白果内酯调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴缓解肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的探讨白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及其对lncRNA LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴的调控作用。方法用肺炎链球菌诱导肺泡上皮细胞建立细胞损伤模型(感染组);分别转染si-NC、si-LEF1-AS1后,用肺炎链球菌感染细胞(感染+si-NC组和感染+si-LEF1-AS1组);pcDNA、pcDNA-LEF1-AS1分别转染至肺泡上皮细胞后用白果内酯与肺炎链球菌共同处理细胞(感染+白果内酯+pcDNA组和感染+白果内酯+pcDNA-LEF1-AS1组)。ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测LEF1-AS1、miR-23b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测LEF1-AS1与miR-23b-3p的靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果白果内酯能够降低肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平和LEF1-AS1的表达量(P<0.05),并可降低凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),还可促进miR-23b-3p和Bcl-2表达(P<0.05),且呈剂量依赖性;LEF1-AS1可靶向调控miR-23b-3p;转染si-LEF1-AS1可降低TNF-α、IL-1β、IL-6的水平以及凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-LEF1-AS1能够逆转白果内酯对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性因子及凋亡的作用。结论白果内酯可通过调控LEF1-AS1/miR-23b-3p分子轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性反应及凋亡,进而减轻细胞损伤。

LncRNA-SNHG17通过调控miR-23b-3p促进非小细胞肺癌进展

目的探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)在非小细胞肺癌中的作用及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime PCR,qRT-PCR)技术检测SNHG17在肺癌细胞系和正常气管上皮细胞中的表达;通过转染pLCDH-SNHG17质粒或SNHG17-siRNA,过表达或沉默SNHG17,检测不同肺癌细胞株增殖、细胞周期和迁移能力;采用生物信息学方法预测并鉴定SNHG17相互作用的微小RNA (miRNA)。结果 SNHG17在NSCLC细胞系中表达上调,SNHG17的沉默能抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;SNHG17的上调促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移;沉默SNHG17导致非小细胞肺癌细胞系中miR-23b-3p水平升高,过表达miR-23b-3p在非小细胞肺癌细胞系中抑制SNHG17的表达。结论 LncRNA-SNHG17在非小细胞肺癌细胞系中高表达,可能通过竞争性结合miR-23b-3p参与非小细胞肺癌的发生。

miR-23b-3p调控脂蛋白(a)抑制同型半胱氨酸诱导的冠状动脉血管内皮细胞损伤

目的 探讨miR-23b-3p作为一种高效降低载脂蛋白（a）[apolipoprotein（a）,Apo（a）]的内源性miR,对高同型半胱氨酸引起的冠状动脉内皮细胞损伤抑制效果及作用机制。方法 通过生物信息学、miR芯片及基础实验筛选ETS1为靶基因,设计miR-23b-3p mimic/inhibitor。构建pmir GLOETS1 3＇-UTR质粒分6组转染人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery endothelial cells,HCAECs）,分别为A组（pmirGLO-ETS1 3＇-UTR转染）、B组（miR-23b-3p inhibitor＋pmir GLO-ETS1 3＇-UTR转染）、C组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR转染）、D组（pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）、E组（miR-23b-3p minics＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）和F组（miR-23b-3p inhibitor＋pmirGLO-ETS13＇-UTR mut转染）,经双荧光素酶报告基因实验验证。HCAECs分为：对照组（无干预）、阴性对照组（miR-23b-3p inhibitor转染）和实验组（miR-23b-3p mimic转染）。3组细胞均置于含1. 0 mmol/L同型半胱氨酸（homocysteine,hcy）培养基中培养7 d。检测各组HCAECs存活率、miR-23b-3p和Apo（a） mRNA表达、akt、p-akt和eNOS蛋白表达。结果 双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p能够和ETS13＇-UTR直接结合,可得ETS1是miR-23b-3p直接靶基因。实验组HCAECs存活率（66. 22±5. 17）%、阴性对照组（42. 12±2. 35）%和对照组（38. 36±2. 21）%均显著低于正常HCAECs（P 〈0. 01）,实验组HCAECs存活率显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组miR-23b-3p mRNA表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）,实验组Apo（a） mRNA表达显著低于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。转染后,实验组p-akt表达和eNOS蛋白相对表达显著高于阴性对照组和对照组（P 〈0. 01）。结论 miR-23b-3p能够以ETS1为靶基因,可能通过akt/eNOS信号通路下调hcy诱导损伤的内皮细胞中Apo（a）表达,从而保护冠状动脉血管内皮细胞。

胆酸通过上调miR-23b-3p抑制载脂蛋白A表达

目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。

miR-23b-3p对延边黄牛垂体细胞中生长激素分泌影响的研究

为了分析血液外胞体miRNA对延边黄牛垂体细胞中生长激素(GH)分泌的影响,试验选择在延边黄牛和韩延牛血液外胞体中存在显著差异表达的miR-23b-3p,分析其对延边黄牛垂体细胞中GH分泌的影响机制。首先进行延边黄牛垂体细胞的原代培养,然后将miR-23b-3p的mimics(miR-23b-3p-mi组)、mimics对照品(NC组)、inhibitor(miR-23b-3p-in组)、inhibitor对照品(iNC组)转染至已建立的垂体原代细胞中,48 h后收集细胞,提取总mRNA和总蛋白,利用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western-blot技术分别检测GH mRNA转录和蛋白的表达情况;利用targetscan和RNAhybrid分析软件对miR-23b-3p的靶基因进行预测,再利用双荧光素酶报告基因系统对miR-23b-3p的靶关系进行了验证;最后利用实时荧光定量PCR和Western-blot技术分别检测miR-23b-3p靶基因的mRNA转录和蛋白表达情况。结果表明:miR-23b-3p-mi组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达水平极显著低于NC组(P<0.01),而miR-23b-3p-in组的延边黄牛垂体细胞中GH mRNA转录和蛋白表达水平显著高于iNC组(P<0.05);miR-23b-3p靶向了垂体特异性转录因子(POU1F1)的3′UTR;miR-23b-3p-mi组的POU1F1 mRNA转录和蛋白表达水平极显著低于NC组(P<0.01),而miR-23b-3p-in组的POU1F1 mRNA转录和蛋白表达水平极显著高于iNC组(P<0.01)。说明miR-23b-3p可通过调节POU1F1基因的表达来调控延边黄牛垂体细胞GH的分泌,进而调控延边黄牛的生长发育。

苦瓜蛋白通过下调miR-23b-3p促进三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达

目的前期工作发现苦瓜蛋白（MD28）可上调THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）的表达而减少胞内的脂质蓄积,但其机制不清楚。文章拟从转录后水平分析其作用机制。方法首先用miRNA芯片技术分析经MD28干预后,50 mg/L ox-LDL处理48 h的THP-1源性泡沫细胞miRNA谱中下调1.5倍的micro RNA（miRNA）,并与Genecards调控ABCA1基因表达的miRNA比较,找到二者共同miRNA,然后以荧光素酶报告基因系统验证其靶基因关系。qRT-PCR检测ABCA1 m RNA和miR-23b-3p的表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,油红O染色测定胞内脂质蓄积。结果 miR-23b-3p是miRNA芯片和Genecards的交集,靶基因验证实验证实ABCA1是miR-23b-3p的靶基因。MD28剂量（0 g/L、0.4 g/L、1.2 g/L、3.6 g/L、5 g/L）和时间（0 h、6 h、12h、24 h、48 h）依赖性地上调ABCA1 m RNA及蛋白的表达水平,以1.2 g/L作用12 h最为显著。ox-LDL上调miR-23b-3p表达且被MD28抑制,MD28能减少胞内脂质蓄积,miR-23b-3p的抑制剂可拮抗MD28对ABCA1表达和胞内脂质蓄积的作用。结论 MD28通过下调miR-23b-3p介导其促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达、减少胞内脂质蓄积作用。

miR-23b-3p在结直肠癌中的表达及其靶向KLF3抑制结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的机制研究

目的:研究miR-23b-3p在结直肠癌中的表达情况及对结直肠癌SW620细胞侵袭和迁移的影响机制。方法:收集2018年01月至2020年12月我院胃肠外科手术切除的58例结直肠癌组织及癌旁组织标本,以及结直肠癌细胞株SW480、SW620、HCT116、HT-29、Lovo和人正常结直肠黏膜细胞FHC,采用qPCR法检测miR-23b-3p和KLF3相对表达水平。采用脂质体转染技术将miR-23b-3p mimics、mimics-NC转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变。利用生物信息学软件预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和KLF3的结合位点。将KLF3过表达质粒(pcDNA3.1-KLF3)或空载质粒(Vector)单独或联合miR-23b-3p mimics转染至SW620细胞,采用Transwell实验和划痕实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用qPCR和Western Blot实验检测SW620细胞中KLF3 mRNA及蛋白的表达。结果:miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05),并与患者TNM分期和远处转移有关(均P<0.05);miR-23b-3p在结肠癌细胞系中的表达水平均显著低于FHC细胞,上调miR-23b-3p表达能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移能力。KLF3在结直肠癌组织和细胞中高表达,与miR-23b-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关(r=-0.326,P=0.013),双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p直接靶向调节KLF3的表达,KLF3过表达能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-23b-3p mimics可下调KLF3蛋白和mRNA表达,逆转KLF3过表达对SW620细胞侵袭和迁移能力的促进作用。结论:miR-23b-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤患者TNM分期及远处转移相关,miR-23b-3p靶向调控KLF3表达抑制结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移能力。

白芍总苷通过miR-23b-3p/FoxA1对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨白芍总苷及对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响分子机制。方法肺泡上皮细胞A549随机分为对照(Con)组、模型(Model)组(1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷低、中、高剂量组(17.5 mg/mL、35 mg/mL、70 mg/mL的白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL的肺炎链球菌感染)、Model+白芍总苷+anti-miR-23b-3p组(转染miR-23b-3p抑制剂+70 mg/mL白芍总苷+1×10^(8)CFU/mL肺炎链球菌感染);细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-6、IL-10水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平;蛋白质印迹法检测FoxA1蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-23b-3p和FoxA1的靶向关系。结果低、中、高剂量白芍总苷处理后,肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞的活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高,miR-23b-3p表达水平升高,FoxA1蛋白表达水平降低,呈剂量依赖性(P<0.05)。过表达miR-23b-3p后,FoxA1蛋白表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6含量降低,IL-10含量升高(P<0.05)。抑制miR-23b-3p可逆转白芍总苷对肺炎链球菌诱导A549细胞凋亡、活性和IL-6和IL-10含量的影响。miR-23b-3p靶向调控FoxA1。结论白芍总苷通过调控miR-23b-3p/FoxA1轴抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症。

苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达

目的 研究苦瓜蛋白（MD28）对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响,探索其作用机制。 方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白；MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot分别检测Apo（a）、法尼酯X受体（FXR）、肝细胞核因子4α（HNF4α）的mRNA和蛋白表达水平；qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小干扰RNA转染沉默FXR。 结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异；与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo（a）表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果最为显著；苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4α的下调作用,但对FXR的表达无影响。 结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo（a）的表达,有望成为临床降低脂蛋白（a）的候选药物。

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P<0.05)。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P<0.05);而circZNF292 siRNA组+H_(2)O_(2)细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P<0.05)。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转(均为P<0.05)。结论circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。

miR-23b-3p对肝核因子4的靶基因及效用分析

目的探索miR-23b-3p是否以肝核因子4作为靶基因并下调apo(a)表达,为降高脂蛋白(a)血症提供新的思路。方法用Targetscan在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝核因子4(HNF4)进行靶基因分析;在JM109细胞中使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因进行验证实验;用RT-PCR检测Hep G2细胞apo(a)mRNA表达水平。结果 Targetscan生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,miR-23b-3p的抑制剂可抑制其作用,验证了HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因。转染miR-23b-3p可抑制Hep G2细胞apo(a)mRNA的表达。结论 miR-23b-3p以HNF4为其靶基因,并下调Hep G2细胞apo(a)的表达。

阿尔泰金莲花总黄酮通过miR-23b-3p抑制RSV感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的分子机制研究

目的:探讨阿尔泰金莲花总黄酮对呼吸道合胞病毒(RSV)感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的影响及分子机制。方法:将人支气管上皮细胞16-HBE分为NC组、RSV组、RSV+低、中、高剂量组、RSV+miR-23b-3p组、RSV+miR-NC组、anti-miR-23b-3p+RSV+高剂量组和anti-miR-NC+RSV+高剂量组。细胞计数(CCK-8)试剂检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Westernblot法检测蛋白表达情况,ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1α水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-23b-3p表达水平。结果:RSV感染的16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平降低,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平升高,miR-23b-3p表达水平降低(P<0.01)。不同剂量阿尔泰金莲花总黄酮处理后,16-HBE细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低,miR-23b-3p表达水平升高(P<0.01)。过表达miR-23b-3p后,细胞活性、CyclinD1表达水平升高,凋亡率、CleavedCaspase-3、Bax表达水平、TNF-α、IL-6、IL-1α水平降低(P<0.01)。抑制miR-23b-3p表达可以逆转阿尔泰金莲花总黄酮对RSV感染的16-HBE细胞活性,凋亡和炎症因子水平的影响。结论:阿尔泰金莲花总黄酮可能通过上调miR-23b-3p表达抑制RSV感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。

过表达miR-23b-3p对甲状腺未分化癌FRO细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨miR-23b-3p对甲状腺未分化癌(ATC)FRO细胞侵袭和迁移能力的影响。方法 qRT-PCR法检测52例ATC癌组织及其癌旁组织中miR-23b-3p和锌指E盒结合同源框1(ZEB1)的表达水平,并分析两者的相关性。培养人ATC细胞株FRO,将miR-23b-3p mimic及其阴性对照转染至FRO细胞中,qRT-PCR检测miR-23b-3p和ZEB1 mRNA表达水平。体外三维培养观察细胞血管生成拟态(VM)形成能力;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;Western blotting检测ZEB1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,双荧光素酶报告实验验证miR-23b-3p和ZEB1的靶向调控关系。结果 ATC组织中miR-23b-3p表达水平低于癌旁组织,而ZEB1的表达水平高于癌旁组织,且两者在ATC组织中的表达水平呈负相关。过表达miR-23b-3p能显著下调ZEB1表达水平,抑制FRO细胞VM形成以及侵袭和迁移能力,同时抑制细胞中VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达。荧光素酶报告实验证实ZEB1是miR-23b-3p的靶基因。结论 过表达miR-23b-3p可能通过靶向下调ZEB1表达抑制FRO细胞的侵袭和迁移能力。

miR-23b-3p对卵巢癌细胞SKOV3中Fas基因表达的调控

目的预测并鉴定miRNA-23b-3p在人卵巢癌细胞SKOV3中的靶基因及其对靶基因的调控方式。方法利用生物信息学技术预测并筛选Hsa-miRNA-23b-3p的候选靶基因,建立双荧光素酶报告基因分析系统,验证miR-23b-3p对候选靶基因的直接靶定作用;采用miR-23b-3p minics转染SKOV3细胞后,定量PCR和Western blotting分别检测转染细胞中靶基因的m RNA和蛋白表达水平的变化,分析miR-23b-3p对靶基因的调控机制。结果生物信息学预测结合靶基因功能分析,选择与卵巢癌发生发展密切相关的Fas作为miRNA-23b的候选靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实miR-23b-3p可以直接靶定Fas基因的3’UTR。转染miR-23b-3p minics后,Fas mRNA表达水平无显著改变,但蛋白表达水平降低。结论在卵巢癌细胞SKOV3中,miR-23b-3p通过结合Fas基因3’UTR的结合位点负性调控其表达。

过表达Hsa-miR-23b-3p抑制CasKi人宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移及上皮间质转化

目的探讨miR-23b-3p对CasKi人宫颈癌细胞增殖、侵袭与迁移的影响。方法体外培养CasKi人宫颈癌细胞和HaCaT正常上皮细胞,采用实时定量PCR检测两种细胞miR-23b-3p的表达水平。采用脂质体转染miR-23b-3p模拟物(miR-23b-3p mimic)的方法建立外源性miR-23b-3p过表达的CasKi细胞,阴性对照组中转染无关序列;CCK-8法检测过表达miR-23b-3p后CasKi细胞的增殖,TranswellTM侵袭实验检测细胞的侵袭能力、TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测CasKi细胞的迁移能力;Western blot法检测神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、Snail、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达。结果与HaCaT细胞相比,CasKi细胞miR-23b-3p表达水平较低。与阴性对照组相比,转染miR-23b-3p mimic的CasKi细胞miR-23b-3p水平明显上调;miR-23b-3p表达上调后,细胞增殖能力减弱,PCNA及cyclin D1表达减少;同时,过表达miR-23b-3p后,CasKi细胞的侵袭及迁移能力均明显受抑制;同时增加E-cadherin蛋白的表达,而抑制vimentin、Snail和N-cadherin蛋白的表达。结论过表达miR-23b-3p抑制CasKi宫颈癌细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)。

儿童原发性肾病综合征患者尿液外泌体miR-23b-3p水平变化及其临床意义

目的检测尿液外泌体miR-23b-3p在儿童原发性肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)患者中的水平,评估其作为NS辅助诊断指标的临床价值。方法收集2017年3～11月在解放军东部战区总医院住院并确诊的98例NS患儿(NS组)和南京医科大学附属儿童医院95例年龄、性别相匹配的健康儿童(对照组)的晨尿标本及临床资料。实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法检测miR-23b-3p在尿液外泌体中的含量。应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)、相关性分析等评估其作为儿童NS诊断指标的临床价值。结果 miR-23b-3p在NS组尿液外泌体中的浓度明显高于对照组[13.44(4.47,31.40)fmol/L vs 3.94(2.76,7.15)fmol/L,差异有统计学意义,U=1 899,P<0.000 1],且在治疗缓解后显著下降[10.62(4.38,37.72)fmol/L vs 2.84(1.53,4.92)fmol/L,W=695,P<0.000 1]。miR-23b-3p诊断NS的ROC曲线下面积(AUC)为0.796(95%CI:0.734～0.858),敏感度为84.7%,特异度为64.2%。相关性分析显示,NS患儿尿液外泌体miR-23b-3p与血清总蛋白(r=-0.377)、清蛋白(r=-0.309)水平呈显著负相关,与血清总胆固醇(r=0.266)、三酰甘油(r=0.318)呈显著正相关,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。结论 miR-23b-3p在NS患儿尿液外泌体中的含量显著升高,且在治疗缓解后明显降低,有望作为儿童NS辅助诊断和治疗效果监测的潜在指标。

miR-23b-3p在皮肌炎血清中的表达与临床意义

目的:研究miR-23b-3p在皮肌炎(DM)患者血清中的表达水平,探讨其在DM中的临床意义。方法:收集2011年3月~2016年2月我院风湿免疫科住院的DM患者(活动期)血清49例,健康对照血清30例,提取血清总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测血清中miR-23b-3p相对表达量,分析与临床特征的相关性。结果:DM患者血清miR-23b-3p相对表达量(1.98±0.86)显著低于健康对照组(3.02±1.13,P<0.01),DM合并"技工手"患者血清miR-23b-3p表达水平显著低于未合并"技工手"患者(P<0.05)。相关性分析显示,miR-23b-3p与肌酸激酶(CK)呈负相关(r=-0.286,P<0.05),与乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)等实验室指标无相关性。结论:DM患者中miR-23b-3p表达下调可能通过多个环节参与DM的发病过程。

青藤碱通过miR-23b-3p/FGF9诱导人类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡

目的:研究青藤碱(SIN)对人类风湿关节炎(RA)成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人RA FLS,用100 mg/L的脂多糖(LPS)处理记为LPS组;3.2 mmol/L SIN和100 mg/L LPS共同处理细胞,记为LPS+SIN组;不作任何处理的细胞作为空白(blank)组。将miR-con、miR-23b-3p、si-con和si-成纤维细胞生长因子9(FGF9)转染至RA FLS中再用100 mg/L LPS处理,分别记为LPS+miR-con组、LPS+miR-23b-3p组、LPS+si-con组和LPS+si-FGF9组;将anti-miR-con、anti-miR-23b-3p、pcDNA和pcDNA-FGF9转染至RA FLS中,再用3.2 mmol/L SIN和100 mg/L LPS共同处理,分别记为LPS+SIN+anti-miR-con组、LPS+SIN+anti-miR-23b-3p组、LPS+SIN+pcDNA组和LPS+SIN+pcDNA-FGF9组。CCK-8法检测细胞活力;集落形成实验检测细胞的集落形成数;West⁃ern blot法检测FGF9、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白水平;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR检测miR-23b-3p和FGF9 mRNA的表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-23b-3p和FGF9的靶向关系。结果:SIN促进LPS诱导的RA FLS凋亡,抑制细胞增殖,上调miR-23b-3p表达,下调FGF9表达。miR-23b-3p靶向调控FGF9,过表达miR-23b-3p或沉默FGF9抑制LPS诱导的RA FLS增殖并促进细胞凋亡。干扰miR-23b-3p或过表达FGF9逆转了SIN对LPS诱导的RA FLS增殖和凋亡的影响。结论:青藤碱可通过miR-23b-3p/FGF9轴诱导RA FLS凋亡,抑制细胞增殖。

胆酸通过FXR／miR-23b-3p／HNF4途径下调载脂蛋白（a）表达

目的前期研究发现miR-23b-3p高效降HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达，本研究拟在基础上分析胆酸降Apo（a）效用与miR．23b．3p的关系，并检测胆酸调控miR．23b．3p表达的机制，分析miR一23b一3p作用靶基因。研究胆酸降Apo（a）作用新机制。方法首先用miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学在线工具对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因分析，然后验证胆酸对高表达Apo（a）细胞株HepG2的降Apo（a）效用的时间（0h、6h、12h、24h、48h）和量效（0、0．5、2、8、32mtg／L）关系，然后分析胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b一3p的关系，分析胆酸活化MAPK并上调miR-23b．3p表达作用，分析胆酸调控miR-23b．3p表达与FXR及MAPK的关系，分析FXR、MAPK结合转录miR一23b-3p的基因启动子情况，最后使用荧光素酶报告系统对miR-23b一3p与调控筛选调控LPA基因的转录因子HNF4进行靶基因验证实验。用Westernblot检测Apo（a）表达水平、p38MAPK及p-p38MAPK、实时定量PCR检测miR-23b一3p表达水平。结果miRanda、Targetscan、PITA三个生物信息学分析工具表明HNF4G可作为miR-23b-3p的靶基因，胆酸呈时间和剂量依赖性调控HepG2细胞Apo（a）的表达，以32mg／L和24h的作用效果最显著，48h作用效果下降，胆酸抑制Apo（a）表达与MAPK和miR-23b．3p有关，胆酸能活化MAPK并上调miR-23b．3p表达，胆酸调控miR-23b-3p表达与FXR及MAPK，FXR在转录miR-23b-3p的基因启动子区域有8个结合位点，未发现MAPK的结合位点，MAPK可能通过间接作用于转录miR-23b-3p的基因启动子区域而发挥下调miR-23b-3p作用。使用FXR拮抗剂抑制miR-23b-3p表达的效用要强于抑制MAPK，可能胆酸更多地通过FXR来介导其上调miR-23b．3p效用，而MAPK只是胆酸发挥效用的信号途径的一个分支，转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组，验证了HNF4G可作为miR-23b．3p的靶基因。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调HepG2细胞Apo（a）表达水平；胆酸降Apo（a）与FXR／miR-23b-3p／HNF4途径有关。

miR-23b-3p靶向XIAP调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的机制研究

目的:探讨微小RNA-23b-3p(miR-23b-3p)靶向X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:应用RT-qPCR检测体外培养的RA滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p和XIAP的表达水平。通过TargetScan预测分析miR-23b-3p与XIAP的靶向关系,并使用双萤光素酶报告基因实验进行验证。采用脂质体法将miR-23b-3p模拟物和抑制物转入细胞中,RT-qPCR法检测miR-23b-3p和XIAP表达水平的变化;CCK-8法和细胞流式术分别检测miR-23b-3p对细胞活力和细胞凋亡的影响;Western blot检测Ki67和Bcl-2蛋白表达量的变化。结果:类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中miR-23b-3p表达显著下调,XIAP表达显著上调(P<0.05)。转染miR-23b-3p模拟物促使XIAP表达显著下调(P<0.05),并且显著抑制细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05),同时Ki67和Bcl-2显著下调(P<0.05);转染miR-23b-3p抑制物的效果与之相反。结论:miR-23b-3p通过靶向XIAP抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖,促进其凋亡。