胃癌患者血清miR-300的表达及临床意义

目的探讨胃癌患者血清中miR-300的表达水平及miR-300作为胃癌诊断标记物的可能性。方法采用实时定量RT-PCR方法检测25例胃癌患者及15例健康志愿者血清中miR-300的表达水平;采用全自动化学发光免疫分析法,检测上述标本的血清癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、癌抗原199(CA199)及癌抗原153(CA153)水平。结果 25例胃癌患者miR-300表达水平是正常人的23.4倍,两者差异有统计学意义(=0.024);胃癌患者血清CEA、CA125、CA199及CA153水平显著高于对照组(均<0.05);在胃癌的诊断中miR-300的敏感性比CEA、CA125、CA199及CA153高,但特异性较低。结论血清miR-300在胃癌中的表达水平高于正常人,对于胃癌的诊断具有一定价值。

miR-300通过负向调控垂体肿瘤转化基因1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭和转移

目的研究miR-300及垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)对骨肉瘤侵袭转移的影响,探讨引起骨肉瘤侵袭转移的分子机制。方法Western blot检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中PTTG1的表达情况,并检测转染敲低PTTG1质粒后细胞的转染效率;Transwell侵袭实验和CCK8实验检测敲低PTTG1及过表达miR-300对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响;网上预测并筛选与PTTG1互补结合的microRNAs(miRNAs);qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中miR-300的表达情况;Western blot检测转染过表达miR-300质粒后PTTG1在骨肉瘤细胞MG63的表达情况;双荧光素酶实验检测miR-300和PTTG1的靶向结合情况;Transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-300和过表达PTTG1质粒共转后对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响。结果PTTG1在骨肉瘤细胞MG63中表达较高(P=0.0002);敲低PTTG1可抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭(P=0.0002)和增殖(P=0.0039)能力;网上预测软件预测可能与PTTG1互补结合的miRNAs,NCBI数据库下载数据集分析确定研究对象为miR-300;qRT-PCR结果表明miR-300在骨肉瘤细胞MG63中表达降低(P=0.0004);采用过表达质粒过表达骨肉瘤细胞MG63中的miR-300,qRT-PCR结果提示转染成功(P<0.0001);Western blot发现过表达miR-300后PTTG1的表达明显降低(P=0.0007);双荧光素酶实验结果显示miR-300可与PTTG1靶向结合(P=0.0010);细胞共转实验显示过表达PTTG1可逆转miR-300对骨肉瘤细胞侵袭(P=0.0003)和增殖(P=0.0077)能力的影响。结论miR-300通过靶向结合PTTG1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭转移能力。

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。

miR-300对人卵巢癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的:研究miR-300对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢正常上皮细胞及卵巢癌细胞中miR-300的表达水平和miR-300 siRNA的沉默效果;CCK-8法检测沉默miR-300对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测沉默miR-300对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响。结果:miR-300在卵巢癌细胞中的表达显著高于卵巢正常上皮细胞;miR-300 siRNA可有效沉默卵巢癌细胞中miR-300的表达;沉默miR-300的表达可以明显抑制卵巢癌细胞的增殖能力,增强卵巢癌细胞的凋亡能力,并使卵巢癌细胞的周期阻滞于G_1期。结论:miR-300在卵巢癌细胞的增殖、凋亡和周期过程中起着重要的调控作用。

急性肺损伤患者血浆miR-221及miR-300表达水平及与预后相关性分析

目的探讨急性肺损伤(ALI)患者血浆miR-221及miR-300表达水平及其与预后相关性。方法选取2016年1月至2019年6月该院收治的ALI患者137例,根据ALI患者生存情况分为存活组(n=90)和死亡组(n=47)。采用急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分标准将ALI患者分为低中危组(n=74)和高危组(n=63)。采用实时荧光定量PCR检测各组血浆miR-221及miR-300表达水平。应用多因素Logistic回归分析ALI患者死亡的危险因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血浆miR-221及miR-300表达水平对ALI患者死亡的预测价值。结果死亡组血浆miR-221及miR-300表达水平均明显高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。高危组血浆miR-221、miR-300表达水平及病死率均明显高于低中危组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血浆miR-221(OR=3.270,95%CI:2.247~7.115)及miR-300(OR=2.683,95%CI:1.715~6.207)表达水平升高是ALI患者死亡的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆miR-221及miR-300表达水平预测ALI患者死亡的最佳截断值分别为2.80、1.73,二者联合预测ALI患者死亡的曲线下面积(0.907,95%CI:0.858~0.974)最大。结论血浆miR-221及miR-300表达水平升高与ALI患者预后不良相关,且其是ALI患者死亡的独立危险因素,二者联合对预测ALI患者死亡具有一定的价值。

miR-300在浆液性卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义

目的:探讨miR-300在浆液性卵巢癌患者血清中的表达及其临床意义。方法:收集卵巢癌患者、良性卵巢肿瘤患者及健康妇女各57例的血清标本,提取血清总RNA,通过实时定量PCR检测血清miR-300的表达水平,并绘制ROC曲线;采用χ2检验miR-300的表达水平与卵巢癌患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier法分析患者5年总体生存率之间的关系。结果:卵巢癌患者血清中miR-300的表达水平显著高于良性卵巢肿瘤患者及健康对照患者,miR-300ROC曲线下面积0.812(95%CI:0.761-0.911),灵敏度为84.6%,特异度为85.3%。血清miR-300的表达水平与浆液性卵巢癌患者的临床分期密切相关(P=0.0018),而与年龄(P=0.792)及淋巴结分期(P=0.793)无显著相关性。血清miR-300高表达的卵巢癌患者5年总体生存率要显著低于血清miR-300低表达患者。结论:浆液性卵巢癌患者血清中miR-300表达水平增高,为浆液性卵巢癌的临床诊断及预后判断提供了重要参考。

miR-300通过靶向BRD7对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨miR-300通过靶向溴含蛋白质(BRD)7对肝癌细胞增殖与侵袭影响的机制。方法将miR-300及对照分别转染入肝癌细胞系HepG 2和Hep3b进行CCK-8增殖实验和Matrigel侵袭实验,观察miR-300对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹验证miR-300靶向下调BRD7表达。结果 CCK-8增殖实验和Matrigel侵袭实验发现,与转染阴性对照(NC)组相比,转染miR-300 mimic能够促进肝癌细胞增殖和侵袭。荧光素酶报告实验和Western印迹实验发现,miR-300可以靶向下调BRD7的表达,且BRD7参与调节上述过程。结论 miR-300通过靶向下调BRD7促进肝癌细胞增殖和侵袭过程。

miR-300 siRNA沉默对博来霉素诱导的大鼠急性肺损伤的修复作用及作用机制分析

目的研究微小RNA-300(miR-300)小干扰RNA(siRNA)沉默对博来霉素诱导的大鼠急性肺损伤的修复作用及作用机制。方法选取雄性SD大鼠32只,随机选取8只为正常组,其余24只建立博来霉素诱导的急性肺损伤模型,随机分为模型组、对照组、沉默组各8只。荧光定量PCR检测miR-300表达,统计大鼠肺功能,双抗体夹心法检测炎症因子水平,免疫印迹检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)通路蛋白表达。结果与正常组比较,其他三组大鼠Ri、Re、IL-6、TNF-α、IL-1β、Nrf2、HO-1水平较高,Cdyn水平较低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,沉默组、对照组Ri、Re、IL-6、TNF-α、IL-1β、Nrf2、HO-1水平较低,Cdyn水平较高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,沉默组Ri(12.36±2.26)%、Re(13.58±3.59)%、IL-6(27.59±7.59)ng/L、TNF-α(54.95±5.59)ng/L、IL-1β(17.96±3.52)ng/L、Nrf2(0.36±0.10)、HO-1(0.38±0.09)水平较低,Cdyn(24.59±6.51)%水平较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-300 siRNA沉默能提高博来霉素诱导急性肺损伤的大鼠模型的修复作用,改善大鼠肺功能,抑制炎症反应,其作用机制可能与Nrf2、HO-1通路有关。

miR-300通过下调ROCK1降低肝癌细胞增殖和分化的研究

目的探讨miR-300是否通过下调ROCK1来降低肝癌HepG2和Huh-7细胞的增殖和分化能力。方法RT-qPCR检测肝癌组织和细胞中miR-300和ROCK1的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和Huh-7,给予miR-300模拟物转染后,RT-qPCR和Western Blot检测细胞ROCK1蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞Sub-G0/G1比值。结果RT-qPCR结果表明:与正常肝组织相比,肝癌组织和肝癌细胞中miR-300的表达水平明显降低(P<0.001),而ROCK1的表达水平明显增加(P<0.001)。与Scrambled Control相比,Western Blot和RT-qPCR结果表明miR-300 mimic组的ROCK1的表达水平明显降低(P<0.001);MTT结果表明miR-300 mimic组的细胞增殖率明显降低(P<0.001);流式细胞术结果表明miR-300 mimic组的Sub-G0/G1比值水平明显增加(P<0.001)。结论miR-300通过下调ROCK1降低肝癌HepG2和Huh-7细胞的增殖和分化能力。

MiR-300对骨肉瘤细胞增殖与凋亡作用研究

目的骨肉瘤具有局部高度侵袭能力以及快速转移潜能,因而致死率较高。研究指出,miR-300的表达异常与多种肿瘤的发病相关。miR-300对骨肉瘤细胞是否存在调控作用却属未知。本研究探讨miR-300对骨肉瘤细胞Saos-2增殖与凋亡调控的作用。方法将miR-300转染进骨肉瘤细胞Saos-2中,实现miR-300在Saos-2细胞内的高表达。通过荧光定量PCR测定miR-300在细胞内的表达水平;分别采用MTT活细胞测试,细胞周期实验和克隆形成实验检测骨髓瘤细胞的增殖情况;通过蛋白质印迹法测定Bcl-2、Bax和Bak,裂解型Caspase-3蛋白水平来鉴定细胞凋亡。结果转染miR-300的Saos-2细胞,其miR-300表达量为对照组的(10.23±1.04)倍,t=3.613 8,P=0.000 6。MTT实验结果显示,在转染后24和48h,miR-300组的Saos-2相对活细胞百分比相对对照组分别为[(174.35±28.46)%,t=2.219,P=0.03]和[(225.73±24.62)%,t=2.738,P=0.008]。miR-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为39.42%,低于对照组的47.58%,t=2.366,P=0.021;而处在G2期的细胞百分比为19.12%,显著高于对照组的10.55%,t=2.987,P=0.004。miR-300组Saos-2细胞克隆形成率为(52.53±30.21)%,显著高于对照组的(24.67±2.05)%,t=2.711,P=0.008 6。miR-300组Saos-2细胞中Bax、Bak和裂解型Caspase-3表达水平分别为对照组的(0.25±0.02)倍(t=2.785,P=0.007)、(0.31±0.03)倍(t=3.223,P=0.002)和(0.36±0.03)倍(t=3.006,P=0.003 8),差异有统计学意义。Bcl-2蛋白水平为对照组的(6.32±0.57)倍,t=3.218,P=0.002。转染miRZip lent-shMiR-300的Saos-2细胞,其miR-300数量为对照组的(0.28±0.03)倍,t=3.531,P=0.000 78。转染24h后,miR-300组Saos-2相对活细胞数为对照组的(64.46±5.32)%,t=2.324,P=0.024;48h后为对照组的(48.14±4.38)%,t=3.009,P=0.004。miR-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为55.71%,高于对照组的46.78%,t=2.108,P=0.039;处在G2期的细胞百分比为2.81%,低于对照组的11.46%,t=3.224,P=0.002。miR-300组的Saos-2细胞的克隆形成率为(17.63±3.89)%,显著低于对照组的(26.84±2.94)%,t=2.989,P=0.004。miR-300组Saos-2细胞中Bax表达水平为对照组的(6.25±4.23)倍,t=3.138,P=0.002 6;Bak表达水平为对照组的(6.03±4.27)倍,t=3.395,P=0.001 2;裂解型Capase-3表达水平为对照组的(5.35±0.37)倍,t=3.017,P=0.003 7;而Bcl-2蛋白水平为对照组的(0.36±0.02)倍,t=2.769,P=0.007 4。结论 miR-300在骨肉瘤细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用,抑制miR-300表达可以一定程度上减少骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,为骨肉瘤的病理机制研究提供了新研究方向。

miR-300-3p通过调控细胞自噬减轻缺氧/复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的研究

目的探究miR-300-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导H9c2大鼠心肌细胞损伤的影响及其机制。方法将H9c2细胞分成对照组、miR-NC组和miR-300-3p组,miR-NC组转染miR-NC阴性对照,miR-300-3p组转染miR-300-3p模拟物(mimics)以过表达miR-300-3p。对照组于正常条件下培养,miR-NC组和miR-300-3p组在转染24 h后进行缺氧24 h/复氧6 h的处理。用细胞计数试剂法检测心肌细胞活力,用乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞活性,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、选择性自噬接头蛋白(P62)、Bcl-2同源结构域蛋白(Beclin-1)和微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的表达水平。结果H/R处理后,miR-300-3p组、miR-NC组和对照组的细胞活力分别为(52.21±3.77)%,(34.27±3.21)%和100.00%,LDH相对释放量分别为1.92±0.25,3.05±0.37和1.00,细胞凋亡率分别为(26.10±3.70)%,(37.10±7.70)%和(4.70±0.90)%,Bcl-2蛋白相对表达水平分别为0.66±0.07,0.34±0.10和1.00,Bax蛋白相对表达水平分别为0.43±0.07,1.47±0.12和1.00,P62蛋白相对表达水平分别为1.14±0.20,2.20±0.23和1.00,Beclin-1蛋白相对表达水平分别为2.55±0.28,0.66±0.12和1.00,LC3蛋白相对表达水平分别为3.12±0.37,0.73±0.10和1.00。miR-300-3p组的上述指标与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-NC组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-300-3p可以抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与激活细胞自噬有关。

MicroRNA-300在胆管癌患者血清中的表达及其临床意义

目的探讨microRNA-300(mi R-300)在胆管癌患者及健康对照血清中的表达及其在诊断和判断预后方面的临床价值。方法选取107例胆管癌患者和107例健康对照的血清标本,提取血清总RNA,通过实时定量PCR检测血清mi R-300的表达水平,并绘制ROC曲线检测mi R-300在胆管癌中的诊断价值;采用χ2检验、Kaplan-Meier法分析mi R-300的表达水平与胆管癌患者临床特征及患者5年总体生存率之间的关系。结果胆管癌患者血清中mi R-300的表达水平高于健康对照者(P<0.05),且在术后降低;mi R-300为胆管癌有效的诊断指标;血清mi R-300的表达与胆管癌患者的临床分期密切相关(P=0.010),而与年龄、性别及分化程度无相关;血清mi R-300高表达的胆管癌患者5年总体生存率低于血清mi R-300低表达患者。结论胆管癌患者血清中mi R-300表达增高,是胆管癌临床诊断和判断预后的有效分子指标,具有重要的临床应用价值。

基于miRNA及mRNA调控网络探讨氯化两面针碱干预肝细胞癌的作用机制

目的:探讨氯化两面针碱(NC)通过调控miRNA及mRNA表达抑制肝细胞癌(HCC)进展的潜在分子机制。方法:建立HCC裸鼠移植瘤模型,连续给药15d取瘤体提取总RNA,通过高通量测序技术检测NC处理前后miRNA及mRNA表达水平,对差异mRNA进行GO功能注释及KEGG通路分析,构建NC抗HCC的miRNA及mRNA调控网络;并以miR-300为例,验证miRNA在HCC中发挥的关键调控作用。结果:NC处理后25个miRNA显著下调;60个mRNA在NC处理后显著上调,137个mRNA显著下调;差异mRNA参与了多条与肿瘤相关的代谢通路;并与miRNA构成了NC抗HCC的miRNA及mRNA调控网络。结论:miRNA及mRNA调控网络是NC发挥抗HCC作用的分子机制之一。