miR-20b-5p靶向VEGFA对深Ⅱ度烫伤创面组织的作用机制

目的:探究微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合的影响机制,以及其对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)A的表达的调控机制。方法:沸水浴烙铁术制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型,以miR-20b-5p抑制剂(miR-20b-5p-antagomir)干预创面组织,以miR-20b-5p-antagomir+小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制VEGFA进行功能挽救;造模28 d后,检测大鼠的创面愈合率、创面组织中的胶原纤维含量以及血管新生。以miR-20b-5p-antagomir和miR-20b-5p-antagomir+siRNA-VEGFA分别转染微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMEC)-1;检测细胞的增殖及小管形成的能力;Western blot检测各组创面组织和细胞中VEGFA的表达。结果:miR-20b-5p-antagomir能明显促进创面愈合,促进HMEC-1细胞的增殖与小管形成,而siRNA-VEGFA可部分逆转这一作用,差异均具有统计意义(P均<0.05)。结论:miR-20b-5p靶向VEGFA的表达影响深Ⅱ度烫伤大鼠的创面愈合,抑制miR-20b-5p的表达能促进创面愈合,促进血管新生。

超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足下肢血管病变的诊断价值

目的:探究超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足(DF)下肢血管病变(LEVD)的诊断价值。方法:选取2021年3月至2023年6月在我院就诊的90例DF患者为研究对象,根据是否合并LEVD分为LEVD组42例和非LEVD组48例。采用实时荧光定量PCR检测DF患者血清miR-106a-5p、miR-20b-5p表达水平,并对所有患者进行下肢血管超声检查。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对DF患者合并LEVD的诊断价值;采用一致性Kappa检验分析超声单独及联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p与金标准的一致性。结果:超声检查结果与金标准诊断结果一致性较高,Kappa值为0.642(P<0.05)。LEVD组血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平显著高于非LEVD组(P<0.05)。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者发生LEVD的曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.757。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p检查结果与金标准诊断结果一致性均为中度,Kappa值分别为0.503、0.492(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平检查结果与金标准诊断结果一致性极高,Kappa值为0.866(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的准确度、阴性预测值显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论:超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的价值较高,值得推广。

血清外泌体miR-20b-5p miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用

目的探究血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用价值。方法选取2015年12月至2018年12月河南科技大学第一附属医院胸外科收治的124例非小细胞肺腺癌患者为观察组,另选取120例同期于本院接受体检的健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链法(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-20b-5p、miR-107表达水平,受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p、miR-107水平检测对非小细胞肺腺癌的早期诊断价值,Kaplan-Meier生存分析研究miR-20b-5p、miR-107水平与患者预后的关系。结果观察组的血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-20b-5p、miR-107检测诊断非小细胞肺腺癌的AUC值分别为0.766、0.821,最佳截断值分别为1.81、1.27。观察组患者中,117例完成随访,7例失访。随访3年后,64例患者死亡,53例患者存活。根据患者的生存状态绘制ROC曲线,确定miR-20b-5p、miR-107预测患者预后的最佳截断值分别为1.95、1.60;miR-20b-5p高表达与低表达、miR-107高表达与低表达患者的TNM分期和淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-20b-5p、miR-107高表达患者的中位生存时间均低于低表达患者(P<0.05)。结论外泌体miR-20b-5p、miR-107在非小细胞肺腺癌患者血清中呈高表达状态,其表达水平与患者的预后相关,在疾病诊断与预测患者累计生存率方面具有一定的参考意义。

妊娠期糖尿病视网膜病变患者血清miR-200c-3p、 miR-20b-5p表达水平及检测临床意义

目的:探讨妊娠期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平变化及检测临床意义。方法:选择妊娠期糖尿病孕妇80例(GDM组)和DR孕妇75例(DR组),正常妊娠期女性95例(对照组)。采用qRT-PCR法对受试者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平进行测定,采用全自动生化分析仪对受试者低密度脂胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)进行测定,采用血糖检测仪对受试者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)进行测定。结果:GDM组、DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于对照组(均P<0.05);DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于GDM组(均P<0.05);随着病情严重程度的增加,DR组患者miR-200c-3p、miR-20b-5p水平显著升高(均P<0.05);预后不良组DR患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于预后良好组(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高为DR患者发生预后不良的危险因素;ROC曲线结果显示,血清miR-200c-3p、miR-20b-5p、两者联合诊断DR患者不良预后曲线下面积(AUC)为0.927(95%CI:0.843~0.974)、0.848(95%CI:0.746~0.920)、0.985(95%CI:0.924~0.999)。结论:DR患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高,对DR不良预后具有一定的预测价值。

川芎嗪和过表达miR-20b-5p干预早期膝骨关节炎模型大鼠滑膜、软骨和软骨下骨血管新生的组织学变化

背景:血管新生参与早期膝骨关节炎进展,滑膜、软骨及软骨下骨均具有血管新生病理表现,探讨川芎嗪和过表达miR-20b-5p对这些组织病理性血管新生的抑制能力及相关作用途径,有助于开发新的早期膝骨关节炎治疗药物。目的:通过组织学观察探讨川芎嗪和过表达miR-20b-5p对早期膝骨关节炎大鼠滑膜、软骨及软骨下骨血管新生的影响及可能发挥作用的途径。方法:将25只SD大鼠进行早期膝骨关节炎造模,造模成功后分5组,每组5只:A组膝关节腔注射与灌胃给予生理盐水,B组膝关节腔注射agomir NC,C组膝关节腔注射miR-20b-5p agomir,D组灌胃给予川芎嗪+膝关节腔注射agomir NC,E组灌胃给予川芎嗪+膝关节腔注射miR-20b-5p agomir,膝关节腔注射为单次给药,灌胃给药为1次/d,连续灌胃4周。4周后处死大鼠,取完整左膝关节制作石蜡切片,进行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色与免疫组织化学染色。结果与结论:①滑膜组织:苏木精-伊红染色与免疫组化染色显示,C、D、E组的血管密度、炎症细胞浸润程度及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达均低于A、B组(P<0.05),E组血管密度、炎症细胞浸润程度及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达低于C、D组(P<0.05);②软骨及软骨下骨组织:苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色与免疫组织化学染色显示,C、D、E组的软骨基质流失程度及血管侵袭情况轻于A、B组,C、D、E组的骨关节炎软骨组织病理学评分及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达均低于A、B组(P<0.05),E组的骨关节炎软骨组织病理学评分及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达低于C、D组(P<0.05);③结果表明,在早期膝骨关节炎大鼠滑膜、软骨及软骨下骨中,川芎嗪和过表达miR-20b-5p可能通过抑制血管内皮生长因子/Notch1信号通路介导的血管新生在一定程度上改善多方面的组织学表现,抑制早期膝骨关节炎的进展。

miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌组织中的表达及意义

目的通过分析miR-20b-5p、TGFBR2在宫颈癌组织中的表达水平及与临床病理特征的关系,探讨miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌转移中的作用。方法选取2018年1月至2020年10月诊治的58例宫颈癌患者为宫颈癌组,选取同期32例因子宫肌瘤或子宫腺肌症行全子宫切除术患者的正常宫颈组织为对照组。RT-PCR检测2组宫颈组织中miR-20b-5p、TGFBR2 mRNA表达情况,免疫组化及Western blot检测宫颈癌组织中TGFBR2蛋白表达情况,通过在线网站预测miR-20b-5p与TGFBR2的靶向结合位点,并分析两者相关性,讨论两者其在宫颈癌组中表达差异与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组中miR-20b-5p表达量显著高于对照组(P<0.01),而宫颈癌组中TGFBR2 mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01)。免疫组化及Western blot结果进一步证实TGFBR2在宫颈癌组中表达水平显著低于对照组(P<0.01)。miR-20b-5p表达水平与TGFBR2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.7366,P<0.01)。且miR-20b-5p表达水平与宫颈癌患者的FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、分化程度、肿瘤大小无相关性(P>0.05);TGFBR2表达与宫颈癌患者的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论miR-20b-5p与TGFBR2的异常表达可能参与了宫颈癌的发生发展,且两者存在密切联系,可能作为宫颈癌淋巴转移和预后的标志物。

miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和组织中的表达及调控靶基因信号通路富集分析

目的观察miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达,并用生物信息学方法分析其靶基因和富集的信号通路,探讨其生物学行为和功能。方法采用实时荧光定量PCR法检测miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞和正常胃黏膜细胞以及其在胃癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析其临床意义,采用mir WALK网站数据库的预测软件预测其靶基因,选择该网站10个软件中具备3个以上软件支持的靶基因,用DAVID 6.7在线富集其靶基因参与的信号通路。结果 miR-20a-5p/miR-20b-5p在不同分化程度(高、中、低)的胃癌细胞中表达上调(P均<0.05),胃癌组织相对于癌旁组织亦明显上调表达(P<0.05),miR-20b-5p表达上调与胃癌淋巴结侵袭转移以及浸润深度关系密切(P均<0.05);生物信息学分析提示,miR-20a-5p/miR-20b-5p的靶基因富集存在于肿瘤相关的多个信号通路中。结论 miR-20a-5p/miR-20b-5p在胃癌细胞系及组织中呈高表达,并于与淋巴结侵袭转移以及浸润深度有关,可作为胃癌潜在的生物学标志物。

子宫内膜异位症患者内膜中miR-20b-5p、miR-106a-5p的表达及机制探讨

目的检测miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA在正常子宫内膜(N)、子宫内膜异位症(endometriosis,EM)患者在位内膜(eutopic endometrial,Eu)、子宫内膜异位症患者异位内膜(ectopic endometrial,Ec)组织中的表达,并探讨miR-20b-5p、miR-106a-5p对子宫内膜异位症细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2017年5月-2018年5月在本院妇产科行腹腔镜手术及术后病理检查确诊的EM患者30例,年龄(32.4±6.2)岁,对照组选择同期行腹腔镜子宫肌瘤剔除术的患者30例,年龄(36.35±5.89)岁。采用qRT-PCR法检测Eu(n=30)、Ec(n=37)以及N(n=30)组织中miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的表达,并用Pearson相关检验分析miR-20b-5p、miR-106a-5p与PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的相关性。结果 Ec与Eu相比,miR-20b-5p、miR-106a-5p表达下降(P <0.001),PTEN mRNA的表达上升(P <0.001),CCNE1 mRNA的表达下降(P=0.005);Eu与N相比,miR-20b-5p表达上升(P=0.038),PTEN表达下降(P=0.049),miR-106a-5p及CCNE1的表达未见明显差异(P> 0.05);miR-20b-5p与PTEN mRNA在Eu及Ec中的表达呈负相关(r=-0.63,P <0.001;r=-0.42,P=0.01);mi R-106a-5p与PTEN mRNA的表达在Eu(r=-0.14,P=0.465)及Ec(r=-0.25,P=0.142)中不存在相关性。结论 miR-20b-5p可能通过PTEN上调细胞增殖,促进EM的发病。

DJ-1、miR-20b-5p在子宫内膜异位症中的表达及与抑癌基因PTEN的关系

目的:探讨DJ-1、miR-20b-5p在子宫内膜异位症(EMT)中的表达及与抑癌基因PTEN的关系。方法:选择2019年3月-2021年3月本院收治的行腹腔镜手术治疗65例EMT患者的在位内膜(Eu组)、异位内膜(Ec组)及行子宫肌瘤剔除术且排除EMT 60例正常内膜组织(对照组)。采用免疫组化法检测3组组织中DJ-1、PTEN蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR法检测3组组织中DJ-1、miR-20b-5p、PTEN mRNA表达水平。Pearson相关分析EMT组织中DJ-1、miR-20b-5p与PTEN mRNA表达关系。结果:免疫组化结果显示,对照组、Eu组、Ec组DJ-1蛋白表达水平依次升高,PTEN蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。PCR结果显示,对照组、Eu组、Ec组DJ-1、miR-20b?5p mRNA表达水平依次升高,PTEN mRNA表达水平依次降低(均P<0.05)。Pearson相关分析显示,DJ-1、miR-20b-5p mRNA与PTEN mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.716、-0.587,均P<0.01)。结论:DJ-1、miR-20b-5p在EMT中表达上调,可能通过负性调节PTEN表达水平,增强异位内膜细胞增殖能力,从而导致EMT发生。

miR-20b-5p靶向调控Cyclin D1对NSCLC细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)靶向调控细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法体外培养NSCLC细胞系A549、H1975、PC-9和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p相对表达量,选择miR-20b-5p相对表达量最低的NSCLC细胞进行后续实验。借助Starbase数据库,预测miR-20b-5p与Cyclin D1的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b-5p与Cyclin D1的靶向调控关系。体外培养NSCLC细胞,分别转染miR-NC与miR-20b-5p mimic(分别设为miR-NC组、miR-20b-5p mimic组)、si-NC与si-Cyclin D1(分别设为si-NC组、si-Cyclin D1组),采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p或Cyclin D1相对表达量。收集上述转染细胞,采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blotting法检测Cyclin D1、CDK4、FOXM1蛋白表达。结果 H1975、PC-9、A549细胞miR-20b-5p相对表达量均低于BEAS-2B细胞,并且A549细胞miR-20b-5p相对表达量低于H1975、PC-9细胞(P均<0.05)。因此,选择A549细胞进行后续实验。经Starbase数据库预测,miR-20b-5p与Cyclin D1存在靶向结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,miR-20b-5p与Cyclin D1存在靶向调控关系。miR-20b-5p mimic组miR-20b-5p相对表达量高于miR-NC组,si-Cyclin D1组Cyclin D1相对表达量低于si-NC组(P均<0.05)。与miR-NC组/si-NC组比较,miR-20b-5p mimic组/si-Cyclin D1组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,穿膜细胞数减少,G1期细胞比例增加、G2/M期细胞比例降低(P均<0.05)。与miR-NC组/si-NC组比较,miR-20b-5p mimic组/si-Cyclin D1组Cyclin D1、CDK4、p-FOXM1蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),而FOXM1蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 miR-20b-5p通过靶向调控Cyclin D1促进NSCLC细胞增殖和侵袭,抑制其凋亡并将细胞阻滞于G1期,其作用机制可能与调控Cyclin D1/CDK4/FOXM1信号通路有关。

酸枣仁提取物调控miR-7b-3p/5-羟色胺1A受体表达促进骨生长

背景:前期研究发现,酸枣仁提取物通过提高脑组织5-羟色胺1A受体(serotonin 1A receptor,5-HT1AR)表达,使之与5-羟色胺结合,延长小鼠慢波睡眠,促进生长激素的分泌,从而使骨生长。5-HT1AR作为一种蛋白质,其表达丰度受到miRNA的调控。作者推测酸枣仁提取物可能通过miRNA调控5-HT1AR的表达从而发挥药物作用。目的:观察酸枣仁提取物通过干预小鼠脑组织中miR-7b-3p/5-HT1AR通路对骨骼生长的影响。方法:①将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组(灌胃酸枣仁提取物0.320 mg/g),阳性对照组(灌胃酸枣仁皂甙0.013 mg/g)和酸枣仁提取物+5-HT1AR抑制剂组(灌胃酸枣仁提取物最后3 d同时每天侧脑室注射5-HT1AR选择性抑制剂P-MPPF 8μg),25 d后观察酸枣仁提取物对小鼠骨生长、血清生长激素水平及脑组织5-HT1AR表达的影响;②基因芯片法筛选由酸枣仁提取物引起的骨生长小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并通过PCR验证和双荧光素酶报告基因实验证实筛选的miR-7b-3p与5-HT1AR的调控关系;③体外培养小鼠脑皮质细胞并鉴定,利用Western blot法观察酸枣仁提取物对脑皮质细胞中5-HT1AR表达的影响;④将昆明种小鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组小鼠脑组织5-HT1AR表达及5-羟色胺与5-HT1AR结合活性;⑤将SD大鼠分为正常对照组、用药组、miR-7b-3p inhibitor组、用药+miR-7b-3p mimics组、阳性对照组,观察各组大鼠慢波睡眠的变化。结果与结论:①酸枣仁提取物可以促进小鼠体长、胫骨增长,促进生长激素分泌,提高脑组织5-HT1AR含量;②基因芯片筛选出差异表达的miRNAs个数为16个,其中上调有13个,下调有3个;生物信息学预测下调miR-7b-3p可以调控5-HT1AR表达,且双荧光素酶报告基因实验证实二者有直接调控关系;③酸枣仁提取物和沉默脑皮质细胞中miR-7b-3p表达可以引起5-HT1AR高表达;沉默miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均升高;过表达miR-7b-3p后小鼠脑组织5-HT1AR表达、5-羟色胺与5-HT1AR结合活性及生长激素分泌均降低;大鼠慢波睡眠期也相应延长或缩短。结果表明,酸枣仁提取物能够降低脑组织的miR-7b-3p水平,同时增加5-HT1AR的表达量。这种机制有助于延长慢波睡眠周期,并且促进生长激素的生成,对骨骼生长有积极影响,为使用酸枣仁提取物作为促进骨骼生长的潜在手段提供了科学依据。

食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

miR-20b-5p靶向MAPK1调控脑出血过程中脑微血管内皮细胞铁死亡

目的:探讨miR-20b-5p对氧糖剥夺(OGD)/Hemin处理的脑微血管内皮细胞(BMVEC)功能的影响及机制。方法:将BMVEC分为Control组、agomir-NC组、agomir-miR-20b-5p组、antagomir-NC组和antagomir-miR-20b-5p组。使用Lipofectamine2000试剂对细胞进行相应的转染处理。BMVEC转染后,将BMVEC再分为Control组、OGD/Hemin组(O/H组)、OGD/Hemin+agomir-NC组(O/H+agomir-NC组)、OGD/Hemin+agomir-miR-20b-5p组(O/H+agomir-miR-20b-5p组)、OGD/Hemin+antagomir-NC组(O/H+antagomir-NC组)和OGD/Hemin+antagomir-miR-20b-5p组(O/H+antagomir-miR-20b-5p组)。Control组BMVEC正常培养,其他组BMVEC进行OGD/Hemin处理。MTT法检测BMVEC增殖,TUNEL染色检测BMVEC凋亡,Transwell检测BMVEC迁移。使用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平。使用Iron Assay试剂盒检测Fe2+含量。通过qRT-PCR检测miR-20b-5p和MAPK1 mRNA水平。通过Western blot检测MAPK1、Bax、Bcl-2、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)蛋白表达水平。通过免疫荧光染色检测MAPK1的荧光强度水平。结果:与Control组和agomir-NC组比较,agomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平升高(P<0.05)。与Control组和antagomir-NC组比较,antagomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低(P<0.05)。与Control组比较,O/H组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低,细胞活力降低,TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,迁移数量降低,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高,Fe2+含量和PTGS2的蛋白表达水平升高,GPX4的蛋白表达水平降低,MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度升高(P<0.05)。与O/H组和O/H+agomir-NC组比较,O/H+agomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平升高,细胞活力升高,TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高,迁移数量升高,SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低,Fe2+含量和PTGS2的蛋白表达水平降低,GPX4的蛋白表达水平升高,MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度降低(P<0.05)。与O/H组和O/H+antagomir-NC组比较,O/H+antagomir-miR-20b-5p组BMVEC中的miR-20b-5p水平降低,细胞活力降低,TUNEL阳性率和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低,迁移数量降低,SOD和GSH-Px活性降低,MDA含量升高,Fe2+含量和PTGS2的蛋白表达水平升高,GPX4的蛋白表达水平降低,MAPK1的mRNA和蛋白表达水平以及相对荧光强度升高(P<0.05)。结论:本研究表明上调miR-20b-5p通过抑制OGD/Hemin处理的BMVEC中MAPK1的表达从而抑制了铁死亡途径。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年1月至2021年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院行改良根治术的68例乳腺癌患者作为研究对象,收集乳腺癌组织及癌旁正常组织石蜡标本。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-135b-5p的表达水平,以乳腺癌组织miR-135b-5p表达量的平均值作为参考,将患者分为低表达组与高表达组,分析miR-135b-5p表达水平与患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-MeierPlotter分析miR-135b-5p表达对不同分子亚型乳腺癌患者预后的影响。结果乳腺癌组织miR-135b-5p的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组肿瘤直径>2cm、淋巴结转移阳性、分型为三阴性、ER表达阴性、PR表达阴性的患者占比高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、发病部位、组织学分级、HER2表达情况比较差异无统计学意义。Kaplan-MeierPlotter在线生存分析结果显示,在ER阳性的管腔型乳腺癌患者中,miR-135b-5p低表达组总生存率低于高表达组,在三阴性乳腺癌患者中,miR-135b-5p高表达组总生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);在HER2过表达型乳腺癌患者中,低表达组和高表达组总生存率比较差异无统计学意义。结论miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达水平在三阴性和管腔型乳腺癌中存在显著差异,可通过发挥不同的作用参与肿瘤的进展过程,在乳腺癌的预后判断和靶向治疗方面可能具有潜在的应用价值。

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

H12、RS13和RL6在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达研究

目的探讨组蛋白H1变体(H12)、核糖体蛋白S13(RS13)和核糖体蛋白L6(RL6)在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达变化。方法(1)自行繁育miR-199b-5p敲除(Knockout,KO)和野生型(Wild-type,WT)C57BL/6小鼠,分别记录两组雌鼠产仔情况(2)基因型鉴定验证分组,取性成熟期小鼠(鼠周龄为11~13周)卵巢用于验证实验。(3)用实时荧光定量PCR(qPCR)检测每组小鼠(n=10)卵巢组织中H12、RS13和RL6的mRNA表达水平变化。(4)用蛋白免疫印迹法(WB)检测每组小鼠(n=3)卵巢组织中H12、RS13和RL6的蛋白表达水平变化。结果(1)共统计半年内两组雌鼠产仔情况:WT组生产27窝,平均每窝产仔数为(8.15±0.41)只;KO组生产28窝,平均每窝产仔数为6.43±0.32只,与WT组比较,KO组雌鼠产仔数显著下降(P=0.004),差异有统计学意义。(2)qPCR结果示:与WT组比较,KO组卵巢组织中H12(P=0.038)、RS13(P=0.011)和RL6(P=0.009)的mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义。(3)WB结果示:与WT组比较,KO组小鼠卵巢组织中H12(P=0.014)蛋白表达水平显著升高,而RS13(P=0.005)和RL6(P=0.009)蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义。结论敲除miR-199b-5p可能影响H12、RL6和RS13基因的表达使小鼠卵巢储备能力下降。

血清外泌体miR-20b-5p对非小细胞肺癌的诊断价值

目的探讨血清外泌体miR-20b-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)患者的诊断价值。方法收集144例NSCLC患者(NSCLC组)血清和138例健康对照人群(健康对照组)血清。分离并鉴定血清外泌体。提取血清外泌体miRNA并通过RT-qPCR比较NSCLC组和健康对照组之间miR-20b-5p的表达水平。利用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p的诊断价值。结果纯化的外泌体具有已报道的外泌体的典型特征。NSCLC组外泌体miR-20b-5p的表达水平显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.802～0.889,敏感度为73.61%,特异度为70.29%)。结论血清外泌体miR-20b-5p在NSCLC中高表达,且具有较高的临床诊断价值,可以作为辅助NSCLC诊断的新型生物标志物。

miR-15b-5p靶向FOXO1对缺氧/复氧诱导的人肾小管上皮细胞损伤的调控作用及其机制

目的探讨miR-15b-5p靶向叉头框蛋白O1(FOXO1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的调控作用及其机制。方法取对数生长期HK-2细胞,设置:(1)对照组(正常培养)与H/R组(H/R诱导培养)。倒置显微镜下观察HK-2细胞形态,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测mi-15b-5p、FOXO1 mRNA的表达,Western blotting检测FOXO1蛋白的表达。(2)对照组(正常培养)、H/R组(H/R诱导培养)、H/R+mimic对照组(转染mimic对照质粒后H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic组(转染miR-15b-5p mimic后H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic+OE-NC组(共转染mi R-15b-5p mimic和OE-NC质粒后H/R诱导培养)与H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组(共转染miR-15b-5p mimic和FOXO1过表达质粒后H/R诱导培养)。采用qRT-PCR检测mi-15b-5p的表达,Western blotting检测FOXO1、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡情况。(3)对照组(正常培养)、H/R组(H/R诱导培养)、H/R+miR-15b-5p mimic组(转染miR-15b-5p mimic后H/R诱导培养)与H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组(共转染miR-15b-5p mimic和OE-FOXO1后H/R诱导培养)。采用Western blotting检测LC3、p62、Beclin-1蛋白的表达,LC3免疫荧光检测细胞自噬水平。双荧光素酶报告实验检测miR-15b-5p与FOXO1之间的靶向关系。结果倒置显微镜下观察显示,对照组细胞数量较多,细胞大多呈典型鹅卵石形态,铺路石状生长;H/R组大部分细胞收缩变圆,贴壁细胞数量明显减少。与对照组比较,H/R组miR-15b-5p表达水平明显降低,FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。荧光素酶报告实验结果显示miR-15b-5p直接靶向作用于FOXO1的3'-UTR。miR-15b-5p过表达抑制H/R诱导的HK-2细胞活力,降低细胞凋亡,抑制细胞自噬(P<0.05)。与H/R+miR-15b-5p mimic组相比,H/R+miR-15b-5p mimic+OE-FOXO1组HK-2细胞存活率降低,细胞凋亡和自噬水平增高(P<0.05)。结论miR-15b-5p通过靶向抑制FOXO1降低细胞自噬减缓H/R诱导的HK-2细胞损伤。