探讨外周血和脑脊液miR-146a和miR-146b表达在儿童抗NMDAR脑炎诊疗中的临床意义。方法 选取30例确诊为NMDAR脑炎儿童作为研究对象,随机将其分为观察组和对照组,每组各15例,对照组给予糖皮质激素和免疫球蛋白治疗,观察组联合利妥昔单抗治疗。于患儿入院诊断时和稳定康复出院前采集静脉血和脑脊液标本,采用PCR检测miR-146a和miR-146b的相对表达量。结果 两组患儿临床资料比较差异无统计学意义,P>0.05;入院时两组患儿外周血和脑脊液miR-146a表达差异无统计学意义,P>0.05;出院前观察组患儿外周血和脑脊液miR-146a表达较低,P<0.05;入院时两组患儿外周血和脑脊液miR-146b表达差异无统计学意义,P>0.05;出院前观察组患儿外周血和脑脊液miR-146b表达较低,P<0.05;观察组疗效较对照组较好,P<0.05。结论 miR-146a和miR-146b对诊断儿童抗NMDAR脑炎有重要临床意义。

lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌组织的表达变化

目的分析lncRNA MALAT1、miR-146b-5p膀胱癌(BC)组织的表达变化。方法选取2017年1月6日至2020年1月6日本院收治的90例膀胱癌病患为研究样本,病患接受手术治疗疾病,留取膀胱癌组织、癌旁组织。应用荧光实时定量PCR法对于以上组织内的lncRNA MALAT1、miR-146b-5p进行测定,分析以上物质在BC组织内的表达变化。结果癌旁组织和BC内miR-146b-5p、lncRNA MALATI相对表达量对比具有统计学意义(P<0.05);BC淋巴结转移和miR-146b-5p、lncRNA MALATI表达存在相关性;BC组织内的miR-146b-5p、lncRNA MALAT1表达情况呈负相关(P<0.05)。结论膀胱癌组织内的miR-146b-5p表达降低,lncRNA MALAT1表达上升。以上两者负相关。这种情况的出现和病患淋巴结转移有关联性,日后其可能成为诊治膀胱癌疾病的重要标记物。

葛根芩连汤含药血清通过miR-146b/SIRT1信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗的研究

目的:探讨葛根芩连汤含药血清改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机制。方法:建立胰岛素抵抗HepG2细胞模型,用葛根芩连汤含药血清、吡格列酮干预,并设空白对照组和模型组。比色法检测细胞糖原合成能力,实时定量PCR检测miR-146b的表达,Western blot和实时定量PCR检测SIRT1/FoxO1通路中相关蛋白及mRNA的表达。结果:葛根芩连汤含药血清能逆转胰岛素抵抗HepG2细胞的糖原合成能力下降(P<0.01)。与对照组比较,模型组miR-146b表达显著升高(P<0.01),葛根芩连汤含药血清能显著抑制miR-146b的表达(P<0.01)。Western blot显示,与空白对照组比较,模型组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著降低,acetyl-FoxO1蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,葛根芩连汤含药血清组SIRT1、PPARγ蛋白表达显著升高,acetyl-FoxO1蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。过表达的miR-146b能抑制SIRT1蛋白的表达,沉默miR-146b能增强SIRT1蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:葛根芩连汤含药血清能改善棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗模型,其机制与调控miR-146b/SIRT1信号通路有关。

MiR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层患者外周血清和主动脉组织中的表达及其临床意义

目的:研究miR-146b在急性Stanford A型主动脉夹层(Stanford type A aortic dissection,TAAD)患者外周血清及主动脉壁组织中的表达,探讨miR-146b在TAAD发病中的意义及机制。方法:将研究对象分为对照组(n=23)和TAAD组(n=27),收集所有研究对象的外周血清、术中主动脉壁组织和临床资料。运用实时荧光定量PCR(quantitative realtime PCR,qRT-PCR)检测各组外周血清及主动脉壁组织中miR-146b的表达水平。比较不同主动脉夹层风险级别的miR-146b水平,对miR-146b水平与TAAD患者主动脉夹层破裂风险进行相关性分析。运用DIANA LAB-TarBase 6.0数据库及TargetScan靶基因预测软件预测miR-146b相关靶基因。结果:TAAD组外周血清和主动脉壁组织中miR-146b表达水平均较对照组增高(P<0.001);中度风险和重度高危的TAAD患者外周血清和主动脉壁组织中miR-146b的表达水平较轻度风险患者明显增高(P<0.05);TAAD外周血清和主动脉壁组织中miR-146b差异表达与主动脉夹层高危风险呈正相关(r=0.862,0.872;P<0.05)。核因子κB1(nuclear factor kappa B1,NF-κB1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、基质金属蛋白酶-16(matrix metalloproteinase 16,MMP16)和肌动蛋白2(actin alpha 2,ACTA2)为miR-146b的靶基因。

miR-146b对急性呼吸窘迫综合征大鼠肺组织中ICAM-1表达的调控作用

目的:探讨miR-146b对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺组织中细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响,阐明miR-146b治疗ARDS的分子机制。方法:采用尾静脉注射油酸法建立ARDS大鼠模型,并将建模成功的大鼠分为模型组(只给予油酸)、agomir阴性对照组和miR-146b agomir组,每组15只,另选15只大鼠作为假手术组(只给予生理盐水,不建模)。术前1 h,miR-146b agomir组大鼠给予miR-146b agomir进行干预,agomir阴性对照组大鼠给予miR-146b agomir阴性对照试剂进行干预。造模成功24 h后,采用血气分析仪检测各组大鼠血氧分压(PaO2)和氧合指数(OI),检测各组大鼠肺组织湿/干重(W/D)比值,ELISA法检测各组大鼠肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,HE染色观察各组大鼠肺组织病理形态表现,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织中miR-146b和ICAM-1 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中ICAM-1蛋白表达水平,双荧光素酶报告系统检测miR-146b和ICAM-1的靶向关系。结果:与模型组和agomir阴性对照组比较,miR-146b agomir组大鼠动脉血PaO2和OI及肺组织W/D比值升高(P<0.01),BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高(P<0.01)。HE染色,假手术组大鼠肺组织结构正常,无明显炎症病理改变;模型组和agomir阴性对照组大鼠肺组织呈现肺泡腔出血、肺泡壁增厚和红细胞渗出等病理变化;miR-146b agomir组大鼠肺组织上述病理形态变化减轻。与模型组和agomir阴性对照组比较,miR-146b agomir组大鼠肺组织中ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),而miR-146b表达水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告系统实验证实miR-146b靶向调控ICAM-1基因。结论:miR-146b通过靶向抑制ICAM-1表达水平,降低ARDS大鼠肺组织炎症水平,缓解肺组织功能损伤,对ARDS肺组织起到保护作用。

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义。方法选取2017年6月~2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-146b-5p和miR-134的表达水平,并分析两者的表达水平与临床病理特征的相关性。结果miR-146b-5p和miR-134在观察组中的相对表达量均低于对照组(P<0.05);miR-146b-5p的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、无静脉浸润和TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)相关(均P<0.05);miR-134的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、有肝硬化、TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)和无肿瘤包膜相关(均P<0.05)。结论肝癌组织中,miR-146b-5p和miR-134表达水平下调,可能参与肝癌的发生和发展,与肝癌临床恶性表型密切相关。

anti-miR-146b对海马神经元OGD/R损伤的凋亡抑制作用

目的:构建海马神经元离体氧糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型,探讨miR-146b抑制(anti-miR-146b)对海马神经元缺血/再灌注损伤的凋亡抑制作用。方法:原代培养大鼠海马神经元,建立OGD/R细胞模型,应用anti-miR-146b慢病毒转染抑制miR-146b表达,将细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-146b、KLF7及凋亡相关蛋白Caspase-3,Bcl-2和Bax mRNA表达变化。CCK8法检测各组细胞活性,Hoechst33342/PI双染法检测各组细胞凋亡情况。结果:与正常组比较,OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组细胞形态受损,细胞活性显著下降,细胞凋亡率显著增高,其中OGD/R+anti-miR-146b组较OGD/R组细胞形态显著改善,细胞活性显著增高,细胞凋亡率显著降低(P <0.05)。与正常组比较,OGD/R组和OGD/R+anti-miR-146b组miR-146b、KLF7、Caspase-3、Bax和Bcl-2mRNA表达水平显著增高,其中OGD/R+anti-miR-146b组KLF7和Bcl-2 mRNA表达显著高于OGD/R组,而miR-146b、Caspase-3和Bax mRNA表达则显著降低(P<0.05)。结论:anti-miR-146b对OGD/R诱导的海马神经元缺血/再灌注细胞损伤具有保护作用,其机制可能与上调KLF7信号通路,下调Caspase-3和Bax表达,上调Bcl-2表达,抑制OGD/R诱导的细胞凋亡途径有关。

miR-146b-5p通过抑制ATR通路诱导肺癌A594细胞凋亡

目的:研究miR-146b-5p对ATR的靶向抑制、诱导A594细胞凋亡的作用。方法:CCK8实验、克隆形成实验检测对照组、miR-146b-5p类似物转染组和阴性转染组,观察A594细胞增殖和存活能力;Target Scan7.1与miRanda软件预测miR-146b-5p靶向ATR。实时定量PCR检测对照组、miR-146b-5p组和Negative mimics组ATR mRNA表达变化。设计ATR 3'UTR突变序列(ATR-3'UTR-mut)和荧光报告载体实验验证miR-146b-5p对ATR的靶向作用;Western Blot实验检测各组癌细胞中ATR通路蛋白ATR、Chk1、p53表达变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果:CCK8实验和克隆形成实验结果:与对照组比较,miR-146b-5p组细胞数降低,克隆形成率从0.98±0.01降低到0.57±0.03,差异显著(P<0.05);Negative mimics组细胞数和克隆形成率0.92±0.03均无显著差异(P>0.05)。实时定量PCR结果与对照组比较,miR-146b-5p组ATR mRNA表达从0.96±0.02降低到0.38±0.03,差异显著(P<0.05);无义序列组ATR mRNA表达为0.94±0.02,差异不显著(P>0.05);荧光报告载体实验结果:ATR 3'UTR miR-1 4 6 b-5p组ATR mRNA降低到0.36±0.03,差异显著(P<0.05);ATR 3'UTR-mut miR-146b-5p组ATR mRNA表达量为0.96±0.02,差异不显著(P>0.05)。Western Blot结果显示miR-146b-5p组ATR、Chk1、p53蛋白表达降低。流式细胞仪结果显示miR-146b-5p组细胞凋亡率增加(26±2.18)%,差异显著(P<0.05)。结论:miR-146b-5p通过抑制ATR信号通路诱导肺癌A594细胞凋亡。

miR-146b-3p通过RAF1/p38MAPK/COX-2信号通路影响糖尿病发生脑梗死的机制研究

目的探讨miR-146b-3p通过RAF1/p38MAPK/环氧化酶-2(COX-2)信号通路影响糖尿病脑梗死的发生机制。方法选取我院2015年4月—2017年12月210例糖尿病病人为研究对象,通过随访研究调查病人发生血栓情况,有15例患有脑梗死,作为伴有糖尿病的脑梗死(DMCI)组,另选取15例无脑梗死病人为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组病人白介素-6(IL-6)、COX-2含量;采用聚合酶链式反应(PCR)及免疫印迹方法检测相关基因的mRNA及蛋白表达。结果两组一般资料及相关指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,DMCI组血中IL-6和COX-2表达升高,但存在一定的局限性;IL-6诱导外周血单核细胞2 h后,COX-2的mRNA和蛋白表达明显增加,COX-2表达受IL-6调控;与对照组相比,miR-146b-3p mRNA在DMCI组表达低于正常组(0.16±0.07与1.12±0.16,P<0.001);与对照组相比,DMCI组RAF1 mRNA的表达增加(P<0.01),且其蛋白表达也增加;DMCI组中COX-2、p-p38MAPK表达增加,p38MAPK蛋白表达减少,说明DMCI病人激活了p38MAPK的信号通路;当用10 ng/mL的IL-6处理外周血单核细胞(PBMC)时,可激活STAT3磷酸化,且当IL-6处理PBMC 1 h后,miR-146b-3p mRNA表达下降,当IL-6处理12 h后,发现miR-146b-3p mRNA在IL-6处理12 h时(0.20±0.12)表达低于对照组(1.02±0.15,P<0.05),还发现IL-6处理中COX-2的mRNA(4.98±0.69)和蛋白质表达高于对照组;DMCI组中miR-146a mRNA表达降低,与miR-146b的表达趋势一致。结论miR-146b-3p的表达通过介导RAF/p38MAPK/COX-2信号通路与糖尿病病人脑梗死的发展密切相关,miR-146b-3p可作为糖尿病脑梗死病人检测和干预的新靶点。

增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨增强miR-146b-3p表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 Real time PCR检测miR-146b-3p在6种人胰腺癌细胞系(MIA PaCa-2、BxPC-3、AsPC-1、PANC-1、SW1990、PC-3)和手术切除的12对胰腺癌/癌旁组织中的表达。将Pre-miR-hsa-miR-146b-3p Precursor转染MIA PaCa-2细胞,Real time PCR检测转染后miR-146b-3p的表达变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-8的表达变化。结果与正常胰腺组织相比,miR-146b-3p在6种胰腺癌细胞系中均呈低表达,以MIA PaCa-2细胞最为明显;12对胰腺组织中,癌组织miR-146b-3p表达水平均低于癌旁组织。同阴性对照组比较,转染前体组的MIA PaCa-2细胞,miR-146b-3p表达增强383.25倍,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率增加,蛋白Bcl-2表达降低(50.0%),Bax表达升高(4.29倍)。结论 miR-146b-3p在胰腺癌细胞系和癌组织中低表达;上调胰腺癌细胞MIA PaCa-2中miR-146b-3p的表达,能够抑制增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax的表达有关。

MiR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧心肌细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨miR-146b在白藜芦醇保护缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)心肌细胞损伤中的作用及其机制。方法:将体外培养的心肌细胞分为正常组、H/R组、白藜芦醇组、白藜芦醇+antimiR-NC组和白藜芦醇+anti-miR-146b组。采用荧光定量PCR检测miR-146b的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β,TNF-α和IL-6含量,MTT法检测细胞存活率,比色法检测LDH漏出率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测Bcl-2,caspase-3,NF-κB和TRAF6蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-146b和TRAF6的靶向关系。结果:与正常组相比,H/R组细胞中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而细胞上清液中IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与H/R组相比,白藜芦醇组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著升高,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率、细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与白藜芦醇组相比,白藜芦醇+anti-miR-146b组中miR-146b和Bcl-2蛋白的表达水平、细胞存活率显著降低,而IL-1β,TNF-α,IL-6含量和LDH漏出率,细胞凋亡率以及caspase-3,NF-κB蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);而白藜芦醇+anti-miR-NC组与白藜芦醇组相比差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹法证实TRAF6是miR-146b靶基因,且miR-146b可靶向调控其表达。结论:miR-146b抑制心肌细胞凋亡和炎症反应是白藜芦醇减轻H/R心肌细胞损伤的调控机制,其作用原理可能与靶向调控TRAF6有关。

血浆miR-146b-5p在胃癌患者中的表达及临床意义

目的基于GEO数据集分析的基础上,探讨胃癌患者血浆中miR-146b-5p的表达水平及临床意义.方法应用实时荧光定量PCR技术检测miR-146b-5p在32例胃癌患者癌组织及癌旁组织中的表达情况;另取92例胃癌患者以及35名健康人的血浆样本,分析其中miR-146b-5p的表达,并对其临床意义进行分析.结果与癌旁组织相比,胃癌组织中的miR-146b-5p表达水平明显升高;与健康组相比,胃癌患者血浆中miR-146b-5p也存在高表达;其受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.680,在胃癌诊断效能中,其敏感性为0.79,特异性为0.77;胃癌患者的淋巴结转移、疾病分期及生存期与miR-146b-5p的表达密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05);比例风险回归分析发现胃癌的独立预后因子中包括了血浆miR-146b-5p的表达(P<0.05).结论胃癌肿瘤分期和预后与血浆中miR-146b-5p表达水平存在相关性,可作为辅助胃癌诊断及预测预后的分子标志物.

miR-146b-5p靶向调控NAIF1抑制胃癌细胞凋亡

目的分析miR-146b-5p对胃癌细胞MGC803增殖与凋亡的调控作用及分子机制。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同胃癌细胞系(MGC803、BGC823、MKN28、MKN45和SGC7901)中miR-146b-5p水平;应用miR-146b-5p抑制剂(inhibitor)和阴性对照(miRNA-NC)分别转染胃癌细胞MGC803,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡比例;TargetScan数据库分析miR-146b-5p的潜在靶基因,蛋白免疫印迹技术(western blot)检测核诱导凋亡因子1(NAIF1)蛋白表达水平;双荧光素酶实验验证miR-146b-5p和NAIF1之间的关系。结果不同胃癌细胞系(MGC803、BGC823、SGC7901、MKN45和MKN28)miR-146b-5p水平均高于正常人胃黏膜细胞(GES-1)(t分别=26.21、13.08、11.09、11.09、6.41,P均<0.05)。miR-146b-5p inhibitor转染胃癌细胞MGC803后miR-146b-5p水平明显降低(t=9.14,P<0.05)。抑制MGC803胃癌细胞miR-146b-5p水平后,细胞活力明显降低,细胞凋亡比例升高(t分别=3.73、9.55,P均<0.05)。miR-146b-5p mimics转染组WT-NAIF1荧光素酶活性明显低于miRNA-NC组(t=8.35,P<0.05)。Western blot结果表明,上调miR-146b-5p水平后,NAIF1蛋白表达明显降低(t=5.67,P<0.05),而下调miR-146b-5p水平后,NAIF1蛋白表达明显升高(t=4.32,P<0.05),在过表达NAIF1的基础上转染miR-146b-5p,细胞活力明显升高,细胞凋亡比例降低(t分别=6.54、4.73,P均<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向抑制NAIF1抑制胃癌细胞凋亡。

病毒性脑炎患儿外周血miR-146a、miR-146b表达检测及临床意义

目的检测病毒性脑炎患儿外周血miR-146a、miR-146b的表达,并探讨其临床意义。方法回顾性分析2016年6月~2019年6月河北医科大学第一医院(以下简称"我院)收治的62例病毒性脑炎患儿的临床资料和同期在我院体检的43名健康儿童的资料,分别记为研究组和对照组。根据感染病毒类型将研究组进一步分为研究A组(单纯疱疹病毒7例)、研究B组(带状疱疹病毒9例)、研究C组(肠道病毒28例)、研究D组(腮腺病毒6例)、研究E组(流行性乙型病毒12例)5个亚组。比较研究组、对照组及研究组各亚组中轻型和重型的miR-146a、miR-146b水平;比较研究组和对照组T淋巴细胞亚群水平,分析研究组外周血miR-146a、miR-146b与T淋巴细胞亚群的相关性,比较不同预后患儿外周血miR-146a、miR-146b水平。结果不同研究组亚组和研究组miR-146a、miR-146b均高于对照组(P <0.05),且重型患儿均高于轻型患儿(P <0.05);不同研究组和研究组亚组CD+3、CD+4及CD+4/CD+8均低于对照组(P <0.05),而CD+8均高于对照组(P <0.05);不同研究组和研究组亚组miR-146a、miR-146b与CD+3、CD+4、及CD+4/CD+8均呈负相关(P <0.05),与CD+8均呈正相关(P <0.05);研究组预后不良率为17.74%,预后不良患儿miR-146a、miR-146b均高于预后良好者(P <0.05)。结论病毒性脑炎患儿外周血miR-146a、miR-146b的表达水平均升高,能够反映病情并与T淋巴细胞亚群具有相关性,且可以预测预后情况。