支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系

目的:分析支气管哮喘患儿外周血microRNA-30a(miR-30a)、microRNA-15b-5p(miR-15b-5p)水平与气道炎症、肺功能的关系。方法:选择2020年3月—2022年3月我院收治的123例支气管哮喘患儿作为研究组,另外选择同期在我院体检的100例健康儿童作为对照组。入院后均检测外周血miR-30a、miR-15b-5p水平,利用肺功能仪检测第1秒用力呼气量(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)及FEV_(1)/FVC等肺功能指标水平,同时检测气道炎症指标水平。比较各组血清miR-30a、miR-15b-5p水平及肺功能、气道炎症指标,采用Pearson相关分析探讨血清miR-30a、miR-15b-5p水平与气道炎症、肺功能的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估外周血miR-30a、miR-15b-5p水平对支气管哮喘发生的预测价值。结果:研究组患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均高于对照组(P<0.05)。研究组患儿诱导痰中的细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞的数目均高于对照组,巨噬细胞的数目低于对照组(P<0.05)。研究组患儿FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC肺功能指标均低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均与肺功能指标(FEV_(1)、FVC、FEV_(1)/FVC)及巨噬细胞呈负相关(P<0.05),与细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、淋巴细胞数目呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,外周血miR-30a、miR-15b-5p预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.841(95%CI:0.792~0.890)、0.862(95%CI:0.817~0.917),二者联合预测小儿支气管哮喘发生的曲线下面积为0.911(95%CI:0.874~0.958)。结论:支气管哮喘患儿外周血miR-30a、miR-15b-5p水平均呈高表达,且二者水平变化与气道炎症、肺功能密切相关,另外可作为预测支气管哮喘患儿发病的有效指标。

基于生物信息学探讨miR-15b-5p在头颈部鳞状细胞癌中的诊断价值和潜在作用机制

目的采用生物信息学探讨miR-15b-5p在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的诊断价值和潜在作用机制。方法(1)从GEO数据库和TCGA数据库中收集HNSCC的miR-15b-5p表达数据和/或HNSCC患者的临床资料。通过Meta分析miR-15b-5p在HNSCC中的表达情况及其诊断HNSCC的价值,使用SPSS 26.0软件分析miR-15b-5p表达水平与HNSCC患者临床特征的关系。利用实时荧光定量PCR检测HNSCC细胞和正常细胞中的miR-15b-5p表达水平。(2)通过miRWalk数据库和GEPIA2数据库分别筛选miR-15b-5p的下游靶基因和HNSCC的差异表达基因,对两者取交集后获得miR-15b-5p在HNSCC中的关键靶基因,对关键靶基因进行富集分析。(3)利用UALCAN数据库分析部分靶基因在HNSCC中的表达水平和甲基化水平。利用GEPIA2数据库分析部分关键靶基因表达情况与HNSCC患者无病生存期和总生存期的关系。结果(1)Meta分析结果显示,miR-15b-5p在HNSCC中呈高表达(P<0.05)。与正常细胞相比,miR-15b-5p在HNSCC细胞中的表达水平升高(P<0.05)。miR-15b-5p表达水平诊断HNSCC的敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比和诊断优势比分别为0.70、0.72、2.15、0.48和7.33,汇总受试者工作特征曲线下面积为0.81。男性、年龄<60岁、N_(1)~N_(3)期患者的miR-15b-5p表达水平分别高于女性、年龄≥60岁、N_(0)期患者(P<0.05)。(2)共获得54个miR-15b-5p在HNSCC中的关键靶基因。功能富集分析结果提示,关键靶基因与细胞外基质密切相关;通路富集分析结果提示关键靶基因与多条信号通路密切相关,其中包含视黄醇代谢通路。(3)与正常组织相比,关键靶基因RDH12和UGT1A7在HNSCC组织中表达下调,关键靶基因UGT1A10和UGT1A7在HNSCC组织中的甲基化水平降低(P<0.05)。与UGT1A7表达量低的HNSCC患者相比,UGT1A7表达量高的HNSCC患者的无病生存期更长(P<0.05),但两者的总生存期差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-15b-5p与HNSCC的发生、发展密切相关,对HNSCC有潜在的诊断价值。miR-15b-5p可能通过靶向作用UGT1A7和RDH12基因来参与调控视黄醇代谢信号通路,从而影响HNSCC的发生、发展。

miR-15b-5p靶向HDGF抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡

目的:研究miR-15b-5p和HDGF对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测胃癌细胞中miR-15b-5p的表达;通过软件预测miR-15b-5p的下游靶基因;将对数生长期AGS细胞随机分为miR-15b-5p组(转染miR-15b-5p模拟物)、miR-NC组(转染阴性对照)、Scramled组(转染阴性对照)、shHDGF组(转染质粒pcDNA3.1-shHDGF)、Vector+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和pcDNA3.1载体共转染)、HDGF+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和HDGF共转染),均以脂质体法转染;MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖和凋亡变化;Western blot法和双荧光素酶报告基因实验分析miR-15b-5p对HDGF的靶向调控作用。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901和AGS中miR-15b-5p低表达,且过表达miR-15b-5p可抑制AGS细胞的增殖并促进凋亡。HDGF是miR-15b-5p的潜在靶标,miR-15b-5p能够抑制HDGF表达。而回补HDGF可逆转miR-15b-5p抑制胃癌细胞增殖与促进凋亡的作用。结论:miR-15b-5p可抑制胃癌细胞的增殖并促进凋亡,其作用机制可能与靶向抑制HDGF有关,提示miR-15b-5p可能成为胃癌诊断与治疗的潜在靶点。

miR-15b-5p调控PI3K/AKT/mTOR信号通路对肾癌细胞凋亡及氧化应激反应的影响

目的:探讨miR-15b-5p是否调控磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/mTOR信号通路影响肾癌细胞(A-498)凋亡和氧化应激反应。方法:运用实时定量PCR分析肾癌组织中miR-15b-5p表达水平。流式细胞术分析抑制或过表达miR-15b-5p对A-498细胞凋亡的影响。试剂盒分析丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平。免疫印迹法分析磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)相关蛋白表达水平。结果:肾癌组织中miR-15b-5p表达水平显著升高(P<0.05)。抑制miR-15b-5p表达显著促进A-498细胞凋亡,增加MDA含量,降低SOD和CAT水平,并下调p-p85、p-Akt和p-p70S6K1蛋白表达水平(P<0.05),而过表达miR-15b-5p具有相反作用(P<0.05)。PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂GNE-477显著促进A-498细胞凋亡,增加MDA含量,降低SOD和CAT水平(P<0.05)。GNE-477还可减弱miR-15b-5p过表达对A-498细胞凋亡和氧化应激反应的影响(P<0.05)。结论:肾癌中miR-15b-5p表达显著增加。抑制miR-15b-5p表达通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路可促进肾癌细胞凋亡和氧化应激损伤。

lncRNA XIST靶向miR-15b-5p调控细胞凋亡及自噬参与帕金森病发病机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对帕金森病(PD)的潜在分子机制。方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导建立PD模型。用爬杆和转棒法检测小鼠行为变化。四甲基偶氮唑盐法和流式细胞术检测人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)活力和凋亡。双荧光素酶报告基因法、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、免疫组化探讨lncRNA XIST在PD中的分子机制。结果PD体内外模型XIST表达上调,miR-15b-5p表达下调。沉默XIST(si-XIST)可缩短小鼠准备向下爬行的时间,延长停留时间。此外,si-XIST也可增加酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元数。miR-15b-5p是XIST的靶基因。结论si-XIST可通过调控miR-15b-5p抑制PD的自噬和凋亡。

循环miR-338-5p、miR-15b-5p和miR-21-5p作为肝细胞癌的潜在肿瘤标记物

目的筛查血浆中能作为肝细胞癌肿瘤标记物的miRNA。方法分为4个阶段：1miRNA芯片筛查肝细胞癌组织中异常表达的miRNA,并根据文献和miRNA芯片结果确定候选miRNA。213对术前和术后7~10 d肝细胞癌患者血浆用定量逆转录-聚合酶链反应（quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR）检测候选miRNA的表达水平,术后表达水平下降的miRNA定为目的miRNA。339例肝细胞癌患者、32例肝硬化患者、25例健康人员血浆进行qRT-PCR,验证目的miRNA在3组人群中的表达差异。4分析目的 miRNA作为肝细胞癌肿瘤标记物的诊断价值,绘制受试者工作曲线并分析其与临床参数的相关性。结果癌组织中40种miRNA表达量增加（〉2倍）,52种miRNA表达量明显下降（〈0.5倍）。结合文献,选取miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p作为候选miRNA。术后3种miRNA表达水平下降,定为目的 miRNA。3组人群测量结果显示miR-15b-5p、miR-21-5p、miR-338-5p在肝细胞癌患者血浆中表达水平明显高于肝硬化患者和健康对照人群。其中miR-338-5p在肝细胞癌与肝硬化、健康人群鉴别时,曲线下面积（area under the curve,AUC）分别为0.762 4（灵敏度：64.10%,特异度：87.50%）和0.906 4（灵敏度：89.74%,特异度：84.00%）。miR-21-5p和miR-338-5p进行联合诊断,特异度可达92.98%。即使在甲胎蛋白（α-fetoprotein,AFP）判定为阴性的肝细胞癌患者,3种miRNA判定为肝细胞癌的灵敏度都比较高。相关性分析结果显示,血浆miR-338-5p水平与AFP水平呈负相关（r=-0.344,P=0.032）。结论循环miR-338-5p、miR-15b-5p、miR-21-5p具有作为肝细胞癌的肿瘤标记物的潜力。

miR-15b-5p靶向CDK4抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖

目的探讨miR-15b-5p通过靶向抑制细胞周期素依赖性激酶4 (CDK4)的表达进而发挥负向调节脉络膜黑色素瘤细胞增殖的作用。方法使用荧光素酶报告分析检测miR-15b-5p与CDK4结合情况。体外培养人眼侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系MUM-2B,分别转染negative control RNA、miR-15b-5p mimics、inhibitor nc RNA和miR-15b-5p inhibitor;采用实时定量PCR检测转染后miR-15b-5p的表达水平;采用Western blotting检测4组细胞中CDK4蛋白的表达量;采用CCK8检测4组细胞的增殖能力;采用流式细胞术检测4组细胞周期情况。结果荧光素酶报告基因分析验证miR-15b-5p能够与CDK4 m RNA 3’UTR结合。与阴性对照组相比,mimics组miR-15b-5p表达显著增加(t=25.01,P <0.000 1),CDK4的蛋白表达水平降低,细胞增殖能力降低,细胞G1期比例增高。而与inhibitor nc组相比,inhibitor组miR-15b-5p表达减少,CDK4表达水平升高,细胞增殖能力增强,细胞G1期比例降低。结论miR-15b-5p能够靶向抑制CDK4的表达,造成肿瘤细胞发生G1期阻滞,从而有效抑制脉络膜黑色素瘤细胞增殖。

LncRNA HOXC-AS3通过miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞的增殖和迁移

背景与目的:胃癌是一种发病率和死亡率均较高的恶性肿瘤。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类具有调控功能的大分子非编码RNA,在胃癌的转移中发挥着重要的作用。探讨lncRNA HOXC-AS3(lnc-HOXC-AS3)在胃癌中的表达模式,以及通过miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞增殖和转移的分子机制。方法:根据生物信息学分析的方法寻找收集2017年4月—2018年12月安徽医科大学第一附属医院收治并经病理学检查诊断为胃癌的90例患者的胃癌组织中异常表达的lncRNA,并且利用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lnc-HOXC-AS3的表达水平;在对lnc-HOXC-AS3功能的研究中,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和transwell等方法确定了lnc-HOXC-AS3对胃癌细胞(MGC803)增殖和迁移的影响;在机制上,采用双荧光素酶报告基因检测lnc-HOXC-AS3、miR-15b-5p和E2F3的靶向调控关系。结果:Lnc-HOXC-AS3在胃癌组织和胃癌细胞系中异常高表达。功能上,lnc-HOXC-AS3促进胃癌细胞增殖和迁移,相反,敲低lnc-HOXC-AS3则明显抑制胃癌细胞增殖和迁移。在机制的探讨中,通过双荧光素酶报告基因和一系列体外实验证实lnc-HOXC-AS3通过靶向下调miR-15b-5p的表达,进而解除miR-15b-5p对E2F3的抑制作用,促进了胃癌细胞增殖和迁移。结论:Lnc-HOXC-AS3在胃癌中异常高表达,并通过调控miR-15b-5p/E2F3生物学轴促进胃癌细胞增殖和迁移,渴望成为研究胃癌早期诊断和治疗的靶点。

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P <0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P <0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响

目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。结果成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK1 3'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR。利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性。结论成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点。

miR-15b-5p靶向SGK1对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响

目的探讨非编码小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)是否通过靶向调控血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶(SGK)1从而影响高糖诱导小鼠足细胞损伤。方法以小鼠肾脏足细胞(MPC5)为研究对象,建立足细胞损伤模型,分为正常对照(NG,含5 mmol/L的D-葡萄糖)组和高糖刺激(HG,含30 mmol/L的D-葡萄糖)组。实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测足细胞中miR-15b-5p和SGK1 mRNA表达;运用生物学信息预测miR-15b-5p靶基因,双荧光素酶报告基因进一步验证;Western印迹检测过表达miR-524-5p或抑制SGK1表达对HG诱导足细胞损伤及凋亡相关蛋白的影响,流式细胞术检测细胞凋亡。共转染pcDNA-SGK1和miR-15b-5p模拟物,观察过表达SGK1对过表达miR-15b-5p作用于高糖刺激足细胞损伤时的影响。结果与正常对照组相比,miR-15b-5p在高糖诱导的足细胞中表达下调(P<0.05),SGK1 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。SGK1是miR-15b-5p的靶基因。miR-15b-5p过表达降低HG刺激的MPC5细胞凋亡率,促进B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、synaptopodin蛋白表达,抑制Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)-3和结蛋白(desmin)蛋白表达,差异均达到显著水平(P<0.05),与抑制SGK1表达作用结果相同。SGK1过表达可以逆转miR-15b-5p过表达对高糖刺激足细胞凋亡的抑制作用及对细胞损伤的保护作用。结论miR-15b-5p通过靶向调控SGK1保护高糖刺激的足细胞损伤,抑制细胞凋亡。

子宫肌瘤患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p,hsa-miR-21-5p的水平与组织中ER,PR蛋白表达的相关性研究

目的检测子宫肌瘤患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平,并分析其与组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)蛋白之间的相关性,进而探讨子宫肌瘤发生发展的作用机制。方法选取2019年8月~2020年12月于陆军军医大学士官学校附属医院妇科就诊的60例子宫肌瘤患者作为研究对象,另取同期因子宫脱垂行切除术的60例患者作为对照,通过免疫组化SP法和Westerblot法检测所有患者肌瘤组织和正常肌层组织中ER和PR蛋白的相对表达;术前采所有患者的空腹外周静脉血,通过qRT-PCR法分别检测患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p mRNA的相对表达水平,并分析组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平与ER,PR蛋白表达的相关性。结果免疫组化结果显示,ER蛋白在子宫肌瘤组和正常子宫肌层组的阳性表达率分别为73.3%(44/60)和38.3%(23/60)(χ^(2)=14.903,P=0.002),PR蛋白在子宫肌瘤组和正常子宫肌层组阳性表达率分别为65.0%(39/60)和31.7%(19/60)(χ^(2)=13.348,P=0.005),差异均有统计学意义。Westernblot结果显示,子宫肌瘤组ER水平(0.98±0.21)较正常子宫肌层组(0.62±0.15)显著升高(t=22.147,P<0.001),子宫肌瘤组PR水平(0.80±0.14)较正常子宫肌层组(0.38±0.08)亦显著升高(t=38.265,P<0.001),差异均有统计学意义。qRT-PCR结果表明,与正常子宫肌层组相比,hsa-miR-15b-5p(1.98±0.12 vs 1.02±0.11)和hsa-miR-21-5p(2.21±0.15 vs 0.93±0.18)mRNA在子宫肌瘤患者血清中表达水平均显著增加(t=46.080,63.944,均P<0.001),在肌瘤组织中两者表达水平较正常肌层组织亦显著升高(t=39.852,52.046,均P<0.001),差异均有统计学意义。Pearson法分析发现,组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p表达水平与ER和PR蛋白表达水平呈明显正相关(r=0.744~0.902,均P<0.001)。结论hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p在子宫肌瘤患者血清和组织中表达水平均显著升高,子宫肌瘤组织中ER和PR蛋白亦呈高表达,并且hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平与ER和PR表达水平呈明显正相关,可能协同诱导子宫肌瘤发生发展。

利拉鲁肽调控miR-15b-5p对高糖诱导的足细胞炎性反应和免疫功能的影响

目的探讨利拉鲁肽通过调控miR-15b-5p对高糖诱导的足细胞炎性反应和免疫功能的影响。方法选择小鼠肾足细胞MPC-5经过葡萄糖诱导培养后,将细胞分组为对照(Con)组、高糖(HG)组、利拉鲁肽低、中、高剂量(HG+LIR-L、HG+LIR-M、HG+LIR-H)组、高糖+利拉鲁肽(HG+LIR)组、高糖+利拉鲁肽+anti-miR-NC、高糖+利拉鲁肽+anti-miR-15b-5p(HG+LIR+anti-miR-NC、HG+LIR+anti-miR-15b-5p)组。MTT检测细胞活力;ELISA检测SOD、MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β的表达;Western blot检测TGF-β1和IL-2蛋白表达;qRT-PCR检测miR-15b-5p的表达。结果HG组的细胞活力、SOD活性、miR-15b-5p表达明细低于Con组,MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-1β、TGF-β1蛋白表达、IL-2蛋白表达明显高于明细低于Con组(P<0.05)。HG+LIR-L组、HG+LIR-M组、HG+LIR-H组的细胞活力、SOD活性、miR-15b-5p表达明细高于HG组,MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-1β、TGF-β1蛋白表达、IL-2蛋白表达明显低于HG组(P<0.05)。HG+LIR+anti-miR-15b-5p组的细胞活力、SOD活性、miR-15b-5p表达明细低于HG+LIR+anti-miR-NC组,MDA含量、TNF-α、IL-6、IL-1β、TGF-β1蛋白表达、IL-2蛋白表达明显高于明细低于HG+LIR+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论利拉鲁肽可以抑制高糖诱导的足细胞氧化应激、炎性反应和免疫功能,其作用机制可能与抑制miR-15b-5p有关。

miR-15b-5p靶向CRKL基因对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和增殖的作用机制

目的探讨微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)靶向CRKL基因对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞凋亡及增殖的作用机制。方法构建miR-15b-5p低表达及CRKL高表达的H9C2心肌细胞系并进行H/R处理,qRT-PCR检测miR-15b-5p及CRKL mRNA表达,Western印迹检测CRKL蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡变化,MTT实验检测细胞增殖,双荧光素酶报告基因验证miR-15b-5p与CRKL的靶向关系。结果与Con组相比,H/R组H9C2心肌细胞中miR-15b-5p表达显著升高,CRKL mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与H/R+anti-miR-NC组相比,抑制miR-15b-5p表达可抑制心肌细胞凋亡,促进细胞增殖;与H/R+pcDNA组相比,CRKL过表达可诱导心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告基因显示,转染miR-15b-5p+野生型CRKL-3′UTR报告基因载体组荧光素酶活性明显下降;转染miR-15b-5p inhibitor+野生型CRKL-3′UTR和转染miR-15b-5p mimic+突变型CRKL-3′UTR报告基因载体组荧光素酶活性没有变化;抑制CRKL表达可逆转抑制miR-15b-5p表达对H/R诱导的心肌细胞凋亡和增殖的作用。结论miR-15b-5p可负向调控CRKL基因表达进而促进H/R诱导的心肌细胞凋亡并抑制心肌细胞增殖。

miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年1月至2021年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院行改良根治术的68例乳腺癌患者作为研究对象,收集乳腺癌组织及癌旁正常组织石蜡标本。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-135b-5p的表达水平,以乳腺癌组织miR-135b-5p表达量的平均值作为参考,将患者分为低表达组与高表达组,分析miR-135b-5p表达水平与患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-MeierPlotter分析miR-135b-5p表达对不同分子亚型乳腺癌患者预后的影响。结果乳腺癌组织miR-135b-5p的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组肿瘤直径>2cm、淋巴结转移阳性、分型为三阴性、ER表达阴性、PR表达阴性的患者占比高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、发病部位、组织学分级、HER2表达情况比较差异无统计学意义。Kaplan-MeierPlotter在线生存分析结果显示,在ER阳性的管腔型乳腺癌患者中,miR-135b-5p低表达组总生存率低于高表达组,在三阴性乳腺癌患者中,miR-135b-5p高表达组总生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);在HER2过表达型乳腺癌患者中,低表达组和高表达组总生存率比较差异无统计学意义。结论miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达水平在三阴性和管腔型乳腺癌中存在显著差异,可通过发挥不同的作用参与肿瘤的进展过程,在乳腺癌的预后判断和靶向治疗方面可能具有潜在的应用价值。

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-146b-5p调控CD82介导食管鳞状细胞癌恶性表型

目的探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146b-5p的下游靶基因;Western-blot实验结果显示,相比NC组,KD组CD82在蛋白水平显著性上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,wt+mimic组荧光强度较mut+mimic组显著性下降(P<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向调控CD82促进食管鳞状细胞癌细胞的迁移,为食管鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

miR-15a-5p在乳腺癌耐药与敏感患者中的差异分析及耐药价值预测

目的探讨miR-15a-5p在多西他赛治疗敏感组和耐药组中的表达差异及对临床预后的意义。方法运用TCGA数据库分析miR-15a-5p在恶性肿瘤中的表达情况。收集2019年1月至2020年1月在本院治疗的30例对多西他赛耐药的乳腺癌患者为耐药组,收集同期治疗的30例对药物敏感的乳腺癌患者为敏感组,通过q-PCR荧光定量法检测患者癌组织中miR-15a-5p的表达水平,探讨miR-15a-5p与乳腺癌耐药、分型的关联情况。绘制ROC曲线分析miR-15a-5p对患者预后的预测价值以及miR-15a-5p对乳腺癌患者耐药诊断价值。结果通过泛癌分析发现,miR-15a-5p在乳腺癌等多种癌症中显著高表达。q-PCR结果显示,多西他赛化疗敏感组的miR-15a-5p的表达水平高于耐药组的表达水平(P<0.05)。临床统计分析发现miR-15a-5p与ER(雌激素受体)、PR(孕激素受体)的表达呈负相关,而与人表皮生长因子受体-2的表达无明显关联性。结论miR-15a-5p在多西他赛耐药患者的肿瘤组织中的表达水平明显低于敏感组,且miR-15a-5p在乳腺癌的高表达与乳腺癌的分子分型、预后相关。miR-15a-5p可能参与了乳腺癌的免疫调节最终导致了乳腺癌患者多西他赛耐药。

H12、RS13和RL6在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达研究

目的探讨组蛋白H1变体(H12)、核糖体蛋白S13(RS13)和核糖体蛋白L6(RL6)在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达变化。方法(1)自行繁育miR-199b-5p敲除(Knockout,KO)和野生型(Wild-type,WT)C57BL/6小鼠,分别记录两组雌鼠产仔情况(2)基因型鉴定验证分组,取性成熟期小鼠(鼠周龄为11~13周)卵巢用于验证实验。(3)用实时荧光定量PCR(qPCR)检测每组小鼠(n=10)卵巢组织中H12、RS13和RL6的mRNA表达水平变化。(4)用蛋白免疫印迹法(WB)检测每组小鼠(n=3)卵巢组织中H12、RS13和RL6的蛋白表达水平变化。结果(1)共统计半年内两组雌鼠产仔情况:WT组生产27窝,平均每窝产仔数为(8.15±0.41)只;KO组生产28窝,平均每窝产仔数为6.43±0.32只,与WT组比较,KO组雌鼠产仔数显著下降(P=0.004),差异有统计学意义。(2)qPCR结果示:与WT组比较,KO组卵巢组织中H12(P=0.038)、RS13(P=0.011)和RL6(P=0.009)的mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义。(3)WB结果示:与WT组比较,KO组小鼠卵巢组织中H12(P=0.014)蛋白表达水平显著升高,而RS13(P=0.005)和RL6(P=0.009)蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义。结论敲除miR-199b-5p可能影响H12、RL6和RS13基因的表达使小鼠卵巢储备能力下降。