miR-4429靶向PIK3R1调控细胞内质网应激通路影响乳腺癌恶性表型的机制

目的:探究微小RNA(miRNA)miR-4429对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和凋亡的影响;并探究其与内质网应激相关通路基因PIK3R1的靶向关系及对内质网应激相关通路的调控作用。方法:通过脂质体转染法构建miR-4429过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其效率;MTT法、克隆形成实验、Annexin-PI染色实验和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖、凋亡和侵袭;双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-4429和PIK3R1靶向关系,qRT-PCR和Western blot探究miR-4429对内质网应激通路的调控。结果:成功建立miR-4429过表达及敲低的MDA-MB-231细胞模型;miR-4429 mimic组中MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭能力均低于其Ctrl组,凋亡能力高于其Ctrl组(均P<0.05);miR-4429能够靶向性结合PIK3R1并抑制PIK3R1的蛋白表达,同时下调内质网应激通路相关基因。结论:miR-4429靶向性结合PIK3R1并下调内质网应激通路相关基因,抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,提示miR-4429可能是乳腺癌治疗的潜在靶点。

miR-4429和基质金属蛋白酶8在胃癌患者血清中的表达

目的探讨miR-4429和基质金属蛋白酶8(MMP-8)在胃癌患者血清中的表达,分析二者与胃癌患者临床病理学特征的关系,并明确其在胃癌诊断中的意义.方法纳入46例胃癌患者作为观察组,同期选取45名健康体检者作为对照组.应用RT-qPCR法检测两组测试者血清中miR-4429的表达水平,ELISA法检测MMP-8的表达水平.计量变量采用Shapiro-Wilk正态检验,不满足正态分布选择Spearman等级相关,满足正态分布选择Pearson线性相关用于检验miR-4429和MMP-8之间的相关性.采用受试者工作特征曲线(ROC)和曲线下面积(AUC)评价MiR-4429和MMP-8作为胃癌诊断指标的诊断效果.结果观察组与对照组一般临床信息方面比较差异无统计学意义(P>0.05).观察组患者血清中miR-4429的表达水平显著低于对照组(P<0.05),MMP-8的表达水平显著高于对照组(P<0.05).Pearson相关分析显示,miR-4429和MMP-8在胃癌患者血清中表达呈显著负相关关系(r=-0.558,P<0.05).miR-4429表达与胃癌患者肿瘤分化程度、TNM分期有关(P<0.05),MMP-8与淋巴结转移有关(P<0.05).ROC曲线结果显示,miR-4429诊断胃癌的曲线下面积(AUC)为0.776(95%CI:0.681~0.870),特异度为66.67%,敏感度为77.08%,截断值为1.25.MMP-8诊断胃癌的AUC为0.774(95%CI:0.678~0.870),特异度为84.44%,敏感度为62.50%,截断值为7.95 ng/mL.miR-4429和MMP-8联合诊断胃癌的AUC为0.862(95%CI:0.799~0.925),特异度为76.58%,敏感度为83.91%.结论miR-4429和MMP-8的表达可能与胃癌发生发展有密切关系,二者联合检测可在胃癌诊断、治疗方面具有指导作用.

蜘蛛香总黄酮调控miR-4429影响胃癌AGS细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨蜘蛛香总黄酮(total flavonoids from Valeriana jatamansi Jones,TFV)对胃癌AGS细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞AGS,随机分为Con组、TFVL组、TFV-M组、TFV-H组、miR-NC组、miR-4429组、TFV+anti-miR-NC组、TFV+anti-miR-4429组。qRT-PCR,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别检测miR-4429表达,细胞增殖、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭情况;Western免疫印迹检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果与Con组比较,TFV-L组、TFV-M组、TFV-H组细胞E-cadherin蛋白水平、增殖抑制率和miR-4429的表达量升高(P<0.05),N-cadherin蛋白水平和划痕愈合率降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05),且呈剂量依赖性;与miR-NC组比较,miR-4429组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少(P<0.05),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低(P<0.05);与TFV+anti-miR-NC组比较,TFV+anti-miR-4429组细胞增殖抑制率和E-cadherin蛋白水平降低(P<0.05),细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多(P<0.05),划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平升高(P<0.05)。结论蜘蛛香总黄酮可抑制胃癌AGS细胞增殖、迁移及侵袭,其抗肿瘤机制与上调miR-4429表达有关。

微滴数字PCR检测血清miR-21和miR-4429在肝癌诊断中的应用

目的应用微滴数字PCR检测血清中mi R-21和mi R-4429的水平,并探讨联合AFP检测在诊断肝细胞肝癌中的临床价值。方法收集69例肝癌、47例慢性活动性乙肝以及40例健康体检者血清标本,应用微滴数字PCR检测血清mi R-21和mi R-4429水平,化学发光法检测血清中AFP水平,并用ROC曲线和Spearman相关进行分析。结果肝癌组患者mi R-21水平明显高于健康对照组和慢性活动性乙肝组(均P<0.05),mi R-4429水平高于健康对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示:mi R-21、mi R-4429和AFP 3者联合检测的灵敏度(95.0%)、特异度(92.5%)和准确度(92.7%),较单独检测或两项联合检测有较大提升。mi R-21、mi R-4429表达与患者年龄、性别、有无HBs Ag感染或肝硬化、PLT或AFP水平、TNM分期和疾病状态均无相关性(均P>0.05)。结论血清mi R-21和mi R-4429对肝癌的诊断具有良好的灵敏度和特异度,联合AFP检测可以提高诊断的效能。

MiR-4429/NQO1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响

目的探讨miR-4429与依赖还原型辅酶/醌氧化还原酶1(NADH quinone dehydrogenase 1,NQO1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡、炎症因子分泌的影响及其作用机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用30 mmol/L葡萄糖处理24 h,制备糖尿病肾病肾小管上皮细胞损伤模型,记作高糖组;用含有5.5 mmol/L葡萄糖的培养基培养24 h,记作正常对照组;用含有50 mmol/L甘露醇的培养基培养24 h,记作高渗对照组;分别将miR-4429抑制剂(anti-miR-4429)、anti-miR-4429阴性对照序列(anti-miR-NC)、anti-miR-4429与NQO1小干扰RNA(si-NQO1)、anti-miR-4429与si-NQO1阴性对照序列(si-NC)转染至HK-2细胞,使用含有30 mmol/L葡萄糖的培养基培养24 h,分别记作HG+anti-miR-4429组、HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-4429+si-NQO1组、HG+anti-miR-4429+si-NC组。检测各组细胞miR-4429、NQO1 mRNA的表达水平,并检测各组细胞存活率、细胞凋亡率、Caspase-3蛋白水平、NQO1蛋白水平、丙二醛(malondialedhyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。采用双荧光素酶报告实验验证miR-4429过表达对野生型和突变型NQO1荧光素酶活性的影响。结果高糖处理后,miR-4429、Caspase-3的表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),MDA含量与IL-1β、TNF-α水平显著升高(P<0.05),但NQO1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),细胞存活率与SOD活性显著降低(P<0.05);抑制miR-4429表达后细胞凋亡率与Caspase-3表达量显著降低(P<0.05),MDA含量与IL-1β、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著升高(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-4429能够抑制NQO1的3′-UTR区荧光素酶活性(P<0.05);抑制NQO1的表达可明显减弱miR-4429的表达对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用。结论 miR-4429可靶向调控NQO1的表达从而促进高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡,降低细胞存活率,加重细胞氧化损伤与炎性损伤。

circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制

目的:探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法:收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的33例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR法检测组织中circAGFG1和miR-4429表达水平。体外培养胆管癌QBC939细胞,分别转染si-circAGFG1、miR-4429 mimic、共转染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB法检测对细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1和miR-4429之间的靶向调控关系。结果:胆管癌组织中circAGFG1的表达量高于癌旁组织(3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05),而miR-4429的表达量低于癌旁组织(0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05)。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达均显著降低(均P<0.05),而E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会促进QBC939细胞中miR-4429表达(均P<0.05)。下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响(均P<0.05)。结论:circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭。

奇果菌素通过调控miR-4429表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解和增殖的机制研究

目的探讨奇果菌素对乳腺癌MDA-MB-231细胞糖酵解和增殖的影响及其对miR-4429的调控作用。方法不同浓度(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)的奇果菌素处理MDA-MB-231细胞,将miR-NC、miR-4429 mimics分别转染至MDA-MB-231细胞后加入奇果菌素处理细胞(回复实验);试剂盒检测葡萄糖消耗量与乳酸生成量;CCK-8、平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成;qRT-PCR法检测miR-4429的表达量;Westernblot法检测PKM2、HK2蛋白表达量。结果不同浓度的奇果菌素处理后细胞中葡萄糖消耗量与乳酸生成量降低(P<0.05),PKM2、HK2蛋白水平降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),细胞增殖抑制率升高(P<0.05),miR-4429的表达水平升高(P<0.05);与转染miR-NC比较,转染miR-4429 mimics后细胞中葡萄糖消耗量与乳酸生成量降低(P<0.05),PKM2、HK2蛋白水平降低(P<0.05),克隆形成数减少(P<0.05),细胞增殖抑制率升高(P<0.05);回复实验结果显示葡萄糖消耗量与乳酸生成量升高(P<0.05),PKM2、HK2蛋白水平升高(P<0.05),克隆形成数增多(P<0.05),细胞增殖抑制率降低(P<0.05)。结论奇果菌素可通过促进miR-4429的表达而抑制乳腺癌细胞糖酵解、增殖及克隆形成。