MiR-610通过下调双微体基因2的表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨miR-610对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。方法:通过RT-PCR检测卵巢癌组织及细胞、正常组织及细胞中miR-610与鼠双微体基因2(MDM2)mRNA的表达;通过Lipofectamine 2000将miR-NC、miR-610 mimic、miR-6101 inhibitor、pc-MDM2质粒分别或联合转染进入HO8910细胞;划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,免疫印迹检测E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、N-钙黏着蛋白(N-cadherin)和MDM2蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因检测miR-610与MDM2靶向关系。结果:与正常卵巢组织和上皮细胞系HOSEpiC相比,人宫颈癌组织和细胞系中miR-610表达明显下调,选择下调效果较明显的HO8910细胞系进行后续实验。与Control组相比,miR-610 mimic组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显降低、侵袭细胞数目明显减少、E-cadherin明显上调、N-cadherin表达明显下调,miR-610 inhibitor组卵巢癌HO8910细胞划痕闭合率明显升高、侵袭细胞数目明显增多、E-cadherin明显下调、N-cadherin表达明显上调。MiR-610与MDM23'UTR区存在结合位点,且miR-610靶向下调MDM2表达。共转染pc-MDM2逆转了miR-610 mimic对卵巢癌HO8910细胞迁移和侵袭能力抑制作用。结论:MiR-610通过靶向下调MDM2抑制卵巢癌HO8910细胞迁移和侵袭能力。

miR-610的克隆及其慢病毒表达载体的构建

目的:克隆微小RNA hsa-miR-610并构建其慢病毒表达载体。方法:将PCR扩增得到的miR-610前体序列和pcDNA6.2-GW/EmGFP载体经双酶切后连接产生pcDNA6.2-miR-610真核表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆。通过BP反应及LR反应将pre-miR-610克隆至慢病毒目的载体pLenti6/V5-DEST,构建miR-610的慢病毒表达载体pLenti6/V5-miR-610。结果:将构建好的慢病毒表达载体导入大肠杆菌Stbl3进行扩增,测序表明所构建的载体与预期的完全一致。结论:成功构建了miR-610的慢病毒表达载体pLenti6/V5-miR-610,为深入研究miR-610的生物学功能奠定了基础。

FEZF1-AS1靶向miR-610对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用

目的:探讨长链非编码RNA FEZF1-AS1对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FEZF1-AS1和miR-610在膀胱癌组织中的相对表达量;通过在膀胱癌细胞中干扰FEZF1-AS1后,采用CCK-8实验检测膀胱癌细胞增殖能力的变化;采用Transwell迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,通过蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测FEZF1-AS1与miR-610的靶向结合,通过荧光素酶实验验证FEZF1-AS1和miR-610的靶向关系;通过细胞周期实验验证FEZF1-AS1对细胞周期的影响;通过细胞凋亡实验验证FEZF1-AS1对细胞凋亡的影响;通过裸鼠荷瘤实验验证FEZF1-AS1在体内对肿瘤细胞增殖的影响;通过以上实验推测FEZF1-AS1在膀胱癌中的作用。结果:FEZF1-AS1在膀胱癌组织中高表达(P<0.01),miR-610在膀胱癌组织中低表达(P <0.01),二者呈负相关(r=-0.572 6,P=0.000 3);shFEZF1-AS1能显著抑制FEZF1-AS1表达并促进miR-610表达(P<0.05),miR-610inhibitor可减弱sh-FEZF1-AS1对miR-610表达的促进作用(P<0.05),FEZF1-AS1能明显抑制miR-610表达(P<0.05),miR-610mimic可减弱FEZF1-AS1对miR-610表达的抑制作用(P<0.05)。RIP实验显示FEZF1-AS1能够靶向结合miR-610;荧光素酶报告实验表明FEZF1-AS1序列上有miR-610的结合位点。sh-FEZF1-AS1能显著抑制T24细胞增殖、侵袭和迁移、抑制细胞分化、促进细胞凋亡(均P<0.05);miR-610 inhibitor能显著减弱sh-FEZF1-AS1对T24细胞的增殖、侵袭、迁移、促进细胞分化、抑制细胞凋亡(P<0.05)。结论:FEZF1-AS1可通过靶向miR-610促进膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与FEZF1-AS1对miR-610的吸附有关。

蒲公英萜醇通过上调微小RNA-610表达抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移侵袭

目的探讨蒲公英萜醇对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法2019年4月至2020年1月,将鼻咽癌细胞SUNE1分为对照组、蒲公英萜醇低、中、高浓度组、微小RNA(miR)-NC组、miR-610组、蒲公英萜醇+anti-miR-NC组、蒲公英萜醇+anti-miR-610组。MTT法检测SUNE1细胞增殖;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测miR-610表达水平。结果不同浓度蒲公英萜醇处理鼻咽癌细胞SUNE1后,细胞增殖抑制率[(16.72±1.42)%、(31.95±2.95)%、(54.59±5.0)%比(0.00±0.00)%]和p21、miR-610(1.68±0.14、2.37±0.21、3.09±0.29比1.00±0.06)表达水平升高,迁移(70.02±5.72、56.49±5.35、43.37±4.19比86.71±7.05)、侵袭(50.70±4.41、39.12±3.89、26.28±2.78比69.12±4.80)细胞数和Cy⁃clinD1、MMP-2、MMP-9水平降低,呈浓度依赖性(P<0.05)。过表达miR-610可提高细胞增殖抑制率[(46.66±4.48)%比(7.11±0.74)%]和p21表达水平,降低迁移(52.18±5.35比87.40±6.86)、侵袭(33.11±3.29比70.27±5.39)细胞数和CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平(P<0.05)。抑制miR-610表达逆转了蒲公英萜醇抗鼻咽癌SUNE1细胞增殖、迁移和侵袭作用。结论蒲公英萜醇可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调miR-610表达相关。