miR-495-3p靶向BUB1调控STAT3信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-495-3p靶向苯并咪唑出芽抑制解除同源物蛋白1(BUB1)调控信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路对食管癌细胞生物学行为的影响。方法 使用cDNA芯片技术筛选出食管癌组织和正常组织差异表达基因,并用生物信息学方法进行分析。运用TargetScan数据库对miRNA的靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告基因检测技术进行验证。将KYSE150细胞分为空白对照组、NC mimics组和miR-495-3p mimics组。通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖活力。用流式细胞术测定细胞周期和凋亡。通过定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定BUB1 mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法(Western blot)测量BUB1、STAT3、磷酸化(p)-STAT3、细胞周期蛋白B1(CCNB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)蛋白水平。用划痕和Transwell小室实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果 差异表达基因参与生物学过程、信号通路和网络构建主要与细胞周期相关,BUB1是关键的核心(Hub)基因,miR-495-3p靶向调控BUB1。体外实验表明,过表达miR-495-3p能显着抑制食管癌细胞的生长、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞。过表达miR-495-3p处理后,食管癌细胞中Caspase-3、Caspase-9表达量升高(P<0.01),而Bcl-2、BUB1、CCNB1、CDK1、p-STAT3表达量降低(P<0.01)。STAT3信号通路也被发现在此过程中发挥着重要作用。结论 miR-495-3p可能通过下调BUB1介导STAT3信号通路影响食管癌细胞的生物学行为。

lncRNA SNHG12靶向抑制miR-495-3p进而调控PI3K/Akt信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12、miR-495-3p相对表达水平(将其中的DU145细胞分为si-NC组、si-SNHG12组、si-SNHG12+anti-miR-NC组、si-SNHG12+anti-miR-495-3p组,4组检测);双荧光素酶报告实验检测SNHG12与miR-495-3p靶向关系;MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白相对表达水平。结果 在前列腺癌组织和细胞(LNCaP、C4-2、DU145)中SNHG12相对表达水平明显升高,miR-495-3p相对表达水平明显降低(P<0.05);敲低SNHG12可降低DU145细胞活性、PCNA、N-cadherin蛋白相对表达水平,减少迁移及侵袭细胞数,增加E-cadherin蛋白相对表达水平(P<0.05);SNHG12可靶向负调控miR-495-3p,下调miR-495-3p可逆转敲低SNHG12对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。与si-NC组相比,si-SNHG12组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05);与si-SNHG12+anti-miR-NC组相比,si-SNHG12+anti-miR-495-3p组p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显增加(P<0.05)。结论 lncRNA SNHG12可能通过靶向抑制miR-495-3p/PI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌患者中的表达及临床意义

目的探讨miR-495-3p、miR-181d-5p在宫颈癌及宫颈癌前病变组织中的表达差异及对宫颈癌诊断的价值。方法收集2020年6月—2022年12月河北中石油中心医院收治的30例宫颈低级别鳞状上皮内病变(CINⅠ级组)、30例宫颈高级别鳞状上皮内瘤变(CINⅡ~Ⅲ级组)、50例宫颈癌(宫颈癌组)患者的临床资料及宫颈组织标本。采用免疫组化法检测各组宫颈组织中miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达情况,比较各组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率;采用RT-qPCR法检测宫颈癌组患者癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量,分析miR-495-3p和miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者临床病理特征的关系、miR-495-3p和miR-181d-5p对宫颈癌的诊断价值及二者在宫颈癌组织中表达的相关性。结果宫颈癌组miR-495-3p、miR-181d-5p阳性表达率均明显低于CINⅠ级组及CINⅡ~Ⅲ级组(P均<0.05)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与FIGO分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05),FIGO分期越高、浸润越深二者表达量越低;miR-181d-5p表达量与分化程度有关(P<0.05),分化程度越高miR-181d-5p表达量越低。miR-495-3p、miR-181d-5p联合检测对宫颈癌的诊断价值高于miR-495-3p、miR-181d-5p单一检测(P=0.001)。宫颈癌组织中miR-495-3p、miR-181d-5p表达呈正相关。结论miR-495-3p、miR-181d-5p表达量与宫颈癌患者的FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移情况相关,两者表达之间具有一定相关性,二者联合检测有助于宫颈癌的诊断。

血清miR-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用

目的探讨血清微小RNA(miR)-338-3p和miR-495-3p水平在重症腺病毒肺炎患儿诊断及病情评估中的应用。方法选取2020年11月至2022年11月在沧州市中心医院接受治疗的腺病毒肺炎患儿130例作为观察组,根据患儿疾病的严重程度分为轻症肺炎组(n=90)和重症肺炎组(n=40),选取同期在沧州市中心医院检查的130例健康儿童为对照组,比较观察组和对照组、不同病情严重程度患儿血清miR-338-3p和miR-495-3p水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-338-3p和miR-495-3p对重症腺病毒肺炎的诊断价值。采用多因素Logistic回归分析重症腺病毒肺炎的影响因素。结果观察组患儿血清miR-338-3p水平比对照组低,miR-495-3p水平比对照组高(P<0.05)。轻症组和重症组电解质紊乱、循环系统并发症发生率及miR-338-3p水平、miR-495-3p水平、序贯器官衰竭评分和Murray肺损伤评分比较,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-338-3p、miR-495-3p辅助诊断重症腺病毒肺炎的曲线下面积(AUC)分别是0.745(95%CI 0.662~0.828)、0.774(95%CI 0.685~0.863),二者联合诊断的AUC为0.884(95%CI 0.821~0.946),均优于各项指标单独检测(Z=2.593、1.963,P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,miR-495-3p是影响重症腺病毒肺炎发生的危险因素,miR-338-3p为保护因素(P<0.05)。结论重症腺病毒肺炎患儿血清miR-338-3p水平降低,miR-495-3p水平升高,且二者联合检测对重症腺病毒肺炎有一定的诊断价值,可作为评估重症腺病毒肺炎病情严重程度的血清指标。

miR-495-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及与手术预后的关系

探究与分析miR-495-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平及与手术预后的关系。回顾性分析中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院2020年3月—2022年2月收治的甲状腺乳头状癌90例患者的临床资料,全部患者均获取了肿瘤组织标本及癌旁正常甲状腺组织标本,通过采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术,对肿瘤组织及癌旁正常甲状腺组织中mi-R495-3p表达水平进行测量,分析mi-R495-3p表达水平与甲状腺乳头状癌临床病理特征之间的关系,采用多元Cox逐步回归分析探讨影响甲状腺乳头状癌患者手术预后的影响因素。甲状腺乳头状癌组织中mi-R495-3p表达水平(1.45±0.54)明显高于癌旁正常甲状腺组织(0.76±0.17),差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者的mi-R495-3p表达水平要明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,发生腺外浸润患者的mi-R495-3p表达水平要明显未发生腺外浸润患者,发生了淋巴结转移的mi-R495-3p表达水平要明显高于未发生淋巴结转移患者,淋巴结侵犯数目在3个以上患者mi-R495-3p表达水平要明显高于淋巴结侵犯数目为1至3个、0个患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。行Logistic回归分析可见,PTC组织中的mi-R495-3p表达水平与TNM分期、腺外浸润、淋巴结转移、淋巴结侵犯数目相关(P<0.05)。mi-R495-3p高表达组发生原位复发的患者比例要明显高于mi-R495-3p低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。mi-R495-3p在甲状腺乳头状癌组织当中可表现出较高的表达水平,与甲状腺乳头状癌患者的肿瘤直径、TNM分期、腺外浸润、淋巴结侵犯数具有密切的关系;mi-R495-3p表达水平较高的患者术后更加容易发生原位复发。

血清miR-183-3p、miR-495-3p表达与食管癌患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨血清miR-183-3p、miR-495-3p表达与食管癌患者临床病理特征及预后的关系。方法选择2017年12月—2020年12月解放军总医院第三医学中心胸外科诊治食管癌患者105例作为食管癌组,随访3年根据患者生存情况分为存活亚组80例和死亡亚组25例;另选择医院同期健康体检者105例作为健康对照组。采取qRT-PCR法检测血清miR-183-3p、miR-495-3p表达;绘制Kaplan-Meier曲线分析血清miR-183-3p、miR-495-3p与食管癌患者预后的关系;ROC曲线分析血清miR-183-3p、miR-495-3p对食管癌患者预后的预测价值;Cox风险回归模型分析影响食管癌患者预后的因素。结果食管癌组血清miR-183-3p表达高于健康对照组,血清miR-495-3p表达低于健康对照组(t/P=8.760/<0.001、4.054/<0.001);死亡亚组血清miR-183-3p表达高于存活亚组,血清miR-495-3p表达低于存活亚组(t/P=3.655/<0.001、4.210/<0.001);miR-183-3p高表达患者低分化程度、AJCC临床Ⅲ~Ⅳ期比例高于miR-183-3p低表达患者,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=10.680/0.001、4.246/0.039);miR-495-3p高表达患者中高分化程度、AJCC临床Ⅰ~Ⅱ期比例高于miR-495-3p低表达患者,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=5.341/0.021、9.320/0.002)。miR-183-3p高表达患者3年生存率(67.92%)低于miR-183-3p低表达患者(84.62%),miR-495-3p低表达患者3年生存率(64.81%)低于miR-495-3p高表达患者(88.24%)(χ^(2)/P=5.279/0.022、9.351/0.002)。血清miR-183-3p、miR-495-3p及二者联合预测食管癌患者预后的AUC分别为0.763、0.737、0.864,二者联合优于各自单独预测效能(Z/P=2.564/0.010、2.011/0.043)。低分化、AJCC临床分期Ⅲ~Ⅳ期、miR-183-3p高表达、miR-495-3p低表达为影响食管癌患者预后的危险因素[HR(95%CI)=6.628(2.278~19.288)、5.803(2.261~14.897)、5.130(2.187~12.034)、6.152(1.951~19.401)]。结论食管癌患者血清miR-183-3p呈高表达,miR-495-3p呈低表达,二者表达与患者肿瘤分化程度和AJCC临床分期有关,且可作为预测预后的生物指标。

血清miR-124-3p和miR-495-3p水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估中的作用

目的探讨血清微小RNA(miRNA)-124-3p和miR-495-3p水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤(AKI)评估中的作用。方法选取2021年1月至2023年1月在该院收治的157例脓毒症患者,根据脓毒症诊断标准,分为脓毒症组(93例)和脓毒症休克组(64例);根据是否出现脓毒症相关AKI,分为AKI组(85例)和非AKI组(72例),另外选取同期在该院进行体检的53名体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR对各组血清miR-124-3p、miR-495-3p水平进行检测,采用Pearson相关对患者血清miR-124-3p、miR-495-3p水平与病情严重程度的相关性进行分析,比较AKI组、非AKI组的临床资料,采用多因素Logistic回归分析影响患者病情严重程度及AKI发生的相关因素,进一步通过受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-124-3p、miR-495-3p水平及二者联合对脓毒症发生AKI的诊断价值。结果脓毒症休克组血清miR-124-3p、miR-495-3p水平均低于脓毒症组、对照组,且脓毒症组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。脓毒症休克组急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA)评分均高于脓毒症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,脓毒症患者血清miR-124-3p、miR-495-3p水平与APACHEⅡ评分、SOFA评分呈负相关(P<0.05)。AKI组血清miR-124-3p、miR-495-3p水平均低于非AKI组(P<0.05)。AKI组与非AKI组的年龄、性别构成、体重指数、是否存在高血压、糖尿病、心脏病比较,差异无统计学意义(P>0.05),APACHEⅡ评分、SOFA评分、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-124-3p、miR-495-3p水平是影响AKI发生的保护因素,APACHEⅡ评分、SOFA评分、BUN、Scr水平是影响AKI发生的危险因素(P<0.05);血清miR-124-3p、miR-495-3p联合检测脓毒症发生AKI的曲线下面积、灵敏度和特异度分别为0.962、89.41%和97.22%;二者联合检测优于血清miR-124-3p、miR-495-3p单独检测。结论血清miR-124-3p、miR-495-3p水平与脓毒症严重程度密切相关,且与AKI是否发生有关。

环状RNA circHIPK3通过miR-495-3p靶向XIAP调控乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3 (circHIPK3)通过miR-495-3p靶向X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)调控乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测乳腺癌组织、良性组织、乳腺癌细胞系MCF-7 circHIPK3、miR-495-3p、XIAP的表达;将si-NC、si-circHIPK3、si-circHIPK3+inhibitor NC、sicircHIPK3+miR-495-3p inhibitor分别转染至MCF-7细胞并命名为si-NC组、si-circHIPK3组、si-circHIPK3+inhibitor NC组、sicircHIPK3+miR-495-3p inhibitor组,未做任何处理的MCF-7细胞记为NC组。qRT-PCR检测MCF-7细胞中circHIPK3、miR-495-3p表达;MTT法检测MCF-7细胞增殖;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;Transwell检测MCF-7细胞侵袭、迁移情况;Western blot检测MCF-7细胞XIAP、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin以及凋亡蛋白水平;双荧光素酶验证circHIPK3与miR-495-3p、miR-495-3p与XIAP的关系。结果 在乳腺癌组织和细胞中circHIPK3、XIAP水平显著上调,miR-495-3p表达量显著下调,且在MCF-7细胞差异最显著(P <0.05),因此选MCF-7细胞为研究对象。与NC组、si-NC组相比,sicircHIPK3组MCF-7细胞凋亡率、miR-495-3p表达量、E-cadherin、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P <0.05),OD450值、迁移、侵袭细胞数目、circHIPK3表达量、XIAP、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P <0.05)。下调miR-495-3p削弱了沉默circHIPK3对MCF-7细胞恶性生物学行为的抑制作用;circHIPK3靶向调节miR-495-3p/XIAP轴。结论 沉默circHIPK3可能通过上调miR-495-3p来抑制XIAP表达,进而对乳腺癌细胞起到抗增殖,促凋亡的作用。

LINC00467靶向miR-495-3p对胃癌细胞HGC-27增殖迁移的影响

目的:探讨长基因间非编码RNA 00467(LINC00467)是否靶向miR-495-3p调控胃癌细胞HGC-27的增殖和迁移。方法:采用实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测HGC-27细胞以及人胃黏膜上皮细胞GES-1中LINC00467和miR-495-3p表达量。采用双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定LINC00467和miR-495-3p之间的靶向调控关系。将HGC-27细胞分为si-NC组、si-LINC00467组、si-LINC00467+anti-miR-NC组、si-LINC00467+anti-miR-495-3p组。采用CCK-8法、平板克隆实验检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;免疫印迹法分析上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)和神经钙黏素(N-cadherin)表达。结果:与GES-1细胞相比,HGC-27细胞中LINC00467表达量显著升高(P<0.05),miR-495-3p表达量显著降低(P<0.05)。LINC00467与miR-495-3p直接结合。与si-NC组比较,si-LINC00467组HGC-27细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、N-cadherin蛋白表达量均显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量、miR-495-3p表达量显著升高(P<0.05)。与si-LINC00467+anti-miR-NC组比较,si-LINC00467+anti-miR-495-3p组HGC-27细胞存活率、克隆形成数、划痕愈合率、N-cadherin蛋白表达量均显著升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:干扰LINC00467通过上调miR-495-3p表达能够抑制胃癌细胞HGC-27增殖和迁移。

糖尿病肾病患者血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1表达水平及其与患者预后的相关性研究

目的研究血清微小RNA(micro RNA,miR)-495-3p,长链非编码RNA核富集转录体1(LncRNA NEAT1)水平与糖尿病肾病(DN)患者预后的关系。方法纳入河北以岭医院2019年1月~2021年1月期间116例DN患者作为DN组,收集其临床资料,根据肾脏病理损伤程度分为Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组;根据治疗后6个月随访期间是否发展为终末期肾病分为预后良好组和预后不良组;另收集同期单纯2型糖尿病(T2DM)患者102例作为T2DM组和健康体检者100例作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-495-3p和LncRNA NEAT1水平对DN患者预后的预测价值。结果对照组、T2DM组和DN组血清miR-495-3p水平(1.02±0.25,0.76±0.22,0.58±0.16)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.01±0.23,1.58±0.29,2.16±0.36)依次升高,差异均有统计学意义(F=117.238,391.506,均P<0.05)。DN中T2DM病程≥10年,eGFR≥60 ml/min/1.73 m^(2),FBG≥8mmol/L,24 h尿蛋白≥3 g/24 h的血清miR-495-3p水平(0.52±0.14,0.52±0.15,0.50±0.16,0.49±0.15)低于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(0.67±0.18,0.69±0.19,0.70±0.19,0.73±0.18);而LncRNA NEAT1水平(2.33±0.42,2.29±0.38,2.35±0.43,2.31±0.40)高于T2DM病程<10年,eGFR<60 ml/min/1.73 m^(2),FBG<8mmol/L和24 h尿蛋白<3 g/24 h(1.90±0.31,1.92±0.33,1.88±0.31,1.90±0.36),差异均有统计学意义(tmiR-495-3p=5.033,5.300,6.122,7.721,t LncRNA NEAT1=5.956,5.244,6.436,5.529,均P<0.05)。Ⅰ级组、Ⅱ级组、Ⅲ级组和Ⅳ级组血清miR-495-3p水平(0.74±0.19,0.61±0.16,0.50±0.08,0.39±0.06)依次降低,LncRNA NEAT1水平(1.69±0.30,2.08±0.32,2.34±0.35,2.74±0.39)依次升高,差异有统计学意义(F=32.060,46.730,均P<0.05)。预后不良组血清miR-495-3p水平(0.45±0.10)低于预后良好组(0.65±0.17),LncRNA NEAT1(2.53±0.47)水平高于预后良好组(1.97±0.36),差异有统计学意义(t=6.836,7.148,均P<0.05)。血清miR-495-3p,LncRNA NEAT1水平单独及联合预测DN患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.784(95%CⅠ:0.702~0.867),0.753(95%CⅠ:0.658~0.848)和0.834(95%CⅠ:0.755~0.912),特异度分别为71.1%,86.8%和77.6%,敏感度分别为62.5%,57.5%和77.5%。结论DN患者血清miR-495-3p低表达,LncRNA NEAT1高表达,二者水平与DN患者肾损伤及预后有关。

LINC00467通过靶向miR-495-3p调控视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡

目的:探讨LINC00467对视网膜母细胞瘤(Rb)细胞增殖、凋亡的影响和分子机制。方法:RT-qPCR检测Rb组织和正常视网膜组织中LINC00467和miR-495-3p表达。将Y79细胞分为si-NC、si-LINC00467、miR-NC、miR-495-3p、siLINC00467+anti-miR-NC、si-LINC00467+anti-miR-495-3p组,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定LINC00467对miR-495-3p的靶向调控作用。结果:抑制LINC00467表达,Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-495-3p后Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。抑制miR-495-3p表达可逆转抑制LINC00467表达对Y79细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:Rb中LINC00467表达升高,miR-495-3p表达降低。抑制LINC00467通过靶向上调miR-495-3p抑制Rb细胞增殖,诱导其凋亡。

miR-495-3p靶向IL-6R抑制宫颈癌细胞的增殖和转移的机制研究

目的:探讨miR-495-3p和白细胞介素6受体基因(IL-6R)在宫颈癌细胞增殖和转移中的作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测人宫颈永生化细胞H8和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、caski)中miR-495-3p和IL-6R表达水平。将SiHa细胞分为miR-NC、miR-495-3p、si-NC、si-IL-6R、miR-495-3p+pcDNA-NC、miR-495-3p+pcDNA-IL-6R组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验分别检测SiHa细胞的增殖和转移能力。Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告实验、Western blot确定miR-495-3p对IL-6R的靶向调控作用。结果:与H8细胞比较,宫颈癌细胞中miR-495-3p表达降低,IL-6R表达升高(P<0.05)。过表达miR-495-3p或抑制IL-6R表达后SiHa细胞CyclinD1、MMP2和MMP9表达降低,细胞增殖和转移能力降低(P<0.05);过表达IL-6R可逆转miR-495-3p对SiHa细胞增殖、转移以及其相关蛋白表达的影响(P<0.05)。IL-6R是miR-495-3p的靶基因,miR-495-3p负调控IL-6R表达。结论:miR-495-3p通过靶向IL-6R抑制宫颈癌细胞的增殖和转移,提示miR-495-3p在宫颈癌中具有抑癌作用。

miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响

旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制。本研究选取健康的3~4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(P<0.01),并且促进BAX表达(P<0.05),抑制BCL2表达(P<0.01);过表达miR-495-3p呈时间依赖性抑制细胞增殖活力,显著降低PCNA的表达(P<0.05);过表达miR-495-3p显著增加G2/M期细胞百分比(P<0.05),并显著降低细胞周期相关基因CDK4(P<0.001)和CCND1(P<0.05)的mRNA水平,抑制miR-495-3p极显著降低CCNE1的mRNA水平(P<0.01);miR-495-3p促进颗粒细胞E2和P4分泌;过表达miR-495-3p显著提高3β-HSD(P<0.001)、CYP11A1(P<0.01)、CYP19A1(P<0.05)的mRNA和蛋白表达水平,干扰miR-495-3p极显著抑制3β-HSD(P<0.01)、促进CYP11A1的表达(P<0.01)。上述结果表明,miR-495-3p促进颗粒细胞凋亡,抑制增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,刺激类固醇激素分泌,从而影响山羊卵泡的发育。

miR-495-3p对LPS刺激人牙周膜细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的:研究miR-495-3p对脂多糖(LPS)刺激人牙周膜细胞(h PDLC)增殖及炎性因子表达的影响。方法:分离培养原代h PDLC,然后给予10μg/m L的LPS处理及miR-495-3p模拟物(mimic)转染。实时定量RT-PCR检测LPS处理后miR-495-3p及Toll样受体4(TLR4)的表达;MTT法检测h PDLC细胞增殖;ELISA法检测白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;双荧光素酶报告基因检测miR-495-3p与TLR4的靶向关系;Western blot法检测miR-495-3p mimic转染后TLR4及磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)的表达。结果:LPS处理后,miR-495-3p的表达显著下降,TLR4的表达显著上升。过表达miR-495-3p可显著促进h PDLC细胞的增殖,抑制IL-6及TNF-α的产生;miR-495-3p可靶向结合到TLR4的3'UTR区,并下调TLR4的表达;过表达miR-495-3p可显著抑制p-IκBα的表达。结论:miR-495-3p可通过靶向下调TLR4的表达,抑制核转录因子-κB(NF-κB)通路,进而抑制炎性因子的产生,促进h PDLC的增殖。

circCSPP1靶向miR-495-3p调控结直肠癌细胞的增殖和糖酵解

目的研究环状RNA中心体/纺锤体相关蛋白基因(circCSPP1)在结直肠癌细胞增殖和糖酵解中的作用,并探索其潜在机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circCSPP1和miR-495-3p在结直肠癌组织、癌旁组织中的表达。将si-NC、si-circCSPP1、miR-NC、miR-495-3p mimics、si-circCSPP1+anti-miR-NC、si-circCSPP1+anti-miR-495-3p分别转染HCT116细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,试剂盒检测细胞中葡萄糖消耗和乳酸水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定circCSPP1与miR-495-3p之间相互作用。结果与癌旁组织比较,结直肠癌组织中circCSPP1表达显著升高,miR-495-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制circCSPP1或过表达miR-495-3p后,HCT116细胞活力显著降低,葡糖糖消耗和乳酸产生水平显著降低(P<0.05)。抑制miR-495-3p表达可逆转抑制circCSPP1对HCT116细胞活力和糖酵解反应的影响(P<0.05)。miR-495-3p是circCSPP1的靶基因,circCSPP1负调控miR-495-3p表达。结论抑制circCSPP1能够抑制胃癌细胞的增殖和糖酵解反应,其机制与靶向调控miR-495-3p有关。

LncRNA NEAT1与miR-495-3p对重症肺部感染的诊断价值及其对T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA NEAT1(LncRNA NEAT1)与微小RNA-495-3p(miR-495-3p)对重症肺部感染的诊断价值及其对T淋巴细胞凋亡的影响。方法收集95例肺部感染患者为研究对象,分为重症感染组(50例)与非重症感染组(45例),选取40例健康志愿者为对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NEAT1与miR-495-3p的表达量;采用受试者工作特征(ROC)分析血清NEAT1、miR-495-3p对重症感染的诊断价值。采用免疫磁珠分选外周血T淋巴细胞,分别将si-NC、si-NEAT1转染至T淋巴细胞;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)表达量。结果与对照组相比,非重症感染组、重症感染组患者血清和T淋巴细胞中NEAT1的表达水平显著升高(P<0.05),miR-495-3p的表达水平显著降低(P<0.05),非重症感染组与重症感染组间差异亦有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示NEAT1在重症感染诊断时敏感度为82.00%,特异度为84.44%,AUC面积为0.816;miR-495-3p在重症感染诊断时敏感度为78.00%,特异度为82.22%,AUC面积为0.820;与对照组相比,非重症感染组与重症感染组T淋巴细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05),非重症感染组与重症感染组间差异亦有统计学意义(P<0.05);与si-NC组相比,si-NEAT1组T淋巴细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05),miR-495-3p的表达水平显著升高(P<0.05)。结论重症肺部感染患者血清中NEAT1的表达水平升高,miR-495-3p的表达水平降低,二者对重症肺部感染具有一定诊断价值,沉默NEAT1可能通过上调miR-495-3p表达从而抑制重症肺部感染患者T淋巴细胞凋亡。

miR-495-3p/WIF1/Wnt信号通路轴调节视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的分析miR-495-3p/Wnt抑制因子(Wnt inhibitor factor 1,WIF1)/Wnt信号通路轴调节视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞增殖、迁移和侵袭。方法生物信息学分析WIF1的差异表达及与临床不良表型之间的关系,并预测miRNA靶标;双荧光酶素报告实验验证。构建稳定过表达WIF1的RB细胞(Vector组、WIF1组)。构建稳定过表达miR-495-3p的RB细胞(miR-NC组、miR-495-3p组和miR-495-3p+WIF1组)。Western印迹检测WIF1蛋白及Wnt通路相关蛋白表达,并进行体外功能试验。裸鼠移植瘤实验分析移植瘤体积重量。免疫组化分析WIF1在RB组织中水平。结果WIF1低表达,与迁移、侵袭有关,为miR-495-3p靶标,双荧光酶素报告实验证实WIF1是miR-495-3p作用靶点。WIF1过表达抑制细胞增殖、迁移和侵袭,影响细胞周期,诱导凋亡。体内实验显示WIF1在RB组织中过表达,其过表达抑制瘤体生长。过表达WIF1下调β-catenin、c-Myc蛋白水平(P<0.05)。过表达miR-495-3p下调WIF1蛋白水平,上调β-catenin和c-Myc蛋白水平,促进细胞增殖迁移、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.05),增加WIF1表达可逆转miR-495-3p的作用(P<0.05)。结论miR-495-3p靶向WIF1通过Wnt信号通路抑制RB细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导凋亡。

miR-495-3p通过调控HDAC9表达对缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响

目的探讨微小RNA-495-3p(miR-495-3p)对缺氧/复氧(H/R)诱导的神经细胞凋亡及炎症反应的影响及机制。方法体外培养神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,建立H/R损伤细胞模型。实验分组:Con组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-495-3p组、H/R+si-NC组、H/R+si-HDAC9组、H/R+miR-495-3p+pc DNA组、H/R+miR-495-3p+pc DNA-HDAC9组。采用q RT-PCR与Western blot分别检测细胞中miR-495-3p、组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)的表达;采用膜联蛋白V(AnnexinV)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;双荧光素酶报告基因检测miR-495-3p与HDAC9的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果与Con组比较,H/R组神经细胞中miR-495-3p的表达水平显著降低(P<0.05),HDAC9的表达水平显著升高(P<0.05);H/R处理后细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞中Bax蛋白表达水平升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);miR-495-3p过表达或抑制HDAC9表达后细胞凋亡率降低(P<0.05),Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);miR-495-3p可靶向结合到HDAC9的3′UTR区,并下调HDAC9的表达;HDAC9过表达可逆转miR-495-3p过表达对H/R诱导的神经细胞凋亡及炎症因子表达水平的抑制作用。结论miR-495-3p可通过靶向下调HDAC9的表达抑制H/R诱导的神经细胞凋亡及抑制炎性因子的产生进而对神经细胞发挥保护作用。

miR-495-3p联合黄氏总皂苷对高糖诱导的成骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨微小RNA-495-3p(miR-495-3p)联合黄芪总皂苷(TSA)在高糖诱导的成骨细胞增殖、凋亡中的作用及其机制。方法 2018年2月至2019年4月,将商购的小鼠成骨细胞MC3T3-E1用随机数字表法分为对照(NC)组,高糖组,高糖+不同浓度TSA组,高糖+miRNA阴性对照(miR-con)组,高糖+miR-495-3p组,高糖+TSA+抗miRNA阴性对照(anti-miR-con)组,高糖+TSA+抗miR-495-3p(anti-miR-495-3p)。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时定量PCR(qRTPCR)检测miR-495-3p表达,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleave-caspase-3)蛋白水平。结果与NC组比较,高糖组MC3T3-E1细胞存活率[(52.26±5.26)%比(100.26±10.03)%]和miR-495-3p[(0.25±0.03)比(1.00±0.10)]、CyclinD1表达量明显降低,细胞凋亡率[(35.33±3.53)%比(10.06±1.51)%]和Cleave-caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05)。与高糖组比较,0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL浓度TSA显著提高MC3T3-E1细胞存活率[(63.26±6.02)%、(72.56±7.25)%、(90.46±8.88)%、(100.04±10.01)%、(102.56±10.23)%比(52.26±5.26)%],2.0μg/mL TSA显著降低细胞凋亡率[(18.56±1.66)%比(35.33±3.53)%]和Cleave-caspase-3水平,明显提高miR-495-3p[(0.95±0.09)比(0.25±0.03)]、CyclinD1表达量(P<0.05),这与高糖+miR-495-3p组促进MC3T3-E1增殖,抑制凋亡的作用相同。低表达miR-495-3p可以逆转TSA促进高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖作用和抑制细胞凋亡作用。结论黄芪总皂苷通过miR-495-3p促进高糖诱导的成骨细胞增殖,并抑制其凋亡。

miR-495-3p 在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:检测miR-495-3p在结直肠癌(CRC)组织和细胞中的表达,探讨miR-495-3p对CRC细胞增殖、迁移、凋亡的影响。方法:采用RT-qPCR检测22对CRC及其癌旁组织和CRC细胞以及正常结肠上皮细胞中miR-495-3p的表达,选取其中差异表达最明显的两组细胞株转染miR-495-3p mimic、miR-495-3p inhibitor以及各自对照组。CCK-8和EdU实验检测细胞增殖能力、Transwell检测细胞迁移能力、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:CRC组织和细胞中miR-495-3p表达降低(P<0.01)。与对照组相比,转染miR-495-3p mimic后细胞增殖和迁移能力下降(P<0.05),凋亡细胞增多(P<0.05);转染miR-495-3p inhibitor后细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),凋亡细胞减少(P<0.05)。结论:miR-495-3p在CRC组织和细胞中低表达,上调miR-495-3p表达后能降低细胞增殖、迁移能力,增加细胞凋亡率,在CRC中扮演着抑癌基因的作用。