食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

天麻素调控miR-181b对创伤性颅脑损伤大鼠行为及脑水肿的作用机制探究

目的探究天麻素(GAS)调控miR-181b对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠行为及脑水肿的作用机制。方法将120只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组(Sham组)、TBI模型组(Model组)、低剂量GAS组(GAS-L组,50 mg/kg GAS)、高剂量GAS组(GAS-H组,100 mg/kg GAS)、高剂量GAS+miR-181b antagomir NC组(GAS-H+miR-181b antagomir NC组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir NC)和高剂量GAS+miR-181b antagomir组(GAS-H+miR-181b antagomir组,100 mg/kg GAS+200 nmol miR-181b antagomir),每组20只大鼠。采用改良神经功能缺损严重程度评分量表(mNSS)对各组大鼠神经功能进行评估。采用转棒测试、旷场实验评价大鼠行为学变化。干湿重法测定大鼠脑组织含水量。HE染色观察大鼠脑组织病理学变化。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定各组大鼠脑组织miR-181b水平。Western blot法测定大鼠脑组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、水通道蛋白-4(AQP-4)的表达水平。结果与Sham组相比,Model组大鼠mNSS评分、脑组织含水量、脑组织MMP-9、AQP4蛋白表达显著升高(P<0.05),转棒测试跌落时间、旷场实验区域中心停留时间、脑组织miR-181b水平显著降低(P<0.05),大鼠脑皮质神经元萎缩,结构紊乱,细胞轮廓不清晰,出现严重的脑损伤。与Model组相比,GAS-H组大鼠相关指标变化趋势与上述相反(P<0.05)。miR-181b antagomir减弱了GAS对TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿的减轻作用。结论GAS可能通过提高miR-181b的表达来改善TBI导致的大鼠行为学障碍和脑水肿。

雷公藤甲素通过调节miR-181b-5p/SMAD2抑制结直肠癌细胞的增殖和转移

目的识别雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响并识别其作用机制。方法CCK-8和EdU检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖的影响;使用Transwell检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响。qRT-PCR检测结直肠癌细胞中miR-181b-5p和SMAD2 mRNA的表达;使用Western blot实验检测结直肠癌细胞中SMAD2蛋白的表达。结果CCK-8实验表明随着雷公藤甲素浓度增加,结直肠癌细胞存活率逐渐降低。EdU实验表明雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞增殖率。Transwell实验显示雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭数目。qRT-PCR结果证实雷公藤甲素可显著促进miR-181b-5p的表达并抑制SMAD2 mRNA和蛋白表达。此外,过表达SMAD2可部分逆转雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论雷公藤甲素以浓度依赖的方式抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-181b-5p/SMAD2轴有关。

脑动脉硬化患者血清miR-181b miR-126与内皮功能和炎症水平的相关性

目的探讨脑动脉硬化患者血清miR-181b、miR-126与内皮功能和炎症水平的相关性。方法选取78例脑动脉硬化患者设为病例组,78名健康志愿者设为对照组。比较两组受试者血清miR-181b、miR-126表达,比较两组受试者血清一氧化氮、血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6、白细胞计数水平。分析脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126表达与内皮功能及炎症水平的相关性。结果病例组患者血清miR-181b、miR-126相对表达量均低于对照组(P<0.01)。病例组患者血清一氧化氮水平低于对照组,血清血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6及白细胞水平均高于对照组(P<0.01)。脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126均与血清一氧化氮水平呈正相关(P<0.01),与血清血管内皮素、促血管生成素-2、超敏C反应蛋白、白介素-6及白细胞水平呈负相关(P<0.01)。结论脑动脉硬化患者miR-181b、miR-126存在异常表达,且其与患者炎症水平及内皮功能具有显著相关性,可能通过调控炎症水平及内皮功能参与脑动脉硬化的发生发展。

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高表达。抑制miR-181b的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc下游调节基因2(NDRG2)是miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而抑制miR-181b能够显著提高NDRG2的表达。抑制miR-181b的表达的同时抑制靶基因NDRG2的表达,能够逆转抑制miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论 miR-181b在骨肉瘤中过表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。

2型糖尿病和糖尿病肾病患者血清miR-181b水平及意义

目的探究2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)和糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者血清miR-181b水平及意义。方法选取2016年5月至2017年4月的87例T2DM并发DN患者作为研究对象。采用RT-qPCR法检测血清miR-181b水平,并分析其与T2DM进展为DN及DN预后的关系。结果 DN组血清miR-181b水平高于T2DM组和对照组(P <0.05)。多元线性回归分析结果显示收缩压和ACR与miR-181b独立相关。血清miR-181b诊断T2DM进展为DN的ROC AUC、敏感度和特异度分别为0.911、71.26%和97.62%。miR-181b高水平组有28例进展为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD),miR-181b低水平组有8例进展为ESRD,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 T2DM和DN患者血清miR-181b水平升高。miR-181b与T2DM、DN患者收缩压和ACR呈独立相关。检测miR-181b水平有助于DN诊断及预后评估。

miR-181a、miR-181b在人胃癌细胞和组织中的表达

目的:研究miR-181a、miR-181b在不同分化程度人胃癌细胞株和胃癌组织中的表达情况,探索其在胃癌发生发展过程中的作用.方法:体外培养3种不同分化程度的胃癌细胞株(AGS,SGC-7901、MGC-803)及正常胃黏膜细胞GES-1,收集28例胃癌患者手术切除的癌组织及正常组织样本,通过实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerasechain reaction,qRT-PCR)方法检测上述细胞和组织中miR-181a、miR-181b的表达量,比较胃癌细胞与正常胃黏膜细胞、胃癌组织与正常胃组织中miR-181a,miR-181b表达的差异性.结果:经qRT-PCR方法检测发现,AGS、S GC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞中miR-181a及miR-181b的表达量均高于GES-1细胞中的表达量(P<0.05),而AGS,SGC-7901、MGC-803 3种胃癌细胞之间miR-181a及miR-181b的表达量差异均无统计学意义(P>0.05).与正常胃组织相比,miR-181a,miR-181b在胃癌组织中的表达量显著升高(P<0.05).Ⅲ/Ⅳ期组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于Ⅰ/Ⅱ期组(P<0.05).有淋巴结转移组胃癌组织中miR-181a,miR-181b的相对表达量高于无淋巴结转移组(P<0.05).miR-181a,miR-181b的相对表达量与年龄、性别、胃癌的分化程度无明显关系(P>0.05).结论:miR-181a、miR-181b在胃癌细胞和组织中高表达,两者的表达水平与胃癌的分期、淋巴结转移相关,可能在胃癌的发生发展中发挥癌基因的作用.

miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

目的:探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法:收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果:miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论:miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。

miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤中表达及功能研究

目的:探讨miR-181b在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中表达及其功能。方法:选择2010年3月到2012年3月来我院及常州市第二人民医院进行检查和治疗的124例DLBCL患者的淋巴组织样本,作为DLBCL组;另选择64例经检查确定为非淋巴瘤患者的健康淋巴组织,作为对照组。检测两组淋巴样本中miR-181b的表达水平,比较不同临床特征的淋巴瘤患者淋巴组织中miR-181b的表达水平,比较不同组织miR-181b表达水平的淋巴瘤患者的生存情况。结果:DLBCL患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量显著高于健康淋巴组织(P<0.05)。Ann Arbor分期越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量越高(P<0.05),而IPI评分越高的患者淋巴组织中miR-181b的相对表达量也越高(P<0.05)。miR-181b低表达组患者5年生存率显著高于高表达组患者(P<0.05)。结论:miR-181b在不同临床分期和预后的DLBCL患者淋巴组织中表达存在差异,它有可能成为未来对DLBCL诊断和预后监测的有效指标。

术后结合替莫唑胺对神经胶质瘤患者血清miR-181b及miR-497的影响

目的:分析神经胶质瘤患者术后结合替莫唑胺对血清mi R-181b及mi R-497表达的影响。方法:将收治的76例神经胶质瘤术后患者随机分为A、B两组。其中A组(38例)采用司莫司汀方法治疗,B组(38例)采用司莫司汀联合替莫唑胺的方法治疗。观察比较两组患者的临床疗效,术后1、2、3年生存率,Karnofsky评分。同时收集患者治疗前、治疗后的血清样本,以检测mi R-181b及mi R-497表达的变化。结果:B组患者的客观有效率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组中位生存期以及术后1、2、3年生存率明显高于A组(P<0.05);B组术后的Karnofsky评分显著高于A组(P<0.05)。术后血清mi R-181b浓度明显提高[术后(162.34±51.79)fmol/L vs.术前(91.37±40.41)fmol/L,P<0.05];术后血清mi R-497明显提高[术后(166.23±53.68)fmol/L vs.术前(88.36±36.72)fmol/L,P<0.05]。结论:术后结合替莫唑胺能够提高神经胶质瘤患者血清mi R-181b及mi R-497的表达,延长患者生存期。

miR-181b抑制骨髓间充质干细胞成骨分化可能参与青少年特发性脊柱侧弯骨密度降低

目的探讨miR-181b在正常对照和青少年特发性侧弯患者(AIS)骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)之间的表达差异,以及其对BM-MSCs成骨分化能力的影响。方法RT-qPCR检测对照和AIS患者MSCs中miR-181b的表达;将miR-181b模拟物、抑制剂以及相应对照瞬时转染BM-MSCs,随后更换为成骨诱导培养基,比较不同处理组BM-MSCs成骨能力的差异;RT-qPCR和Westernblot检测成骨标志基因以及特异性转录因子的表达;碱性磷酸酶(ALP)染色法以及ALP活性分析法来鉴定成骨早期分化;茜素红染色检测细胞外基质的形成情况;慢病毒在BM-MSCs中过表达miR-181b的模拟物和抑制剂后,建立裸鼠异位骨生成模型,通过组织染色检测类骨质的形成。Westernblot检测miR-181b水平的改变对ERK1/2磷酸化的影响。结果与正常对照比,AIS患者BM-MSCs中miR-181b表达显著升高(P<0.01)。过表达miR-181b明显抑制间充质干细胞体外向成骨分化,降低体内异位骨生成(P<0.05);阻断内源性miR-181b可以促进BM-MSCs体外向成骨分化,增强体内类骨质的形成(P<0.05)。其作用机制是,过表达miR-181b抑制ERK1/2的磷酸化,而抑制miR-181b促进ERK1/2的磷酸化(P<0.05)。结论miR-181b抑制间充质干细胞成骨分化,可能与AIS患者骨密度降低有关。

血浆miR-181b和miR-194作为急性移植物抗宿主病诊断及疗效评价的标志物的研究

目的:研究血浆中miR-181b和miR-194的水平变化与异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关联性,确定新的aGVHD诊断及预测标志物。方法:采用qRT-PCR方法检测31例接受异基因造血干细胞移植的患者移植前、移植后15 d以及发生aGVHD时血浆中miR-181b和miR-194表达水平变化,利用ROC曲线及曲线下面积分析移植后第15天miR-181b和miR-194的表达量作为aGVHD早期诊断标志物的特异性和敏感性。结果:发生aGVHD时患者血浆miR-181b和miR-194表达水平较移植前显著上调(P <0.05),且在治疗后表达水平下调,与移植前水平相比无显著差异。移植后第15天,aGVHD组miR-181b和miR-194的表达水平较未发生aGVHD组显著上调(P <0.05),且表达水平增高先于临床诊断。该检测时间点miR-181b诊断aGVHD曲线下面积0.91±0.05(特异性为0.94,敏感性为0.69),miR-194诊断aGVHD曲线下面积0.91±0.06(特异性为0.94,敏感性为0.77)。结论:miR-181b和miR-194的表达量可作为aGVHD早期诊断及疗效评价的特异性标志物。

LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b/IL-6轴影响食管癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA1(homeobox transcription factor 6 antisense RNA1,DLX6-AS1)调控miR-181b/白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轴对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取人食管上皮细胞株HEEC和人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、miR-181b及IL-6的表达水平。将si-DLX6-AS1、miR-181b mimics、pcDNA-IL-6、pcDNA-IL-6+miR-181b mimics及其相应阴性对照分别转染至Eca-109细胞,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8法和EdU染色实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移与侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-181b、miR-181b与IL-6的靶向关系。结果与HEEC细胞相比,Eca-109细胞中lncRNA DLX6-AS1、IL-6 mRNA的表达水平升高(P=0.005,0.006),但miR-181b表达水平降低(P=0.004)。与相应阴性对照组比较,si-DLX6-AS1组和miR-181b mimics组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率均降低(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目均减少(均P<0.05),而pcDNA-IL-6组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率升高(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目增加(均P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1与miR-181b存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型DLX6-AS1载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P=0.006);下调DLX6-AS1表达后Eca-109细胞中miR-181b表达水平升高(P=0.010)。miR-181b与IL-6存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型IL-6载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);过表达miR-181b后Eca-109细胞中IL-6的表达水平降低(P<0.05)。与pcDNA-IL-6组比较,pcDNA-IL-6与miR-181b mimics共转染后,Eca-109细胞中IL-6 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低,细胞迁移数目与侵袭数目也减少(均P<0.05)。结论LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b靶向负调控IL-6表达而促进食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭。

脑髓康对动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b及巨噬细胞炎症反应的影响

目的研究脑髓康对动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b及巨噬细胞炎症反应的影响。方法选取SPF级雄性ApoE-/-小鼠40只,采用随机数字表法分为动脉粥样硬化模型组、用药组、空白对照组、低分子肝素组各10只,对照组小鼠用普通饲料喂养,用药组小鼠建模成功后给予脑髓康治疗,低分子肝素组皮下注射低分子肝素。HE染色观察四组小鼠组织学,采用实时定量PCR法检测血清中miR-21、miR-181b表达水平及血脂水平[总胆固醇(TC),三酰甘油(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],并检测巨噬细胞上清炎症因子[白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]分泌情况。结果用药组和低分子肝素组小鼠内皮细胞排列情况接近空白对照组,动脉粥样硬化模型组小鼠血管腔内粥样斑块形成,内皮细胞内膜增厚,细胞排列较乱;模型组血清miR-21表达水平显著高于空白对照组,miR-181b表达水平显著低于空白对照组(P<0.05),用药组和低分子肝素组血清miR-21表达水平显著低于模型组,miR-181b表达水平显著高于动脉粥样硬化模型组(P<0.05);模型组IL-1、IL-6、TNF-α水平显著高于空白对照组,IL-10水平显著低于空白对照组(P<0.05),用药组和低分子肝素组血清IL-1、IL-6、TNF-α水平显著低于动脉粥样硬化模型组,IL-10水平显著高于动脉粥样硬化模型组(P<0.05);动脉粥样硬化模型组TC、TG、LDL-C水平显著高于空白对照组,用药组和低分子肝素组血清TC、TG、LDL-C水平显著低于动脉粥样硬化模型组。结论脑髓康能有效调控动脉粥样硬化小鼠血清miR-21、miR-181b表达水平,并有效缓解巨噬细胞炎症反应。

miR-181b调控Mex3B蛋白对动脉粥样硬化斑块形成及分子机制研究

目的探讨miR-181b靶向调控肌肉过量蛋白-3B(muscle excess protein-3,Mex3B)的表达在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块的形成及其分子作用机制。方法将雄性SD大鼠随机分成正常组、模型组、对照组和实验组。对照组和实验组分别尾静脉注射miR-181b-inhibitor-NC、miR-181b-inhibitor的混合液,正常组、模型组注射等剂量的生理盐水;注射完毕24 h后将维生素D3以600000 U/kg的剂量一次性腹腔注射进模型组、对照组、实验组大鼠体内后,每日以100 g高脂饲料喂养构建AS模型大鼠,正常组大鼠始终以等量基础饲料喂养。喂养60 d后,对大鼠进行颈动脉超声检查,测量管腔动脉后壁内膜-中层厚度(intima-media thickness of the posterior wall of the artery,IMT)和斑块面积(square,S)参数。RT-PCR检测各组miR-181b和Mex3B蛋白的mRNA的表达;Western blot检测各组Mex3B蛋白的表达水平;荧光素酶报告基因分析miR-181b和Mex3B的调控关系。结果与正常组相比,模型组大鼠颈动脉内膜增生明显,颈动脉IMT、斑块S、miR-181b和Mex3B蛋白的mRNA和蛋白的表达明显增大,与模型组相比,实验组大鼠大鼠颈动脉内膜增生明显减小,颈动脉IMT、斑块S、miR-181b和Mex3B蛋白的mRNA和蛋白的表达明显减小,差异均具有统计意义(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析证明miR-181b与Mex3B靶向结合。结论miR-181b通过靶向调控Mex3B的表达参与动脉粥样硬化中的炎性应激反应,抑制miR-181b的表达能明显抑制炎症反应,抑制AS中斑块的形成。

精神分裂症患者中西药物治疗后外周血miR-181b表达水平研究

目的:研究传统中药方剂加味癫狂梦醒汤治疗精神分裂症的微小RNA作用机制。方法:将70例精神分裂症患者分为中药组和西药组各35例,另设正常对照组10例。中药组患者口服加味癫狂梦醒汤,西药组患者口服氯氮平,正常对照组不服药,观察治疗前后各组患者PANSS评分变化情况,采用实时荧光定量PCR检测治疗前后各组患者外周血miR-181b表达水平变化情况。结果:中药组患者治疗后PANSS评分较治疗前显著下降(P<0.05),但与西药组治疗后比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后中药组患者miR-181b表达水平较治疗前显著下降(P<0.05),与西药组相当。结论:精神分裂症的发病可能与微小RNA相关,中药方剂加味癫狂梦醒汤可能通过调控miR-181b的表达发挥其抗精神病作用。

脑胶质瘤中miR-181b的表达及临床意义

背景与目的:miR-181b在多种肿瘤中表达异常,并参与调节多种抗肿瘤药物的敏感性。研究发现miR-181b在胶质瘤中具有起类似抑癌基因的作用,可作为胶质瘤的独立预后指标。本研究旨在进一步探讨恶性胶质瘤中miR-181b表达的临床意义及miR-181b对替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法:收集不同病理级别胶质瘤标本,以荧光定量PCR法检测其中miR-181b的表达,分析其与胶质瘤病理分级及患者预后的关系;利用CCK-8细胞毒性实验检测患者恶性胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性,并分析其与miR-181b表达的关系。结果:miR-181b在胶质瘤组织中的表达显著低于正常脑组织(P<0.05),miR-181b的表达水平分别为:正常脑组织3.69±0.477,WHOⅠ级2.56±0.354,WHOⅡ级0.81±0.222,WHOⅢ级0.42±0.130,WHOⅣ级0.21±0.067。miR-181b表达低的患者中位生存期为370±37天,而miR-181b表达高的患者中位生存期为493±60天(P<0.05)。在高级别胶质瘤中,miR-181b的表达与替莫唑胺的敏感性呈正相关(r=-0.576,P<0.001)。结论:miR-181b在胶质瘤中的表达与胶质瘤的病理级别呈负相关,而与脑胶质瘤患者预后呈正相关,与高级别胶质瘤对替莫唑胺的敏感性呈正相关。

LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)在体外构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒检测LDH释放总量;采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达;caspase-Glo3检测试剂盒评估caspase 3活性;双萤光素酶报告基因实验验证TUG1或PDCD4与miR-181b-5p的靶向关系。结果 与NG组比较,HG组细胞活性降低,LDH释放总量、凋亡率、Bax、cleaved caspase 3表达及caspase 3活性升高(P<0.05),敲低TUG1或上调miR-181b-5p表达可拮抗上述变化(P<0.05)。抑制miR-181b-5p可减轻TUG1沉默对高糖处理下心肌细胞活力和凋亡的影响(P<0.05)。PDCD4过表达可减弱miR-181b-5p上调对高糖处理的心肌细胞活力的促进作用和对凋亡的抑制作用。TUG1可通过吸附miR-181b-5p上调PDCD4表达(P<0.05)。结论TUG1通过下调miR-181b-5p、上调PDCD4表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡。

miR-181b在慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及其靶基因的预测

目的:探讨miR-181b在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者CD19+B淋巴细胞中的表达水平,分析其表达与CLL预后关系,并利用生物信息学预测miR-181b在CLL中的潜在靶基因。方法:选取2013年6月至2018年6月在新疆自治区人民医院诊治的CLL患者84例、并选取健康者20例为对照组。应用磁珠分选CLL患者和对照组外周血CD19+B淋巴细胞后进行RNA提取,检测miR-181b的表达水平,分析其在不同IPI分组中表达差异,探讨miR-181b表达水平与CLL患者PFS相关性。使用网上数据库及文献预测miR-181b靶基因,对候选靶基因进行基因注释分析及相关信号通路分析。结果:miR-181b在CLL患者中表达显著低于对照组(P<0.01)。miR-181b在低危组的表达水平高于高危组和极高危组(P<0.05),但在低危组与中危组间表达无差异(P=1.00),中危组中miR-181b的表达水平高于高危组和极高危组(P<0.05),但在高危组与极高危组间表达无差异。ROC曲线结果显示,曲线下面积(AUC)为0.792(P<0.01),由此显示,miR-181b表达水平处于分界值0.279时,具有较好的敏感性(62.9%)和特异性(91.8%)。生存分析结果提示,与高表达组相比,miR-181b低表达CLL患者具有较差的PFS(log-rank:P=0.047)。使用starBase、Targetscan和PicTar数据库进行靶基因预测,结合文献报道,与血液疾病相关的靶基因有CARD11、ZFP36L1、RUNX1、NR4A3、ATP1B1、PUM1和PLAG1,其中上调的CARD11、ZFP36L1通过促进细胞增殖、抑制细胞衰老参与淋巴系统肿瘤形成。结论:miR-181b在CLL患者中的表达水平明显低于健康对照组,且miR-181b低表达与CLL不良预后有关。通过生物信息学预测并结合文献报道,推测CARD11及ZFP36L1可能作为miR-181b的靶基因参与CLL疾病发生发展,该结果还需要进一步实验进行验证。

藁本内酯上调miR-181b减轻氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞炎症损伤

目的研究藁本内酯(ligustilide,LIG)减轻氧化低密度脂蛋白(oxidative low density lipoprotein,oxLDL)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)损伤作用机制。方法将细胞随机分为5组,对照组(正常培养细胞不加干预)、模型组(100μmol/L ox-LDL干预24 h)、LIG低浓度组、LIG中浓度组、LIG高浓度组。其中,LIG低、中、高浓度组细胞分别以10、20、40μmol/L预先孵育2 h,再用100μmol/L ox-LDL干预24 h。CCK8法检测各组细胞活力,ELISA检测细胞培养液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的含量。qRT-PCR检测细胞内TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、NF-κB及miR-181b的mRNA水平;Western blotting测定细胞NF-κB的表达量。结果与对照组相比,模型组细胞存活率明显下降,凋亡率增高,细胞上清中TNF-α、IL-6、ICAM-1及VCAM-1的浓度升高。LIG能显著提高细胞存活率,抑制细胞凋亡,并且能降低细胞内炎性因子水平,尤其是中、高浓度组,与模型组相比差异有显著性(P<0.01)。此外,LIG能明显降低细胞内NF-κB转录及翻译水平,上调miR-181b的表达,与模型组相比差异有显著性(P<0.01)。激活或抑制细胞内miR-181b表达,能有效调节细胞内炎性因子水平。结论藁本内酯明显减轻ox-LDL诱导HUVEC损伤,其机制可能是通过上调miR-181b抑制NF-κB表达,从而减轻ox-LDL诱导的细胞炎症损伤。