急性脑梗死患者血清miR-27b和miR-146a表达及其与颈动脉狭窄的相关性分析

目的 探讨急性脑梗死(ACI)患者血清miR-27b和miR-146a表达并分析其与颈动脉狭窄的相关性。方法 选取120例ACI患者作为观察组,再选取同期65名健康体检者作为对照组。根据颈动脉狭窄程度将ACI患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组、完全闭塞组。检测被试者血清miR-27b和miR-146a表达,分析ACI患者血清miR-27b和miR-146a的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-27b和miR-146a表达对ACI的诊断价值,再以Pearson相关性分析法分析血清miR-27b和miR-146a表达与颈动脉狭窄的相关性,行多因素Logistic回归分析探讨影响ACI发生的危险因素。结果 观察组患者血清miR-27b表达高于对照组,血清miR-146a表达低于对照组(P<0.01)。血清miR-27b和miR-146a表达对ACI诊断价值的ROC曲线显示,单独检测时血清miR-27b的敏感度最高,miR-146a的特异度最高,两者联合检测时曲线下面积可达0.986。不同颈动脉狭窄程度ACI患者血清miR-27b和miR-146a表达水平不同,其中轻度狭窄组miR-27b表达最低,miR-146a表达最高,而完全闭塞组miR-27b表达最高,miR-146a表达最低,各组间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清miR-27b表达与颈动脉狭窄程度呈正相关(r=0.775,P<0.01),血清miR-146a表达与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.622,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-27b、miR-146a表达为ACI患者发生中、重度颈动脉狭窄的影响因素(P<0.01)。结论 ACI患者血清miR-27b表达升高,miR-146a表达降低,可作为临床诊断ACI的潜在指标,且两者联合检测的价值高于单独检测。

miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及PPARα信号的作用机制

目的 研究miR-27b对心力衰竭大鼠心肌细胞自噬、心肌能量代谢及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α信号的作用机制。方法 清洁级SD健康雄性大鼠40只,随机分为4组,每组10只,由于建模时意外死亡3只,因此健康组10只、模型组9只,miR-27b-NC组9只、miR-27b组9只,miR-27b-NC组及miR-27b组于腹主动脉分别注射5μl(20 nmol/L)拮抗剂阴性对照、5μl(20 nmol/L)miR-27b拮抗剂,其余大鼠注射等体积生理盐水,1次/d,共4 w。苏木素-伊红(HE)染色及Masson染色观察大鼠心肌组织病理形态及纤维化,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-27b、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)mRNA、PPARα mRNA指标水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌细胞能量代谢指标,TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测微管相关轻链蛋白(LC)3Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin)-1、组织蛋白酶(Cath)D表达。结果 HE染色:健康组心肌细胞形态正常,结构清晰;模型组与miR-27b-NC组心肌细胞水肿并有大量炎性细胞浸润,此外还产生大量的成纤维细胞;miR-27b组与模型组相比,成纤维细胞增生及炎性细胞浸润减少。Masson染色:胶原纤维呈现蓝紫色,心肌细胞及肌纤维呈现红色。健康组心肌组织结构正常,心腔附近有少量胶原纤维;模型组与miR-27b-NC组胶原纤维显著增加;与模型组相比,miR-27b组胶原纤维增生有所减少。上述结果均提示建模成功。与健康组相比,模型组与miR-27b-NC组N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、游离脂肪酸(FFA)、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著升高,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著降低(P<0.05),在经过抑制miR-27b后,NT-proBNP、FFA、心肌细胞凋亡、LC3Ⅱ、Beclin-1、CathD、miR-27b水平显著降低,LC3Ⅰ、AMPK、PPARα水平显著升高(P<0.05)。结论 沉默miR-27b表达后可抑制心力衰竭大鼠心肌细胞自噬,减少心肌细胞凋亡,同时通过调控AMPK/PPARα通路改善心肌能量代谢水平,从而起到心保护的作用。

miR-27b/PPARγ2轴对小鼠胚胎成骨前体细胞增殖和成骨细胞分化的意义

背景:先前的研究证实了miR-27b在脂质水平的作用,可以控制多个对血脂异常有重要影响的基因,推测miR-27b可能通过靶向PPARγ2在骨质疏松症中发挥作用。目的:探讨miR-27b/PPARγ轴在地塞米松诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1细胞建立骨质疏松症细胞模型中的影响及相关作用机制。方法:体外地塞米松诱导MC3T3-E1细胞后,通过Lipofectamine^(■)2000转染miR-27b模拟物、miR-27b抑制剂、NC-模拟物、NC-抑制剂、siPPARγ2、siNC,使用二甲基亚砜处理作为对照。细胞诱导培养后,检测细胞活性、碱性磷酸酶活性以确定细胞成骨、分化水平;实时荧光定量PCR法和Western blot法检测成骨分化基因miR-27B、PPARγ2、Runx2、骨形态发生蛋白2和骨钙素的mRNA及蛋白表达水平;生信分析预测miR-27b下游靶基因,并用双荧光素酶基因报告实验验证。结果与结论:①地塞米松处理显著降低了MC3T3-E1细胞的活力和miR-27b表达水平;与二甲基亚砜相比,地塞米松处理在24和48 h显著抑制MC3T3-E1细胞的活力并显著下调了miR-27b的表达水平;②miR-27b可直接调控PPARγ2;与相应的NC相比,miR-27b模拟物显著上调了miR-27b的表达水平,而miR-27b抑制剂显著下调了miR-27b的表达水平;与相应的NC相比,PPARγ2 mRNA和相应蛋白质表达被miR-27b模拟物抑制,并被miR-27b抑制剂显著增强;③miR-27b过表达减弱了地塞米松抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;与二甲基亚砜+NC-mimic组相比,地塞米松显著抑制成骨细胞分化;而地塞米松介导的抑制作用则被miR-27b模拟物所逆转,细胞碱性磷酸酶活性和骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素蛋白表达水平部分恢复;④抑制miR-27b通过上调PPARγ2抑制MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化;miR-27b的敲除明显增加了PPARγ2的表达,并降低了细胞活力、成骨细胞分化、碱性磷酸酶活性以及骨形态发生蛋白2、Runx2和骨钙素的表达水平;PPARγ2可能是miR-27b的直接作用靶点。

血清miR-27b、Hcy评估老年重症心力衰竭患者随访1年预后的临床价值

目的 探讨血清miR-27b、同型半胱氨酸(Hcy)评估老年重症心力衰竭患者随访1年预后的临床价值。方法 前瞻性纳入86例老年重症心力衰竭患者,检测患者血清miR-27b、Hcy水平,并收集患者年龄、性别、饮酒吸烟史、既往病史、体质量指数及相关实验室检查资料。所有患者接受为期1年的跟踪随访,根据其预后情况分为预后不良组(n=23)和预后良好组(n=63),通过单因素分析对影响患者疾病预后的风险因素筛选,采用Logistic回归分析明确危险因素,并通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分别评价血清miR-27b、Hcy水平及联合检测对老年重症心力衰竭患者预后风险的预测价值。结果 随访1年后,23例(26.74%)预后不良。预后不良组左室射血分数(LVEF)、血清Hcy及miR-27b水平均较预后良好组明显偏高(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,LVEF数值偏低、血清Hcy水平及miR-27b水平偏高均是影响老年重症心力衰患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。ROC曲线显示,血清Hcy、miR-27b及两项指标联合检测的AUC分别为0.838(95%CI为0.721~0.955)、0.823(95%CI为0.694~0.952)、0.968(95%CI为0.925~0.999),联合诊断的AUC较各项指标单因子预测价值较高(P<0.05)。结论 血清Hcy、miR-27b水平均是影响老年重症心力衰竭患者预后不良的独立危险因素,且两项指标均对患者发生不良预后结局的预测效能较高,联合检测的预测价值更高。

miR-27b-3p靶向HOXB8调节口腔鳞癌耐药细胞的增殖、凋亡和顺铂耐药性

目的探究miR-27b-3p在口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)耐药细胞增殖、凋亡和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性中的作用及潜在的机制.方法RT-qPCR检测miR-27b-3p和HOXB8 mR-NA的表达;Western印迹分析HOXB8及耐药蛋白MRP1的表达;CCK-8分析细胞活力,克隆形成实验分析细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.miR-27b-3p和HOXB8之间的相互作用通过在线软件Targetscan预测并通过双荧光素酶报告基因分析证实.裸鼠异种移植模型测试miR-27b-3p在体内OSCC DDP耐药中的作用.结果miR-27b-3p在DDP耐药OSCC组织和OSCC细胞系中明显低表达,且在DDP耐药OSCC细胞系(CAL-27/DDP)中的表达明显低于正常OSCC细胞系(CAL-27)(P<0.05);而HOXB8 mRNA在DDP耐药OSCC组织和OSCC细胞系中明显高表达,在DDP耐药OSCC细胞系(CAL-27/DDP)中的表达明显高于正常OSCC细胞系(CAL-27)(P<0.05).miR-27b-3p模拟物可明显抑制CAL-27/DDP细胞活力、克隆形成能力和耐药蛋白MRP1的表达,促进细胞凋亡(P<0.05);而HOXB8过表达可部分逆转miR-27b-3p模拟物对CAL-27/DDP细胞增殖、凋亡以及耐药性的影响(P<0.05).HOXB8与miR-27b-3p存在靶向调控作用.瘤内注射miR-27b-3p agomir显著缓解了体内异种移植耐药细胞的生长,同时降低了HOXB8和MRP1的表达(P<0.05).结论miR-27b-3p可能通过靶向HOXB8调节OSCC耐药细胞的增殖、凋亡和DDP耐药性.

LncRNA HCP5调节miR-27b-3p/H2AFZ轴对口腔鳞状细胞癌增殖侵袭迁移的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)人类白细胞抗原复合物P5(HCP5)通过调节微小RNA(miR)-27b-3p/H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)轴对口腔鳞状细胞癌(OSCC)增殖、侵袭、迁移的影响。方法:收集2021年2月至2022年2月在本院行手术治疗的48例OSCC患者癌组织及邻近癌旁组织、OSCC细胞系(Tca-811、SCC-9、SCC-25、HN4)及人正常口腔角质形成细胞(hNOK),检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;取对数生长期Tca-811细胞,分为对照组、小干扰RNA阴性对照(si NC)组、干扰HCP5表达(si HCP5)组、si HCP5+抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、si HCP5+miR-27b-3p抑制物(miR-27b-3p inhibitor)组。双荧光素酶验证LncRNA HCP5与miR-27b-3p、miR-27b-3p与H2AFZ的靶向关系;qRT-PCR检测LncRNA HCP5、miR-27b-3p、H2AFZ mRNA表达水平;流式细胞仪及MTT法检测Tca-811细胞凋亡及增殖变化;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移变化;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、H2AFZ蛋白表达。结果:与hNOK细胞和癌旁组织比较,OSCC细胞和组织中LncRNA HCP5、H2AFZ mRNA表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。miR-27b-3p与LncRNA HCP5、H2AFZ均存在靶向关系。si HCP5组细胞凋亡率、cleaved caspase-3、miR-27b-3p表达较si NC组、对照组升高(P<0.05),OD570(24h、48h)、侵袭、迁移细胞数及CyclinD1、MMP-2、HCP5、H2AFZ表达下降(P<0.05);抑制miR-27b-3p表达逆转了干扰HCP5对Tca-811细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05)。结论:干扰LncRNA HCP5可通过靶向上调miR-27b-3p、抑制H2AFZ表达,进而抑制OSCC的增殖、侵袭、迁移。

长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控RA-FLS细胞生物学功能机制研究

目的研究长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)细胞生物学功能机制。方法选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎(RA)患者40例作为观察组,同期行膝关节手术的健康创伤患者40例作为对照组开展研究。分别采集观察组和对照组研究对象的膝关节滑膜组织中进行培养,培养成功之后将RA-FLS细胞根据免疫荧光分为对照组以及观察组。其中观察组待细胞汇合度达至80%时转入si-NEAT1,对照组则转入对照组-siRNA。比较两组NEAT1、miR-27b的表达,RA-FSL细胞生物学功能,炎症因子表达水平,并行Pearson相关性分析。结果观察组NEAT1、miR-27b相对表达量分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组RA-FSL细胞增殖率、迁移细胞数、侵袭细胞数分别相较于对照组均更低,而细胞凋亡率相较于对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析发现:NEAT1、miR-27b与IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均呈正相关(P<0.05)。结论长链非编码RNA NEAT1靶向miR-27b调控炎症因子,进而影响RA-FLS细胞生物学功能。

miR-27b-3p通过靶向抑制HIF1AN调控颈脊髓损伤后骨质疏松症大鼠的成骨分化

目的 探讨miR-27b-3p在颈脊髓损伤后骨质疏松症(CSCI-OP)发展中的作用与机制。方法 定量PCR检测30例CSCI-OP患者及50例健康体检者外周血中miR-27b-3p的表达。BMP2诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨,采用定量PCR检测MSCs中miR-27b-3p和成骨相关基因的mRNA水平。使用miR-27b-3p mimic过表达或使用miR-27b-3p inhibitor下调miR-27b-3p后检测miR-27b-3p的mRNA水平,探讨miR-27b-3p对MSCs成骨相关基因的调控作用。用茜素红染色检测过表达miR-27b-3p后MSCs的成骨能力。双荧光素酶报告基因检测验证miR-27b-3p与HIF1AN的结合情况。通过挽救实验验证miR-27b-3p是否可以通过靶向HIF1AN调控骨质疏松症的发展。建立CSCI-OP大鼠模型验证miR-27b-3p和HIF1AN的表达,micro-CT观察miR-27b-3p mimic对CSCI-OP大鼠股骨组织骨量的影响。结果 CSCI-OP组患者外周血中miR-27b-3p的表达低于对照组(P<0.05)。miR-27b-3p的表达随着成骨诱导时间的延长而上调(P<0.05)。过表达miR-27b-3p可促进MSCs成骨相关基因ALP、Runx2、OPN的mRNA表达(P<0.05)。MSCs过表达miR-27b-3p后,钙化结节数量增加(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测证实HIF1AN与miR-27b-3p具有多个结合位点。HIF1AN的mRNA和蛋白水平均受到miR-27b-3p的负调控。挽救实验表明,过表达HIF1AN抑制了miR-27b-3p对MSCs成骨的促进作用(P<0.05)。CSCI-OP大鼠中HIF1AN的表达上调(P<0.05),体内micro-CT观察到miR-27b-3p mimic促进了CSCI-OP大鼠ALP、Runx2和OPN的表达,增加了BV/TV(P<0.05),而这些作用都被HIF1AN过表达所抑制(P<0.05)。结论 miR-27b-3p在骨质疏松症患者外周血中高表达,其可通过靶向抑制HIF1AN促进成骨分化并抑制CSCI-OP的发生和进展。

脑胶质瘤患者血清miR-27b-3p水平与术后复发的相关性分析

目的分析脑胶质瘤患者血清miR-27b-3p水平与术后复发的相关性。方法选取安徽医科大学第二附属医院及安徽省立医院于2020-01—2022-12接受手术治疗的脑胶质瘤患者共65例为研究对象,同期收治的颅脑损伤患者25例纳入对照组。脑胶质瘤患者手术完成2周后测定患者血清miR-27b-3p水平。术后随访6个月,将脑胶质瘤患者分为复发组(n=17)及未复发组(n=48),分析脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素及血清miR-27b-3p在术后复发中的预测价值。结果脑胶质瘤组患者血清miR-27b-3p表达水平(4.57±1.38)显著低于颅脑损伤组(9.46±1.97)(P<0.001)。肿瘤直径≥4.5 cm、WHO分级Ⅲ~Ⅳ级、手术未完全切除及miR-27b-3p低表达是脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。肿瘤直径≥4.5 cm及WHO分级Ⅲ~Ⅳ级患者血清miR-27b-3p水平显著低于肿瘤直径<4.5 cm及WHO分级Ⅰ~Ⅱ级的患者(P<0.05)。血清miR-27b-3p对脑胶质瘤患者术后复发具有较高的预测价值,其曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI=0.7263~0.9257;P<0.001)。当血清miR-27b-3p水平低于4.738时,脑胶质瘤患者具有较高的术后复发风险。结论脑胶质瘤患者血清miR-27b-3p水平与颅脑损伤组相比显著降低,且其可能通过调控胶质瘤生长及转移影响患者术后复发。早期检测血清miR-27b-3p水平对脑胶质瘤患者术后复发具有一定的预测价值。

胃癌组织内miR-34a与miR-27b表达及其抑制胃癌生长与血管生成的机制

目的探究胃癌组织中miR-34a与miR-27b表达水平及其对胃癌生长和血管生成的影响。方法通过实时荧光定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织中miR-34a和miR-27b表达,免疫组织化学染色检测胃癌组织及癌旁组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达;通过脂质体介导法将miR-34a mimic、miR-27b mimic及对应的阴性对照转染至胃癌细胞SGC-7901,CCK-8法和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液VEGF与血管内皮生长因子受体(VEGFR)2水平,荧光素酶报告系统检测miR-34a、miR-27b与VEGF的靶标关系,Western印迹检测细胞中含激酶插入区受体(KDR)、胎肝激酶(FLK)-1蛋白表达,静脉内皮细胞成管实验检测血管形成能力。结果胃癌组织中miR-34a、miR-27b相对表达水平均低于癌旁组织,而胃癌组织VEGF阳性表达率高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.01);与空白对照组比较,SGC-7901细胞转染miR-34a mimic、miR-27b mimic后,细胞增殖活性下降,细胞迁移与侵袭数目均减少,细胞上清液中VEGF与VEGFR2含量均降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);miR-34a、miR-27b分别与VEGF 3′-UTR在特定区域存在碱基互补现象,且负调控VEGF表达,细胞中KDR、FLK-1蛋白表达较空白对照组也明显降低,同时,经过miR-34a mimic与miR-27b mimic细胞上清液处理的细胞形成小管数目均减少,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论miR-34a与miR-27b在胃癌组织中表达下降,两者均能抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭及血管形成,从而影响胃癌进程,其机制可能与靶向调控VEGF表达相关。

LncRNA GHET1靶向miR-27b对胆囊癌细胞增殖、凋亡及转移的影响

目的探讨GHET1对胆囊癌细胞生物学行为的影响及其对miR-27b的调控机制。方法采用实时荧光定量P C R检测50例胆囊癌样本中GHET1与mi R-27b的表达情况。利用s i-N C载体、s iGHET1载体、miR-27b抑制物以及si-GHET1载体+miR-27b抑制物转染至SGC-996细胞,并分别作为对照组、GHET1干扰组、miR-27b干扰组以及GHET1+miR-27b干扰组。采用MTT法、流式细胞术以及Transwell实验检测各组细胞增殖、凋亡以及转移情况,以荧光素酶报告基因实验验证GHET1对miR-27b的调控作用。结果GHET1在癌组织中的表达较癌旁组织升高,而miR-27b在癌组织中的表达较癌旁组织降低,GHET1与miR-27b表达呈负相关(P<0.05)。GHET1表达与TNM分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。高GHET1表达与胆囊癌患者预后较差相关(P<0.05)。与对照组比较,GHET1干扰组细胞增殖能力降低、凋亡率升高且细胞转移数量减少,而miR-27b干扰组细胞增殖能力升高、凋亡率降低且细胞转移数量增加(P<0.05)。与GHET1干扰组比较,GHET1+miR-27b干扰组细胞增殖能力升高、凋亡率降低且细胞转移数量增加(P<0.05)。GHET1可以海绵吸附miR-27b并抑制其表达。结论GHET1靶向miR-27b促进胆囊癌细胞增殖和转移并抑制细胞凋亡,提示GHET1/miR-27b轴在胆囊癌进展中具有一定的作用。

关岭牛MSTN基因3'-UTR与bta-miR-27b的靶向验证

【目的】明确关岭牛bta-miR-27b与肌肉生长抑制素基因(MSTN)的结合位点及靶向调控关系,为通过调控miRNA改良关岭牛产肉量提供理论依据,也为贵州地方黄牛分子遗传改良工作提供新的切入点。【方法】通过TargetScan预测牛MSTN基因3'端非翻译区(3'-UTR)的潜在miRNA结合区域及互作miRNA,对比关岭牛与不同关岭牛杂交品种的生理表型及MSTN基因和3'-UTR端miRNA表达差异,并分析bta-miR-27b在不同关岭牛杂交群体中的靶位点特异性。将MSTN基因3'-UTR序列野生型(WT)和3'-UTR序列突变型(MUT)分别克隆至pMIR-REPORT Luciferase(H306)载体构建重组双荧光素酶报告基因载体,与bta-miR-27b共转染293T细胞以验证bta-miR-27b与MSTN基因的作用关系,并利用实时荧光定量PCR验证bta-miR-27b对MSTN基因表达的影响。【结果】在牛MSTN基因3'-UTR端发现7个miRNA结合位点;关岭牛各系杂交品种的3个miRNA(bta-miR-27a-3p、bta-miR-27b和bta-miR-128)相对表达量均极显著高于关岭牛(P<0.01,下同),MSTN基因相对表达量极显著低于关岭牛,体质量、体高、体斜长、胸围等生长指标却明显优于关岭牛。关岭牛及其杂交牛MSTN基因3'-UTR端的bta-miR-27b结合区域均无突变、无缺失;MSTN-3'-UTR(WT)与bta-miR-27bmimics共转染293T细胞后其相对荧光值下降53.80%,极显著低于MSTN-3'-UTR(MUT)+bta-miR-27bmimics共转染;转染bta-miR-27b mimics后,bta-miR-27b在关岭牛原代成肌细胞株(N2)中成功超表达,而MSTN基因相对表达量呈极显著下调趋势,表明bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。【结论】bta-miR-27b与MSTN基因的结合区域位于3'-UTR端第62~69位碱基处,且靶位点保守性较高。bta-miR-27b对MSTN基因有很强的靶向调控作用,表现为bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。

miR-27b在恶性肿瘤发生发展中作用的研究进展

微RNA(miRNA/miR)-27b是一个位于染色体9q22.1上的C9orf3基因内部的miRNA,是近年来新发现的同时具有抑癌功能和促癌功能的miRNA,可以通过调控细胞周期、血管生成、上皮-间充质转化等多种机制,影响肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌等肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、肿瘤干性和化疗耐药性等生物学过程。然而,miR-27b在肿瘤发生和发展中的具体机制尚未阐明,因此miR-27b在恶性肿瘤进展中的作用及其在肿瘤临床诊断和治疗中应用将成为未来的研究方向。

lncRNA NEAT1通过调节miR-27b-3p/SP1轴对心房颤动大鼠心肌纤维化的影响

[目的]探讨lncRNA NEAT1通过调节miR-27b-3p/特异性蛋白1(SP1)轴对心房颤动(AF)大鼠心肌纤维化的影响。[方法]54只大鼠按照随机数字表法分成6组(n=9):假手术组、AF组、AF+shControl组、AF+shNEAT1组、AF+shNEAT1+anti-miR-Control组、AF+shNEAT1+anti-miR-27b-3p组。转染上述慢病毒载体2周后,采用连续7天尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙的方法进行AF大鼠造模。AF的发生率、持续时间采用心电图记录;RT-qPCR检测心房组织内NEAT1、miR-27b-3p、SP1及纤维化相关基因(TGF-β1、CTGF、COLⅠ、COLⅢ)的表达水平;荧光素酶报告基因检测miR-27b-3p与NEAT1、miR-27b-3p与SP1的靶向关系;TUNEL染色观察心房组织心肌细胞凋亡;Masson染色观察心房组织心肌纤维化;Western blot检测心房组织中SP1、纤维化相关基因的蛋白表达水平。[结果]与AF组比较,AF+shNEAT1组AF的发生率和持续时间降低,心肌纤维化和细胞凋亡减轻,TGF-β1、CTGF、COLⅠ、COLⅢ的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。NEAT1负调控miR-27b-3p水平。沉默miR-27b-3p可逆转shNEAT1对AF大鼠心肌细胞凋亡和心肌纤维化的抑制作用。miR-27b-3p直接靶向SP1并抑制其mRNA和蛋白表达(P<0.05)。NEAT1通过下调miR-27b-3p促进SP1的表达。[结论]NEAT1下调可缓解AF和AF诱导的心肌纤维化,其调控机制与调节miR-27b-3p/SP1轴有关。

基于Nrf2/ARE信号通路探讨抑制miR-27b对HICH大鼠模型神经细胞凋亡和炎症因子的影响

目的研究miR-27b通过核因子-E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路影响高血压性脑出血(HICH)大鼠模型神经细胞凋亡和炎症因子产生。方法HICH大鼠共分为空白(SM)组、对照(HICH)组、miR-27b抑制(HICH+ART)组、miR-27b阴性对照(HICH+AR)组、miR-27b阳性对照(HICH+TBHQ)组,荧光素酶报告分析Nrf2是否为miR-27b的靶基因,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组miR-27b和Nrf2表达,Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及IL-6含量,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测神经细胞活力及凋亡情况。结果HICH组miR-27b和Nrf2随着时间表达趋势相反,两者存在明显的负相关性(P<0.05)。与SM组相比,HICH组、HICH+AR组Bax蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平含量显著升高,Bcl-2蛋白量显著降低(P<0.05);HICH+ATR组、HICH+TBHQ组Bax蛋白表达、TNF-α、IL-1β、IL-6水平含量显著降低,Bcl-2蛋白量显著升高(P<0.05)。HICH+ATR组、HICH+TBHQ组的细胞活力显著高于HICH组及HICH+AR组(P<0.05),且细胞凋亡数目显著小于HICH组及HICH+AR组(P<0.05)。结论通过抑制miR-27b的表达,增加Nrf2的表达,促使Bcl-2蛋白过表达和Bax蛋白低表达,从而减少了HICH大鼠神经细胞的凋亡,缓解了大鼠炎症反应的发生。

心肌细胞过表达miR-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤

以往的miRNA芯片研究结果显示,miR-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究miR-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性-肌球蛋白重链(-MHC)启动子(5.5 kb)控制下过表达miR-27b的转基因小鼠。通过Real-time PCR检测,发现miR-27b前体和成熟体表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高。miR-27b转基因小鼠不仅出现心肌肥厚,还表现出明显的心肌纤维化。进一步研究表明心肌纤维化的关键调节分子金属基质蛋白酶13(MMP13)是miR-27b的靶分子,在miR-27b转基因小鼠中MMP13显著下调,胶原分子I和III则显著上调。此外,还发现miR-27b转基因小鼠会出现心脏超微结构的损伤。以上研究结果表明,miR-27b可能通过抑制MMP13促进心肌纤维化。

miR-27b及其靶基因PPARγ在肌内和皮下脂肪细胞中的差异表达分析

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)在肌内和皮下脂肪细胞中的差异表达及其与脂质差异沉积的关系,并从miRNAs角度阐述PPARγ基因差异表达的机制。[方法]用油红O染色法检测肌内前体脂肪细胞与皮下前体脂肪细胞的分化聚脂能力;采用qRT-PCR与Western blot检测PPARγ在肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞中的表达水平;通过生物信息学预测靶向PPARγ的miRNAs,利用qRT-PCR检测候选miRNAs在肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞中的表达水平;用双荧光素酶报告系统鉴定候选miRNAs与PPARγ的靶向性。[结果]肌内前体脂肪细胞的分化聚脂能力显著高于皮下前体脂肪细胞(P<0.05);PPARγ的mRNA和蛋白在肌内脂肪细胞中的表达水平显著高于其在皮下脂肪细胞中的表达量(P<0.05);生物信息学预测得知miR-130a、miR-130b、miR-128、miR-301、miR-27a和miR-27b可以靶向PPARγ,其中miR-27a与miR-27b在肌内脂肪细胞中的表达量显著低于其在皮下脂肪细胞中的表达量(P<0.05);荧光素酶活性分析表明,miR-27b可以显著抑制PPARγ的荧光活性。[结论]在体外,与皮下前体脂肪细胞相比,肌内前体脂肪细胞具有更强的分化能力。miR-27b在两种脂肪细胞中的差异表达可导致靶基因PPARγ的差异表达,进而引起肌内前体脂肪细胞与皮下前体脂肪细胞分化能力的差异。

miR-27b在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制

目的探讨mi R-27b在雌激素受体(ER)阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制。方法通过反转录实时定量PCR测定mi R-27b的表达。用双荧光素酶报告和蛋白质印迹实验验证mi R-27b对HMGB3的靶向调控作用。在他莫昔芬敏感(Tam S)或耐药(Tam R)的MCF-7细胞中过表达mi R-27b或敲减HMGB3后测定细胞活力,分析上皮和间质标志物的表达,检测细胞侵袭力。结果 Tam R MCF-7细胞中mi R-27b的水平约为Tam S MCF-7细胞的20%。过表达mi R-27b增加了4-羟基他莫昔芬(4-OHT)对Tam R MCF-7细胞的活力抑制。Tam S与Tam R细胞在mi R-27b过表达后,穿膜细胞数目均明显减少。在Tam R MCF-7细胞中,转染mi R-27b mimics增加了约3倍的E-cadherin表达,同时也降低了约70%的N-cadherin表达。mi R-27b可以结合预测的HMGB3 3′非翻译区(UTR)结合位点并降低HMGB3在蛋白水平的表达。HMGB3敲减和mi R-27b过表达具有类似的生物学功能。结论 mi R-27b可以通过抑制HMGB3的表达抑制乳腺癌细胞上皮间质转化并增强乳腺癌细胞他莫昔芬敏感性。

血清miR-27b在老年左心室肥厚病人中的表达及诊断意义

目的探讨血清miR-27b在老年左心室肥厚(LVH)病人中的表达和诊断意义。方法收集2015~2016年门诊老年高血压病人,以心超左心室质量指数(LVMI)为"金标准"诊断LVH,纳入150例LVH病人,150例单纯高血压病人;另选100例无心血管疾病老年人作为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应方法检测血清中miR-27b的表达,并进行组间比较;应用受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27b对LVH的诊断价值。结果与对照组和高血压组比较,LVH组的miR-27b表达显著增高(P<0.05)。miR-27b鉴别老年高血压病人发生LVH的ROC曲线下面积为0.818,敏感度为79.1%,特异度为70.3%;miR-27b鉴别老年人发生LVH的ROC曲线下面积为0.885,敏感度为91.0%,特异度为73.0%。结论 miR-27b在老年LVH病人中表达增高,为筛查LVH提供了新的切入点。

大鼠肝再生过程中miR-27b与Tmub1表达相关性研究

目的探讨miR-27b与Tmub1在大鼠70%肝大部分切除术肝脏再生过程中的表达相关性。方法将SD雄性大鼠(180±20)g,随机分为实验组(肝部分切除术,partial hepatectomy,PH)和假手术组(剖腹探查手术,exploratory laparotomy),依次提取0、12、24、48及72 h原代肝细胞并留取组织标本,利用real-time PCR检测不同时间段肝脏内miR-27b与Tmub1 m RNA的量,并利用Western blot检测不同时间段肝脏内Tmub1蛋白含量,从而分析出miR-27b与Tmub1蛋白表达的时间相关性;将miR-27b模拟物转染入肝细胞,采用荧光素酶报告基因检测系统观察miR-27b对Tmub1表达的影响。结果肝切除12、24、48及72 h后PH组miR-27b表达较假手术组均显著下降(P<0.05),而该相同时相点Tmub1 m RNA及蛋白水平显著增高(P<0.05);改变miR-27b的表达后,含Tmub1基因序列的报告基因荧光素酶活性明显下降(P<0.05)。结论肝再生过程中miR-27b与Tmub1的表达呈负相关,miR-27b可能参与了Tmub1的表达调控过程。