精浆miR-191-5p、miR-21-5p和miR-320a对体外受精能力的影响及相关性分析

全世界大约10%~15%的育龄夫妇都面临不孕不育难题。其中,40%~50%的不孕不育是由男性因素导致的[1]。随着辅助生殖技术的不断发展,体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)技术已经成为临床上不孕不育治疗的主要途径。体外移植前的胚胎发育越来越成为人们关注的话题。因为它提供了一个独特的视角来了解父方因素通过精子的直接影响,而不受母体体内子宫环境的影响。

宫颈癌源外泌体miR-191-5p通过靶向TJP1调控血管内皮细胞层通透性促癌细胞转移的分子机制研究

目的探讨宫颈癌细胞分泌的外泌体miR-191-5p对血管内皮细胞层的通透性影响,为肿瘤血管相关的基因靶点研究提供理论依据。方法提取并鉴定宫颈癌细胞(SiHa/HeLa)培养上清来源的外泌体。将宫颈癌细胞源外泌体与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养,检测外泌体的摄取。跨内皮电阻(TEER)测定HUVEC单层细胞形成时间。内皮细胞层通透性测定HUVEC细胞层通透性。qRT-PCR检测宫颈癌细胞、外泌体及与外泌体共培养48 h的HUVEC中miR-191-5p表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-191-5p与TJP1的靶向关系。qRT-PCR、Western blot检测miR-191-5p、TJP1表达。内皮细胞层穿透实验检测miR-191-5p对HUVEC细胞层通透性的影响以及能否促进宫颈癌转移。恢复实验、qRT-PCR、Western blot检测TJP1的表达。结果提取的微小囊泡确是宫颈癌源外泌体。宫颈癌源外泌体可被HUVEC细胞摄取。TEER随时间增加而增大,在培养3 d时细胞形成单层,TEER达到最大值;外泌体共培养的HUVEC细胞层通透性增大,差异有统计学意义(P<0.0001)。miR-191-5p在宫颈癌源外泌体中富集,并被转运至HUVEC细胞中,miR-191-5p与TJP1存在靶向关系。与PBS组比较,miR-191-5p mimics组的miR-191-5p相对表达水平升高,TJP1的相对表达水平下降,而miR-191-5p inhibitor组的miR-191-5p相对表达水平下降,TJP1的相对表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.01);与PBS组比较,miR-191-5p mimics组通透性增加,而miR-191-5p inhibitor组通透性减弱,差异有统计学意义(P<0.0001)。在SiHa细胞中,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组穿透的平均细胞数增加,miR-191-5p inhibitor组穿透的平均细胞数下降,差异有统计学意义(P<0.05)。在HeLa细胞中,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组穿透的平均细胞数增加,miR-191-5p inhibitor组穿透的平均细胞数下降,差异有统计学意义(P<0.05)。恢复实验结果显示,与PBS组比较,miR-191-5p mimics组TJP1的相对表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-191-5p mimics组比较,pCMV-T+mimics组中TJP1的表达量增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论宫颈癌源外泌体miR-191-5p通过靶向调控TJP1导致血管内皮细胞层通透性增加,进而促进宫颈癌细胞转移。

miR-191-5p通过靶向调控HOXB2影响人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

目的:探究miR-191-5p通过靶向HOXB2对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡的影响。方法:免疫组化和qRT-PCR检测人OSCC病灶和癌旁组织中miR-191-5p和HOXB2的表达。qRT-PCR检测人OSCCSCC-4、CAL-27和正常人口腔角化表皮细胞HOK(对照)细胞中miR-191-5p和HOXB2的表达。通过Targetscan预测miR-191-5p与HOXB2的结合位点,用双荧光素酶报告基因验证miR-191-5pmimic对h-HOXB2-3'UTR转录活性的抑制作用。CCK-8实验和AnnexinV/PI流式双染检测miR-191-5pinhibitor和pcDNA-HOXB2对CAL-27的细胞生物学特征影响。Westernblot检测Wnt3a/β-catenin信号通路在CAL-27细胞的变化。结果:人OSCC组织中miR-191-5p高表达,HOXB2低表达。在CAL-27细胞中miR-191-5p高表达,HOXB2低表达,在HOK细胞中miR-191-5p低表达,HOXB2mRNA高表达。miR-191-5pmimic显著抑制h-HOXB2-3'UTR-wt的转录活性。miR-191-5pinhibitor和pcDNA-HOXB2能抑制CAL-27细胞的增殖并促进凋亡,降低细胞Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平,两者共转染效果更显著。结论:miR-191-5p抑制人OSCC细胞的增殖、促进凋亡,作用机制与靶向调控HOXB2及抑制其下游Wnt3a/β-catenin信号传递有关。

IgA肾病患者血浆中miR-191-5p表达及其与肾间质纤维化相关性的研究

目的:探讨IgA肾病患者血浆中miR-191-5p表达及其与肾间质纤维化(RIF)相关性的研究。方法:选择2017年2月至2022年2月我院收治的80例IgA肾病患者(IgA肾病组),根据CKD分期分为Ⅰ~Ⅱ期组(42例)、Ⅲ期组(38例),根据牛津分型分为T 0组(20例)、T 1组(39例)、T 2组(21例),另选择77例健康志愿者为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测受试者血浆miR-191-5p表达,全自动生化分析仪检测肾功能[血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)],酶联免疫吸附试验检测RIF指标[转化生长因子TGF-β1、TGF-α]。Pearson分析miR-191-5p表达与肾功能及RIF指标、RIF面积的相关性。结果:IgA肾病组血浆miR-191-5p表达低于对照组(P<0.05),Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α水平高于对照组(P<0.05)。Ⅲ期组血浆miR-191-5p表达低于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05),Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α水平高于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05),RIF面积大于Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05);T 2组血浆miR-191-5p表达低于T 0组和T 1组(P<0.05),Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α水平高于T 0组和T 1组(P<0.05),RIF面积大于T 0组和T 1组(P<0.05)。CKD患者血浆miR-191-5p表达与RIF面积、Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α均呈负相关(r=-0.509、-0.379、-0.311、-0.475、-0.486,P<0.05)。结论:IgA肾病患者血浆miR-191-5p表达降低,且与RIF以及肾功能下降有关。

miR-191-5p通过靶向TJP1调控Cal-27细胞增殖、侵袭和迁移的体外研究

目的探讨miR-191-5p调控OSCC细胞的生物学功能及作用机制。方法利用生物信息学方法分析miR-191-5p在口腔鳞癌患者样本中的表达情况并通过相关数据库筛选出可能的靶基因TJP1,通过双荧光素酶实验验证二者的靶向关系。体外转染分为空白组、inhibitor NC(阴性对照组)和miR-191-5p inhibitor(敲低miR-191-5p组)。敲低miR-191-5p后通过qRT-PCR验证转染效率,CCK-8增殖实验、细胞克隆实验、Transwell、划痕实验分别检测miR-191-5p对Cal-27细胞的增殖能力、侵袭和迁移能力的影响;Western blotting检测TJP1蛋白及上皮间质转化相关蛋白的表达。将siRNA-TJP1转染到miR-191-5p低表达的细胞中,观察同时下调TJP1后对Cal-27细胞的增殖和迁移能力的影响。结果miR-191-5p在OSCC组织和细胞中表达上调,而下调miR-191-5p可抑制Cal-27细胞的增殖、侵袭和迁移能力以及上皮间质转化趋势;miR-191-5p可靶向抑制TJP1的表达,同时TJP1的下调逆转了敲低miR-191-5p对Cal-27细胞增殖和迁移的抑制。结论miR-191-5p通过靶向TJP1抑制OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,并可能通过调控EMT途径增加肿瘤的转移。

早发型子痫前期患者外周血miR-191-5p水平对不良妊娠结局的预测价值分析

目的探讨早发型子痫前期患者外周血miR-191-5p水平对不良妊娠结局的预测价值。方法选取2018年1月至2020年1月在青岛大学医学院附属医院住院分娩的178例早发型子痫前期患者作为研究对象。根据妊娠结局将其分为母体不良结局组(n=54)、非母体不良结局组(n=124),以及围产儿不良结局组(n=27)、非围产儿不良结局组(n=151),对比其孕28周时外周血miR-191-5p水平的差异,采用受试者操作特征(ROC)曲线分析外周血miR-191-5p水平对不良妊娠结局的预测价值。采用单因素、多因素回归模型分析早发型子痫前期患者不良妊娠结局发生的危险因素。结果孕28周时,母体不良结局组外周血miR-191-5p的表达水平高于非母体不良结局组,围产儿不良结局组外周血miR-191-5p的表达水平高于非围产儿不良结局组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,孕28周时外周血miR-191-5p水平预测早发型子痫前期患者母体不良结局的临界值为>0.67,AUC为0.831(95%CI0.770~0.893),对应的灵敏度、特异度分别为66.94%、77.78%;预测围产儿不良结局的临界值为>0.71,AUC为0.871(95%CI0.800~0.941),对应的灵敏度、特异度分别为80.13%、74.07%。Logistics回归分析发现,首次产检收缩压(SBP)≥160mmHg、24h蛋白尿定量≥2.0g/24h、血小板<100×10^(9)、D-二聚体≥0.5、外周血miR-191-5p水平>0.67是早发型子痫前期患者母体不良结局发生的独立危险因素(P<0.05);首次产检SBP≥160mmHg、24h蛋白尿定量≥2.0g/24h、血小板<100×10^(9)、D-二聚体≥0.5、外周血miR-191-5p水平>0.71是早发型子痫前期患者围产儿不良结局发生的独立危险因素(P<0.05)。结论外周血miR-191-5p水平异常增高是早发型子痫前期患者不良妊娠结局发生的独立危险因素,且具有一定预测价值。

miR-191-5p作为鼻咽癌外周血miRNA检测内源性参照的可行性及稳定性分析

目的:分析miR-191-5p作为鼻咽癌(NPC)外周血miRNA检测内源性参照分子的可行性及其稳定性,为临床样本检测提供依据。方法:随机选择15例NPC患者及15例健康体检者,收集其清晨空腹外周血,用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)技术分别检测miR-191-5p和U6的表达量;选择4例健康志愿者外周血,以全血及血浆形式分装储存于4℃冰箱和-80℃冰箱,分别于1 h、4 h、8 h、12 h、24 h、7 d、30 d取出,提取miRNA后检测miR-191-5p表达情况。结果:miR-191-5p在人群外周血中的表达量是U6的(6.674±0.873)倍(P<0.05),表达量较稳定,且在NPC及健康对照人群中表达无差异(P=0.530);miR-191-5p在分离的血浆中12 h内基本稳定,而后检测值有所下降;存储于-80℃冰箱的血浆,7 d和30 d后处理检测结果变化不大;在以全血形式保存的样本中miR-191-5p的检测结果值波动较大。结论:miR-191-5p可作为NPC循环miRNA检测的内源性参照,临床样本收集及时分离血浆后在4℃冰箱中可保存12 h,若较长时间不处理,建议-80℃冰箱保存。

血清miR-191-5p和miR-20a-5p联合作为脑卒中后认知功能障碍诊断标志物的研究

目的观察卒中后认知障碍患者血清中miR-191-5p和miR-20a-5p变化,以探讨两者联合是否能够作为脑卒中后认知障碍的诊断标志物。方法收集36例脑卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment,PSCI)患者、36例脑卒中后认知正常(post-stroke cognitive normal,PSCN)患者和37例年龄匹配对照组(age-matched control,AMC)的样本。使用ROC曲线和AUC分析比较miR-191-5p和miR-20a-5p及其联合对PSCI的诊断能力。结果与PSCN和AMC相比,PSCI患者血清中,miR-191-5p和miR-20a-5p均升高,ROC曲线显示miR-191-5p的AUC(95%CI)为0.647(P<0.05),灵敏度为66.7%,特异度为55.6%;miR-20a-5p的AUC(95%CI)为0.759(P<0.05),灵敏度为77.8%,特异度为61.1%;两者联合的AUC(95%CI)为0.861(P<0.05),灵敏度为88.9%,特异度为72.2%。而且miR-191-5p和miR-20a-5p均与PSCI患者的MoCA评分相关,miR-191-5p(r=-0.488,P<0.01),miR-20a-5p(r=-0.624,P<0.01)。结论血清miR-191-5p和miR-20a-5p表达与卒中后认知功能存在显著相关性,提示miR-191-5p联合miR-20a-5p可能是PSCI的诊断标志物。

前列腺癌细胞miR-191-5p表达变化及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的观察前列腺癌细胞miR-191-5p表达变化,并探讨敲低其表达对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用qRT-PCR法检测miR-191-5p在人前列腺癌细胞PC-3、LNCap、DU145和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的表达。将人前列腺癌细胞PC-3随机分为敲低组和对照组,参照Lipofectamine RNAi max试剂说明书分别转染miR-191-5p inhibitor、NC inhibitor,采用qRT-PCR法检测两组转染48 h时miR-191-5p表达,CCK-8法检测两组转染24 h再培养6、24、48、72、96 h时细胞增殖能力,流式细胞术检测两组转染24 h时细胞周期比例及细胞凋亡比例。结果人前列腺癌细胞PC-3、LNCap、DU145中miR-191-5p相对表达量均高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P均<0.01)。敲低组与对照组miR-191-5p相对表达量分别为0.27±0.09、1.00±0.02,敲低组明显低于对照组(P<0.01)。两组转染24 h再培养6 h细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05),敲低组转染24 h再培养24、48、72、96 h时细胞增殖能力均低于对照组(P<0.05或<0.01)。敲低组G_0/G_1期细胞比例高于对照组,S期细胞比例低于对照组(P<0.05或<0.01);两组G_2/M期细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05)。敲低组与对照组细胞凋亡比例分别为(16.67±0.97)%、(9.27±0.85)%,两组比较P<0.01。结论前列腺癌细胞中miR-191-5p表达升高;敲低miR-191-5p表达可抑制前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡。

血清miR-191-5p、miR-101-3p与胃癌患者临床病理特征、PI3K/Akt信号通路及预后的关系研究

目的:探讨血清微小核糖核酸(miR)-191-5p、miR-101-3p与胃癌患者临床病理特征、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路及预后的关系。方法:选取2019年1月至2021年1月我院收治的182例胃癌患者(胃癌组)和同期于体检中心体检健康的90例体检者(对照组)。检测两组血清miR-191-5p、miR-101-3p以及PI3K mRNA、Akt mRNA表达。Pearson法分析血清miR-191-5p、miR-101-3p与PI3K mRNA、Akt mRNA的相关性。分析血清miR-191-5p、miR-101-3p与胃癌患者临床病理特征的关系。Kaplan-Meier曲线分析不同miR-191-5p、miR-101-3p表达胃癌患者的3年总生存(OS)率。结果:胃癌组血清miR-191-5p、miR-101-3p表达低于对照组(P<0.05),PI3K mRNA、Akt mRNA表达高于对照组(P<0.05)。胃癌患者血清miR-191-5p、miR-101-3p表达与PI3K mRNA、Akt mRNA均呈负相关(P<0.05)。血清miR-191-5p、miR-101-3p表达与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度有关(P<0.05)。miR-191-5p低表达胃癌患者3年OS率低于miR-191-5p高表达胃癌患者,miR-101-3p低表达胃癌患者3年OS率低于miR-101-3p高表达胃癌患者(P<0.05)。结论:胃癌患者血清miR-191-5p、miR-101-3p表达显著下调,与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度、分化程度有关,可能通过激活PI3K/Akt信号通路导致不良预后。

新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解:基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

目的探讨新风胶囊(XFC)对白介素(IL)-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型;SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验(CCK-8)和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度;双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒(inhibitor)及阴性对照组,转染至软骨细胞中。分为对照组(NC),IL-1β组,XFC组,IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor,IL-1β+miR-502-5pinhibitor+XFC最佳含药血清组,酶联免疫吸附试验(ELASA)检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验(WB)、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体(ADAMTS5)和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果与NC组相比,IL-1β组中软骨细胞活力下降,细胞凋亡率升高,且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降,IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高(P<0.05)。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比,XFC含药血清干预后,软骨细胞活力升高,细胞凋亡率下降,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κBp65表达下降,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高(P<0.05)。与NC-inhibitor相比,转染miR-502-5p inhibitor后,IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高,miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降;与miR-502-5pinhibitor相比,将miR-502-5pinhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后,XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤,其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。

miR-214-5p通过DNMT1介导的AXIN2基因DNA甲基化修饰在皮肤基底细胞癌中的作用机制

目的探讨皮肤基底细胞癌中轴抑制蛋白2(Axis inhibition protein 2,AXIN2)基因启动子甲基化对基因转录的影响及miR-214-5p通过靶向DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT1)对AXIN2甲基化率的调控机制。方法收集2022年1月-2023年6月在广州市皮肤病防治所就诊治疗的102例皮肤基底细胞癌(Cutaneous basal cell carcinoma,BCC)患者作为研究对象,提取癌组织和癌旁正常组织标本及基线资料。焦磷酸测序法检测AXIN2基因启动子区甲基化率。实时荧光定量PCR检测AXIN2、DNMT1基因mRNA和miR-214-5p的表达水平。将miR-214-5p模拟物(mimic)、抑制物(inhibitor)及其阴性对照(mimic NC和inhibitor NC)分别对基底细胞癌A431细胞进行转染,48 h后检测DNMT1基因mRNA表达水平和AXIN2基因甲基化率。结果BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率显著高于癌旁正常组织(t=5.128,P<0.001),AXIN2基因mRNA相对表达水平显著低于癌旁正常组织(t=7.826,P<0.001),DNMT1基因mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(t=4.838,P<0.001),miR-214-5p表达水平显著低于癌旁正常组织(t=5.426,P<0.001)。BCC癌组织的AXIN2基因甲基化率与其mRNA表达水平呈负相关(r=-0.793,P<0.001),DNMT1基因mRNA水平与AXIN2基因甲基化率呈正相关(r=0.814,P<0.001),miR-214-5p表达水平与DNMT1基因mRNA水平呈负相关(r=-0.747,P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,DNMT1是miR-214-5p的靶基因。细胞转染后,与mimic NC、inhibitor和inhibitor NC比较,mimic的DNMT1基因mRNA水平、AXIN2基因甲基化率显著降低(P<0.001);而inhibitor的DNMT1基因mRNA水平和AXIN2基因甲基化率相较于其他三组明显上升(P<0.001)。结论miR-214-5p可通过调控下游靶蛋白DNMT1表达,影响AXIN2基因的DNA甲基化率,调控AXIN2基因的表达水平,参与皮肤基底细胞癌的发生机制。

circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴调控铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移

目的探索circ0000799经miR-1287-5p/GPX4轴对铁死亡促进三阴乳腺癌脑转移的影响机制。方法检测circ0000799在乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中的表达。沉默亲代三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231和子代脑转移细胞MDA-MB-231-BM中circ0000799的表达。比较各组细胞生长、侵袭能力、脑转移结节数目。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ0000799、miR-1287-5p、GPX4调控关系。检测circ0000799对铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)表达和总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比的影响。结果与人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)或癌旁组织比较,circ0000799在三阴乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中上调,且在子代三阴乳腺癌细胞系及脑转移灶中上调最为显著(P<0.05)。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组细胞生长、侵袭能力降低(P<0.05)。sh-circCTR组、sh-circ0000799组、sh-circ0000799+RSL3组脑转移结节数量依次降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,circ0000799可与miR-1287-5p相互作用,miR-1287-5p可与GPX4相互作用。与sh-circCTR组比较,sh-circ0000799组miR-1287-5表达增加,总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比和GPX4表达降低(P<0.05)。与miR-CTR组比较,miR-1287-5p组GPX4 mRNA表达降低(P<0.05)。结论circ0000799在三阴乳腺癌中高表达且可能通过miR-1287-5p/GPX4轴促进三阴乳腺癌脑转移。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

lncRNA TUG1靶向调节miR-31-5p对急性胰腺炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)在急性胰腺炎(AP)中的作用机制。方法:体外培养小鼠胰腺腺泡细胞系(MPC-83),用脂多糖(LPS,10μg/ml)和雨蛙素(Caerulein,100 nmol/L)处理3 h,建立AP模型。实验分为对照组(control组)、AP组、AP+sh-NC组、AP+sh-TUG1组、AP+sh-TUG1+inhibitor-NC组、AP+sh-TUG1+miR-31-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测细胞上清液中IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA TUG1和miR-31-5p之间的靶向关系。构建AP小鼠模型,给予相应的干预后,qRT-PCR检测胰腺组织中lncRNA TUG1和miR-31-5p表达水平;试剂盒检测血清中炎症因子IL-1β、TNF-α含量和淀粉酶(AMY)和脂肪酶(Lipase)活性;HE染色观察胰腺组织病理学变化;TUNEL检测胰腺组织中细胞凋亡。结果:在Caerulein和LPS共同处理的MPC-83细胞中lncRNA TUG1水平、细胞凋亡率、IL-1β和TNF-α水平升高,miR-31-5p水平、细胞活力降低(均P<0.05);敲低lncRNA TUG1可上调miR-31-5p,增加细胞活力,降低IL-1β和TNF-α水平,抑制细胞凋亡(均P<0.05);下调miR-31-5p表达可减弱敲低lncRNA TUG1对细胞炎症反应的抑制作用。miR-31-5p是lncRNA TUG1的直接靶标。在体内敲低lncRNA TUG1表达可上调AP小鼠胰腺组织中miR-31-5p表达,降低IL-1β、TNF-α水平,减少细胞凋亡,改善胰腺组织损伤。结论:敲低lncRNA TUG1可能通过上调miR-31-5p表达水平,抑制炎症反应,改善AP。

circLRP6调节miR-31-5p/HMGA1轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的分析circLRP6调节miR-31-5p/高迁移率族蛋白A1(HMGA1)轴对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为对照组、高糖组、高糖+si-NC组、高糖+si-circLRP6组、高糖+si-circLRP6+miR-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-NC组、高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组,对照组置于含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,其余各组置于含25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基内培养,并通过Lipofectamine 2000将相应质粒转染至HK-2细胞内,实时定量PCR测定细胞circLRP6、miR-31-5p、HMGA1 mRNA水平,试剂盒测定细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)水平、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及丙二醛(MDA)含量;流式细胞仪观察细胞凋亡;Western blotting测定细胞HMGA1、Bax、Bcl-2蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验分析miR-31-5p与circLRP6、HMGA1的靶向关系。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞circLRP6水平升高,细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+si-circLRP6组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达降低(均P<0.05);与高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor组相比,高糖+si-circLRP6+miR-31-5p inhibitor+si-HMGA1组HK-2细胞增殖抑制率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(均P<0.05)。miR-31-5p与circLRP6、HMGA1均具有靶向关系。结论沉默circLRP6可能通过上调miR-31-5p,抑制HMGA1表达,对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。

circFAT1调节miR-211-5p/CCND2轴对糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的影响

目的探讨circFAT1对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌损伤的影响及对miR-211-5p/细胞周期蛋白D2(CCND2)轴的调节机制。方法利用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素建立DCM大鼠模型,并随机分为DCM组、circ-NC组、circFAT1组、circFAT1+激动剂-NC组和circFAT1+miR-211-5p激动剂组,以喂食普通饲料的大鼠作为对照组,每组20只。实时PCR检测心肌组织中circFAT1、miR-211-5p、CCND2水平;Western blotting检测心肌组织CCND2蛋白表达;生化分析仪检测大鼠空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平;心脏超声检测大鼠心功能;HE和Masson染色观察心肌组织病理形态;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;双荧光素酶报告基因实验验证circFAT1、miR-211-5p、CCND2之间的靶向关系。结果与对照组相比,DCM组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,左心室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)水平降低(P<0.05),FBG、TC、TG、左心室舒张末期直径(LVEDd)、左心室收缩末期直径(LVEDs)、胶原容积分数(CVF)、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.05);与DCM组相比,circFAT1组circFAT1、CCND2 mRNA及蛋白表达,LVEF、LVFS水平升高(P<0.05),FBG、TC、TG、LVEDd、LVEDs、CVF、细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05);miR-211-5p激动剂逆转了circFAT1对DCM心肌损伤的缓解作用,且CCND2 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。结论circFAT1通过调控miR-211-5p/CCND2轴减轻DCM大鼠心肌组织损伤。

冠心病患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系研究

目的探究冠心病(CHD)患者血清miR-3129-5p和miR-6870-3p表达与疾病严重程度的关系。方法以2021年3月至2023年7月在青岛大学附属心血管病医院进行治疗的80例CHD患者为研究对象(CHD组),根据Gensini评分将CHD患者分为轻度组(n=27)、中度组(n=33)和重度组(n=20),另选取同期在本院进行体检的健康者80例为对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分之间的关系采用Spearman相关性分析;发生CHD的影响因素采用Logistic多因素模型分析;血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平对CHD的诊断价值采用受试者工作特征(ROC)曲线分析。结果CHD组患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均高于对照组(P<0.05),且随着病情程度的增加,CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平逐渐升高(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平与Gensini评分均呈正相关(r_(1)=0.411,r_(2)=0.431,P<0.001)。Logistic回归分析结果显示,总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、甘油三酯(TG)、miR-3129-5p、miR-6870-3p升高均为发生CHD的危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL-C)升高为发生CHD的保护因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,血清miR-3129-5p、miR-6870-3p诊断CHD的曲线下面积(AUC)分别为0.855、0.852,敏感度分别为78.8%、83.8%,特异度分别为65.1%、56.3%,二者联合预测CHD的AUC为0.927,敏感度为77.5%、特异度为73.8%。结论CHD患者血清miR-3129-5p、miR-6870-3p水平均升高,且血清miR-3129-5p、miR-6870-3p与CHD患者疾病严重程度密切相关。miR-3129-5p、miR-6870-3p联合检测可作为诊断CHD的重要辅助参考指标。

lncRNA HCP5靶向miR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨lncRNA HCP5靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞。将抑制HCP5表达的质粒si-HCP5及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13细胞。采用CCK-8法和Transwell实验检测SCC13细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5和miR-409-3p的靶向关系。结果:SCC13细胞中HCP5表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05)。抑制HCP5表达后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-409-3p后SCC13细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示lncRNA HCP5和miR-409-3p存在靶向关系。抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5低表达对SCC13细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05)。结论:抑制HCP5可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭。

灰树花多糖通过LncRNA HULC/miR-186-5p轴调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析灰树花多糖(Grifola frondose polysaccharide,GFP)对胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:将对数期GBC-SD细胞随机分组:对照组、GFP组(0.5、1、2µg/mL GFP)、shNC组、shHULC组、miR-NC组、miR-186-5p mimics组、GFP+pcDNA组、GFP+pcDNA-HULC组。CCK-8法检测细胞抑制率;Transwell小室法检测GBC-SD细胞迁移和侵袭;Western Blot印迹检测Cyclin D1、P21、MMP-2、MM-9蛋白水平;qRT-PCR检测LncRNA HULC和miR-186-5p的水平;Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p的结合位点,双荧光素酶报告实验检测LncRNA HULC和miR-186-5p的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测GFP对GBC-SD细胞移植瘤体内生长的影响。结果:0.25~8µg/mL GFP对胆囊癌GBC-SD细胞具有一定的抑制作用;与对照组比较,0.5、1、2µg/mL的GFP(极)显著(P<0.05,P<0.01)抑制GBC-SD细胞迁移和侵袭,(极)显著降低Cyclin D1、MMP-2和MM-9水平(P<0.05,P<0.01),(极)显著(P<0.05,P<0.01)增加P21水平,极显著(P<0.01)下调LncRNA HULC,上调miR-186-5p的表达(P<0.05,P<0.01);Starbase在线软件预测HULC与miR-186-5p存在结合位点,与miR-NC组比较,miR-186-5p mimics组HULC-WT的荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),而HULC-MUT荧光素酶活性无统计学差异(P>0.05);与shNC组比较,shHULC组HULC相对表达水平极显著(P<0.01)降低,miR-186-5p相对表达水平极显著(P<0.01)增加,细胞存活率、迁移数目、侵袭数目极显著(P<0.01)降低,Cylin D1、MMP-2和MM-9水平极显著下调(P<0.01);与GFP+pcDNA组比较,GFP+pcDN-HULC组抑制率显著降低(P<0.05),迁移数目、侵袭数目极显著增加(P<0.01),Cylin D1、MMP-2和MM-9水平显著上调(P<0.05);与GFP+pcDNA给药组比较,GFP+pcDN-HULC给药组瘤体体积、质量极显著增加(P<0.01),miR-186-5p水平极显著下调(P<0.01)。结论:GFP可抑制胆囊癌细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制与调控LncRNA HULC/miR-186-5p有关。