miR-338-3p通过靶向PPM1B促进口腔癌细胞凋亡

目的探讨miR-338-3p在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用及其调节细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法以正常口腔组织或成人牙龈成纤维细胞(HGF)作为对照组,RT-qPCR法检测OSCC组织或OSCC细胞(TSCCA,CAL-27,Tb3.1)中miR-338-3p和PPM1B mRNA的表达情况;免疫组化法检测OSCC组织与正常组织PPM1B表达量;过表达miR-338-3p后,MTT法检测OSCC细胞增殖、Annexin V-FITC-PI双染试剂盒检测OSCC的凋亡;Western blot法检测PPM1B与凋亡相关蛋白Bax和Claved-caspase 3、Bcl-2的表达;采用生物信息学软件Target scan网站和荧光素酶检测法探索miR-338-3p和PPM1B潜在的靶向关系。通过敲除和过表达PPM1B探索其对OSCC细胞增殖、迁移和凋亡的影响。结果OSCC组织和细胞中miR-338-3p表达下调,而PPM1B mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05)。过表达miR-338-3p可抑制OSCC细胞的增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示,miR-338-3p可以促进Bax和Claved-caspase 3并抑制PPM1B、Bcl-2的表达(P<0.05)。敲除PPM1B也抑制了细胞的生长并诱导细胞凋亡(P<0.05)。荧光素酶报告基因检测显示PPM1B和miR-338-3p之间有直接结合(P<0.05)。过表达PPM1B部分逆转了miR-338-3p对OSCC细胞增殖、凋亡的作用(P<0.05)。结论miR-338-3p在OSCC患者和OSCC细胞系中表达下调。过表达miR-338-3p通过靶向PPM1B,抑制OSCC细胞增殖并诱导细胞凋亡。

血清miR-338-3p联合肺部超声评分预测急性呼吸窘迫综合征新生儿的预后价值

目的探讨血清miR-338-3p、肺部超声评分(LUS)对新生儿呼吸窘迫综合征(ARDS)预后价值。方法选择2019年5月至2022年5月在深圳市宝安区石岩人民医院收治的120例ARDS新生儿作为ARDS组,其中男性76例,女性44例;胎龄28~40周,平均胎龄32.32周;出生体质量1.68~3.89 kg,平均出生体质量2.18 kg;新生儿Apgar评分4~8分,平均Apgar评分6.37分;分娩方式,顺产43例,剖宫产57例;病因,脓毒症10例,早产29例,肺炎25例,胎粪吸入综合征21例,其他15例。选择同时期50例正常新生儿为对照组,其中男性34例,女性16例;胎龄31~40周,平均胎龄33.04周;出生体质量1.94~4.02 kg,平均出生体质量2.74 kg;分娩方式,顺产17例,剖宫产33例。ARDS新生儿根据预后分为生存组与死亡组,根据胸部X射线片结果分为轻度组与重度组。实时定量聚合酶链式反应(qPCR)检测血浆miR-338-3p水平,进行床旁肺部LUS及新生儿急性生理学评分围生期补充Ⅱ(SNAPPE-Ⅱ)评分。比较各组血浆miR-338-3p水平、LUS。Pearson相关性分析SNAPPE-Ⅱ与miR-338-3p、LUS的相关性。受试者工作特性(ROC)曲线分析miR-338-3p、LUS对ARDS新生儿死亡的预测价值。采用Logistic回归分析法分析miR-338-3p水平、LUS与ARDS新生儿预后的关系。结果ARDS新生儿LUS高于正常新生儿[(29.45±3.42)分vs(10.04±2.01)分],血浆miR-338-3p水平低于正常新生儿[(10.04±2.01)分vs(1.12±0.11)分](P<0.001)。重度组LUS、SNAPPE-Ⅱ评分高于轻度组[(34.27±4.25)分vs(18.97±2.11)分、(31.84±3.52)分vs(18.56±2.85)分],miR-338-3p水平低于轻度组[(0.28±0.02)vs(0.96±0.04)](P<0.001)。SNAPPE-Ⅱ评分与LUS呈正相关(r=0.971,P<0.001),与miR-338-3p水平呈负相关(r=-0.918,P<0.001)。死亡组新生儿LUS高于生存组,miR-338-3p水平低于生存组[(37.02±3.63)分vs(20.77±3.02)分、(0.33±0.02)vs(0.75±0.02)。P<0.001]。LUS评分、血浆miR-338-3p及两者联合预测ARDS新生儿预后的曲线下面积(AUC)分别为0.851、0.835、0.929。血浆miR-338-3p、LUS是影响ARDS新生儿预后的危险因素(均P<0.05)。结论ARDS新生儿血清miR-338-3p低表达,LUS升高,两者可预测ARDS新生儿病情程度、预后。

circ_0061140靶向miR-338-3p调控多发性骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的:研究环状RNA 0061140(circ_0061140)对多发性骨髓瘤Sko-007细胞增殖和凋亡的影响和调控机制。方法:采用生物信息学数据库预测circ_0061140的靶miRNA,双荧光素酶报告实验证实circ_0061140与miR-338-3p靶向关系。实时定量PCR分析健康对照者和多发性骨髓瘤病人外周血中circ_0061140和miR-338-3p表达。将circ_0061140小干扰RNA(si-circ_0061140)、miR-338-3p模拟物、si-circ_0061140联合miR-338-3p抑制剂分别转染Sko-007,采用CCK-8法、流式细胞术分析干扰circ_0061140或过表达miR-338-3p或同时抑制circ_0061140和miR-338-3p对Sko-007细胞增殖、凋亡的影响。蛋白质印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)表达变化。结果:miR-338-3p是circ_0061140达靶基因。circ_0061140在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著高于健康对照者(P<0.01),miR-338-3p在多发性骨髓瘤病人血清中的表达显著低于健康对照者(P<0.01)。干扰circ_0061140表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),miR-338-3p和Bax表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。过表达miR-338-3p后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著降低(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著升高(P<0.01)。与干扰circ_0061140比较,同时抑制circ_0061140和miR-338-3p表达后Sko-007细胞增殖活力、Bcl-2表达显著升高(P<0.01),细胞凋亡率、Bax表达显著降低(P<0.01)。结论:circ_0061140通过靶向miR-338-3p促进多发性骨髓瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,在多发性骨髓瘤中具有致癌作用。

血清miR-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用

目的探讨血清微小RNA(miR)-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用。方法选取2020年11月至2022年11月在沧州市中心医院接受治疗的腺病毒肺炎患儿130例作为观察组,根据患儿疾病的严重程度分为轻症肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=40),选取同期在沧州市中心医院检查的130例健康儿童为对照组,比较观察组和对照组、不同病情严重程度患儿血清miR-338-3p和miR-495-3p水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-338-3p和miR-495-3p对重症腺病毒肺炎的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析重症腺病毒肺炎的影响因素。结果观察组患儿血清miR-338-3p水平比对照组低,miR-495-3p水平比对照组高(P<0.05)。轻症组和重症组电解质紊乱、循环系统并发症发生率及miR-338-3p水平、miR-495-3p水平、序贯器官衰竭评分和Murray肺损伤评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-338-3p、miR-495-3p辅助诊断重症腺病毒肺炎的曲线下面积(AUC)分别是0.745(95%CI 0.662~0.828)、0.774(95%CI 0.685~0.863),二者联合诊断的AUC为0.884(95%CI 0.821~0.946),均优于各项指标单独检测(Z=2.593、1.963,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-495-3p是影响重症腺病毒肺炎发生的危险因素,miR-338-3p为保护因素(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清miR-338-3p水平降低,miR-495-3p水平升高,且二者联合检测对重症腺病毒肺炎有一定的诊断价值,可作为评估重症腺病毒肺炎病情严重程度的血清指标。

甲状腺乳头状癌组织中miR-338-3p、PLCD3表达及其与病理参数、上皮—间质转化、预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小核糖核酸-338-3p(miR-338-3p)、磷脂酶Cδ-3(PLCD3)表达及与病理参数、上皮—间质转化(EMT)、预后的关系。方法选取2016年1月—2020年12月商洛市中心医院乳甲外科收治接受手术切除的PTC患者152例,取其癌组织及对应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白[N-钙黏蛋白(N-Cad)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、波形蛋白(VIM)];分析miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达与PTC病理参数的关系;通过Targetscan数据库预测miR-338-3p与PLCD3的结合位点,采用Pearson法和二列相关性分析miR-338-3p与PLCD3 mRNA及二者与EMT相关蛋白在PTC组织中表达的相关性;根据PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达均值分为高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达组,通过Kaplan-Meier法绘制高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达PTC患者无病生存率(DFS)生存曲线;通过Cox回归分析PTC患者DFS的影响因素。结果与癌旁组织比较,PTC组织miR-338-3p和E-Cad蛋白阳性表达率降低,PLCD3 mRNA和N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高(t/χ^(2)/P=32.875/<0.001、15.575/<0.001、37.351/<0.001、21.984/<0.001、16.604/<0.001);miR-338-3p与PLCD3 mRNA在PTC组织中表达呈负相关(r/P=-0.712/<0.001)。PTC组织中miR-338-3p与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈负相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈正相关(r/P=-0.642/<0.001、-0.617/<0.001、0.622/<0.001);PTC组织中PLCD3 mRNA与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈正相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈负相关(r/P=0.657/<0.001、0.624/<0.001、-0.632/<0.001)。不同TNM分期、淋巴结转移的PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达差异有统计学意义(F/t/P=30.778/<0.001、3.430/0.001)。miR-338-3p高表达组3年DFS高于低表达组,PLCD3 mRNA高表达组3年DFS低于低表达组(χ^(2)/P=15.615/<0.001、16.088/<0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PLCD3 mRNA≥1.83为PTC患者DFS的独立危险因素[HR(95%CI)=3.127(1.361~7.604)、2.546(1.115~5.817)、2.854(1.178~6.919)],miR-338-3p≥0.57为独立保护因素[HR(95%CI)=0.306(0.116~0.804)]。结论PTC组织中miR-338-3p低表达和PLCD3 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移、EMT和预后有关,可能成为PTC诊治新靶点。

circ_0000069靶向miR-338-3p对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状RNA 0000069(circ_0000069)是否靶向miR-338-3p调控非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭。方法 采用qRT-PCR技术检测NSCLC患者癌组织、癌旁正常组织中circ_0000069和miR-338-3p表达量。采用CCK-8、Transwell实验分析抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p对A549细胞增殖活力、迁移和侵袭的影响。使用荧光素酶酶报告实验和qRT-PCR分析circ_0000069和miR-338-3p之间的相互作用。结果NSCLC组织中circ_0000069表达量较癌旁组织升高(P<0.05),而miR-338-3p表达量显著降低(P<0.05)。抑制circ_0000069或过表达miR-338-3p后A549细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。miR-338-3p是circ_0000069的靶基因,circ_0000069靶向负调控miR-338-3p表达。干扰miR-338-3p表达显著减弱circ_0000069对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制(P<0.05)。结论 抑制circ_0000069通过上调miR-338-3p抑制NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭。

下调lncRNA DSCAM-AS1表达通过负调控miR-338-3p抑制结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DSCAM-AS1对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染DSCAM-AS1)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-DSCAM-AS1组(转染pcDNA-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-NC)、si-DSCAM-AS1+anti-miR-338-3p组(共转染si-DSCAM-AS1和anti-miR-338-3p)均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中;采用qRT-聚合酶链反应(PCR)检测miR-338-3p和DSCAM-AS1 mRNA的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测荧光活性;各组细胞侵袭和迁移采用Transwell检测;细胞活性采用噻唑蓝(MTT)法检测;蛋白表达采用Western印迹检测。结果与正常结直黏膜上皮细胞NCM460相比,结直肠癌细胞SW480、HT29、SW1116中DSCAM-AS1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05);下调DSCAM-AS1、过表达miR-338-3p均可显著抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭及CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达(P<0.05)。DSCAM-AS1抑制miR-338-3p表达,靶向调控miR-338-3p的表达,部分逆转下调DSCAM-AS1对SW480细胞侵袭、迁移和增殖的抑制作用。结论lncRNA DSCAM-AS1对结直肠癌细胞的调控机制可能与靶向调控miR-338-3p有关,可对癌细胞的侵袭、迁移、增殖起到抑制作用,可为结直肠癌的治疗、预防和诊断提供新靶点。

Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:探讨Circ_0058063通过miR-338-3p靶向SOX4调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法:qRT-PCR、Western Blot分别检测正常人尿路上皮细胞系SV-HUC-1细胞、T24膀胱癌细胞Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4表达;将si-NC、si-Circ_0058063、si-Circ_0058063+inhibitor NC、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor分别转染至T24细胞并命名为si-NC组、si-Circ_0058063组、si-Circ_0058063+inhibitor NC组、si-Circ_0058063+miR-338-3p inhibitor组,未做任何处理的T24细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验检测Circ_0058063、miR-338-3p、SOX4关系;qRT-PCR检测T24细胞中Circ_0058063、miR-338-3p表达;CCK-8法检测T24细胞增殖情况;流式细胞术检测T24细胞凋亡率;Transwell检测T24细胞侵袭、迁移数量;Western Blot检测T24细胞SOX4、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的蛋白水平。结果:与SV-HUC-1细胞相比,T24细胞中Circ_00 58063、SOX4水平显著上调(P<0.05),miR-338-3p表达显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-Circ_0058063组T24细胞OD_(450)值、迁移、侵袭细胞数量、Circ_0058063表达量、SOX4、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),T24细胞凋亡率、miR-338-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而miR-338-3p表达下调逆转了沉默Circ_0058063抑制T24细胞增殖、迁移和侵袭的效果;Circ_0058063靶向调节miR-338-3p/SOX4轴。结论:沉默Circ_0058063可能通过上调miR-338-3p来抑制SOX4表达,进而对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭产生影响。

LncRNA LINC00525调控miR-338-3p/RUNX2轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA长基因非蛋白质编码RNA 525(LncRNA LINC00525)调控miR-338-3p/核心结合因子(RUNX2)轴对子宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:样本选自2018年10月至2020年10月期间石家庄市第四医院的52例子宫颈癌组织和52例癌旁组织,以及子宫颈癌细胞HeLa、C33A、SiHa和人正常子宫颈上皮细胞Ect1/E6E7。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00525、miR-338-3p、RUNX2 mRNA的表达;通过细胞计数试剂8(CCK8)、Transwell、蛋白印迹(Western blot)实验检测HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭、RUNX2蛋白的表达;采用双荧光素酶报告基因、RNA下拉实验验证LINC00525与miR-338-3p、miR-338-3p与RUNX2的关系。结果:①与癌旁组织比较,子宫颈癌组织中LINC00525、RUNX2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05);与人正常子宫颈上皮细胞Ect1/E6E7比较,子宫颈癌HeLa、C33A、SiHa细胞中LINC00525、RUNX2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),miR-338-3p表达水平显著降低(P<0.05),且HeLa细胞变化最显著。②下调LINC00525抑制HeLa细胞增殖、迁移与侵袭。③LINC00525靶向负调控miR-338-3p的表达;miR-338-3p靶向下调RUNX2的表达;④下调miR-338-3p表达减弱了下调LINC00525对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用,过表达RUNX2减弱了下调LINC00525或过表达miR-338-3p对HeLa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。结论:下调LINC00525可能通过调控miR-338-3p/RUNX2轴抑制子宫颈癌细胞增殖、迁移与侵袭。

Circ_0007841通过miR-338-3p靶向JAG1促进肝癌细胞恶性生物学活性的机制研究

目的:探究肝癌恶性生物学活性的调控机制。方法:购买人源正常肝上皮细胞THLE-3与肝癌细胞系BEL-7405、SNU-387、MHCC-97H、HCCLM3、Huh7,转染si-0007841/NC或miR-338-3p inhibitor/NC至Huh7细胞,qRT-PCR检测circ_0007841、miR-338-3p、JAG1的表达。在各组Huh7中利用CCK-8、Transwell检测各组的增殖活力、迁移、侵袭能力变化。Circular RNA Interactome、miRWalk预测circ_0007841与miR-338-3p、miR-338-3p与JAG1的靶向关系,双荧光素酶报告实验验证靶向结合。结果:circ_0007841在HCC中呈高表达,抑制circ_0007841的表达可以抑制HCC的增殖活力与迁移、侵袭能力;进一步抑制miR-338-3p的表达后,可以部分逆转低表达circ_0007841对HCC恶性行为的遏制。在HCC中,circ_0007841可以靶向抑制miR-338-3p的表达,而miR-338-3p则可以靶向抑制JAG1的表达。结论:肝癌中高表达的circ_0007841通过竞争性结合miR-338-3p增加JAG1转录,最终促进肝癌细胞恶性生物学活性。

miR-338-3p和MACC1基因在卵巢上皮性癌(EOC)组织中的表达及其意义

目的探讨微RNA-338-3p(miR-338-3p)和MET转录调剂因子MACC1在卵巢上皮性癌(epithelial ovariancancer,EOC)组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织和65例EOC组织中miR-338-3p和 MACC1 基因的表达情况,分析二者表达的相关性及其与EOC临床病理指标的关系,Log-rank和Cox回归分析影响EOC患者复发和死亡的危险因素,Kaplan-Meier法分析miR-338-3p和MACC1表达对EOC患者生存的影响。结果 EOC组织中miR-338-3p和 MACC1 基因的表达分别为0.331±0.038和0.774± 0.025 ,与正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中的表达差异有统计学意义( F=77.916,P<0.001;F=77.945,P <0.001),不同性质卵巢组织中miR-338-3p和MACC1的表达呈明显负相关( r=-0.968,P <0.001)。在EOC中,临床分期越晚、组织级别越高、有淋巴结转移的癌组织中miR-338-3p表达越低、MACC1表达越高。Log-rank单因素分析显示miR-338-3p低表达与EOC患者的复发( P =0.038,HR=4.139,95%CI:1.271~8.078)和死亡( P =0.008,HR=3.007,95%CI:1.217~7.431)相关。与其他患者相比,miR-338-3p低表达且MACC1高表达的EOC患者的总体生存率和无进展生存率最低(χ 2= 16.960,P=0.001;χ 2=18.930,P =0.000)。结论 miR-338-3p低表达和MACC1高表达可能与EOC患者预后不良相关,二者可能共同参与EOC的进展和复发。

miR-338-3p在恶性肿瘤中的表达异常及其表观遗传组蛋白的修饰位点

目的探讨不同种类肿瘤中miR-338-3p表达谱及其表达异常的表观遗传修饰调控机制。方法生物信息学大数据库(TCGA Pan-Cancer)分析miR-338-3p在15种不同种类肿瘤组织中的表达谱;以胃癌为研究对象,分析数据库中45例正常胃组织和366例胃癌组织中miR-338-3p表达情况;CRCH37数据库预测miR-338-3p上游启动子区组蛋白修饰位点;利用染色质免疫共沉淀获取组蛋白结合的DNA,PCR扩增miR-338-3p启动子区片段,凝胶电泳验证PCR产物。结果 miR-338-3p在包括食道癌(ESCA)等不同种类肿瘤中表达异常,其中ESCA、头颈部鳞状细胞癌(HNSC)、肾嫌色细胞癌(KICH)、肾乳头状肾细胞癌(KIRP)、肺鳞癌(LUSC)和甲状腺癌(THCA)中表达显著下调(P<0.05),而在结肠腺癌(COAD)、肾透明细胞癌(KIRC)和肝细胞肝癌(LIHC)表达显著上调(P<0.05);366例胃癌组织中miR-338-3p表达普遍下调;染色质免疫共沉淀结合PCR证实组蛋白H3K9m2和H3K4m3是可能引起miR-338-3p下调的两个修饰位点。结论 miR-338-3p在胃癌中表达下调,组蛋白H3K9和H3K4甲基化修饰是潜在原因。

miR-338-3p调控MORC4促进宫颈癌细胞紫杉醇化疗敏感性

目的探究miR-338-3p通过调控MORC4表达对宫颈癌细胞紫杉醇(taxol,TAX)化疗敏感性的影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-338-3p的表达水平;MTT检测宫颈癌紫杉醇耐药细胞株(HeLa/TAX)细胞增殖活力;Transwell检测HeLa/taxol细胞侵袭能力;Annexin V-FITC/PI检测HeLa/TAX细胞凋亡水平;免疫印迹蛋白(Western blotting)检测HeLa/TAX细胞中MORC家族的CW型锌指(4Microrchidia4,MORC4)表达水平。结果miR-338-3p在宫颈癌细胞中异常低表达,且在TAX耐药细胞HeLa/TAX中表达较亲本HeLa细胞更低;过表达miR-338-3p可上调TAX促进HeLa/TAX细胞凋亡的作用和抑制细胞侵袭的作用;miR-338-3p靶向负调控MORC4表达;miR-338-3p可通过靶向下调MORC4表达,上调TAX对HeLa/TAX细胞增殖和侵袭的抑制作用,以及诱导细胞凋亡。结论过表达miR-338-3p可通过靶向下调MORC4表达,上调TAX对HeLa/TAX细胞凋亡的促进作用和对细胞侵袭能力的抑制作用,以此促进宫颈癌细胞对TAX化疗敏感性。

MiR-338-3p靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移

肺腺癌是目前肺癌最常见的组织学亚型,约占肺肿瘤的一半。MicroRNAs(miRNAs)是非常短(20~24个核苷酸)的非编码RNA,miRNA的异常表达与多种人类肿瘤的进展和转移有关。本研究通过GEO数据集GSE19945查询获得肺癌中降低最显著的miRNA即miR-338-3p,并通过Kaplan-Meier Plotter(Kmplot)网站查得低表达水平的miR-338与肺腺癌病人的不良预后有关。利用qRT-PCR检测发现,miR-338-3p在肺腺癌细胞中表达降低(P<0.05)。利用GV369-miR-338过表达慢病毒上调A549细胞中的miR-338,利用qRT-PCR检测过表达效率。Transwell细胞侵袭实验发现,miR-338的上调可抑制肺腺癌细胞的侵袭能力(P=0.0007)。基因预测网站分析获得miR-338-3p的靶基因-B3GNT3(β1,3-N-acetylglucosaminyltransferase-3),生物信息学数据库分析发现,B3GNT3在肺腺癌组织中升高。双荧光素酶分析验证miR-338和B3GNT3可靶向结合(P<0.05)。Western印迹结果证明,过表达miR-338后B3GNT3蛋白的表达下降,且差距具有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验证明,miR-338-3p可通过靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌细胞的侵袭和转移(P<0.05)。综上,miR-338-3p在肺腺癌组织和细胞中表达降低,且miR-338-3p可靶向调控B3GNT3抑制肺腺癌的侵袭和转移。

过表达miR-338-3p对炎症信号通路的影响

目的研究过表达miR-338-3p在内皮细胞系EOMA中对炎症信号通路的影响。方法将EOMA细胞分为四组即对照组、miR-338-3p过表达组、TNF-α处理组、miR-338-3p与TNF-α共处理组。用Real time PCR检测miR-338-3p及黏附分子VCAM-1和ICAM-1mRNA表达水平,Western blot分析ERK/p38 MAPK信号通路活性。结果与对照组比较,miR-338-3p过表达组的黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显降低,而TNF-α处理组的黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显升高;miR-338-3p与TNF-α共处理组与TNF-α处理组比较,黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达水平和ERK/p38信号通路活性明显降低;miR-338-3p与TNF-α共处理组与miR-338-3p过表达组比较,黏附分子表达水平及ERK/p38信号通路活性不再升高。结论过表达miR-338-3p抑制ERK/p38信号通路活性,降低黏附分子VCAM-1和ICAM-1mRNA表达水平;过表达miR-338-3p能够逆转TNF-α对ERK/p38通路的激活和TNF-α对黏附分子VCAM-1及ICAM-1mRNA表达的促进作用。

99Tc-MDP通过miR-338-3p靶向下调RANKL抑制破骨细胞活性机制研究

目的探究99Tc-MDP通过miR-338-3p调控RANKL影响破骨细胞活性进而缓解骨质疏松发生的分子机制。方法经药物处理细胞后,通过qRT-PCR检测破骨细胞(osteoporosis-derived osteoclast,OC)中miR-338-3p以及破骨细胞活性标志物CD51和MMP-9的表达;采用CCK-8、双荧光素酶报告基因和Western blotting检测OC细胞存活率、细胞增殖活力以及miR-338-3p与RANKL之间的靶向调节关系。结果99Tc-MDP抑制OC细胞存活及CD51和MMP-9的表达;99Tc-MDP上调miR-338-3p同时下调RANKL;双荧光素酶报告基因以及Western blotting结果证实miR-338-3p靶向下调RANKL;进一步实验表明,99Tc-MDP通过上调miR-338-3p进而抑制RANKL表达从而抑制OC细胞增殖及活性。结论99Tc-MDP通过上调miR-338-3p从而下调RANKL抑制破骨细胞活性,进而缓解骨质疏松发生。

MiR-338-3p通过靶向WNK1影响食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制研究

目的探讨miR-338-3p影响食管癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制及其对WNK1的靶向调控作用。方法体外培养人正常食管上皮细胞株Het-1A与人食管癌细胞Eca-109、EC-1、EC9706,采用q RT-PCR与Western blot分别检测miR-338-3p、WNK1的表达水平;以EC9706细胞为研究对象,分别将miR-con、miR-338-3p mimics、si-con、si-WNK1、miR-338-3p mimics与pc DNA、miR-338-3p mimics与pc DNA-WNK1转染至EC9706细胞;MTT法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡、Transwell小室实验检测迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-338-3p与WNK1的靶向关系。结果与Het-1A比较,食管癌细胞Eca-109、EC-1、EC9706中miR-338-3p的表达显著下调(P<0.05),WNK1 m RNA及蛋白表达显著上调(P<0.05);转染miR-338-3p mimics或si-WNK1可明显降低EC9706细胞的活力、迁移及侵袭细胞数(P<0.05),增加EC9706细胞的凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-338-3靶向结合WNK1;共转染miR-338-3p mimics与pc DNA-WNK1可明显逆转转染miR-338-3p mimics对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用。结论miR-338-3p可靶向下调食管癌中的WNK1,进而抑制食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭,和诱导细胞凋亡。

LINC00525靶向miR-338-3p促进胃癌细胞凋亡和降低其耐药性

目的研究LINC00525靶向miR-338-3p对胃癌细胞凋亡及耐药性的影响。方法将紫杉醇耐药胃癌细胞(HGC-27/PTX)分为si-NC组、si-LINC00525组、miR-NC组、miR-338-3p组、si-LINC00525+anti-miR-NC组、si-LINC00525+anti-miR-338-3p组。细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8, CCK-8)检测细胞存活率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC00525和miR-338-3p表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验验证LINC00525和miR-338-3p的靶向关系。结果 HGC-27和HGC-27/PTX细胞中LINC00525表达水平升高,miR-338-3p表达水平降低。敲除LINC00525和过表达miR-338-3p,caspase-3、P21、E-cadherin表达水平升高,MMP-2表达水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞迁移、侵袭数降低。LINC00525靶向调控miR-338-3p,抑制miR-338-3p能减弱敲除LINC00525对细胞HGC-27/PTX的存活率、迁移、侵袭及凋亡的影响。结论敲除LINC00525通过上调miR-338-3p表达抑制HGC-27/PTX细胞增殖、迁移和侵袭,促进胃癌细胞凋亡,降低胃癌细胞对紫杉醇的耐药性。

miR-338-3p靶向MACC1调节MEK/ERK信号通路抑制非小细胞肺癌的增殖和EMT

目的探讨miR-338-3p对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR检测NSCLC组织和NSCLC细胞A549、H1975、H1299、H292中miR-338-3p表达。将A549细胞分为7组:空白组、miR-NC组、miR-338-3p mimics组、pcDNA组、MACC1组、miR-338-3p mimics+pcDNA组、miR-338-3p mimics+MACC1组,qRT-PCR检测miR-338-3p、MACC1 mRNA表达;CCK-8法检测细胞增殖;western blot检测结肠癌转移相关基因-1(MACC1)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Snail、Slug及丝裂原活化的细胞外信号调节激酶/细胞外信号调节激酶(MEK/ERK)通路关键蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-338-3p与MACC1的关系。结果miR-338-3p在NSCLC组织和A549、H1975、H1299、H292细胞中低表达,且在A549细胞中表达最低,因此,选用A549细胞进行后续实验;过表达miR-338-3p后A549细胞中miR-338-3p、E-cadherin蛋白表达升高,OD450值(24、48h)、MACC1 mRNA及蛋白、Vimentin、N-cadherin、β-catenin、Snail、Slug、p-MEK、p-ERK1/2蛋白表达降低(P<0.05);过表达MACC1后A549细胞中miR-338-3p表达无显著变化,其它对应指标变化与上述相反;上调MACC1逆转了过表达miR-338-3p对NSCLC细胞的增殖和EMT的影响。结论过表达miR-338-3p通过下调MACC1来阻断MEK/ERK通路,进而抑制NSCLC细胞的增殖和EMT。

LINC02163靶向miR-338-3p影响乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已被发现在乳腺癌中失调,与肿瘤恶性行为密切相关。本研究旨在探究LINC02163靶向miR-338-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:收集郑州人民医院2020年1月—2021年9月收治的9例乳腺癌患者的乳腺癌组织及距其2 cm外的癌旁组织样本,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测组织样本、人正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)和乳腺癌细胞系(MCF-7、BT-20、MDA-MB-231、T47D)中LINC02163的表达。将MDA-MB-231分为control组、sh-NC组、sh-LINC02163组、sh-LINC02163+inhibitor-NC组和sh-LINC02163+miR-338-3p inhibitor组。采用MTT法、transwell实验及划痕实验分别检测MDA-MB-231细胞活力、侵袭及迁移能力。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测MDA-MB-231细胞c-Myc、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2、MMP9、E-钙粘素(E-cadherin)及N-钙粘素(N-cadherin)蛋白的表达。通过双荧光素酶报告基因实验分析LINC02163与miR-338-3p的靶向关系。采用体内成瘤实验检测BALB/c裸鼠肿瘤体积及重量。采用免疫组织化学法检测裸小鼠移植瘤组织的Ki-67增殖指数。结果:与癌旁组织相比,LINC02163在乳腺癌组织中的表达显著升高(P<0.05)。与MCF-10A细胞相比,LINC02163在MCF-7、BT-20、MDA-MB-231及T47D细胞中的表达均显著升高,并且其在MDA-MB-231细胞中升高最为显著(P<0.05)。与control组比,sh-LINC02163组LINC02163表达、细胞存活率、侵袭细胞数及迁移率、c-Myc、MMP2、MMP9、N-cadherin表达、肿瘤体积及重量、Ki-67增殖指数显著降低,miR-338-3p、E-cadherin表达显著升高(P<0.05)。与sh-LINC02163组相比,sh-LINC02163+miR-338-3p inhibitor组LINC02163表达无显著变化(P>0.05),细胞存活率、侵袭细胞数及迁移率、c-Myc、MMP2、MMP9、N-cadherin表达、肿瘤体积及重量、Ki-67增殖指数显著增加,miR-338-3p、E-cadherin表达显著降低(P<0.05)。在乳腺癌中LINC02163与miR-338-3p存在潜在的靶向关系。结论:沉默LINC02163表达通过促进miR-338-3p表达来抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移。