LncRNA-NEAT1调控miR-182-5p表达对狼疮性肾炎肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)核旁丛组装转录本1(NEAT1)在狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)中通过微小RNA(miR)-182-5p/叉头盒蛋白O1(FoxO1)/β-连环蛋白(β-catenin)轴对肾系膜细胞损伤的影响。方法收集2019年3月至2021年7月凉山州第二人民医院收治的32例LN患者(LN组)外周血和32例体检健康者(健康对照组)外周血,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血单个核细胞中NEAT1以及miR-182-5p、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量。采用20%LN患者血清处理肾系膜细胞的方法构建LN肾系膜细胞模型,造模完成后将细胞分为对照组(正常培养,不转染)、模型组(加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NC组(转染si-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1组(转染si-NEAT1后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-NC组(共转染si-NEAT1和anti-miR-NC后加入5μg/mL脂多糖培养)、si-NEAT1+anti-miR-182-5p组(共转染si-NEAT1和anti-miR-182-5p后加入5μg/mL脂多糖培养)。qRT-PCR法检测各组细胞NEAT1、miR-182-5p表达水平;ELISA法测定各组细胞炎症因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH含量;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测各组细胞增殖活力;流式细胞仪分析各组细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组细胞FoxO1、β-catenin蛋白表达水平。结果与健康对照组比较,LN组患者外周血单个核细胞中NEAT1、FoxO1、β-catenin mRNA表达水平以及血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著上升,miR-182-5p表达水平显著下降(P<0.05)。与对照组比较,模型组肾系膜细胞增殖活力、FoxO1和β-catenin蛋白水平以及LDH、TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显增加,miR-182-5p表达水平明显降低(P<0.05)。敲低NEAT1后,细胞增殖活力和炎症反应减弱,FoxO1和β-catenin蛋白表达明显下调(P<0.05);抑制miR-182-5p表达可减轻NEAT1敲低对LN肾系膜细胞模型细胞增殖、炎症因子及FoxO1、β-catenin蛋白表达的影响(P<0.05)。各组细胞间凋亡率无显著变化(P>0.05)。结论敲低NEAT1可通过靶向负调控miR-182-5p表达,抑制LN肾系膜细胞过度增殖,降低炎症反应,其可能与抑制FoxO1/β-catenin通路有关。

血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平与急性脑梗死患者病情及预后的关系

目的 检测急性脑梗死患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并探讨其与患者病情及预后的关系。方法 选取2020年3月至2022年10月安阳市人民医院神经内科收治的136例急性脑梗死患者纳入脑梗死组,另选取本院同期136例体检健康志愿者作为对照组。根据病情程度将脑梗死组患者分为轻度组(n=42)、中度组(n=59)和重度组(n=35)。根据患者90 d随访情况分为预后良好组103例和预后不良组33例。采用qRT-PCR法检测两组受检者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平,并比较各组受试者miR-182-5p、miR-372-3p表达水平和美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分。采用Spearman相关性分析急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p与NIHSS评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析急性脑梗死预后的影响因素;绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析miR-182-5p、miR-372-3p预测急性脑梗死患者预后的价值。结果 脑梗死组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.56±0.16、0.39±0.11,明显低于对照组的0.99±0.23、1.00±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);随着脑梗死患者病情程度的加重,轻度组、中度组、重度组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平逐渐降低,而NIHSS评分逐渐增加,差异均有统计学意义(P<0.05);经Spearman相关性分析结果显示,急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p水平与NIHSS评分均呈负相关(r=-0.483、-0.648,P<0.05);预后良好组患者的血清miR-182-5p、miR-372-3p表达水平分别为0.62±0.17、0.42±0.12,明显高于预后不良组的0.39±0.12、0.30±0.09,差异均有统计学意义(P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-182-5p和miR-372-3p低表达以及重度梗死是急性脑梗死预后不良的影响因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-182-5p、miR-372-3p水平联合预测急性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)明显大于miR-182-5p单独预测的AUC (Z=1.991,P=0.046)及miR-372-3p单独预测的AUC (Z=2.294,P=0.022)。结论 急性脑梗死患者血清miR-182-5p、miR-372-3p表达降低,两者是急性脑梗死患者不良预后的危险因素,且与病情程度密切相关,可作为急性脑梗死预后的生物标志物。

基于SATB2/nox4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用

目的 基于特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白(SATB)2/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nox)4信号通路探讨miR-182-5p对结肠癌细胞增殖和迁移的调控作用。方法 收集经手术切除的结肠癌及癌旁组织各43例,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析癌组织及癌旁组织中miR-182-5p与SATB2相对表达,分析miR-182-5p与SATB2在结肠癌中的相关性。SW480细胞分为对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组并进行相应转染。TargetScanHuman预测、双荧光素酶报告基因检测、染色质免疫共沉淀分析miR-182-5p与SATB2的靶向调节关系。噻唑蓝(MTT)法、划痕实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖、迁移能力;qRT-PCR、Western印迹法检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、NC-inhibitor组、miR-182-5p-inhibitor组细胞SATB2、nox4、E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA与蛋白表达情况。体内异种移植实验检测对照组、NC-mimics组、miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤发展能力,免疫组化检测肿瘤SATB2、nox4表达情况。结果 与癌旁组织相比,结肠癌组织miR-182-5p表达量明显升高,SATB2表达量明显降低(P<0.05),miR-182-5p与SATB2水平呈负相关(P<0.001)。miR-182-5p与SATB2存在结合位点,过表达SATB2导致miR-182-5p与SATB2的结合能力明显下降。与对照组、NC-mimics组、NC-inhibitor组相比,miR-182-5p-mimics组细胞增殖能力明显加强,迁移率明显升高,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显下降,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-inhibitor组细胞增殖能力明显降低,迁移率明显下降,SATB2、E-cadherin mRNA与蛋白表达量明显升高,nox4、Vimentin mRNA与蛋白表达量明显下降(P<0.05)。与对照组、NC-mimics组相比,miR-182-5p-mimics组、miR-182-5p-mimics+pcDNA-NC组肿瘤体积、质量明显更大,SATB2表达量明显降低,nox4表达量明显升高(P<0.05);miR-182-5p-mimics+pcDNA-SATB2组肿瘤体积、质量明显更小,SATB2表达量明显上升,nox4表达量明显下降(P<0.05)。结论 miR-182-5p对结肠癌细胞的增殖和迁移能力具有促进作用,能够降低SATB2表达并影响SATB2/nox4信号通路及其相关蛋白,SATB2能够反向调控miR-182-5p表达。

丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响

目的 探讨丙泊酚通过miR-182-5p介导HIF-1α通路对缺氧诱导胎盘滋养细胞生物学活性的影响。方法 采用缺氧诱导体外培养的HTR-8/SVneo细胞,丙泊酚干预,采用CCK-8检测细胞的活力、Transwell测定细胞迁移和侵袭,TUNEL检测细胞凋亡。通过qRT-PCR测量miR-182-5p和HIF-1α相对mRNA表达水平。Western blot检测相关通路蛋白表达水平。结果 与对照组比较,缺氧组细胞迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平降低,HIF-1α、VEGF表达水平升高(P <0.05)。与缺氧组比较,丙泊酚干预后,细胞迁移、侵袭能力恢复,细胞凋亡率降低(P <0.05),miR-182-5p、MMP-9表达水平升高,HIF-1α、VEGF表达水平降低(P <0.05)。转染抑制剂后则逆转了丙泊酚的治疗作用。结论 丙泊酚通过调节miR-182-5p/HIF-1α轴改善缺氧诱导的HTR-8/SVneo细胞毒性。

miR-182-5p靶向TRIM52逆转卵巢癌SKOV3细胞对顺铂耐药的机制

目的研究miR-182-5p靶向三结构域蛋白52(TRIM52)对卵巢癌SKOV3细胞顺铂(CDDP)耐药的影响。方法采用qRT-PCR法测定卵巢癌SKOV3细胞中miR-182-5p水平。以卵巢癌SKOV3细胞作为研究对象,在细胞中转染miR-182-5p mimics,给予CDDP处理(记为SKOV3/CDDP细胞),采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,Transwell小室测定细胞迁移和侵袭,Western blot测定基质金属蛋白酶9(MMP-9)、C-Caspase-3蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-182-5p和TRIM523’UTR端互补结合,使用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将TRIM52过表达载体和miR-182-5p mimics共转染到卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况。结果卵巢癌SKOV3/CDDP细胞中miR-182-5p水平低于卵巢癌SKOV3细胞(P<0.001)。miR-182-5p mimics、CDDP和二者联合处理后的卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,细胞凋亡增多(P<0.001),细胞中MMP-9蛋白表达减少,C-Caspase-3蛋白表达增多(P<0.001)。miR-182-5p靶向抑制TRIM52表达,TRIM52过表达载体可以逆转miR-182-5p mimics联合CDDP对卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移、侵袭抑制作用和凋亡促进作用。结论miR-182-5p靶向TRIM52抑制卵巢癌SKOV3/CDDP细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,提高细胞CDDP敏感性。

miR-182-5p在膀胱癌中的表达及其机制

目的:探究miR-182-5p及FOXO3在膀胱癌中的表达意义及其参与膀胱癌可能的机制。方法:收集2017年6月至2019年6月64例于郑州人民医院行手术切除膀胱癌患者的组织标本和临床资料,采用RT-qPCR检测膀胱癌组织及膀胱癌细胞中的miR-182-5p和FOXO3表达,按照其表达水平分为miR-182-5p高表达组和miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组和FOXO3低表达组,采用Western blot实验检测FOXO3蛋白的表达。采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-182-5p和FOXO3与膀胱癌患者预后的相关性。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与FOXO3的靶向关系,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot检测转染miR-182-5p抑制剂对FOXO3表达的影响;分别采用CCK-8、Transwell实验和流式细胞术检测转染miR-182-5p抑制剂对T24细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:miR-182-5p在膀胱癌组织中的表达量为2.27±0.66,显著高于癌旁组织的1.04±0.36,两者比较差异具有统计学意义(P<0.001),与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05);FOXO3在膀胱癌组织中低表达,与肿瘤大小、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);miR-182-5p高表达组、FOXO3低表达组的患者的生存率显著低于miR-182-5p低表达组、FOXO3高表达组(P=0.038,P=0.004)。T24细胞中miR-182-5p高表达(P<0.05)。抑制miR-182-5p上调FOXO3表达,抑制miR-182-5p表达能抑制T24细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.05)。结论:miR-182-5p在膀胱癌组织中高表达,而FOXO3低表达。miR-182-5p促进膀胱癌细胞的增殖和侵袭,抑制其凋亡,可能与负调控FOXO3有关。

血清miR-182-5p表达水平对脓毒症患儿继发急性肾损伤的早期预测价值

目的:探讨血清miR-182-5p表达对脓毒症患儿继发急性肾损伤(AKI)的早期预测价值。方法:选取2016年1月~2019年6月海南省第三人民医院收治的脓毒症患儿196例,分为继发AKI组(AKI组,n=72)和未继发AKI组(非AKI组,n=124),检测两组血清miR-182-5p、血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)及肾损伤分子-1(KIM-1)水平。应用多因素Logistic回归分析脓毒症患儿继发AKI的危险因素。绘制ROC曲线分析血清miR-182-5p、Scr、Cys-C及KIM-1水平对AKI的早期预测价值,Pearson相关分析检测血清miR-182-5p表达水平与Scr、Cys-C及KIM-1的相关性。结果:AKI组血清miR-182-5p(1.46±0.62 vs 0.35±0.08)、Scr(460.28±84.26 vs 90.42±10.35,μmol/L)、Cys-C(1.83±0.57 vs 0.58±0.12,mg/L)及KIM-1(22.90±6.35 vs 4.75±0.62,μg/L)水平明显高于非AKI组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析发现血清miR-182-5p(OR=2.903,95%CI:1.870~5.116)、Scr(OR=1.704,95%CI:1.105~2.940)、Cys-C(OR=2.063,95%CI:1.434~3.970)及KIM-1(OR=2.530,95%CI:1.524~4.613)水平升高是脓毒症患儿继发AKI的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清miR-182-5p、Scr、Cys-C及KIM-1水平四项联合预测脓毒症患儿继发AKI的曲线下面积(0.956,95%CI:0.903~0.997)最大,其敏感度和特异度较高,为96.4%和90.8%。Pearson相关分析显示,AKI组血清miR-182-5p表达水平与Scr、Cys-C及KIM-1均呈正相关(r=0.683、r=0.795、r=0.847,P<0.01)。结论:血清miR-182-5p表达水平在脓毒症患儿继发AKI中明显升高,是脓毒症患儿继发AKI的独立危险因素,联合Scr、Cys-C及KIM-1水平对预测AKI具有较高的价值。

miR-182-5p调控FHIT对喉鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-182-5p调控脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)对喉鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法选取喉鳞癌组织和癌旁正常组织标本各39例,将anti-miR-NC、anti-miR-182-5p、miR-NC、miR-182-5p载体质粒分别转染至FD-LSC-1喉鳞癌细胞中,分别记为anti-miR-NC组、anti-miR-182-5p组、miR-NC组、miR-182-5p组;将anti-miR-182-5p质粒分别与si-NC、si-FHIT载体质粒共转染至FD-LSC-1细胞中,分别记为anti-miR-182-5p+si-NC组、anti-miR-182-5p+si-FHIT组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测喉癌组织、癌旁组织中的FHIT及miR-182-5p表达水平;蛋白质印迹(Western Blot)法检测FHIT、细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测miR-182-5p和FHIT的靶向关系。结果与癌旁组织相比,喉鳞癌组织中miR-182-5p表达水平显著升高,FHIT表达水平显著降低。抑制miR-182-5p表达可降低细胞活性和迁移、侵袭数量,提高细胞凋亡率,降低CyclinD1、Bcl-2、MMP-2表达水平,提高p21、Bax、E-cadherin表达水平。miR-182-5p可靶向调控FHIT,抑制FHIT能逆转抑制miR-182-5p对喉鳞癌细胞FD-LSC-1增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡促进作用。结论抑制miR-182-5p表达可抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与FHIT表达相关。

去甲斑蝥素通过调控miR-182-5p抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭

目的:研究去甲斑蝥素(ND)对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法:CCK-8和Transwell检测不同浓度的ND给药后SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和上皮间充质转化(EMT)相关蛋白表达;加入LKB1/AMPK通路激动剂GSK621后,CCK-8和Transwell分别检测SKOV3细胞增殖和侵袭能力变化;qRT-PCR和Western blot检测给药前后EMT相关蛋白和LKB1/AMPK信号通路蛋白变化;si-miR-182-5p转染SKOV3细胞后CCK-8和Transwell检测miR-182-5p对SKOV3细胞增殖和侵袭能力影响;qRT-PCR和Western blot检测转染前后LKB1/AMPK信号通路蛋白和EMT相关蛋白表达。结果:30μmol/L ND对SKOV3细胞增殖抑制效果最明显;ND显著抑制SKOV3细胞侵袭同时显著激活LKB/AMPK信号通路和EMT。加入GSK621可以部分消除ND对SKOV3细胞增殖和侵袭影响,ND抑制miR-182-5p表达而激活LKB1/AMPK磷酸化和EMT。结论:ND可能通过抑制miR-182-5p阻滞LKB1/AMPK信号通路和EMT发生抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭。

miR-182-5p通过靶向调节KLF7抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-182-5p对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法:用qRT-PCR检测法比较人骨肉瘤细胞系(U2OS、MG63、SAOS2)、人正常细胞和人成骨细胞(HFOB1.19)中miR-182-5p的表达水平。转染miRNA模拟物或抑制剂或模拟物+KLF7,以转染miR-182-5p表达的上调或下调。通过EDU、迁移分析和侵袭分析来检测细胞功能。双荧光素酶报告分析检测miR-182-5p与KLF7的关系,蛋白质印迹分析检测KLF7的表达。结果:miR-182-5p在骨肉瘤细胞系中被下调。miR-182-5p过表达抑制肿瘤生长、迁移和侵袭。随后的研究显示,KLF7是骨肉瘤细胞中miR-182-5p的直接和功能靶点。miR-182-5p通过调节KLF7来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。结论:miR-182-5p通过靶向调节KLF7而起到抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用。

miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移的调节作用

目的 探讨miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移的调节作用。方法 收集2017年10月—2018年5月我院经病理检查确诊为骨肉瘤的组织及癌旁正常组织,检测miR-182-5p和Bcl-2在人骨肉瘤组织中表达情况。将骨肉瘤细胞株MG-63分为实验组、对照组和空白组;实验组将miR-182-5p过表达后转染到骨肉瘤细胞,对照组不做处理,空白组加入同等剂量的Bcl-2空白转染液。采用蛋白免疫印迹实验检测骨肉瘤细胞株MG-63中miR-182-5p调控Bcl-2的表达情况,细胞划痕实验检测miR-182-5p对骨肉瘤细胞株MG-63迁移能力的影响,MTT实验检测miR-182-5p对骨肉瘤细胞株MG-63增殖能力的影响。结果 人骨肉瘤组织中miR-182-5p表达水平低于癌旁正常组织( P <0.01)。过表达miR-182-5p后骨肉瘤细胞株MG-63中Bcl-2的表达水平相对上调。实验组miR-182-5p表达水平高于对照组和空白组,细胞增殖率低于空白组和对照组( P <0.05)。实验组骨肉瘤细胞株MG-63迁移距离低于空白组和对照组( P <0.05)。结论 miR-182-5p靶向原癌基因Bcl-2对骨肉瘤细胞增殖和迁移有一定的抑制作用,表明miR-182-5p在人骨肉瘤的发生发展过程中扮演着重要角色。

miR-182-5p通过HOXB7基因调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭迁移

目的探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常膀胱上皮细胞(HUC)和膀胱癌细胞(T24、5637、SW780)中miR-182-5p和同源异型盒基因B7(HOXB7)表达;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-182-5p和HOXB7的靶向关系;蛋白质印迹法(Western Blot)检测过表达miR-182-5p或抑制HOXB7表达对SW780细胞中HOXB7、P53和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白水平的影响;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移。共转染pcDNA-HOXB7和miR-182-5p模拟物,观察过表达HOXB7对miR-182-5p作用于膀胱癌细胞的影响。结果HUC细胞相比,miR-182-5p在膀胱癌细胞系中表达下调(P<0.05),HOXB7 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。miR-182-5p在SW780细胞中的表达量最低。HOXB7是miR-182-5p的靶基因。miR-182-5p过表达可抑制细胞活力、侵袭和迁移,降低P53和MMP-2蛋白表达量,差异有统计学意义(P<0.05),与抑制HOXB7表达结果相同。过表达HOXB7可以逆转miR-182-5p对膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。结论miR-182-5p通过靶向调控HOXB7表达抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移。

Hsa_circ_USP42竞争性结合miR-182-5p抑制三阴性乳腺癌转移的机制研究

目的探索hsa_circ_USP42作为miR-182-5p海绵在TNBC中的生物学功能及调控机制。方法 RT-PCR技术检测hsa_circ_USP42在TNBC癌组织及癌旁组织中表达;通过双荧光素酶报告基因分析等技术研究hsa_circ_USP42和miR-182-5p的相互作用;过表达hsa_circ_USP42,qPCR技术及Western印迹法检测靶miRNA miR-182-5p及靶基因MTSS1的表达水平;Transwell及CCK8实验检测hsa_circ_USP42对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果 Hsa_circ_USP42在TNBC中表达明显下调(P=0.000),淋巴结阳性组表达低于淋巴结阴性组(P=0.003)。双荧光素酶实验证实hsa_circ_USP42与靶miR-182-5P可有效结合;细胞功能实验表明,过表达hsa_circ_USP42可抑制TNBC细胞迁移、侵袭和增殖。体外实验表明,过表达hsa_circ_USP42后,靶miRNA miR-182-5p上调,而靶基因MTSS1在转录水平及蛋白水平均降低。结论 Hsa_circ_USP42在TNBC中低表达,与miR-182-5p有效结合,可发挥miRNA海绵上调MTSS1表达,抑制TNBC侵袭及转移,是参与TNBC生物学行为机制之一。

白山毛桃根提取物通过调控miR-182-5p/PCDH10表达抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨白山毛桃根提取物是否调控miR-182-5p/PCDH10表达影响非小细胞肺癌细胞生物学行为。方法设置对照组(无白山毛桃根提取物)、白山毛桃根提取物组(浓度40 mg/ml)、白山毛桃根提取物+miR-182-5p组、白山毛桃根提取物+miR-NC组、anti-miR-182-5p组、anti-miR-NC组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)法检测各组细胞增殖。Transwell检测各组细胞的侵袭和迁移;qRT-PCR检测非小细胞肺癌H1299细胞中miR-182-5p和PCDH10 mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测PCDH10蛋白表达。双荧光素酶报告实验检测荧光活性。结果相较于对照组,白山毛桃根提取物组非小细胞肺癌H1299细胞迁移和侵袭数量显著减少(P<0.05),PCDH10 mRNA和蛋白表达升高,miR-182-5p表达显著降低(P<0.05);miR-182-5p可靶向调控PCDH10的表达。抑制miR-182-5p表达后,迁移和侵袭的H1299细胞数量显著降低(P<0.05)。miR-182-5p过表达可逆转白山毛桃根提取物对非小细胞肺癌的影响。结论白山毛桃根提取物可能通过下调miR-182-5p/PCDH10轴对非小细胞肺癌H1299细胞发挥抗增殖、抗迁移和抗侵袭作用。

基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。

结直肠癌中miR-182-5p通过靶向Tiam1抑制肿瘤血管新生

目的:探讨结直肠癌中miR-182-5p是否可以通过靶向Tiam1抑制肿瘤血管新生。方法:选取人正常结肠上皮细胞与结直肠癌细胞,用qPCR检测细胞系中miR-182-5p和Tiam1 mRNA的表达。将对照mimics过表达载体、miR-182-5p mimics过表达载体、对照siRNA过表达载体、Tiam1 siRNA过表达载体及Tiam1过表达载体分别转染至HT-29细胞中,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-182-5p与Tiam1 3’UTR的靶向关系,用工程化肿瘤细胞上清培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),通过划痕愈合实验及小管生成实验分别检测细胞的迁移及小管生成能力,用Western blot检测相关蛋白的表达,并通过小鼠体内移植瘤模型检测血管新生。结果:miR-182-5p在HT-29细胞中显著低表达(P<0.01),而Tiam1在HT-29细胞中显著高表达(P<0.001),且Tiam1是miR-182-5p的靶标。迁移实验结果表明,转染miR-182-5p mimics的HT-29细胞上清可以抑制HUVEC的迁移能力(P<0.01),Tiam1基因沉默的HT-29细胞上清也可以抑制HUVEC的迁移能力(P<0.001)。小管生成及小鼠体内实验表明,过表达miR-182-5p及沉默Tiam1可以有效抑制肿瘤血管生成(P<0.01)。结论:miR-182-5p可以靶向Tiam1,通过抑制Tiam1的表达水平,从而抑制结直肠癌中的血管新生。

阿尔茨海默病中高表达的miR-182-5p靶向抑制了Neuritin的表达

目的筛选阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)数据集中可能靶向Neuritin的目标miRNA,明确二者在AD动物模型中的相关性,进一步探讨目标miRNA对Neuritin的靶向抑制作用。方法从AD小鼠脑组织miRNA数据集中,富集AD中上调的miRNA;同时利用生物信息学手段,分析预测靶向Neuritin的miRNA;二者取交集,筛选获得AD中上调的可能靶向Neuritin的目标miRNA。为了明确二者的相关性,我们在AD模型小鼠中,使用qRT-PCR检测目标miRNA在脑组织的表达水平,同时利用Western Blot检测Neuritin蛋白在脑组织的表达。然后,在细胞水平观察了目标miRNA模拟物对Neuritin表达的影响。最后,我们用荧光素酶报告基因实验探讨了目标miRNA对Neuritn 3′UTR区特异性的结合作用。结果筛选获得AD中上调、且可能靶向Neuritin的目标miRNA———miR-182-5p;在AD模型小鼠海马组织中,miR-182-5p的表达升高(P<0.05),且Neuritin的表达降低(P<0.01),说明AD模型小鼠海马中miR-182-5p与Neuritin的表达呈负相关;miR-182-5p模拟物转染293T细胞后,Neuritin表达低于对照组(P<0.05),说明miR-182-5p抑制了Neuritin的表达;荧光素酶报告基因结果显示,共转染荧光素酶报告基因和miR-182-5p模拟物后,pLUC-Neuritin组的荧光活性低于pLUC-MUT-Neuritin组(P<0.01),说明miR-182-5p通过与Neuritn 3′UTR区特异结合,靶向抑制了Neuritin的表达。结论AD模型小鼠中miR-182-5p表达升高,miR-182-5p可以靶向抑制Neuritin的表达。

脓毒症并发急性肾损伤患儿的血清miR-182-5p、miR-21-3p表达变化及其临床意义

目的观察脓毒症并发急性肾损伤(AKI)患儿血清miR-182-5p、miR-21-3p的表达变化,并探讨其临床意义。方法113例脓毒症患儿,根据是否并发AKI分为AKI组89例和NAKI组24例,采集患儿入院后次日清晨空腹静脉血,采用实时荧光定量法检测血清miR-182-5p、miR-21-3p,采用ELISA法检测血清肾功能指标肾损伤分子-1(KIM-1)、胱抑素C(Cys-C)、肌酐(Scr),分析血清miR-182-5p、miR-21-3p表达与脓毒症并发AKI患儿血清KIM-1、Cys-C、Scr水平的相关性,采用多因素Logistics回归分析法分析脓毒症并发AKI的影响因素,绘制受试者工作特征曲线分析血清miR-182-5p、miR-21-3p表达对脓毒症患儿并发AKI的预测价值。结果AKI、NAKI组血清miR-182-5p相对表达量分别为1.54(0.98,1.98)、0.35(0.28,0.39),血清miR-21-3p相对表达量分别为2.66(1.83,3.28)、0.85(0.75,1.00),二者比较,P均<0.05。脓毒症并发AKI患儿的血清miR-182-5p、miR-21-3p表达与血清KIM-1、Cys-C、Scr水平均呈正相关(P均<0.05)。与NAKI组比较,AKI组患者24小时尿量少,血清KIM-1、Cys-C、Scr水平升高,急性生理和慢性健康评估Ⅱ评分、脓毒症相关的序贯器官衰竭评估评分增加(P均<0.05)。血清miR-182-5p、miR-21-3p、KIM-1、Cys-C、Scr为脓毒症患儿并发AKI独立危险因素(OR分别为1.530,1.247,1.249,1.473,1.741;95%CI分别为1.134~1.913,1.011~1.707,1.021~1.529,1.103~2.987,1.062~3.517;P均<0.05)。miR-182-5p+miR-21-3p联合预测脓毒症患儿并发AKI的曲线下面积明显高于血清miR-182-5p、miR-21-3p单独预测(Z=3.039、2.864,P=0.002、0.004)。结论脓毒症并发AKI患儿血清miR-182-5p、miR-21-3p表达降低。血清miR-182-5p、miR-21-3p表达降低是脓毒症患儿并发AKI的独立危险因素。血清miR-182-5p、miR-21-3p可作为脓毒症患儿并发AKI的预测指标。

miR-182-5p在阿尔兹海默病的表达及生物信息学分析

目的:探究miR-182-5p在阿尔兹海默病(AD)病人血清中的表达水平,并采用生物信息学方法对其进行靶基因预测及功能分析。方法:从GEO数据库获取AD相关miRNAs芯片数据集GSE104514,利用GEO2R在线工具分析差异表达的miRNAs,选择差异最大的miR-182-5p进行深入研究。收集AD病人28例(AD组)及健康者15名(对照组),应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清中miR-182-5p的表达水平。通过miRBase数据库分析miR-182-5p在不同物种间的保守性;运用miRcode、miRDB、miRWalk和Target Scan数据库预测miR-182-5p靶基因,并取交集靶基因;应用DAVID和KOBAS数据库对miR-182-5p靶基因进行GO功能及KEGG信号通路富集分析。结果:AD小鼠脑组织的miR-182-5p表达明显高于野生型小鼠(P<0.05),AD病人血清中的miR-182-5p表达量(2.022±1.225)明显高于对照组(0.486±0.442)(P<0.01);保守性分析显示miR-182-5p成熟体序列在不同物种间高度保守;在线数据库预测获得miR-182-5p潜在的交集靶基因共23个。GO富集结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与于锌离子的结合、生物过程的负调控、杂环类化合物的结合、主要代谢过程的调节、GTPase的活性、膜的内在成分的组成、大脑的发育、部分细胞形态的发生、转移酶的活性、信号的调节、泛素结合酶的结合、耳蜗的发育、组蛋白H4-K16的乙酰化作用、咽系统的发育、神经元演化方向的规范、大脑皮层细胞的迁移、大脑皮层细胞的放射状定向迁移等多个生物学过程。KEGG分析结果显示,miR-182-5p靶基因主要参与肾集合管的酸分泌、醚脂类代谢、志贺菌病、细胞的黏附、细菌侵袭上皮细胞等5条信号通路。结论:miR-182-5p在AD病人血清中高表达,其可能通过多条信号通路参与AD的发展过程。

miR-182-5p和自噬在外周血单个核细胞和THP-1细胞痛风性关节炎模型炎症反应中的研究

目的:探讨miR-182-5p及自噬参与原发性痛风性关节炎发生的可能机制。方法:采用尿酸盐(MSU)晶体刺激健康男性外周静脉血建立痛风炎症模型,在0、1、2、4、6、8 h分离血浆及提取外周血单个核细胞(PBMCs)。培养THP-1细胞,给予MSU晶体刺激建立痛风炎症模型,分别在0、3、6、9、12 h时间点收集细胞及上清液。实时荧光定量PCR检测PBMC和THP-1中IL-1βmRNA、linc00173、linc00963、miR-182-5p和LC3-2 mRNA水平;Western Blot技术检测IL-1β蛋白和LC3-2蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测血浆和上清液中IL-1β蛋白浓度。结果:MSU刺激健康男性外周血后PBMCs中IL-1βmRNA水平在1、2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05),血浆IL-1β蛋白浓度水平在1、2、4、6 h较0 h增高(P<0.05),PBMCs中IL-1β蛋白水平在2、4、6、8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中linc00173水平在1、2、4 h较0 h增高(P<0.05),linc00963水平在1、2 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在4 h较0 h降低(P>0.05),在8 h较0 h增高(P<0.05)。PBMCs中LC3-2 mRNA水平在4、6、8 h较0 h增高(P<0.05);LC3-2蛋白水平在6、8 h较0 h增高(P<0.05)。MSU刺激THP-1细胞:THP-1细胞中IL-1βmRNA水平和上清液IL-1β蛋白浓度在3、6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),THP-1细胞IL-1β蛋白水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05)。linc00173水平在9、12 h较0 h增高(P<0.05),miR-182-5p水平在6 h较0 h增高(P<0.05)。LC3-2 mRNA水平在6、9、12 h较0 h增高(P<0.05),LC3-2蛋白水平在12 h较0 h增高(P<0.05)。结论:miR-182-5p可能与linc00173和linc00963相互作用,通过调控自噬参与痛风炎症反应。