食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

雷公藤甲素通过调节miR-181b-5p/SMAD2抑制结直肠癌细胞的增殖和转移

目的识别雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响并识别其作用机制。方法CCK-8和EdU检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖的影响;使用Transwell检测雷公藤甲素对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响。qRT-PCR检测结直肠癌细胞中miR-181b-5p和SMAD2 mRNA的表达;使用Western blot实验检测结直肠癌细胞中SMAD2蛋白的表达。结果CCK-8实验表明随着雷公藤甲素浓度增加,结直肠癌细胞存活率逐渐降低。EdU实验表明雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞增殖率。Transwell实验显示雷公藤甲素可显著抑制结直肠癌细胞迁移和侵袭数目。qRT-PCR结果证实雷公藤甲素可显著促进miR-181b-5p的表达并抑制SMAD2 mRNA和蛋白表达。此外,过表达SMAD2可部分逆转雷公藤甲素对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论雷公藤甲素以浓度依赖的方式抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-181b-5p/SMAD2轴有关。

慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表达及其与心功能和预后的关系

目的:探讨慢性心力衰竭病人血清微小RNA-181b-5p(miR-181b-5p)、长链非编码RNA(lncRNA)肺癌相关转录物1(LUCAT1)表达及其与心功能和预后的关系。方法:选取2020年1月—2021年1月在我院治疗的慢性心力衰竭病人80例(观察组),根据美国纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级将病人分为Ⅱ级组(34例)、Ⅲ级组(28例)和Ⅳ级组(18例);根据病人预后情况分为预后良好组(52例)和预后不良组(28例)。另选取同期门诊健康体检者40名作为对照组。比较各组血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表达水平及临床资料;Pearson法分析miR-181b-5p水平与lncRNA LUCAT1水平的相关性;Logistic回归分析慢性心力衰竭病人预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平对慢性心力衰竭病人预后的预测价值。结果:观察组血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1表达水平高于对照组,且随着NYHA心功能分级的升高而升高(P<0.05)。Pearson相关分析显示,慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p水平与lncRNA LUCAT1水平呈正相关(r=0.780,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1、N末端B型利钠肽(NT-proBNP)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)是慢性心力衰竭病人预后不良的危险因素(P<0.05),左室射血分数(LVEF)是慢性心力衰竭病人预后的保护因素(P<0.05)。血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1二者联合预测慢性心力衰竭病人预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.950,敏感度为89.29%,特异度为98.08%,优于单独预测(Z_(二者联合vs miR-181b-5p)=2.808,Z_(二者联合vs lncRNA LUCAT1)=3.602,P值分别为0.005,0.035)。结论:慢性心力衰竭病人血清miR-181b-5p、lncRNA LUCAT1水平与心功能及预后密切相关,二者联合检测对慢性心力衰竭病人预后有较好的临床价值。

LncRNA TUG1通过调节miR-181b-5p/PDCD4轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调节miR-181b-5p/程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)轴对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)在体外构建糖尿病心肌病(DCM)细胞模型。AC16细胞分为NG组、HG组、HG+sh-NC组、HG+sh-TUG1组、HG+miR-NC组、HG+miR-181b-5p组、HG+sh-TUG1+anti-miR-NC组、HG+sh-TUG1+anti-miR-181b-5p组、HG+miR-181b-5p+pcDNA组、HG+miR-181b-5p+pc-PDCD4组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒检测LDH释放总量;采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测TUG1、miR-181b-5p和PDCD4 mRNA表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测B细胞淋巴瘤2-相关X(Bax)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase 3)和PDCD4蛋白表达;caspase-Glo3检测试剂盒评估caspase 3活性;双萤光素酶报告基因实验验证TUG1或PDCD4与miR-181b-5p的靶向关系。结果 与NG组比较,HG组细胞活性降低,LDH释放总量、凋亡率、Bax、cleaved caspase 3表达及caspase 3活性升高(P<0.05),敲低TUG1或上调miR-181b-5p表达可拮抗上述变化(P<0.05)。抑制miR-181b-5p可减轻TUG1沉默对高糖处理下心肌细胞活力和凋亡的影响(P<0.05)。PDCD4过表达可减弱miR-181b-5p上调对高糖处理的心肌细胞活力的促进作用和对凋亡的抑制作用。TUG1可通过吸附miR-181b-5p上调PDCD4表达(P<0.05)。结论TUG1通过下调miR-181b-5p、上调PDCD4表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡。

外泌体源性miR-181b-5p在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

目的:探讨外泌体源性miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病患儿不同疾病阶段的表达水平差异及其与临床特点的相关性。方法:收集86例ALL患儿骨髓血浆标本,采用外泌体提取试剂盒提取血浆中外泌体,TRIzol法提取外泌体中RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测初诊组、复发组、缓解组、对照组患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平,比较分析miR-181b-5p表达水平在各组患儿中的差异,以及miR-181b-5p表达水平与临床特征之间的关系。结果:初诊和复发组ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平均明显低于缓解组和对照组(P<0.05);初诊组T-ALL患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于B-ALL患儿(P<0.05);初诊组男性患儿血浆外泌体miR-181b-5p表达水平明显高于女性患儿(P<0.01)。结论:外泌体源性miR-181b-5p在ALL儿童病程中呈动态变化,可以作为监测疾病状态的标记性miRNA;外泌体可以在肿瘤微环境中传递信息,作为生物分子靶向治疗的潜在载体。

miR-181b-5p调节EGR1/BIM通路对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的 探讨miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的作用及其潜在的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测四川大学华西医院2019年1月—2021年1月80例ALL患者miR-181b-5p和早期生长反应因子1(EGR1) mRNA的表达水平。分别使用miR-181b-5p模拟物、miR-181b-5p抑制物或(和)EGR1过表达质粒转染人ALL细胞系NALM-6细胞。采用MTT、流式细胞仪和划痕愈合实验检测miR-181b-5p对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。通过双荧光素酶验证miR-181b-5p和EGR1的相互作用关系。Western blot检测细胞中EGR1蛋白和细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达水平。结果 miR-181b-5p在ALL中表达显著上调,EGR1表达下调(P<0.05)。抑制miR-181b-5p不仅抑制细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,而且上调EGR1和BIM蛋白表达(P<0.05);上调miR-181b-5p则具有与之相反的效果(P<0.05)。EGR1是ALL细胞中miR-181b-5p的靶基因(P<0.05)。miR-181b-5p过表达可明显削弱EGR1过表达对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响(P<0.05)。结论 抑制miR-181b-5p可通过靶向上调EGR1和BIM表达在ALL中抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡。

miR-181b-5p通过靶向结合PAX9促进人急性髓细胞性白血病细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探究miR-181b-5p通过靶向结合配对盒基因9(PAX9)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 分别用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析AML患者中PAX9的表达水平和预后的关系。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染空载体(Vector组)或PAX9(PAX9组),CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白B1(CCNB1)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。生物信息学分析预测PAX9靶作用的微小RNA(miRNA)、荧光素酶报告系统验证其靶向作用,实时定量PCR检测PAX9 mRNA水平,Western blot法检测PAX9蛋白表达。在Kasumi-1细胞和AML5细胞中转染miR-NC(miR-NC组)或miR-181b-5p(miR-181b-5p组),在miR-181b-5p组细胞中进一步转染PAX9(miR-181b-5p联合PAX9组),采用前述方法分别检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。结果 GEPIA和TCGA数据库显示AML患者PAX9呈低表达趋势并与患者不良预后相关。在Kasumi-1、 AML5细胞中,与Vector组相比,PAX9组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、 BAX蛋白表达升高。双荧光素酶报告基因验证PAX9是miR-181b-5p的靶基因。与miR-NC组相比,miR-181b-5p组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达升高,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率、 BAX蛋白表达降低。与miR-181b-5p组相比,miR-181b-5p联合PAX9组细胞增殖活力、 S期细胞百分比、 CDK2、 CCNB1和Bcl2蛋白表达降低,G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡、 BAX蛋白表达升高。结论 miR-181b-5p靶向抑制PAX9表达促进AML细胞增殖、延缓细胞凋亡。

外泌体miR-181b-5p诱导M2型巨噬细胞极化促进喉癌细胞转移的功能研究

目的:探究外泌体miR-181b-5p对巨噬细胞极化和喉癌转移的影响。方法:THP-1诱导分化为M0型的巨噬细胞,M0型巨噬细胞分为TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2 exo、NP69 exo、miR-NC exo、miR-181b-5p exo组和PBS组。外泌体诱导后的巨噬细胞与TU-212细胞共孵育,qRT-PCR检测miR-181b-5p、TNF-α、CCR7、Arg1、CD206、CD163表达,Western blot检测PI3K p110γ、PTEN、p-AKT、AKT表达,Transwell小室法检测各组细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p与PTEN的靶向关系。结果:TU-212、TU-177、Hep-2细胞及其外泌体中miR-181b-5p高表达,TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2exo、miR-181b-5p exo促进巨噬细胞中miR-181b-5p、Arg1、CD206、CD163、PI3K p110γ表达及AKT磷酸化,抑制PTEN、TNF-α、CCR7表达。PTEN为miR-181b-5p的靶基因。TU-212 exo、TU-177 exo、Hep-2 exo、miR-181b-5p exo诱导的巨噬细胞显著促进TU-212细胞的迁移和侵袭。结论:外泌体miR-181b-5p激活PTEN/PI3Kγ信号通路诱导M2型巨噬细胞极化,从而促进喉癌细胞的转移。

miR-181b-5p在恶性肿瘤发生发展中的作用研究进展

微小RNA-181b-5p(miR-181b-5p)是一种高度保守的微小RNA,在人类癌症中发挥重要作用,能够与靶mRNA的3’UTR序列互补结合,调节致癌或抑癌靶基因的表达,从而调控肿瘤的增殖、凋亡、迁移、自噬和细胞周期进展。在多种癌症中,miR-181b-5p都发挥着促癌或抑癌作用,并且逐渐证实其在早期诊断、分期分级、耐药靶点、治疗靶点及预后生物标志物等方面具有应用价值。本文简要综述近年来miR-181b-5p在恶性肿瘤中的研究进展。

miR-181b-5p靶向PDCD4基因调控高糖诱导血管内皮细胞增殖和凋亡的机制

目的研究miR-181b-5p和程序性细胞死亡因子(PDCD)4在高糖诱导的血管内皮细胞中的表达及其对增殖和凋亡的影响。方法运用qRT-PCR和Western印迹检测高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中miR-181b-5p和PDCD4的表达。用脂质体法将miR-181b-5p mimic和PDCD4 siRNA转染至HUVEC,MTT法、流式细胞仪检测高糖诱导HUVEC的增殖和凋亡。Targetscan在线分析网站预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PDCD4的靶向关系。共转染miR-181b-5p mimic和pcDNA-PDCD4至HUVEC,MTT法、流式细胞仪检测高糖诱导HUVEC的增殖和凋亡。结果与5 mmol/L葡萄糖干预的HUVEC相比,高糖诱导的细胞中miR-181b-5p表达显著上调、PDCD4表达显著下调(P<0.01,P<0.001)。过表达miR-181b-5p、低表达PDCD4均可促进高糖诱导的HUVEC增殖、抑制其凋亡。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western印迹结果显示,miR-181b-5p能够靶向调控PDCD4的表达。上调PDCD4的表达可逆转miR-181b-5p对高糖诱导的HUVEC促进增殖和抑制其凋亡的作用。结论过表达miR-181b-5p可促进高糖诱导的HUVEC增殖,抑制其凋亡,其机制可能与miR-181b-5p靶向调控PDCD4有关。

miR-181b-5p靶向调控Nr6a1抑制GC-1spg细胞的增殖与迁移

Micro RNA(mi RNA)是一段长约为22 nt的内源性非编码单链RNA,研究表明mi RNA对正常精子发生和雄性发育必不可少。为了探究mi R-181b-5p在雄性生殖细胞发育中的功能以及寻找其靶基因,首先采用流式细胞术、噻唑蓝检测以及划痕实验分析了mi R-181b-5p在小鼠GC-1spg精原细胞系中的生物学效应,随后利用Targetscan和GO数据库等生物信息学软件预测发现生殖核受体Nr6a1可能为其靶基因,进而通过双荧光素酶报告基因实验以及q PCR证实了mi R-181b-5p与Nr6a1的靶向识别关系,最后采用细胞功能回补实验明确了mi R-181b-5p通过靶向调控Nr6a1来抑制GC-1spg细胞的增殖和迁移。结果表明mi R-181b-5p通过其靶基因Nr6a1在精子发生中起到负调控的作用。

miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞系SLK细胞迁移、侵袭的影响

目的通过脂质转染miR-181b-5p模拟物及抑制物到卡波西肉瘤细胞系SLK,研究miR-181b-5p对卡波西肉瘤细胞SLK细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法应用脂质体对人卡波西肉瘤细胞株SLK进行转染,转染miR-181b-5p模拟物及抑制物后应用MTT测定细胞增殖曲线,应用流式细胞仪行检测细胞周期。利用Transwell小室试验后行苏木素染色观察细胞迁移、细胞侵袭生物学特性。结果 miR-181b-5p模拟物促进细胞增殖,促进S期的转变,加速细胞周期进程;miR-181b-5p抑制物抑制细胞增殖,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,延缓细胞周期进程。Transwell小室迁移实验结果显示,与阴性对照组迁移实验下室面细胞数目151±11个相比,miR-181b-5p模拟物组184±9个,细胞数目明显数量增多,迁移能力均明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示,与阴性对照组侵袭实验下室面细胞数目35±6个相比,miR-181b-5p模拟物组48±5个,细胞数目明显数量增多,侵袭能力均明显提高(P<0.05)。结论 miR-181b-5p在SLK细胞中高表达,其对SLK细胞的增殖、侵袭和迁移能力可能存在正向调控作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点。

miR-181b-5p在胆绿素治疗脑缺血再灌注损伤中的靶基因预测及鉴定

目的:对Small RNA测序中筛选出的rno-miR-181b-5p进行靶基因预测、生物信息学分析及鉴定,以期为miR-181b-5p在胆绿素治疗大鼠脑缺血再灌注损伤中的生物学作用奠定基础。方法:分别用TargetScan、miRDB、miRwalk 3个数据库预测rno-miR-181b-5p的靶基因,取3个数据库的交集靶基因进行基因功能富集分析(gene ontology)及信号通路富集分析(KEGG pathway analysis)。采用双荧光素酶基因报告实验对靶基因进行验证,同时通过RT-QPCR和Western blot检测大鼠血管内皮细胞中过表达miR-181b-5p后内皮细胞特异性分子1(Esm1)的表达变化。结果:3个数据库交集的靶基因共有28个,这些交集靶基因主要富集于调节刺激反应(P=0.013)、调节细胞增长(P=0.014)、积极调控(P=0.048)等生物过程GO条目中;而细胞成分层面主要富集于细胞内膜结合细胞器(P=0.045)、黏附连接(P=0.049)等GO条目中;分子功能层面,靶基因主要富集于与mRNA5’-UTR结合(P=0.017)、受体结合(P=0.032)、蛋白质结合(P=0.046)等GO条目中。信号通路主要富集于突触小泡循环(P=0.024)、基础转录因子(P=0.040)、RIG-I样受体信号通路(P=0.047)等通路中。双荧光素酶基因报告实验结果揭示了miR-181b-5p可以靶向调控Esm1基因。另外,RT-QPCR和Western blot结果显示在大鼠血管内皮细胞中过表达miR-181b-5p可负向调控Esm1。结论:rno-miR-181b-5p可能通过靶向调控Esm1基因而在胆绿素治疗大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥生物活性作用。

miR-181b-5p在人卡波西肉瘤组织中的表达变化及临床意义

目的检测miR-181b-5p在人卡波西肉瘤(KS)组织中的表达,明确miR-181b-5p是否与KS的发生发展相关。方法收集2012年1月—2013年10月新疆维吾尔自治区人民医院18例行HE染色病理检查明确诊断KS患者的KS组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测KS组织和癌旁组织中miR-181b-5p表达水平并比较其差异;同时对miR-181b-5p表达的影响因素进行分析。结果 KS组织中miR-181b-5p表达水平为(0.73±0.40),高于癌旁组织中的(0.24±0.16)(t=4.826,P<0.01)。不同年龄、病程、全身皮损面积、全身皮损类型及人疱疹病毒8型(HHV-8)、人类免疫缺陷病毒(HIV)阴阳性患者KS组织miR-181b-5p表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同肿瘤组织病理分期患者miR-181b-5p表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。斑块期、结节期患者miR-181b-5p表达水平高于斑片期(P<0.05)。HIV合并HHV-8双阳性患者miR-181b-5p表达水平为(0.32±0.19),HIV合并HHV-8双阴性患者miR-181b-5p表达水平为(0.43±0.17),差异无统计学意义(t=1.615,P=0.158)。结论 miR-181b-5p可能参与了KS的致瘤过程,miR-181b-5p有可能成为潜在的分子诊断指标之一。

miR-181b-5p及其靶基因ACVR2A对鸡原代成肌细胞增殖的影响

研究旨在探究miR-181b-5p与Ⅱ型激活素A受体基因(ACVR2A)之间的靶标关系,以及它们对鸡肌肉生长发育的影响。试验过表达或抑制鸡原代成肌细胞中miR-181b-5p及ACVR2A,分析它们与鸡成肌细胞增殖之间的关系,并构建双荧光素酶报告载体确定miR-181b-5p与ACVR2A之间的靶标关系。双荧光素酶活性检测结果显示,共转染miR-181b-5p和pmirGLO-ACVR2A-3′UTR-WT后,miR-181b-5p能显著抑制报告基因活性(P<0.05)。在过表达miR-181b-5p后,ACVR2A的表达量极显著(P<0.01)降低,抑制miR-181b-5p后,ACVR2A的表达量极显著(P<0.01)上升,但无论是过表达还是抑制,对原代成肌细胞的增殖没有影响;在过表达ACVR2A后,miR-181b-5p的表达量极显著(P<0.01)降低,抑制ACVR2A后,miR-181b-5p的表达量极显著(P<0.01)上升。综上所述,miR-181b-5p与ACVR2A之间具有靶标关系,但是miR-181b-5p与ACVR2A对鸡原代成肌细胞的增殖都不具有促进或抑制作用。

MiR-181b-5p在胃癌中的表达及生物信息学分析

目的:研究MiR-181b-5p在胃癌中的表达水平,并进行生物信息学分析,探讨其在肿瘤发生、发展中的作用。方法:在GEO数据库检索并下载胃癌的miRNA数据,提取数据进行独立样本T检验和绘制ROC曲线,进行Meta分析,预测MiR-181b-5p的靶基因,并进行GO功能和KEGG通路分析。结果:检索筛选后得到5个miRNA芯片数据集,Meta分析显示胃癌和正常胃组织的miR-181b-5p的表达水平有差异,差异有统计学意义(P=0.008)。预测得到145个miR-181b-5p的靶基因,GO功能分析表明靶基因主要富集在转录的调控、细胞增殖和细胞周期的调节、蛋白质结合的调节等方面,差异有统计学意义(P<0.05);KEGG通路分析显示其主要涉及背腹轴形成、肿瘤miRNA、雌激素信号通路、神经营养蛋白信号通路、肿瘤的中心碳代谢等,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-181b-5p的上调与胃癌的有密切的联系,对胃癌的诊断可能有重要的意义。

食管癌患者外周血中miR-181b-5p表达水平下降

目的探讨miR-181b-5p在食管癌患者外周血中表达水平的变化,评价其在食管癌患者的诊断和预后评估的临床意义。方法收集34例食管癌患者和26名健康志愿者全血标本,分为食管癌组和正常对照组;对白细胞总RNA的miRNA芯片结果进行分析;筛选单一miRNA候选指标并用RT-q PCR法进行验证。结果与正常对照组相,比食管癌组miR-181b-5p表达水平下调。结论 miR-181b-5p在食管癌中表达下调,可能与食管癌的发生、发展相关。

miR-181b-5p负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-181b-5p通过下调CYLD的表达促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-181b-5p在膀胱癌细胞系(T24、UM-UC-3、5637)和人膀胱上皮永生化细胞(SV-HUC-1)中的表达水平。在T24和UM-UC-3细胞中转染miR-181b-5p模拟物(miR-181b-5p组)和miR-NC(对照组),CCK-8实验和克隆形成实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达miR-181b-5p对T24和UM-UC-3细胞迁移和侵袭的影响。采用生物信息学预测miR-181b-5p潜在下游靶基因CYLD,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p是否与CYLD的3′-UTR结合,qRT-PCR检测过表达miR-181b-5p对CYLD mRNA的影响,Western blot法检测过表达miR-181b-5p对CYLD蛋白的影响。在T24和UM-UC-3细胞中沉默CYLD的表达,采用CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测沉默CYLD对T24和UM-UC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果与SV-HUC-1比较,膀胱癌细胞系中miR-181b-5p的表达水平升高(P<0.05)。与对照比较,过表达miR-181b-5p和沉默CYLD均促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,过表达miR-181b-5p明显降低野生型CYLD的荧光素酶活性(P<0.05)。qRT-PCR和Western blot法结果显示过表达miR-181b-5p显著下调CYLD mRNA和蛋白的水平(P<0.05)。结论miR-181b-5p通过负调控CYLD的表达促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。