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SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能 被引量:1
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作者 向威 吕磊 +2 位作者 郑福鑫 章传华 袁敬东 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期161-167,共7页
目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9... 目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 SLC9A3-AS1 mir-148a-3p ROCK1
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miR-148a通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善椎间盘组织退变的机制
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作者 卢斌 孟莉娟 张晨冲 《临床骨科杂志》 2024年第4期584-589,共6页
目的探讨miR-148a通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善椎间盘退变(IDD)的机制。方法以白细胞介素(IL)-1β诱导建立IDD大鼠和细胞模型。观察miR-148a对如下观察指标的影响:椎间盘组织病理形态,椎间盘软骨组织,椎间盘髓核细胞活力及凋亡,... 目的探讨miR-148a通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善椎间盘退变(IDD)的机制。方法以白细胞介素(IL)-1β诱导建立IDD大鼠和细胞模型。观察miR-148a对如下观察指标的影响:椎间盘组织病理形态,椎间盘软骨组织,椎间盘髓核细胞活力及凋亡,血清及椎间盘髓核细胞的IL-6与IL-18水平,椎间盘组织及髓核细胞机制标记物蛋白Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)、蛋白聚糖(Aggrecan)的表达;椎间盘组织及髓核细胞miR-148a、Wnt/β-catenin通路相关蛋白(Wnt、β-catenin)的表达。结果与假手术组(大鼠)/对照组(细胞)比较,模型组大鼠椎间盘组织发生退变且软骨基质大量流失,髓核细胞活力及CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达均降低(P<0.05),髓核细胞凋亡率、IL-6、IL-18、Wnt及β-catenin蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,miR-148a过表达组大鼠椎间盘组织退变及软骨基质流失症状减轻,髓核细胞活力、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达均升高(P<0.05),髓核细胞凋亡率、IL-6、IL-18、Wnt及β-catenin蛋白表达均降低(P<0.05)。结论miR-148a可通过下调Wnt/β-catenin信号通路表达而抑制炎症,进而减轻IDD大鼠椎间盘及软骨损伤,缓解软骨基质流失及髓核细胞凋亡,改善大鼠椎间盘组织退变症状。 展开更多
关键词 mir-148a WNT/Β-CATENIN信号通路 椎间盘退变 大鼠
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右美托咪定通过上调miR-148a-3p抑制焦亡改善老年大鼠术后认知功能障碍
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作者 何剑波 秦新刚 +3 位作者 李帆 段开明 斯坎带尔·吾守尔 王晓炜 《新疆医科大学学报》 CAS 2024年第7期925-931,共7页
目的 探索右美托咪定对老年大鼠术后认知功能障碍(POCD)的改善作用及其具体机制。方法 18月龄SPF雄性SD大鼠共98只,选取18只作为正常对照组,另80只使用七氟烷+肝叶切除手术建立POCD模型。模型建立成功后,随机分为模型组、模型+生理盐水... 目的 探索右美托咪定对老年大鼠术后认知功能障碍(POCD)的改善作用及其具体机制。方法 18月龄SPF雄性SD大鼠共98只,选取18只作为正常对照组,另80只使用七氟烷+肝叶切除手术建立POCD模型。模型建立成功后,随机分为模型组、模型+生理盐水组、模型+右美组、模型+右美+阿替美唑组,每组20只,探讨右美托咪定对各组老年大鼠POCD的作用。随后,从模型组和模型+右美组中各选取4只,给予miR-148a-3p模拟物或抑制剂,进一步研究右美托咪定改善POCD的机制。结果 七氟烷麻醉+肝叶切除手术导致了大鼠术后认知功能显著下降、神经炎症和焦亡发生增加、海马突触可塑性和miR-148a-3p表达降低(P<0.05);右美托咪定可改善术后认知功能以及上述病理变化(P<0.05);阿替美唑组可显著降低右美改善认知功能的效果(P<0.05);miR-148a-3p模拟物可模拟出右美托咪定对POCD的保护效果,并抑制焦亡,miR-148a-3p抑制剂则可降低右美托咪定的保护效果,并促进焦亡的发生(P<0.05);FMR1可能是miR-148a-3p的下游作用靶点。结论 右美托咪定在能够改善认知功能障碍的同时,还能够改善麻醉手术大鼠海马的突触可塑性、神经炎症,并可能通过上调miR-148a-3p表达抑制焦亡的发生,FMR1可能是miR-148a-3p的下游作用靶点。 展开更多
关键词 术后认知功能障碍 右美托咪定 焦亡 mir-148a-3p
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hMLH1和miR-148a表达与散发性结直肠癌微卫星不稳定性的关系
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作者 岑红兵 赵建红 +1 位作者 汪洪 倪慧峰 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2024年第3期265-270,共6页
目的检测散发性结直肠癌(sCRC)组织中人类错配修复基因1(hMLH1)蛋白和miR-148a表达及其与微卫星不稳定性(MSI)的关系。方法收集黄冈市中心医院病理科保存的sCRC组织标本90例及其对应癌旁正常组织。收集患者临床病历资料,采用多重荧光PC... 目的检测散发性结直肠癌(sCRC)组织中人类错配修复基因1(hMLH1)蛋白和miR-148a表达及其与微卫星不稳定性(MSI)的关系。方法收集黄冈市中心医院病理科保存的sCRC组织标本90例及其对应癌旁正常组织。收集患者临床病历资料,采用多重荧光PCR法检测组织DNA微卫星不稳定性,免疫组化染色法检测组织hMLH1蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织miR-148a表达量,双荧光素酶报告实验分析miR-148a和hMLH1 mRNA靶向关系。结果90例sCRC组织中,检出MSI 29例(32.22%),hMLH1蛋白表达缺失24例(26.67%)。经荧光素酶报告基因分析,miR-148a mimics可抑制含有hMLH1 mRNA 3′UTR-WT序列的报告基因质粒的荧光素酶活性;而且hMLH1蛋白表达缺失组织中miR-148a相对表达量高于未缺失组织(P<0.05);此外MSI组织中hMLH1蛋白表达缺失率和miR-148a相对表达量均高于微卫星稳定性(MSS)组织。右半结肠和直肠部位、pN_(0/1)期、pM _(0)分期hMLH1蛋白表达缺失率和MSI比例高于左半结肠、pN_(2)期、pM_(0)期(P<0.05);另外肿瘤直径>5.0 cm、右半结肠和直肠、pT_( 3/4)期、pN_(2)期、pM_(1)分组织miR-148a相对表达量低于肿瘤直径≤5.0 cm、左半结肠、pT_(1/2)期、pN_(0/1)期、pM_(0)期组织(P<0.05)。结论约30%的sCRC患者存在hMLH1蛋白表达缺失和MSI状态;sCRC肿瘤组织miR-148a相对表达量降低,导致对hMLH1基因表达的抑制作用减弱,可能是影响sCRC肿瘤细胞MSI状态的重要原因之一。 展开更多
关键词 散发性结肠癌 HMLH1蛋白 错配修复蛋白 mir-148a 微卫星不稳定性
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miR-148a-3p对软骨细胞炎性和凋亡的影响及其机制
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作者 吴枭 胡静 李章华 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第8期1008-1016,共9页
目的研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响。方法2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞。为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为con... 目的研究miR-148a-3p对软骨细胞炎症因子、细胞凋亡和软骨细胞表型的影响。方法2周龄大耳兔处死后提取原代软骨细胞。为了探究炎症对软骨细胞相关标志物及其胞内miR-148a-3p表达水平的影响,建立IL-1β-诱导的OA细胞模型,软骨细胞分为control组和IL-1β组。为了探究miR-148a-3p对软骨细胞相关标志物及细胞凋亡相关因子表达水平的影响,软骨细胞分为blank组、IL-1β组、IL-1β+NC组、IL-1β+mimics组、IL-1β+inhibitor组。qRT-PCR检测IL-1β、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN、MMP-13 mRNA水平;采用免疫蛋白印迹法检测软骨相关标志物MMP-13、COL-Ⅱ、ACAN、SOX9以及细胞凋亡相关因子Bax、Caspase-3、Bcl-2蛋白的表达水平。采用ELISA法检测细胞上清中IL-6和IL-10的含量。结果①与control组比较,IL-1β组细胞MMP-13蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN蛋白表达降低(P<0.05);miR-148a-3p表达水平升高(P<0.0001);②与blank组比较,IL-1β组细胞上清液IL-6水平升高,IL-10水平降低(P<0.05);MMP-13 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),COL-Ⅱ和ACAN mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与IL-1β组比较,IL-1β+mimics组细胞上清液IL-6水平、MMP-13 mRNA和蛋白、Bax、Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05);上清液IL-10水平、SOX9、COL-Ⅱ、ACAN mRNA和蛋白,以及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。IL-1β+inhibitor组和IL-1β组间上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论IL-1β诱导体外软骨细胞中miR-148a-3p表达上调,可导致软骨细胞炎症性改变、细胞凋亡、软骨细胞表型改变和细胞外基质(ECM)降解。 展开更多
关键词 mir-148a-3p 软骨细胞 白介素-1Β 细胞凋亡 骨关节炎 软骨稳态
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miR-148a-3p调控EGFR抑制涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移
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作者 高万鹏 赵琦 +6 位作者 惠琪 王嘉乐 郭嘉飞 杨子桧 王珺 魏建华 杨新杰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期309-314,共6页
目的:研究miR-148a-3p对涎腺腺样囊性癌SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移的影响及相关分子机制。方法:将miR-148a-3p模拟物和抑制剂,靶向EGFR的siRNA以及相应对照转染SACC-LM细胞。生物信息学手段分析预测miR-148a-3p的潜在靶基因;qRT-PC... 目的:研究miR-148a-3p对涎腺腺样囊性癌SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移的影响及相关分子机制。方法:将miR-148a-3p模拟物和抑制剂,靶向EGFR的siRNA以及相应对照转染SACC-LM细胞。生物信息学手段分析预测miR-148a-3p的潜在靶基因;qRT-PCR检测miR-148a-3p和EGFR的mRNA表达;Western blot实验检测EGFR的蛋白表达。CCK-8、划痕和Transwell分别用于检测SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-148a-3p与EGFR之间的直接靶向关系;SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。结果:过表达或抑制miR-148a-3p可以显著抑制或促进SACC-LM细胞的增殖、侵袭和转移(P<0.05);生物信息学分析和双荧光素酶实验显示miR-148a-3p可靶向调控EGFR的表达(P<0.001);下调EGFR可以显著抑制SACC-LM细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),并可部分逆转miR-148a-3p抑制剂对这些能力的促进作用(P<0.05)。结论:涎腺腺样囊性癌细胞中miR-148a-3p的下调导致其靶基因EGFR的异常高表达,从而促进了涎腺腺样囊性癌细胞的增殖、侵袭和转移。 展开更多
关键词 涎腺腺样囊性癌 mir-148a-3p EGFR 增殖 侵袭 转移
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产前超声联合血清miR-148b、miR-375检测在胎儿先天性心脏病诊断中的应用价值
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作者 白子彤 朱毓 《河北医药》 CAS 2024年第15期2308-2311,共4页
目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值。方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随... 目的 探讨微小RNA(miR)-148b、miR-375在胎儿先天性心脏病孕妇血清中的水平,及其联合产前超声在胎儿先天性心脏病诊断中的价值。方法 收集2019年1月至2023年1月进行产前筛查的疑似胎儿先天性心脏病的106例孕妇作为研究对象,根据产后随访结果将其分为病例组(先天性心脏病,n=80)和对照组(均无先天性心脏病,n=26)。比较2组血清miR-148b、miR-375水平;ROC曲线分析血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病的诊断效能;四表格法分析产前超声联合血清miR-148b、miR-375水平对胎儿先天性心脏病的诊断效能。结果 与对照组比较,病例组血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高(P<0.05)。产前超声联合血清miR-148b、miR-375诊断胎儿先天性心脏病的准确率为93.40%,敏感性为92.50%,特异性为96.15%。其中,三项联合诊断的敏感性高于血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05),三项联合诊断的准确率和特异性高于产前超声、血清miR-148b、miR-375单独诊断(P<0.05)。结论 胎儿先天性心脏病的孕妇血清miR-148b水平显著降低,血清miR-375水平显著升高,产前超声联合血清miR-148b、miR-375对胎儿先天性心脏病具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 mir-148b mir-375 产前超声 胎儿先天性心脏病
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miR-148b-3p调控瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的机制研究 被引量:2
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作者 李心怡 李茜 +1 位作者 张伟 李小静 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第9期1534-1539,共6页
目的分析miR-148b-3p对瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的影响。方法通过Real-time PCR分析人瘢痕疙瘩来源成纤维细胞(HKF)和正常人成纤维细胞(NFs)中miR-148b-3p和SPARC的表达水平。通过Western blot检测细胞中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋... 目的分析miR-148b-3p对瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的影响。方法通过Real-time PCR分析人瘢痕疙瘩来源成纤维细胞(HKF)和正常人成纤维细胞(NFs)中miR-148b-3p和SPARC的表达水平。通过Western blot检测细胞中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)蛋白表达水平。利用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和平板克隆形成分析miR-148b-3p和SPARC对HKF增殖的影响。使用在线分析软件预测miR-148b-3p的靶基因,随后构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析miR-148b-3p与靶基因的靶向结合位点。结果miR-148b-3p在HKF中低表达,SPARC在HKF中高表达。在HKF细胞中转染miR-148b-3p能够下调SPARC的表达,并抑制细胞增殖。在线分析软件预测miR-148b-3p能够靶向结合SPARC的3′-UTR;双荧光素酶报告基因的结果进一步证实miR-148b-3p能够靶向作用于SPARC的3′-UTR。在转染miR-148b-3p的HKF中再转染SPARC真核表达质粒,能够抵消miR-148b-3p的作用,恢复细胞增殖能力。结论miR-148b-3p通过靶向作用于SPARC的3′-UTR,抑制其表达,抑制HKF增殖。 展开更多
关键词 病理性瘢痕 mir-148b-3p 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白 增殖
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热性惊厥患儿血清miR-148a-3p HMGB125(OH)D水平与癫痫发作的相关性 被引量:2
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作者 张义堂 秦小菀 +7 位作者 石岩 侯海燕 殷雪 李哲 徐会民 刘麦叶 李万桢 宋春雨 《中国实用神经疾病杂志》 2023年第5期599-604,共6页
目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局... 目的探讨热性惊厥患儿血清微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、25-羟维生素D(25(OH)D)水平与癫痫发作的相关性。方法回顾性分析2018-01—2022-03南阳市中心医院收治的122例热性惊厥患儿,根据热性惊厥患儿预后结局是否发生癫痫,分为热性惊厥癫痫组36例和热性惊厥非癫痫组86例,同期选择55例未发生惊厥的呼吸道感染仅发热的患儿为对照组,比较3组患儿的血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平。收集3组患儿临床资料进行多因素Logistic回归分析,绘制ROC曲线分析miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D对热性惊厥患儿癫痫发作的预测价值。结果热性惊厥癫痫组的血清miR-148a-3p表达量、HMGB1水平高于热性惊厥非癫痫组、对照组[(2.26±0.57)vs(1.71±0.43)vs(1.50±0.38);(7.45±1.87)μg/L vs(6.70±1.58)μg/L vs(5.33±1.29)μg/L;均P<0.05],血清25(OH)D水平低于热性惊厥非癫痫组、对照组[(26.83±6.79)μg/L vs(34.24±8.56)μg/L vs(42.16±4.15)μg/L;P<0.05]。惊厥类型、惊厥持续时间、退热后脑电图结果、miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D与癫痫发作存在相关关系(P<0.05)。miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D预测热性惊厥患儿癫痫发作的灵敏度为83.33%、77.78%、72.22%,特异度为74.42%、68.60%、63.95%。结论血清miR-148a-3p、HMGB1、25(OH)D水平与热性惊厥患儿癫痫发作有一定相关性,可作为临床辅助诊断标志物。 展开更多
关键词 热性惊厥 癫痫 mir-148a-3p 高迁移率族蛋白B1 25-羟维生素D
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miR-148a-3p靶向调控FLOT2促进肝癌细胞迁移、侵袭及增殖
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作者 王芊文 李文华 +5 位作者 逯君霞 赵彬 耿玉庆 王小芳 吴向未 陈雪玲 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第21期3921-3927,共7页
目的:探究脂筏特征蛋白2(Flotillin2,FLOT2)对肝癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响及相关机制。方法:通过ENCORI数据库和细胞功能学实验证实FLOT2在肝癌中的表达情况以及对肝癌细胞生物学行为的影响;TargetScan中检索可能调控FLOT2的miR... 目的:探究脂筏特征蛋白2(Flotillin2,FLOT2)对肝癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响及相关机制。方法:通过ENCORI数据库和细胞功能学实验证实FLOT2在肝癌中的表达情况以及对肝癌细胞生物学行为的影响;TargetScan中检索可能调控FLOT2的miRNA,CancerMIRNome分析miR-148a-3p在肝癌中的表达和对肝癌患者预后的影响,qRT-PCR和Western Blot检测过表达miR-148a-3p后肝癌细胞中FLOT2的表达水平,双荧光素酶实验验证miR-148a-3p与FLOT2的靶向调控关系;将细胞分为pcDNA组、pcDNA-FLOT2组以及pcDNA-FLOT2+miR-148a-3p mimics组,Transwell实验以及EdU实验检测三组细胞迁移、侵袭和增殖能力。结果:FLOT2在肝癌中高表达,高表达FLOT2的肝癌患者预后更差,过表达FLOT2增强肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力;miR-148a-3p在肝癌组织中低表达,与肝癌患者预后相关,和FLOT2呈负相关;过表达miR-148a-3p降低FLOT2的mRNA和蛋白水平,双荧光素酶实验表明miR-148a-3p靶向调控FLOT2基因;过表达miR-148a-3p抑制FLOT2促进肝癌细胞迁移、侵袭和增殖的能力。结论:miR-148a-3p靶向调控FLOT2基因促进肝癌细胞迁移、侵袭及增殖。 展开更多
关键词 肝癌 mir-148a-3p FLOT2 迁移 增殖
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淫羊藿通过miR-148a调控乳腺癌干性表达 被引量:3
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作者 宋博 刘明燃 +6 位作者 魏福霞 陈颖 迪少帅 翟春涛 柴智 马艳苗 彭涛 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期851-859,共9页
目的观察淫羊藿对乳腺癌细胞增殖及干性表达的影响,探讨其抑制干性与miR-148a的关系及分子机制。方法淫羊藿处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法和平板克隆实验评估其对细胞增殖和群体依赖的影响;悬浮成球实验检测其对衍生乳腺球大小... 目的观察淫羊藿对乳腺癌细胞增殖及干性表达的影响,探讨其抑制干性与miR-148a的关系及分子机制。方法淫羊藿处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法和平板克隆实验评估其对细胞增殖和群体依赖的影响;悬浮成球实验检测其对衍生乳腺球大小的影响;qPCR检测其对CD44、ALDH-1、Oct4、BMI1和EpCAM表达水平的影响;Western blot检测EpCAM、SOX4、ZO-1、E-cadherin、Vimentin的蛋白表达量;免疫荧光观察EpCAM的蛋白定位情况;划痕实验检测其对细胞迁移能力的影响。将miR-148a mimic转染至MDA-MB-231细胞中,观察淫羊藿对转染后细胞干性表达的影响。结果淫羊藿可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖和群体依赖性(P<0.01),减少乳腺球的形成;与Control组相比,其可明显降低CD44、ALDH-1、Oct4、BMI1和EpCAM的mRNA水平(P<0.05),降低EpCAM、SOX4和Vimentin的蛋白含量(P<0.01),上调ZO-1、E-cadherin的蛋白表达(P<0.01),抑制细胞的迁移能力(P<0.05)。淫羊藿能够上调MDA-MB-231细胞miR-148a的表达(P<0.01)。与Control组相比,淫羊藿+miR-148a mimic组能够明显抑制MDA-MB-231细胞的干性表达和EMT过程(P<0.05)。结论淫羊藿能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能与其上调miR-148a水平,降低乳腺癌细胞干性表达,抑制EMT过程有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 淫羊藿 mir-148a 干性 上皮间质转化 迁移
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miR-148a-3p靶向SMURF2调节牙髓干细胞和口腔上皮细胞共培养体系成骨分化及牙釉质发育的作用机制
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作者 徐倩 崔玉梅 +4 位作者 马思明 林云红 熊依菁 宋子珺 李旭东 《昆明医科大学学报》 CAS 2023年第11期16-21,共6页
目的探讨miR-148a-3p在体外牙齿发生中成骨分化和牙釉质发育中的作用,揭示其分子机制。方法获取人牙髓干细胞和口腔上皮细胞。将人牙髓干细胞转染miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p抑制剂或阴性对照。通过在Matrigel基质凝胶上接种人牙... 目的探讨miR-148a-3p在体外牙齿发生中成骨分化和牙釉质发育中的作用,揭示其分子机制。方法获取人牙髓干细胞和口腔上皮细胞。将人牙髓干细胞转染miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p抑制剂或阴性对照。通过在Matrigel基质凝胶上接种人牙髓干细胞并覆盖口腔上皮细胞,建立三维共培养系统。采用MTT实验评估miR-148a-3p对共培养细胞增殖和蛋白表达的影响,采用Western blotting实验检测成骨细胞分化(RUNX2)和牙釉质发育标志物(E-cadherin)蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验验证SMURF2(SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶2)与miR-148a-3p的相互作用。结果在人牙髓干细胞中使用抑制剂下调miR-148a-3p后,3D共培养中的细胞活力降低(P<0.05)。使用模拟物上调miR-148a-3p后,共培养中成骨标志物RUNX2和牙釉质发育标志物E-cadherin的表达增加(P<0.05)。TargetScan软件预测miR-148a-3p在SMURF2的3’-UTR中有结合位点。荧光素酶报告实验表明miR-148a-3p mimics抑制野生型载体的荧光素酶活性(P<0.05),同时Western blot结果显示miR-148a-3p mimics下调SMURF2的表达(P<0.05)。结论miR-148a-3p可能通过靶向SMURF2,调控RUNX2和E-cadherin的表达,参与了人牙髓干细胞成骨分化和上皮细胞牙釉质发育。为牙齿修复和治疗提供了潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 mir-148a-3p 牙源性间充质干细胞 成骨分化 牙釉质发育 SMURF2
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紫花牡荆素通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移和侵袭 被引量:2
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作者 娄磊 王靓厚 +1 位作者 王智 李翔 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期868-875,共8页
目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;... 目的用紫花牡荆素(casticin,CAS)处理MHCC97H细胞,观察其迁移和侵袭能力的变化,并初步探讨CAS的分子作用机制。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度CAS对MHCC97H细胞活力的影响;分组开展细胞迁移和侵袭实验,评估MHCC97H细胞的迁移和侵袭能力;逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CAS处理后,MHCC97H细胞的miR-148a-3p和Wnt1 mRNA表达变化;迁移侵袭相关蛋白(MMP2、MMP9)和Wnt1蛋白表达量采用Western blot检测;Dual-Luciferase报告基因检测miR-148a-3p与Wnt13′-UTR的结合情况。结果CAS明显抑制MHCC97H细胞的生存活力,其对这种细胞的IC_(50)约为10.0μmol·L^(-1),亚细胞毒浓度的CAS(3.0μmol·L^(-1))可减弱这种细胞的迁移和侵袭能力;miR-148a-3p mimic或CAS均能抑制MHCC97H细胞迁移和侵袭能力,且两者联合处理后的抑制作用强于单独使用;过表达Wnt1能有效减弱CAS的抑制作用;CAS能明显上调MHCC97H细胞miR-148a-3p表达,同时Wnt1、MMP2和MMP9的表达呈现下降;Dual-Luciferase报告基因发现,miR-148a-3p可以直接靶向Wnt13′-UTR。结论CAS可通过miR-148a-3p/Wnt1信号通路减弱肝癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 紫花牡荆素 肝癌 MHCC97H细胞 mir-148a-3p/Wnt1信号通路 细胞迁移 细胞侵袭
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miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞恶性生物学行为的影响 被引量:2
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作者 王迪迪 黄玉荣 +3 位作者 王建君 左常茜 何磊 杨杰 《贵州医科大学学报》 CAS 2023年第10期1129-1136,1144,共9页
目的探讨miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找miR-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选miR-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用... 目的探讨miR-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找miR-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选miR-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-148b-3p在正常肝脏细胞LO2和肝癌细胞Huh7、Hep1中的表达水平,选取miR-148b-3p表达量最低的细胞Huh7作为研究对象;Huh7肝癌细胞分为对照组(转染miR-148b-3p NC)和实验组(转染miR-148b-3p mimics),CCK8实验和克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、以及油红O染色分别检测两组肝癌细胞的增值、迁移、侵袭能力及脂滴形成情况,采用RT-PCR和Western blot检测交集基因及脂肪生成指标基因FASN、PPAR-γ及SCD1的mRNA和蛋白表达水平。结果miR-148b-3p在Huh7细胞中mRNA相对表达量显著低于Hep1细胞(P<0.01)和LO2细胞(P<0.001);与对照组相比,实验组Huh7细胞的增殖受到抑制(P<0.05)、转移能力减弱(P<0.05)、侵袭能力降低(P<0.05),细胞脂滴形成明显减少(P<0.01);交集基因PRKAG2、INSIG2的mRNA水平的表达量明显升高(P<0.01、P<0.01)、CHD9表达量明显降低(P<0.001),脂代谢FASN、PPAR-γ、SCD1基因的mRNA水平明显降低(P<0.001、P<0.001、P<0.01);交集基因PRKAG2、INSIG2蛋白水平的表达量升高(P<0.01、P<0.05)、CHD9表达量降低(P<0.05),脂代谢FASN、PPAR-γ、SCD1基因蛋白水平的表达量均明显降低(P<0.01)。结论过表达miR-148b-3p可抑制肝癌细胞的增殖、转移和侵袭能力,其机制可能与miR-148b-3p抑制了肝癌细胞的脂代谢有关。 展开更多
关键词 肝癌 脂代谢 mir-148b-3p 增殖 迁移 侵袭
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miR-148a-3p靶向谷氧还蛋白5抑制肺癌细胞增殖迁移与侵袭 被引量:1
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作者 金秀盈 丁岩 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2023年第1期32-40,共9页
目的 探索miR-148a-3p对肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 收集肺癌组织和配对癌旁组织以及肺癌细胞和正常肺上皮细胞株,RT-qPCR检测miR-148a-3p表达;Western blot和免疫组织化学检测谷氧还蛋白5(glutaredoxin 5,GLRX5)的表达。对A... 目的 探索miR-148a-3p对肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 收集肺癌组织和配对癌旁组织以及肺癌细胞和正常肺上皮细胞株,RT-qPCR检测miR-148a-3p表达;Western blot和免疫组织化学检测谷氧还蛋白5(glutaredoxin 5,GLRX5)的表达。对A549细胞转染miR-148a-3p mimics和pcDNA-GLRX5后,分别用MTT、EdU、细胞划痕和Transwell实验检测细胞活性、细胞增殖、迁移和侵袭;Western blot和免疫荧光检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki-67、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达。用生物信息学和荧光素酶测定法鉴定miR-148a-3p与GLRX5的靶向关系。结果 分别与癌旁组织或正常肺上皮细胞比较,肺癌组织和肺癌细胞中miR-148a-3p表达降低,GLRX5表达升高。转染miR-148a-3p mimics后,A549细胞活性、增殖、迁移和侵袭以及PCNA、Ki67、MMP-2和MMP-9表达均降低,而过表达GLRX5能显著逆转miR-148a-3p mimics的上述作用。GLRX5是miR-148a-3p的靶基因。结论 miR-148a-3p可通过靶向GLRX5来发挥对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。 展开更多
关键词 mir-148a-3p 肺癌 增殖 迁移 侵袭 谷氧还蛋白5
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AIH患儿血清miR-148a表达及其与炎症因子的相关性
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作者 周莹 任益慧 李广明 《检验医学》 CAS 2023年第12期1130-1134,共5页
目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患儿血清miR-148a表达及其与炎症因子的相关性。方法选取2018年1月—2021年3月南阳市第一人民医院AIH患儿45例(AIH组)和体检健康儿童53名(正常对照组)。检测所有研究对象血清miR-148a、IgG、炎症因子[转化... 目的探讨自身免疫性肝炎(AIH)患儿血清miR-148a表达及其与炎症因子的相关性。方法选取2018年1月—2021年3月南阳市第一人民医院AIH患儿45例(AIH组)和体检健康儿童53名(正常对照组)。检测所有研究对象血清miR-148a、IgG、炎症因子[转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素23(IL-23)]、肝功能[天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)]和自身抗体[抗核抗体(ANA)、抗肝细胞溶质抗原1型(LC-1)抗体、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体(LKM)抗体]水平。采用Pearson相关分析评估miR-148a水平与各项指标的相关性。采用Logistic回归分析评估发生AIH的危险因素。结果AIH组血清IgG、AST、ALT、GGT、IL-17、IL-23水平和miR-148a相对表达量,以及ANA、抗LC-1抗体、ASMA、抗LKM抗体阳性率均高于正常对照组(P<0.001),TGF-β水平低于正常对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,AIH患儿miR-148a与IL-17、IL-23、IgG均呈正相关(r值分别为0.504、0.533、0.392,P<0.05),与TGF-β呈负相关(r=-0.527,P<0.05)。miR-148a高表达组ANA、抗LC-1抗体、ASMA、抗LKM抗体阳性率均高于低表达组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,IL-17、IL-23、miR-148a水平升高和TGF-β水平降低均是发生AIH的独立危险因素(P<0.05)。结论AIH患儿血清miR-148a表达与炎症因子和自身抗体密切相关,其可能参与了AIH的发生。 展开更多
关键词 mir-148a 转化生长因子-β 白细胞介素-17 白细胞介素-23 自身免疫性肝炎
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miR-148a-3p调控血管生成的体内外表型鉴定
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作者 黄瑾 韩文卿 +1 位作者 李鑫 陈骁俊 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第6期525-529,540,共6页
目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基... 目的明确miR-148a-3p调控血管生成的表型。方法提取miR-148a基因敲除小鼠的原代组织,结合免疫组织化学染色,探究miR-148a敲除对血管生成的影响;通过miRNA mimic转染,在人脐静脉血管内皮细胞(hUVECs)中过表达miR-148a-3p,结合Matrigel基质胶管腔形成实验、细胞迁移实验、荧光定量PCR实验等,从敲除和过表达两方面明晰miR-148a-3p对血管生成的作用。结果与同窝对照相比,miR-148a基因敲除小鼠的骨骼组织存在H型血管分布异常。离体实验得到了相似的趋势,miR-148a敲除胎鼠的跖骨具有明显更强的血管形成能力。通过miR-148a-3p mimic过表达血管内皮细胞中的miR-148a-3p表达水平,发现miR-148a-3p过表达不影响hUVECs的增殖能力,但可通过抑制其迁移能力干扰血管生成,影响伪足形成、管腔形成等过程。结论miR-148a-3p可抑制体内外血管生成,包括细胞出芽、迁移、管腔形成等生物学过程。 展开更多
关键词 mir-148a-3p 血管生成 基因敲除小鼠 表型鉴定 H型血管
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miR-148a-3p通过抑制钙网蛋白表达改善高糖诱导的心肌细胞线粒体损伤与凋亡
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作者 苟棋玲 赵宏谋 +1 位作者 酉鹏华 刁佳宇 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期499-504,共6页
目的评估miR-148a-3p对钙网蛋白(calreticulin,CRT)表达的影响以及对高糖培养下心肌细胞线粒体功能的调节作用。方法利用miR-148a-3p minic、inhibitor干预H9c2大鼠心肌母细胞,检测CRT蛋白表达水平。再将细胞分为对照组、高糖组、高糖+m... 目的评估miR-148a-3p对钙网蛋白(calreticulin,CRT)表达的影响以及对高糖培养下心肌细胞线粒体功能的调节作用。方法利用miR-148a-3p minic、inhibitor干预H9c2大鼠心肌母细胞,检测CRT蛋白表达水平。再将细胞分为对照组、高糖组、高糖+miR-148a-3p minic组、高糖+miR-148a-3p minic+TG(CRT激动剂)、高糖+miR-148a-3p inhibitor组、高糖+miR-148a-3p inhibitor+CRT-(CRT-siRNA)组,检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量与活性氧物质(reactive oxygen species,ROS)水平、细胞线粒体呼吸链复合酶活性与细胞凋亡水平。结果miR-148a-3p minic明显抑制心肌细胞内CRT蛋白表达,miR-148a-3p inhibitor使CRT表达水平升高。miR-148a-3p minic抑制了高糖诱导的心肌细胞内的ATP生成减少、ROS生成增多、线粒体呼吸链复合酶活性减弱及细胞过度凋亡;而TG减弱了miR-148a-3p minic的上述作用。miR-148a-3p inhibitor加重了高糖诱导的心肌细胞线粒体损伤与凋亡,而miR-148a-3p inhibitor的上述作用则被CRT-siRNA部分阻断。结论miR-148a-3p可负向调节心肌细胞内CRT的表达,并通过抑制CRT保护高糖诱导的心肌细胞线粒体损伤与凋亡。 展开更多
关键词 mir-148a-3p 钙网蛋白 高糖 心肌细胞 线粒体损伤 凋亡
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MiR-148 b-3 p/FOXO 4轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响
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作者 郭玲 陈敬信 《临床与病理杂志》 CAS 2023年第9期1621-1630,共10页
目的:MiR-148b-3p通过调节叉头框蛋白O4(forkhead box O4,FOXO4)在乳腺癌(breast cancer,BC)进展中的作用还未完全阐明。本研究探究miR-148b-3p调节FOXO4表达对BC细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用实时反转录聚合酶链反应(real-tim... 目的:MiR-148b-3p通过调节叉头框蛋白O4(forkhead box O4,FOXO4)在乳腺癌(breast cancer,BC)进展中的作用还未完全阐明。本研究探究miR-148b-3p调节FOXO4表达对BC细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR)检测BC患者的癌组织标本(BC组织)和邻近的非肿瘤组织标本(正常组织)、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和人BC细胞(MCF7、SKBR3、MDA-MB-231细胞)中miR-148b-3p和FOXO4的表达情况。对MDA-MB-231细胞进行转染并将其分为对照组(Ctrl组)、inhibitor-NC组、miR-148b-3p inhibitor组、si-NC组、si-FOXO4组、miR-148b-3p inhibitor+si-NC组、miR-148b-3p inhibitor+si-FOXO4组。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞自噬;蛋白质印迹法检测细胞FOXO4、增殖、凋亡和自噬相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测(double luciferase reporter gene assay,DLR)和miRNA下拉实验验证miR-148b-3p与FOXO4的靶向作用关系。结果:与正常组织比较,BC组织中miR-148b-3p表达升高,FOXO4 mRNA表达降低(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示BC患者癌组织中miR-148b-3p的表达水平与FOXO4 mRNA的水平呈负相关(r=−0.774,P<0.01)。与MCF-10A细胞比较,MCF-7细胞、SKBR3细胞和MDA-MB-231细胞中miR-148b-3p表达均升高,FOXO4蛋白和mRNA表达均降低(均P<0.05),且MDA-MB-231细胞中升高或降低更多。miR-148b-3p靶向负调控FOXO4的表达。敲减miR-148b-3p后MDA-MB-231细胞活力、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白水平降低,凋亡率、自噬小体数量、FOXO4蛋白和mRNA水平、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP-1、LC3-II/LC3-I、Beclin-1蛋白水平均升高(均P<0.05),而敲减FOXO4后与之相反;敲减FOXO4可减弱敲减miR-148b-3p对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡和自噬的影响。结论:miR-148b-3p可能通过靶向FOXO4促进MDA-MB-231细胞增殖,抑制其凋亡和自噬。 展开更多
关键词 mir-148b-3p 叉头框蛋白O4 乳腺癌 增殖 凋亡 自噬
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结肠癌患者miR-148a-3p、miR-19a表达及与预后的关系
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作者 胡敏 牛雅轩 +2 位作者 王瑾琳 陈晓 崔发财 《分子诊断与治疗杂志》 2023年第12期2147-2150,2154,共5页
目的探究结肠癌患者miR-148a-3p、miR-19a表达及其与预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月于郑州大学人民医院就诊的98例结肠癌患者作为观察组,并选择同期于本院进行体检且结果为健康者49例作为对照组。收集所有研究对象入组时的... 目的探究结肠癌患者miR-148a-3p、miR-19a表达及其与预后的关系。方法选择2019年1月至2020年1月于郑州大学人民医院就诊的98例结肠癌患者作为观察组,并选择同期于本院进行体检且结果为健康者49例作为对照组。收集所有研究对象入组时的一般资料;比较两组患者血清miR-148a-3p、miR-19a表达量;比较不同临床特征患者的miR-148a-3p、miR-19a表达;随访患者生存时间,采用单因素生存分析Kaplan-Meier绘制生存曲线,COX风险比例回归分析影响患者预后的因素。结果观察组血清miR-148a-3p表达量显著低于对照组,差异有统计学意义(t=2.669,P<0.05),miR-19a的表达量显著高于对照组,差异有统计学意义(t=2.929,P<0.05);结肠癌患者miR-148a-3p、miR-19a表达水平与肿瘤分化程度、TNM分期有关(t=4.075、2.110,P<0.05);miR-148a-3p低表达患者3年总生存率和3年无病生存率均显著低于高表达患者(χ^(2)=6.978,8.025,P<0.05);miR-19a高表达患者3年总生存率和3年无病生存率均显著低于低表达患者(χ^(2)=8.252,4.474,P<0.05);miR-148a-3p下调、miR-19a上调为影响结肠癌患者3年无病生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论结肠癌患者血清miR-148a-3p异常低表达,miR-19a异常高表达,且其异常表达可降低患者3年总生存率和无病生存率。 展开更多
关键词 结肠癌 mir-148a-3p mir-19a 生存率
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