miR-425-5p靶向TGF-β1/Smad2信号通路减少小鼠增生性瘢痕组织胶原纤维沉积

目的探究miR-425-5p在增生性瘢痕(HS)形成中的作用及机制。方法通过RT-qPCR和Western blot检测了16对HS组织和正常皮肤组织中miR-425-5p、转化生长因子-β1(TGF-β1)和SMAD家庭成员2(Smad2)的水平。将成纤维细胞分为9组:对照组(control组)、miR-425-5p-mimic组、NC-mimic组、miR-425-5p-inhibitor组、NC-inhibitor组、TGF-β1-pcDNA3.1组、NC-pcDNA3.1组、miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组和miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组,并采用Lipofectamine 2000对细胞进行转染处理。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-425-5p和TGF-β1的靶向关系。通过博莱霉素(BLM)诱导小鼠增生性瘢痕,然后将小鼠随机分为3组,对照组(NC-agomir)、模型组(NC-agomir+BLM)和转染miR-425-5p干预模型组(miR-425-5p-agomir+BLM),小鼠均治疗21 d。通过Masson三色染色检测HS组织的胶原纤维沉积。通过RT-qPCR和Western blot检测组织和细胞中miR-425-5p、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1和Smad2的表达水平。结果与正常组相比,HS组的miR-425-5p表达水平降低(t=4.242,P<0.001),而TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.001)。与对照组相比,miR-425-5p-mimic组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与control组相比,miR-425-5p-inhibitor组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic共转染后,TGF-β1-3′-UTR-WT组的相对荧光素酶活性比TGF-β1-3′-UTR-MUT组降低(P<0.05)。与miR-425-5p-mimic+NC-pcDNA3.1组相比,miR-425-5p-mimic+TGF-β1-pcDNA3.1组的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1和Smad2的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与NC-agomir+BLM组相比,miR-425-5p-agomir+BLM组的相对胶原蛋白含量降低(P<0.05),miR-425-5p表达水平升高,而TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-425-5p在HS组织中表达下调,上调miR-425-5p通过抑制TGF-β1/Smad2信号通路抑制胶原沉积和HS形成。

miR-425-5p通过靶向HSPB8表达介导心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨miR-425-5p及其下游靶点HSPB8对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响及相关机制。方法:将AC16细胞随机分为control组,H/R组,H/R+miR-NC组,H/R+miR-425-5p inhibitor组,H/R+miR-425-5p mimic组,H/R+OE-NC组,H/R+OEHSPB8组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定AC16的增殖能力;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(western blotting)分别检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,荧光素酶报告基因检测验证miR-425-5p及HSPB8间的靶向关系。结果:miR-425-5p在MIRI患者中表达显著高于正常人群;HSPB8在MIRI患者中表达低于正常人群;与control组相比,H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-425-5p mimic组、H/R+OE-NC组细胞活力降低(P<0.01),凋亡、炎症及氧化应激水平上升(P<0.01);与control组相比,H/R+miR-425-5p inhibitor组和H/R+OE-HSPB8组细胞活力显著增强(P<0.01),凋亡、炎症及氧化应激水平下降(P<0.01);与H/R+OE-NC组相比,H/R+OE-HSPB8组凋亡、炎症和氧化应激水平显著降低(P<0.01);靶向关系结果显示,miR-425-5p和HSPB8之间存在靶向作用关系。结论:miR-425-5p可以靶向HSPB8介导MIRI,抑制miR-425-5p可通过上调HSPB8来减轻MIRI。

miR-425-5p通过调控靶基因HGF促进急性心肌梗死诱导心肌纤维化的分析

目的探讨miR-425-5p与肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的相关性,并分析两者的调控作用影响急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)进程诱导心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)的发生。方法采用qRT-PCR检测miR-425-5p在AMI患者及AMI小鼠中的表达水平;荧光素酶报告基因法分析HGF及Western blot检测HGF与miR-425-5p的相关性;应用CCK8和流式细胞法分别检测miR-425-5p转染后对心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖能力的影响;通过心脏超声心动图检测AMI小鼠心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒4周后的左室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF);采用qRT-PCR检测心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒的AMI小鼠中Nppa mRNA的表达量;通过Masson’s trichrome染色法检测小鼠4周后左心室纤维化;应用CD31抗体对小鼠左室切片进行免疫组化分析; ELISA检测AMI小鼠心脏中miR-425-5p与HGF的蛋白表达量。结果 miR-425-5p与AMI存在相关调控机制; miR-425-5p可下调HGF的mRNA和蛋白表达,而miR-425-5p inhibitor可抑制该下调; miR-425-5p可抑制细胞的增殖;与心肌注射miR-425-5p mimics慢病毒的AMI小鼠相比,AMI小鼠的左心室纤维化增加; miR-425-5p可促进心肌梗死的发展; miR-425-5p过表达的AMI小鼠心脏中CD31阳性毛细血管的数量明显低于AMI小鼠; miR-425-5p能通过抑制HGF的表达导致AMI小鼠心脏中血管的生成受到抑制,导致心功能降低。结论 miR-425-5p通过抑制HGF的表达,显著促进AMI诱导MF的病理进程。

人类miR-425靶基因预测及生物信息学特征分析

目的采用生物信息学工具分析人类miR-425(has-miR-425)的转录调控、靶基因功能和蛋白-蛋白互作,为研究其在细胞调控过程中的作用提供理论依据。方法应用miRBase、UCSC Genome Browser等数据库,分析has-miR-425在不同物种的序列情况,以及在基因组上下游10kb以内的Cp G岛分布情况、转录起始位置(TSS)、转录因子结合位置(TFBS)等;选择Target Scan、Pic Tar、MiRanda三种计算方法预测has-miR-425的靶基因,取三个预测结果的交集靶基因分别进行注释描述和富集分析。采用STRING软件对交集靶基因进行蛋白与蛋白互作网络分析。结果has-miR-425序列在人、大鼠、猕猴、黑猩猩之间呈现高度保守性;has-miR-425可能具有独立的启动子。共预测到319个潜在的靶基因,这些靶基因主要参与蛋白去磷酸化、细胞氮化合物反应、氮化合物反应等生物学过程;主要分子功能为酶结合、转移酶活性、金属离子结合等;主要细胞组成为:膜结合细胞器、细胞内膜有界细胞器、细胞核等。蛋白-蛋白互作分析显示靶基因中PAFAH1B1与DYNC1I2、MAP2K6与ZAK之间的关联度最高。结论通过对has-miR-425转录调控元件、靶基因的分析,为has-miR-425在细胞调控中的功能与调控机制提供了重要的理论依据。

miR-425-5p靶向ZNF423基因调控Notch信号通路促进胃癌细胞侵袭转移

目的探究miR-425-5p靶向ZNF423基因通过Notch信号通路对胃癌细胞侵袭转移的影响和机制。方法qRT-PCR和Western blot检测人胃上皮细胞GES-1和3种胃癌细胞(AGS、SGC-7901和BGC-823)中miR-425-5p和ZNF423的表达水平。以SGC-7901细胞为研究对象,构建抑制miR-425-5p表达的细胞株,qRT-PCR检测miR-425-5p的表达水平,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot检测迁移侵袭和Notch信号通路相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-425-5p和ZNF423的靶向调控关系。结果与GES-1细胞相比,3种胃癌细胞中miR-425-5p的表达显著上调,ZNF423的表达显著下调。稳定抑制miR-425-5p表达的细胞株构建成功。抑制miR-425-5p可显著抑制MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes5和Hey1蛋白的表达,抑制SGC-7901细胞的迁移和侵袭。沉默ZNF423可逆转抑制miR-425-5p表达对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。沉默ZNF423还可逆转抑制miR-452-5p表达对胃癌细胞中Notch信号通路的抑制作用。结论miR-425-5p通过下调ZNF423表达激活Notch信号通路,进而促进胃癌细胞的侵袭和转移。

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。

CD44、CD133耦连miR-425装载纳米脂质体对结直肠癌干细胞PDL-1表达的下调作用

目的探究CD44、CD133耦连miR-425装载纳米脂质体对结直肠癌干细胞PDL-1表达的下调作用。方法选择结直肠癌细胞系HCT116分选出CD44、CD133/1+细胞,进行miR-425装载纳米脂质体转染,分为对照组(转染control载体)、实验组(转染miR-425慢病毒载体),空白组以纳米脂质体代替,测定干细胞生长状态,检测PDL-1表达水平。结果分选的CD 133/1+细胞呈圆形,12 h后开始贴壁生长,状态良好。qRT-PCR检测显示实验组的miR-425的相对表达水平为(182.44±22.19),对照组与空白组分别为(1.84±1.11)和(1.67±0.98),实验组明显高于对照组与空白组(P<0.05)。MTT检测结果表明,与空白组(0.78±0.22)、对照组(0.81±0.17)比较,实验组(0.24±0.15)的HCT116细胞生长速度明显减慢(P<0.05)。空白组与对照组的细胞增殖率分别为(0.48±0.14)与(0.51±0.18),都明显高于实验组的(0.30±0.11)。Western blot检测分析显示实验组、对照组、空白组的PDL-1相对表达量分别为(0.33±0.13)、(0.76±0.21)和(0.82±0.15),实验组明显低于对照组与空白组(P<0.05)。结论 CD44、CD133耦连miR-425装载纳米脂质体能抑制结直肠癌干细胞PDL-1的表达,从而显著抑制干细胞的生长、增殖能力。

姜黄素通过调控miR-425表达对炎症性肠病大鼠炎性反应的影响研究

目的研究姜黄素通过调控miR-425表达水平对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性反应的影响。方法选取30只成年雄性SD大鼠作为研究对象,随机分为对照组、IBD组和IBD+姜黄素组,每组10只。采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌胃的方法构建IBD模型,对照组给予等量15%乙醇溶液灌胃。建模后,IBD+姜黄素组每日给予姜黄素(100 mg/kg)灌胃,IBD组每日给予蒸馏水(100 mg/kg)灌胃。连续灌胃7 d后,采集各组的静脉血,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-425表达水平,采用流式细胞术(FCM)检测辅助性T细胞17(Th17细胞)和调节性T细胞(Treg细胞)的百分比,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-17和抑炎因子转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平。喂养期间观察各组的体质量、粪便性状和隐血情况,并比较各组疾病活动度指数(DAI)的差异。结果与对照组相比,IBD组静脉血中miR-425表达水平升高(P=0.002),Th17细胞百分比升高(P<0.001)、Treg细胞百分比降低(P=0.008),IL-6、IL-17表达水平升高(P<0.001)、TGF-β表达水平降低(P<0.001),DAI评分升高(P=0.004)。与IBD组相比,IBD+姜黄素组miR-425表达水平降低(P=0.002),Th17细胞百分比降低(P<0.001)、Treg细胞百分比升高(P=0.008),IL-6、IL-17表达水平降低(P=0.002,P<0.001)、TGF-β表达水平升高(P<0.001),DAI评分降低(P=0.004)。结论姜黄素可通过下调miR-425表达水平来减轻IBD大鼠的炎性反应和改善病情。

miR-425-5p通过下调PTEN表达对促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨miR-425-5p通过下调PTEN表达对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其潜在的作用机制。方法:运用qPCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和正常乳腺细胞MCF-10A中miR-425-5p和PTEN的mRNA表达水平,Western blot检测PTEN蛋白表达水平。分别建立过表达miR-425-5p、抑制miR-425-5p表达或过表达PTEN的MCF-7和MDA-MB-231细胞株,采用MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因分析法和Western blotting验证miR-425-5p和PTEN的靶向调控关系。结果:与正常乳腺细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中miR-425-5p的表达显著升高(P<0.05),PTEN的表达显著降低(P<0.05)。过表达miR-425-5p促进MCF-7和MDAMB-231细胞的增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。抑制miR-425-5p或过表达PTEN均可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭(P<0.05)。PTEN是miR-425-5p的靶基因,miR-425-5p可负性调控PTEN的表达。结论:miR-425-5p可通过下调PTEN蛋白的表达,从而促进乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响

目的探讨木犀草素联合下调miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞生物学特性的影响及可能机制。方法将宫颈癌HeLa细胞(购自中国医学科学院肿瘤细胞库)分成Control组(不做任何处理)、Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control)、Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor)、木犀草素+Anti-NC组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染inhibitor control,经40μmol/L木犀草素处理)、木犀草素+Anti-miR-425-5p组(在HeLa细胞中用Lipofectamine 2000转染miR-425-5p inhibitor,经40μmol/L木犀草素处理)共5组,并对上述5组采用MTT测定细胞培养24 h后A值(以A值代表细胞增殖活性),平板克隆实验测定细胞培养12 d后克隆形成率,流式细胞术检测细胞培养24 h后凋亡率,Transwell小室测定细胞培养24 h后侵袭和迁移数目,Western blot法检测细胞培养24 h后p-Akt、c-caspase-3、c-caspase-9、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,比较5组上述指标差异。结果与Anti-NC组比较,Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组、木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Anti-miR-425-5p组、木犀草素+Anti-NC组比较,木犀草素+Anti-miR-425-5p组细胞增殖活性、侵袭与迁移数目和MMP-9、MMP-2、p-Akt蛋白表达水平均明显降低,细胞凋亡率和c-caspase-3、c-caspase-9、Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论木犀草素联合下调miR-425-5p可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡,作用机制可能与抑制Akt信号通路的激活有关。

lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴调节喉癌细胞干性

目的:探讨lncRNA LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴对喉癌细胞干性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法将LINC-PINT全长序列扩增并转染到HEp-2细胞,应用Diana Tools、双荧光素酶报告分析系统分别预测和验证LINC-PINT及miR-425-5p的分子靶标,应用qRT-PCR和Western blot检测LINC-PINT和癌细胞干性相关基因(Sox-2、CD44、CD133和Nanog)及其蛋白的表达。结果:转染LINC-PINT后证实LINC-PINT过表达会引起癌细胞干性相关基因表达下调,抑制miR-425-5p可引起癌细胞干性相关基因表达下调;LINC-PINT的分子靶标为miR-425-5p,且miR-425-5p的分子靶标为PTCH1。结论:LINC-PINT通过miR-425-5p/PTCH1轴抑制喉癌细胞干性而抑制喉癌的发生。

MiR-425对血管平滑肌细胞增殖迁移的作用及分子机制

目的探讨miR-425对人主动脉平滑肌细胞增殖迁移的作用及潜在的分子机制。方法实时定量RT-PCR(qRT-PCR)检测人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMCs)中miR-425的表达水平。转染miR-342inhibitor改变HASMCs中内源性miR-425的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖及周期的变化,Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测PTEN、PI3K、p-AKT/AKT、MMP-9的蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ(angiotensionⅡ,AngⅡ)可时间及剂量依赖性地促进HASMCs中miR-425的表达。转染miR-425 inhibitor可抑制AngⅡ对HASMCs的促增殖作用,并抑制细胞迁移,同时细胞中PI3K、p-AKT/AKT及MMP-9的蛋白水平显著降低,PTEN水平显著升高。结论沉默miR-425可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制人主动脉平滑肌细胞的增殖及迁移,提示miR-425可作为血管重构的一个潜在诊疗靶点。

MiR-425-5p通过调控PTEN促进乳腺癌细胞体外生长和转移的机制

目的研究miR-425-5p对乳腺癌细胞体外生长和转移的影响及机制。方法RT-qPCR检测5种乳腺癌细胞株中miR-425-5p的表达水平;miR-425-5p mimic、inhibitor、NC转染至乳腺癌细胞,CCK8法和Transwell小室法检测转染后乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,采用生物信息学的方法预测miR-425-5p的靶基因,荧光素酶报告实验验证靶基因,Western blot检测转染miR-425-5p mimic、inhibitor、NC后靶基因的表达水平。检测过表达及低表达PTEN后,miR-425-5p对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。结果5种乳腺癌细胞株中miR-425-5p表达水平均显著高于乳腺上皮细胞(P<0.05)。miR-425-5p mimic显著促进MCF-7细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.001);miR-425-5p inhibitor显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)和迁移能力(P<0.001)。预测并验证PTEN为miR-425-5p的靶基因,miR-425-5p能够下调PTEN的表达;过表达PTEN后,miR-425-5p mimic的促增殖和迁移作用则被显著抑制(P<0.05);抑制PTEN表达后miR-425-5p inhibitor的抑制增殖和迁移作用亦被显著增强(P<0.05)。结论miR-425-5p能够调控乳腺癌细胞的体外生长和转移,其机制可能为抑制抑癌基因PTEN的表达。

MEIS1/miR-425反馈调节通路对慢性髓系白血病细胞株K562增殖的作用

目的:研究转录因子MEIS1和miR-425对人慢性髓系白血病细胞株K562增殖的调控作用及其分子机制。方法:通过生物信息学预测分析转录因子MEIS1在miR-425启动子区的结合位点情况,ChIP-qPCR结合双荧光报告基因实验检测MEIS1与miR-425启动子的结合情况及其对miR-425启动子的调节作用,CCK-8法检测MEIS1和miR-425对K562细胞增殖的影响,PI染色结合流式细胞术检测MEIS1和miR-425对K562细胞周期的影响,Western blot检测miR-425对MEIS1表达的影响。结果:MEIS1可以与miR-425启动子区结合,并可抑制其活性。使用针对MEIS1的shRNA转染K562细胞后,可显著抑制K562细胞增殖及细胞周期的运行。类似地,使用miR-425的模拟物转染K562细胞后,也可抑制K562细胞的增殖和细胞周期的运行。miR-425可以通过与MEIS13′UTR的结合抑制MEIS1的表达。结论:转录因子MEIS1可在转录水平抑制miR-425的转录活性,miR-425则在转录后水平抑制MEIS1蛋白的表达,因此,两者共同构成一个反馈调节通路作用于K562细胞的增殖。

miR-425对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制

目的探讨miR-425对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法 RT-PCR测定卵巢细胞系SKOV3及正常卵巢细胞系HOSE中miR-425表达水平,将SKOV3细胞分为lent-shmiR-425和lent-shvector组,分别转染lent-shmiR-425和lent-shvector,24 h后行细胞划痕试验和Transwell侵袭小室试验。应用Target Scan预测miR-425与PTEN因子3'端非翻译区结合位点。将SKOV3细胞分成3组:野生型质粒组、突变型质粒组、阴性对照组,分别共转染miR-425及野生型荧光素酶报告质粒p GL3-PTEN 3'UTR,miR-425和突变型荧光素酶报告质粒p GL3-PTEN 3'WT,miR-425和对照荧光素酶质粒,用荧光素酶试验检测各组荧光素酶活性。结果在卵巢癌细胞系SKOV3中miR-425相对表达量为2.1,正常卵巢细胞系HOSE为1.0,两者比较,P<0.05。lent-shmiR-425组划痕愈合率为27.56%±2.14%,lent-shvector组划痕愈合率为89.15%±6.24%,两组比较,P<0.05。lent-shmiR-425组侵袭细胞数为(75±10)个/200倍视野,lent-shvector组侵袭细胞数为(160±20)个/200倍视野,两组比较,P<0.05。Target Scan预测miR-425与PTEN因子3'端非翻译区的结合位点结合;野生型质粒组、突变型质粒组、阴性对照组荧光素酶活性分别为23.70±0.93、99.27±5.90、104.00±4.02。野生型质粒组低于突变型质粒组和阴性对照组(P均<0.05)。突变型质粒组与阴性对照组比较,P>0.05。结论 miR-425水平升高可促进卵巢癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与miR-425靶向调节PTEN表达有关。光素酶活性分别为23.70±0.93、99.27±5.90、104.00±4.02。野生型质粒组低于突变型质粒组和阴性对照组(P均<0.05)。突变型质粒组与阴性对照组比较,P>0.05。结论 miR-425水平升高可促进卵巢癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与miR-425靶向调节PTEN表达有关。

miR-425-5p在调控宫颈癌HeLa细胞功能中的作用及其机制

目的miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞功能的调控作用及其机制。方法将体外培养的HeLa细胞分为miR-NC组(转染miR-425-5p模拟物对照)、miR-425-5p组(转染miR-425-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-425-5p抑制剂对照)和anti-miR-425-5p组(转染miR-425-5p抑制剂)共四组。采用RT-PCR检测四组细胞中miR-425-5p的表达水平,CCK-8法、克隆形成试验、Transwell试验、划痕试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡能力。生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因试验检测miR-425-5p和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的靶向关系,Western blot检测miR-425-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果转染miR-425-5p模拟物后HeLa细胞中miR-425-5p的表达水平较miR-NC组明显升高,而miR-425-5p抑制剂后miR-425-5p的表达水平较anti-miR-NC组明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显升高,而细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实miR-425-5p能够与PTEN 3′UTR靶向结合,Western blot试验结果证实miR-425-5p可负向调控PTEN蛋白的表达。结论miR-425-5p可促进HeLa细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。

miR-425通过靶向PTPRN2调节肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-425对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法RT-qPCR检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H)和正常肝细胞系HL-7702中miR-425的表达水平;利用生物信息学预测miR-425作用的靶基因;双荧光素酶实验确认miR-425和PTPRN2的直接靶向关系;蛋白质印迹检测PTPRN2蛋白表达水平;MTT实验检测miR-425和PTPRN2对肝癌细胞增殖能力的影响;Transwell迁移和侵袭实验检测miR-425和PTPRN2对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果miR-425在肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H相对表达量分别为:2.01±0.13、3.97±0.24、9.14±0.26,高于正常肝细胞系的1.00±0.03(P<0.05);封闭miR-425的表达(miR-425 inhibitor)可明显抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;荧光素酶实验结果显示:与对照组相比,野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(0.99±0.09比0.40±0.03,P<0.05),突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(1.00±0.05比0.93±0.07,P>0.05);沉默PTPRN2蛋白表达后可以逆转miR-425 inhibitor对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论miR-425通过靶向下调PTPRN2可促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭过程。

晚期结直肠癌患者血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平及其与化疗敏感性、预后的关系

目的分析晚期结直肠癌患者血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平及其与化疗敏感性、预后的关系。方法选取2017年1月1日至2018年12月10日我院肿瘤内科收治的82例晚期结直肠癌患者作为观察组,另选取同期我院70名体检健康人群作为对照组。均行血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平测定。比较两组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平。比较观察组不同亚组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平。分析观察组化疗前、后血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平变化情况与化疗敏感性及预后的关系。结果观察组的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平低于对照组(P<0.05)。DCR组化疗后的血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平高于化疗前及PD组(P<0.05)。DCR组中,血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者占比高于未升或下降患者(P<0.05)。血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者的无进展生存期长于未升或下降患者(P<0.05)。结论血清miR-143-3p和miR-425-5p在晚期结直肠癌患者中呈低表达。化疗后血清miR-143-3p、miR-425-5p表达水平上升患者的化疗敏感性更高,无进展生存期更长。

miR-425-5p靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用研究

目的探讨微小RNA-425-5p(miR-425-5p)靶向FOXJ3对乳腺癌细胞的作用。方法用Lipofiectamine2000分别将miR-425-5p inhibitor及NC转染至MDA-MB-231乳腺癌细胞作为miR-425-5p inhibitor组和NC组,不做任何处理的为对照组。通过RT-qPCR测乳腺上皮细胞MCF10A及miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组中miR-425-5p及FOXJ3mRNA表达水平。通过MTT法测miR-425-5p inhibitor组、NC组、对照组细胞增殖情况;通过流式细胞仪测3组细胞凋亡情况;Transwell小室实验测细胞侵袭情况;Western-blot测细胞中FOXJ3、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2蛋白表达情况;双荧光素酶实验验证miR-425-5p与FOXJ3的靶向关系。结果与乳腺上皮细胞MCF10A比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-425-5p表达水平显著升高(P<0.05),FOXJ3mRNA表达水平显著下降(P<0.05);与对照组和NC组比,miR-425-5p inhibitor组细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制,细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶实验结果显示抑制miR-425-5p表达显著增加野生型FOXJ33′UTR萤光素酶活性,对突变型FOXJ33′UTR的萤光素酶活性无影响。结论下调miR-425-5p可能通过靶向FOXJ3抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭,并促进细胞凋亡。

经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p水平检测对宫颈癌的诊断效能分析

目的分析经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p水平检测对宫颈癌的诊断效能。方法选取2017年1月~2019年1月在郑州市第七人民医院诊治的宫颈癌患者58例和宫颈炎及宫颈上皮瘤变者77例分别为癌症组和疾病组,60例同期来院体检结果正常的健康女性为对照组。对三组实施经阴道彩色多普勒超声检查,并使用实时荧光定量PCR法检测血清miR-130a,miR-425-5p水平。分析经阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a,miR-425-5p表达对宫颈癌的诊断效能。结果癌症组、疾病组和对照组的收缩期血流速度(peak systolic velocity,PSV)(12.01±2.85,9.53±1.98和8.52±1.23cm/s)依次降低,阻力指数(resistive index,RI)(0.42±0.10,0.58±0.12和0.66±0.14)依次升高,差异有统计学意义(F=43.178,60.098,均P<0.001);癌症组、疾病组和对照组的血清miR-130a(0.092±0.030,0.045±0.012和0.030±0.008),miR-425-5p(0.733±0.203,0.365±0.098和0.205±0.048)表达水平依次升高,差异有统计学意义(F=181.070,259.304,P<0.001)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)显示经阴道多普勒超声诊断宫颈癌的敏感度、特异度、准确度、曲线下面积(area under curve,AUC)分别为77.59%,87.01%,82.96%和0.889;血清miR-130a分别为79.31%,80.52%,80.00%和0.820;血清miR-425-5p分别为74.14%,77.92%,76.30%和0.785;联合诊断分别为74.14%,90.91%,83.70%和0.932,三者联合检测的AUC大于单独检测(P<0.05)。结论阴道彩色多普勒超声联合血清miR-130a和miR-425-5p的表达对宫颈癌具有较高的诊断效能。