血清外泌体miR-575与ER阳性乳腺癌患者他莫昔芬辅助治疗预后的相关性研究

目的研究血清外泌体miR-575水平与雌激素受体(ER)阳性乳腺癌患者他莫昔芬辅助内分泌治疗预后的相关性。方法通过生物信息学分析miR-575表达水平与乳腺癌患者总体生存率的关系。采集接受他莫昔芬辅助内分泌治疗的162例ER阳性乳腺癌患者的血液样本作为观察组,另外收集165例非癌志愿者的血液样本作为对照组,以实时荧光定量PCR法检测血清外泌体miR-575表达水平。观察组患者至少随访5年,根据患者对他莫昔芬的耐药情况将其分为抵抗组和敏感组,分析血清外泌体miR-575表达水平与术后疾病进展的关系。采用单因素和多因素Cox回归分析影响ER阳性乳腺癌患者他莫昔芬治疗预后的临床因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC)。结果生物信息学结果显示,miR-575在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常乳腺组织(P<0.001);且在ER阳性患者中,miR-575表达水平升高与Nottingham病理学分级较高以及预后不良有关(P<0.05)。观察组患者血清外泌体miR-575相对表达水平高于对照组1.834(1.168,2.519)vs.1.003(0.901,1.217),Z=-8.871,P<0.001;观察组患者血清外泌体与乳腺癌组织miR-575相对表达水平呈正相关(rs=0.726,P<0.001)。随访5年,110例患者对他莫昔芬耐药(抵抗组),52例对他莫昔芬敏感(敏感组)。抵抗组血清外泌体miR-575相对表达水平明显高于敏感组2.097(1.700,3.163)vs.1.168(0.947,1.524),Z=-7.164,P<0.001。Kaplan-Meier曲线显示,血清外泌体miR-575高表达组患者中位疾病进展时间短于低表达组(P<0.001)。Cox回归分析和ROC曲线结果显示,血清外泌体miR-575高表达是ER阳性乳腺癌患者接受他莫昔芬辅助内分泌治疗预后不良的独立危险因素(P<0.05),预测5年疾病进展的AUC为0.850(95%CI0.789~0.910)。结论血清外泌体miR-575表达水平较高预示着ER阳性乳腺癌患者接受他莫昔芬辅助内分泌治疗预后不良,有望成为预测他莫昔芬敏感性的一个重要参考指标。

miR-575对腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感性的影响及机制研究

目的探讨miR-575在腹泻型肠易激综合征(IBS-D)中的作用及机制。方法40只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(IBS-D组)、miR-575抑制空白对照组(NC antagomir组)、miR-575抑制组(miR-575 antagomir组),每组10只,采用母婴分离与束缚应激相结合的方法建立IBS-D模型。RT-qPCR检测结肠组织中miR-575的表达水平;检测各组大鼠的粪便含水量;腹部撤退反射(AWR)评分系统评估各组大鼠的内脏高敏感性;HE染色检测结肠组织病理学变化;ELISA检测结肠组织中5-HT、SP和CGRP的水平;Western blot检测结肠组织中PAR2、TRPV1、PTEN、p-AKT蛋白水平。结果miR-575在IBS-D大鼠结肠组织中表达升高。miR-575 antagomir可显著降低大鼠粪便含水量和AWR评分,下调5-HT、SP和CGRP水平以及PAR2、TRPV1蛋白表达,上调PTEN表达,抑制AKT信号通路活化。结论抑制miR-575可改善IBS-D大鼠内脏高敏感性,其机制可能与调控PTEN/AKT通路有关。

lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h,将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-575组;将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中,记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平;双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中RPL34-AS1表达水平降低(1.00±0.08比0.47±0.05),miR-575表达水平升高(1.01±0.07比3.12±0.28)(P<0.05)。转染si-RPL34-AS1后,细胞活性升高(48 h:0.68±0.06比0.55±0.05;72 h:0.99±0.08比0.71±0.06),G1期细胞所占比例降低(13.42±1.38比32.15±2.11),S期细胞所占比例升高(53.75±5.22比34.69±3.41),细胞凋亡率降低(4.31±0.42比9.25±0.91),CyclinD1、Bcl-2表达水平升高(0.92±0.08比0.71±0.07;0.86±0.07比0.61±0.06),p21、Bax表达水平降低(0.13±0.02比0.29±0.03;0.19±0.02比0.31±0.03)(P均<0.05)。RPL34-AS1靶向调控miR-575,过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性,阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-575有关。

X射线对人外周血白细胞miR-575表达的影响

目的探讨电离辐射对外周血白细胞microRNA-575(miR-575)表达水平的影响。方法用EDTA-K2血常规管收集2例(男、女各1例)健康成年人肘正中静脉血各48 ml,分成4份,每份6个样品,在室温下分别接受剂量为0 Gy、0.5 Gy、1 Gy、3 Gy、5 Gy和8 Gy的6MV X射线照射,照射剂量率为2 Gy/min,照射面积大小为10 cm×10 cm。随后将接受照射的血样接种于RPMI-1640完全培养基中,37℃培养12 h、24 h、48 h和72 h,收获培养物后分离其中白细胞的总RNA,采用实时荧光定量PCR实验检测外周血白细胞中miR-575的相对表达量。结果照射剂量对辐照培养后白细胞miR-575相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),但培养时间差异无统计学意义(P>0.05)。与0 Gy组相比,照射0.5 Gy、1 Gy、3 Gy和5 Gy后的白细胞miR-575相对表达量明显增加(P<0.05),在辐射剂量为5 Gy处达到峰值,到8 Gy下降,剂量-效应曲线符合二次函数方程,拟合曲线方程:y=-0.0054x2+0.0432x+0.343(r2=0.929)。结论白细胞miR-575的表达水平可能与电离辐射损伤有关,可能有作为电离辐射相关生物标志的潜力。

银杏叶提取物调控缺氧致心肌细胞凋亡的机制

[目的]探讨银杏叶提取物(GBE)调控缺氧致心肌细胞凋亡的潜在分子机制。[方法]使用银杏叶提取物处理缺氧心肌细胞H9c2,检测其凋亡水平。通过高通量测序检测银杏叶提取物处理后缺氧心肌细胞H9c2 miRNA的表达谱。通过过表达差异miRNA,寻找关键miRNA。通过miRDB在线分析潜在的靶标。通过过表达或敲低靶标的方法检测miRNA与靶标的结合和生物学功能。[结果]缺氧处理后,心肌细胞H9c2的凋亡水平显著上升(P<0.05),而用GBE处理后,心肌细胞H9c2的凋亡水平显著下降(P<0.05)。过表达miR-575时,心肌细胞H9c2的凋亡水平下降(P<0.05)。GBE处理心肌细胞H9c2后,WEE1、MEF2C、CD40、ANKRD23、ZNF827的表达水平显著下降(P<0.05)。敲低CD40后,心肌细胞H9c2的凋亡水平下降(P<0.05)。过表达CD40后,心肌细胞H9c2的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达miR-575后,CD40的mRNA水平和蛋白水平均下降(P<0.05);敲低miR-575后,CD40的mRNA水平和蛋白水平均上升(P<0.05)。同时,荧光素酶报告实验发现miR-575靶向CD40的3’端非编码区(P<0.05)。然而,同时敲低miR-575和CD40,心肌细胞H9c2的凋亡水平无显著差异(P>0.05);同时过表达miR-575和CD40,心肌细胞H9c2的凋亡水平无显著差异(P>0.05)。[结论]银杏叶提取物通过上调miR-575的表达水平后,miR-575靶向CD40 mRNA的3’端非编码区后降低了CD40的翻译,随后抑制了缺氧致心肌细胞H9c2的凋亡。