芪苈强心胶囊与托拉塞米对慢性充血性心力衰竭病人心室重塑及血清miR-210-3p、miR-423-5p的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊与托拉塞米对慢性充血性心力衰竭心室重塑及血清miR-210-3p、miR-423-5p的影响。方法:选取2020年12月—2022年12月我院收治的慢性充血性心力衰竭病人100例,采用随机数字表法分为两组,各50例。对照组给予托拉塞米治疗,观察组采用芪苈强心胶囊与托拉塞米联合治疗。比较两组临床疗效及治疗前后心室重塑指标[室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)、左室质量指数(LVMI)]、心功能指标[左室收缩末期容积(LVESV)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-210-3p、血清miR-423-5p水平变化。结果:观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(96.0%与76.0%,P<0.05)。治疗前两组IVST、LVPWT、LVMI、LVESV、LVEDV、LVEF、血清miR-210-3p、血清miR-423-5p水平比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组IVST、LVPWT、LVESV、LVEDV、miR-210-3p、miR-423-5p均低于对照组,LVMI、LVEF高于对照组(P<0.05)。结论:芪苈强心胶囊与托拉塞米治疗慢性充血性心力衰竭能够抑制心室重塑,改善心功能水平,调节血清miR-210-3p、miR-423-5p水平。

HIF-1α与miR-210-3p在子宫内膜异位症组织中的表达及相关性

目的研究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在子宫内膜异位症(EMS)患者异位内膜组织中的表达。方法选取56例EMS手术患者,所有病例均经腹腔镜或开腹手术确诊,经病理证实为EMS,术中留取异位内膜组织为试验组,同期选取正常子宫内膜组织22例为对照组,应用免疫组织化学法(SP)测定2组内膜组织中HIF-1α的表达,并采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测2组标本中miR-210-3p相对表达水平;采用Spearman法分析异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达水平相关性分析。结果异位内膜组织中miR-210-3p相对表达量显著高于正常内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05);异位内膜组织中HIF-1α蛋白的阳性表达率高于正常内膜组织,差异有统计学意义(P=0.036);Spearman相关性分析结果显示异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达水平呈正相关(r=0.573,P<0.001)。结论EMS患者异位内膜组织中HIF-1α与miR-210-3p表达上调,两者呈正相关,可能协同参与了EMS的发生发展。

血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值

目的:探讨血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。方法:选取198例冠心病患者为研究对象,根据是否并发左心室肥厚分为并发组(n=82)和未并发组(n=116)。比较两组患者一般资料、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、血脂及细胞因子水平,Logistic回归分析影响冠心病患者并发左心室肥厚的因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-499-5p、miR-423-5p及miR-210-3p水平对冠心病患者并发左心室肥厚的预测价值。结果:两组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平无统计学差异(P>0.05)。并发组患者年龄、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及总胆固醇(TC)水平、中性粒细胞/淋巴细胞(NLR)及血小板/淋巴细胞比值(PLR)高于未并发组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,患者年龄大、血清miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致响患者冠心病患者并发左心室肥厚的相关因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,年龄、miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p、TC、NLR及PLR对预测冠心病患者并发左心室肥厚均较高价值,且各指标联合预测的价值更高(P<0.05)。结论:患者年龄大、微小核酸(miR-499-5p、miR-423-5p、miR-210-3p)及TC水平较高、NLR及PLR值较高是导致冠心病患者并发左心室肥厚风险因素,微小核酸、TC、NLR及PLR联合检测对预测冠心病患者并发左心室肥厚有较高价值。

卒中后认知障碍患者血清miR-210-3p水平与认知障碍相关性分析

目的:探讨轻中度缺血性卒中后认知障碍(PSCI)患者血清miR-210-3p的表达水平及与认知障碍的相关性。方法:选取2019年1月—2021年11月某院收治的轻中度缺血性卒中后认知障碍患者30例为研究组,并选取同期该院健康体检者30例作为对照组。采用蒙特利尔认知量表(MoCA)对受试者进行认知评估,采用荧光定量PCR检测患者血清中miR-210-3p表达水平,针对miR-210-3p表达水平与MoCA评分进行相关性分析。采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-210-3p表达水平对PSCI的诊断价值。结果:研究组患者血清中miR-210-3p表达水平为(0.045±0.035),低于健康对照组的(0.380±0.475),差异有统计学意义(P<0.001);研究组患者血清中miR-210-3p表达水平与MoCA评分呈正相关性(R=0.486,P<0.05);ROC曲线分析表明,miR-210-3p在轻中度缺血性PSCI中具有良好的诊断性能,灵敏度0.815,特异度0.875,曲线下面积(AUC)为0.937(95%CI 0.831~0.986),截断值0.095(P<0.01)。结论:miR-210-3p在轻中度缺血性PSCI血清中的表达是下降的,与MoCA评分呈正相关性,可作为PSCI的潜在分子生物标志物,而且可能为该病的预防和治疗提供新的见解。

miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响

目的探讨miR-210-3p和miR-532-3p在子宫内膜癌中的表达及其对预后的影响。方法回顾性收集2017年6月至2018年6月于同济大学附属第一妇婴保健院收治并行手术治疗的子宫内膜癌患者的手术标本59例纳入研究,另选取同期20例行子宫肌瘤切除术患者的正常子宫内膜组织作为对照。RT-qPCR检测miR-210-3p和miR-532-3p的相对表达量,分析miR-210-3p和miR-532-3p表达与临床病理和预后的关系,并采用CoX回归模型分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果子宫内膜癌组织中miR-210-3p的水平为1.93±0.37,明显高于正常子宫内膜组织(0.49±0.11),差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织中miR-532-3p的水平为0.64±0.16,明显低于正常子宫内膜组织(1.42±0.39),差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织中miR-210-3p和miR-532-3p表达与FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结有无转移、分化程度有关(P<0.001);miR-210-3p低表达患者5年的生存率为77.78%,明显高于miR-210-3p高表达患者(52.17%),差异有统计学意义(P<0.05);miR-532-3p低表达患者5年的生存率为53.57%,明显低于miR-532-3p高表达患者(80.65%),差异有统计学意义(P<0.05)。FIGO分期、肌层浸润深度、淋巴结转移、分化程度、组织学类型、miR-210-3p和miR-532-3p是影响子宫内膜癌患者预后独立的危险因素(P<0.05)。结论miR-210-3p在子宫内膜癌组织中高表达,miR-532-3p在子宫内膜癌组织中低表达,miR-210-3p和miR-532-3p的表达与子宫内膜癌患者的预后具有一定的相关性,可为预后判断提供一定的参考。

miR-210-3p通过自噬调控MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究

目的:探讨微小RNA-210-3p(microRNA-210-3p,miR-210-3p)通过自噬对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的影响。方法:(1)采用脂质体转染法构建miR-210-3p过表达或沉默的MC3T3-E1细胞模型,设置阴性对照(negative control,NC)mimic组、miR-210-3p mimic组、NC inhibitor组和miR-210-3p inhibitor组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标及自噬相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(2)用雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别构建自噬激活和抑制模型,设置control组、RAPA组和3-MA组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测自噬激活或抑制后MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(3)设置NC mimic组、NC mimic+RAPA组和miR-210-3p mimic+RAPA组,Western blot和RT-qPCR检测各组MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化。结果:(1)与NC mimic组相比,miR-210-3p mimic组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,矿化结节数目增加,细胞自噬水平显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-210-3p inhibitor组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞内Runx2疫荧光强度降低,矿化结节数目减少,细胞自噬水平显著升高(P<0.05)。(2)与control组相比,3-MA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,而RAPA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度降低。(3)miR-210-3p过表达可逆转RAPA对MC3T3-E1细胞成骨分化的抑制作用(P<0.01)。结论:miR-210-3p可通过降低自噬水平促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。

miR-210-3p通过靶向ATG7抑制人膀胱癌细胞J82的自噬和诱导凋亡

目的探索miR-210-3p抑制人膀胱癌细胞J82机制。方法应用定量实时PCR(qRTPCR)检测miR-210-3p及其靶基因自噬相关基因7(autophagy-relatedgene7,ATG7)在J82细胞中的表达。为验证miR-210-3p和ATG7之间的生物学关系,进行荧光素酶报告检测。通过体外实验研究miR-210-3p和ATG7在J82细胞中的生物学功能,包括CCK-8法检测细胞增殖情况,hoechst染色检测细胞凋亡,westernblot检测细胞自噬。结果miR-210-3p表达明显下调ATG7表达水平,生物信息学预测和荧光素酶报告实验证明miR-210-3p抑制ATG7是通过直接结合到ATG73’-未翻译区域(3’-UTR)。在J82细胞中,miR-210-3p上调可抑制ATG7表达、细胞自噬和细胞增殖,同时诱导细胞凋亡。结论miR-210-3p通过负调控ATG7抑制细胞增殖和自噬,并促进凋亡,从而促进膀胱癌细胞J82细胞死亡。因此,在膀胱癌中抑制自噬对于开发针对膀胱癌的自噬靶向治疗至关重要。本研究补充了miRNA调控膀胱癌的相关机制。

老年慢性心力衰竭患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性

目的探究老年慢性心力衰竭(CHF)患者血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与其营养状况和睡眠质量的相关性。方法采用微型营养评价量表(MNA)与匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估106例CHF患者营养状况及睡眠质量;将患者按不同MNA、PSQI和心功能分组,比较各组血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平,并分析其相关性。结果随着心功能分级的增加,miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平逐渐增加,MNA评分逐渐减少,PSQI评分逐渐增加。miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平互呈正相关;miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与营养状况呈负相关;miR-423-5p、miR-499-5p与睡眠质量呈正相关(P<0.05)。结论血浆miR-423-5p、miR-499-5p及miR-210-3p水平与CHF患者心力衰竭程度、营养状况和睡眠质量密切相关。

血清miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p在慢性心力衰竭大鼠中的表达及意义

目的探讨血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、微小RNA-499-5p(miR-499-5p)、微小RNA-210-3p(miR-210-3p)在慢性心力衰竭(CHF)大鼠中的表达及意义。方法SD大鼠随机分为对照(NC)组(n=15)和CHF组(n=15),采用腹腔注射阿霉素建立CHF模型。建模6周后检测两组心功能指标[左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)、左室射血分数(LVEF)]、血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平及氨基末端脑利钠肽前体(NTpro-BNP)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平。采用Pearson法分析血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与心功能指标、NTpro-BNP、cTnI相关性。结果与NC组比较,CHF组心功能指标LVEDV和LVESV升高(P<0.05),miR-423-5p、miR-499-5p和miR-210-3p表达水平升高(P<0.05),NTpro-BNP和cTnI水平升高(P<0.05),LVEF降低(P<0.05)。CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p与LVEDV、LVESV、LVEF无明显相关性(P>0.05),而CHF大鼠血清miR-423-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.668,P=0.007;r=0.622,P=0.004),CHF大鼠血清miR-499-5p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.532,P=0.013;r=0.663,P=0.041),CHF大鼠血清miR-210-3p与NTpro-BNP、cTnI呈正相关(r=0.598,P=0.019;r=0.533,P=0.041)。结论CHF大鼠血清miR-423-5p、miR-499-5p、miR-210-3p表达水平升高,且与NTpro-BNP和cTnI密切相关。

miR-210-3p在肺癌组织中的表达及其对预后的影响分析

目的评估miR-210-3p在肺癌组织中的表达及其对预后的影响。方法选择2012年2月—2017年12月于邯郸市第一医院诊治的187例肺癌患者作为研究对象,回顾分析其临床资料。比较肺癌患者肺癌组织及癌旁组织中miR-210-3p相对表达量,分析miR-210-3p相对表达量与患者各项临床病理资料之间关系,同时对患者的生存曲线进行统计分析。结果与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-210-3p表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-210-3p表达与肺癌的临床分型和淋巴结转移情况有关(P<0.05),与性别、年龄、吸烟史、肺癌组织类型及肿瘤组织大小无关(P>0.05)。临床分期为Ⅲ/Ⅳ期、有淋巴结转移的肺癌患者miR-210-3p表达水平明显高于临床分期为Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移肺癌患者(P<0.05)。随着miR-210-3p表达水平的升高,肺癌患者的生存率明显下降(P<0.05)。结论肺癌组织中miR-210-3p相对表达量高于癌旁组织。肺癌组织中miR-210-3p表达水平与肺癌的临床分型和淋巴结转移情况有关。

低氧诱导因子-1α通过提高miR-210-3p表达水平促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的:研究低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)是否通过改变miR-210-3p的表达水平影响口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的进展。方法:低氧培养CAL-27细胞并检测细胞内HIF-1α、miR-210-3p的表达水平;重组HIF-1α刺激CAL-27细胞后检测miR-210-3p的表达水平是否发生变化;转染短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)改变CAL-27细胞内miR-210-3p的表达水平后,用划痕实验和CCK-8实验来观察其对CAL-27细胞迁移、增殖能力的影响。结果:低氧导致CAL-27细胞内HIF-1α及miR-210-3p表达量增高;重组HIF-1α处理后的CAL-27细胞内miR-210-3p表达量升高;过表达miR-210-3p会促进CAL-27细胞的增殖及迁移能力,反之细胞的增殖和迁移能力则受到抑制。结论:MiR-210-3p在OSCC细胞增殖和迁移过程中起到重要作用,HIF-1α通过影响miR-210-3p表达来参与肿瘤进程。

低表达miR-210-3p调控大鼠垂体瘤GH3与MMQ细胞株增殖与迁移

目的:探讨低表达miR-210-3p对大鼠垂体瘤GH3和MMQ细胞株的增殖与迁移的作用。方法:将培养好的大鼠垂体瘤MMQ与GH3细胞株随机分为低表达miR-210-3p组和阴性对照组,分别转染miR-210-3p inhibitor和miR-210-3p NC,荧光定量PCR检测实验组与对照组的miR-210-3p的表达;转染后24 h、48 h、72 h分别进行CCK8检测增殖能力;用Transwell来检测大鼠垂体瘤细胞的迁移能力;用Western- boltting技术分别检测低表达miR-210-3p组和阴性对照组的FGFRL-1的蛋白表达;用双荧光素酶实验验证miR-210-3p的靶基因。结果:转染低表达病毒后MMQ与GH3垂体瘤细胞株的细胞增殖能力下降较阴性对照组比较差异,P 【0.05,有统计学意义;低表达miR-210-3p组MMQ与GH3垂体瘤细胞系与阴性对照组相比细胞迁移能力下降,P 【0.05,有统计学意义;转染低表达病毒组的细胞株与对照组相比,靶基因蛋白表达有差异,P 【0.05;miR-210-3p可与FGFRL-1 mRNA的3’-UTR结合,FGFRL-1为miR-210-3p的靶基因。结论:miR-210-3p低表达抑制大鼠垂体瘤细胞的增殖与迁移。

miR-210-3p在骨质疏松性骨折中靶基因预测及信号通路的生物信息学分析

目的通过生物信息学分析人miR-210-3p染色体定位、物种保守性、碱基序列,并分析其调控骨质疏松性骨折的靶基因及分子功能。方法通过NCBI、PubMed、UCSC等数据库查找miR-210-3p物种保守性和碱基序列,借助TargetScan、miRDB、miRTarBase、GeneCards预测miR-210-3p调控骨质疏松性骨折作用靶点,借助STRING在线数据库和Cytoscape 3.7.0本地软件构建PPI网络图,通过DAVID在线数据库对靶基因进行GO、KEGG富集性分析。结果已知的成熟miR-210-3p序列在多个物种间具有高度保守性。PPI网络分析显示,miR-210-3p的靶点之间具有非常复杂的作用网络,尤其是靶基因BDNF、TWIST1、MEF2D、MEF2A的编码蛋白在调控骨质疏松性骨折中起关键作用。GO分析发现其靶基因参与骨骼系统发育、骨化、成骨细胞分化等生物学过程。结论分析结果初步提示miR-210-3p通过调控靶基因广泛参与多种重要的生物学过程,为深入研究miR-210-3p参与抗骨质疏松性骨折机制提供了新的思路与线索。

肺腺癌患者血清中mi R-498,miR-339-5p和miR-210-3p水平表达的临床诊断价值

目的研究肺腺癌(lung adenocarcinoma,LA)患者血清中微核糖核酸(miRNA)在肺腺癌患者及正常人群组血清中的表达水平,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法收集60例肺腺癌及40例正常人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time PCR,qRT PCR)检测各组血清miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的表达情况。统计分析各组miRNA的表达差异以及单个miRNA在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析三者联合检测的诊断价值。结果相比正常人群,肺腺癌患者血清中miR-210-3p表达增加(6.41±1.85 vs 4.52±1.45),miR-498(2.09±0.88vs 3.01±0.69)和miR-339-5p(0.8±0.53 vs 1.24±0.58)表达下降,差异有统计学意义(t=4.72,1.34,2.75,均P<0.05)。受试者工作特征曲线下面积(AUC)分析结果显示,miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p的AUC分别为0.788(95%CI0.695~0.864),0.715(95%CI 0.616~0.801)和0.799(95%CI 0.707~0.872);三者联合检测在肺腺癌诊断中AUC值为0.902(95%CI 0.826~0.952),三者联合检测优于单个miRNA的检测,差异有统计学意义(t=14.09~18.65,均P<0.05)。结论miR-498,miR-339-5p和miR-210-3p在肺腺癌患者血清中的表达情况改变,对肺腺癌具有一定的临床诊断价值。

miR-141-3p对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的抑制和改善作用

背景:研究表明,胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子有抑制纤维环细胞凋亡的作用。miR-141-3p微小RNA在骨髓基质细胞中随着年龄的增加而增加,且与炎症信号通路的活化存在一定关系,提示其可能成为腰椎间盘突出症的治疗靶点。目的:探究miR-141-3p通过调控胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子对腰椎间盘突出症大鼠背根神经节炎症及下肢疼痛的影响。方法:选取50只SPF级SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组、miR-141-3p mimics组,每组10只。除正常组外,其余大鼠采用自体髓核移植法进行腰椎间盘突出症建模。建模成功后,对miR-NC组、miR-141-3p inhibitor组和miR-141-3p mimics组大鼠鞘内分别注射10μL 20μmol/L miR-NC,miR-141-3p inhibitor,miR-141-3p mimics,均每天注射1次,连续注射28 d;正常组、模型组同期同位置注射同体积生理盐水。采用热缩足潜伏期阈值评价大鼠下肢疼痛,实时荧光定量PCR检测背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达,ELISA法检测背根神经节组织炎症因子,免疫印迹法检测背根神经节组织胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子蛋白表达,并分析miR-141-3p与胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子的相关性。结果与结论:miR-NC组各项指标与模型组比较,差异均无显著性意义。①大鼠热缩足潜伏期阈值:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。②背根神经节组织miR-141-3p mRNA表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。③背根神经节组织肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素1含量:模型组明显高于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显高于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显低于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。④背根神经节组织胰岛素样生长因子1、血小板源性生长因子蛋白表达:模型组明显低于正常组(P<0.05),miR-141-3p inhibitor组明显低于miR-NC组(P<0.05),miR-141-3p mimics组明显高于miR-141-3p inhibitor组(P<0.05)。⑤胰岛素样生长因子1与miR-141-3p呈正相关(r=0.904,P<0.001),血小板源性生长因子与miR-141-3p呈正相关(r=0.879,P<0.001)。⑥结论:miR-141-3p可显著改善腰椎间盘突出症大鼠下肢疼痛,抑制背根神经节炎症,其机制可能与促进胰岛素样生长因子1/血小板源性生长因子表达有关。

艾滋病患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p和miR-296-5p的检测意义分析

目的研究艾滋病(AIDS)患者血清微小RNA(miR)-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p的检测意义。方法选取2020年5月至2023年5月鹤壁市传染病医院收治的100例AIDS患者作为研究对象,设为AIDS组。另选取同期健康志愿者100例设为参考组。比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p及miR-296-5p水平。根据AIDS患者预后将AIDS组分为预后不良组、预后良好组,比较两组血清miR-210-5p、miR-23a-3p、miR-296-5p水平。采用多因素Logistic回归分析AIDS患者预后不良的影响因素。结果AIDS组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于参考组,miR-296-5p水平低于参考组,差异具有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平均高于预后良好组,miR-296-5p水平低于预后良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-210-5p、miR-23a-3p水平升高及miR-296-5p水平降低均是AIDS患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论AIDS患者血清miR-210-5p、miR-23a-3p水平异常升高,miR-296-5p水平异常降低,其均对AIDS患者的预后具有一定的评估作用。

miR-152-3p表达下调降低紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇的耐药性

目的探讨miR-152-3p对紫杉醇耐药人卵巢癌细胞A2780T对紫杉醇耐药性的影响及机制。方法①紫杉醇(1.875,3.75,7.5,17和23μmol·L^(-1))与人卵巢癌A2780和A2780T细胞作用48 h,MTT法检测细胞存活率,计算抑制细胞存活半数抑制浓度(IC50)值和耐药指数(RI)。Western印迹法检测A2780和A2780T细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达。②实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测A2780和A2780T细胞miR-152-3p表达水平。脂质体瞬时转染技术转染miR-152-3p抑制物降低A2780T细胞中miR-152-3p表达(miR-152-3p抑制物组),同时设转染miR-152-3p阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法、划痕实验和流式细胞术分别检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞存活、迁移和凋亡的影响;Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物对A2780T细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。③用miRDB,Targetscan,miRWalk和Starbase数据库预测miR-152-3p的靶基因,并用Western印迹法检测转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞磷酸酯酶张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达的变化及RT-qPCR检测A2780和A2780T细胞PTEN mRNA表达水平予以验证。随后,脂质体瞬时转染技术转染PTEN siRNA沉默A2780T细胞中PTEN表达,同时设转染siRNA阴性对照组,RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测沉默PTEN表达后A2780T细胞存活率和IC50值,Western印迹法检测P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达。结果①紫杉醇处理后A2780和A2780T细胞存活率均降低(P<0.01),A2780T细胞RI为2.8。与A2780细胞相比,A2780T细胞P-gp,MRP1和ABCG2蛋白高表达(P<0.05,P<0.01)。②与A2780细胞相比,A2780T细胞miR-152-3p明显高表达(P<0.01)。与转染miR-152-3p阴性对照组比较,转染miR-152-3p抑制物后A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和细胞迁移能力(P<0.05)明显降低,细胞凋亡率升高(P<0.01);Bax蛋白表达增加(P<0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。③生物信息学数据库分析结果提示,PTEN是miR-152-3p的一个靶基因;Western印迹法验证显示,转染miR-152-3p抑制物组A2780T细胞PTEN蛋白表达低于转染miR-152-3p阴性对照组(P<0.05);RT-qPCR结果显示,A2780T细胞PTEN mRNA表达水平高于A2780细胞(P<0.01)。转染PTEN siRNA沉默PTEN表达后,与转染siRNA阴性对照组相比,A2780T细胞存活率(P<0.05,P<0.01)和IC50值(P<0.01)显著降低,P-gp,MRP1和ABCG2蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论miR-152-3p在A2780T细胞中高表达,其表达下调可抑制A2780T细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,降低A2780T细胞对紫杉醇的耐药性,该作用可能是通过降低其靶基因PTEN表达发挥的。

lncRNA NPIPA9靶向miR-210-3p对前列腺癌细胞生长和迁移的影响

目的分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量,通过过表达lncRNA NPIPA9检测miR-210-3p的相对表达量及对前列腺癌细胞生长和迁移的影响。方法通过Oncomine数据库分析lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中的相对表达量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA NPIPA9在前列腺癌细胞株DU-145、PC-3、C4-2B、22Rv1、LNCaP和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中的相对表达量。体外培养前列腺癌PC-3细胞,分为两组:NPIPA9组和对照组,NPIPA9组转染100 nmol/L lncRNA NPIPA9载体,对照组转染100 nmol/L对照载体。CCK-8法检测PC-3细胞的增殖活力。Transwell实验检测PC-3细胞的迁移能力。生物信息学技术预测lncRNA NPIPA9的潜在靶点。双荧光素酶报告基因实验确定lncRNA NPIPA9和miR-210-3p的靶向结合关系。RT-qPCR检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中miR-210-3p相对表达量的影响。Western blotting法检测lncRNA NPIPA9对前列腺癌细胞中核因子κB(NF-κB)通路蛋白表达量的影响。计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果前列腺癌组织中lncRNA NPIPA9相对表达量低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。前列腺癌细胞株中lncRNA NPIPA9相对表达量均低于RWPE-1细胞,差异具有统计学意义(P<0.01);前列腺癌PC-3细胞中lncRNA NPIPA9相对表达量最低,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9对前列腺癌PC-3细胞活力具有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞迁移数目分别为(101.70±8.63)、(45.97±8.83)个,lncRNA NPIPA9对PC-3细胞迁移具有抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.01)。lncRNA NPIPA9可以直接靶向结合miR-210-3p,差异具有统计学意义(P<0.01)。对照组和NPIPA9组PC-3细胞中miR-210-3p相对表达量分别为5.32±0.79和1.11±0.56,lncRNA NPIPA9可直接下调PC-3细胞中miR-210-3p表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。与对照组相比,lncRNA NPIPA9能够降低PC-3细胞中NF-κB通路蛋白c-Myc、MMP-9、VEGF、p65、p50表达。结论lncRNA NPIPA9在前列腺癌组织中表达下调,其通过靶向并负调控miR-210-3p,降低前列腺癌PC-3细胞的增殖和迁移能力。

lncRNA MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN介导慢性阻塞性肺疾病发展的分子机制研究

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)MEG8通过调控miR-367-3p/磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)介导慢性阻塞性肺疾病(COPD)发展的分子机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测16HBE细胞和COPD组织lncRNA MEG8表达水平;在香烟烟雾提取物(CSE)刺激后的16HBE细胞中过表达lncRNA MEG8及加入miR-367-3p inhibitor后同时敲减lncRNA MEG8或PTEN,采用MTT法、流式细胞术、酶联免疫吸附试验和免疫印迹法检测细胞凋亡、细胞增殖和炎症因子水平的变化;利用双荧光素酶报告系统对lncRNA MEG8、miR-367-3p、PTEN的靶向关系进行验证。结果 MEG8在CSE刺激的16HBE细胞和COPD临床组织样本中表达降低(P<0.05)。相比于CSE组,过表达MEG8后CSE刺激的16HBE细胞凋亡和炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平降低(P<0.05),促凋亡蛋白Bax、Caspase3和Cleaved-caspase3表达水平降低(P<0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证了MEG8可靶向抑制miR-367-3p(P<0.05),同时miR-367-3p可靶向抑制PTEN的表达(P<0.05),进而抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应(P<0.05)。在CSE刺激下,相较于Control组,加入miR-367-3p inhibitor可显著上调16HBE细胞中PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),增强细胞增殖活性(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),显著下调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3和Cleaved-caspase3的表达水平(P<0.05),上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平(P<0.05),抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05),随后敲降MEG8或PTEN可恢复PTEN的蛋白表达水平(P<0.05),抑制细胞增殖活性(P<0.05),逆转miR-367-3p inhibitor导致的细胞凋亡(P<0.05)以及对凋亡相关蛋白的调控作用(P<0.05),增强炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平(P<0.05)。结论 MEG8通过调控miR-367-3p/PTEN轴抑制CSE刺激的16HBE细胞的凋亡和炎症反应,并可能为临床COPD的治疗提供新的治疗策略。

hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。