miR-623靶向MMP1调控食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:分析基质金属蛋白酶1(MMP1)在食管鳞癌组织中的表达水平,探究miRNA-623(miR-623)靶向调控MMP1表达水平影响食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡能力的分子机制。方法:从GEO数据库中下载关于食管鳞癌微阵列数据库,分析53对食管鳞癌与癌旁组织中MMP1 mRNA表达水平。qRT-PCR及Western blot法检测人正常食管鳞状上皮细胞(HET-1A)及人食管鳞癌细胞系(TE-10、KYSE30、KYSE180)中miR-623和MMP1蛋白的表达水平。生物信息学方法分析miR-623与MMP1结合的靶向序列。双荧光素酶报告基因实验检测miR-623对MMP1的靶向调控机制。用脂质体法将miR-623 mimic转染TE-10食管鳞癌细胞系中,通过qRT-PCR及Western blot检测转染后TE-10细胞系中MMP1的表达水平。CCK-8实验观察细胞增殖能力,流式细胞术观察细胞凋亡能力,细胞划痕及Transwell侵袭实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MMP1 mRNA在食管鳞癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。与人正常食管鳞状上皮细胞系相比,在食管鳞癌细胞系中miR-623的表达水平显著下调(P<0.05),而MMP1蛋白水平则显著上调(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-623能显著影响MMP1 3'-UTR表达载体的荧光素酶活性(P<0.05)。过表达miR-623可显著降低MMP1表达水平,抑制食管鳞癌细胞系细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡(均P<0.05)。结论:在食管鳞癌中miR-623低表达,而MMP1高表达;miR-623可靶向调控癌基因MMP1的表达,从而调控食管鳞癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭,提示其可能是一个潜在的食管鳞癌治疗靶点。

circ_0084927靶向miR-623调控喉癌TU177细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨circ_0084927靶向miR-623对喉癌TU177细胞增殖和凋亡的影响。方法选取2017年6月—2019年6月接受手术治疗的喉癌41例,检测癌组织和癌旁组织circ_0084927和miR-623的表达水平。将喉癌TU177细胞分为si-NC组、si-circ_0084927组、miR-NC组、miR-623组、pcDNA组、pcDNA-circ_0084927组、si-circ_0084927+anti-miR-NC组和si-circ_0084927+anti-miR-623组,检测细胞光密度(OD)值、凋亡率、细胞克隆形成数及凋亡相关蛋白表达情况;应用双荧光素酶报告实验确定circ_0084927和miR-623的靶向关系。结果与癌旁组织比较,喉癌组织中circ_0084927相对表达水平升高,miR-623相对表达水平降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-circ_0084927组TU177细胞OD值、克隆形成数降低,凋亡率及剪切型半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、Cleaved-caspase9蛋白表达水平升高(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-623组TU177细胞OD值、克隆形成数降低,凋亡率及Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白表达水平升高(P<0.01)。与pcDNA组比较,pcDNA-circ_0084927组TU177细胞miR-623相对表达水平降低(P<0.05)。与si-circ_0084927+anti-miR-NC组比较,si-circ_0084927+anti-miR-623组TU177细胞OD值、克隆形成数升高,凋亡率及Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论干扰circ_0084927通过靶向上调miR-623表达可抑制喉癌TU177细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

Hsa_circ_0000128通过miR-623/EIF4A1轴促进人胃腺癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的目前对于hsa_circ_0000128是否通过miR-623/EIF4A1轴通路参与胃腺癌的发生过程尚不清楚。文中旨在研究环状RNA hsa_circ_0000128(Circ_01607)在胃腺癌组织、细胞株的表达以及对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响。方法收集2019年9月至2020年8月江苏大学附属人民医院病理科的40份胃腺癌及癌旁组织标本。进行高通量测序筛选出表达明显提高的环状RNA hsa_circ_0000128;通过circBank、TargetScan等数据库预测下游miR-623。采用RT-PCR对40例临床胃腺癌组织、癌旁组织、胃癌细胞株(MGC-803,HGC-27,BGC-823)以及正常人胃粘膜上皮细胞株GES-1中hsa_circ_0000128的表达进行测定及验证结果。挑选出表达量差异最大的两组进行后续实验。将HGC-27、MGC-803细胞株分别接种于两块细胞培养板中,培养板中设置相应的circRNA组别:Si-NC组(Si-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ组(si-hsa_circ_0000128转染胃腺癌细胞)、Si-EIF4A1组(Si-EIF4A1转染胃腺癌细胞)、miR-NC组(miR-623-NC转染胃腺癌细胞)、miR-mimics组(miR-623-mimics转染胃腺癌细胞)、miR-inh组(miR-623-inhibitors转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-NC组(Si-circ、miR-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-inh组(Si-circ、miR-inh转染胃腺癌细胞)。采用克隆形成实验测定各组细胞增殖能力;使用Transwell实验测定各组胃癌细胞的迁移能力;蛋白免疫印迹实验测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、bcl-2和Bax的表达水平验证细胞凋亡情况。验证miR-623在组织及细胞中的表达情况,通过荧光素酶实验验证结合靶点信息,加入miRNA对应干扰并将其分组,通过细胞功能学实验,蛋白印迹实验比较胃癌细胞株各组细胞功能的变化。通过PCR及蛋白免疫印迹实验验证各组真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)的相关表达水平与miR-623含量的关系。结果hsa_circ_0000128在胃癌组织及细胞株中较癌旁组织及正常胃黏膜上皮细胞中呈高表达状态。SI-circ组hsa_circ_0000128的相对表达量明显低于SI-NC组(P<0.05)。SI-circ+miR-inh组miR-623含量较SI-circ+miR-NC组下降(P<0.05)。SI-circ组Cleaved-caspase-3、Bax相对表达量较SI-NC组增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量下降(P<0.05)。HGC-27和MGC-803细胞中Si-circ组的克隆形成率[(11.57±1.724)%、(12.47±2.401)%]明显低于Si-NC组[(32.53±3.250)%、(25.07±1.557)%],差异有统计学意义(P<0.05)。加入miR-623 inhibitor后可逆转抑制现象,SI-circ+miR-NC组克隆形成率[(10.43±1.305)%、(12.50±1.400)%]明显低于Si-circ+miR-inh组[(25.03±1.665)%、(19.63±1.955)%],差异具有统计学意义(P<0.01)。Transwell实验表明,SI-circ组较SI-NC组迁移明显降低(P<0.05)。EIF4A1在40对胃癌组织及胃癌细胞株HGC-27、MGC-803表达较癌旁组织、正常胃黏膜上皮细胞GES-1中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验显示当敲减hsa_circ_0000128时,EIF4A1的含量下降;当加入miR-623 inhibitor逆转敲减circRNA情况时,EIF4A1的表达含量上升(P<0.01)。结论hsa_circ_0000128在胃癌细胞株、组织中呈高表达,hsa_circ_0000128作为miR-623的海绵上调EIF4A1促进胃癌细胞的生物学功能;含量下调后可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移并诱导其凋亡。

miR-623在膀胱癌中的表达及靶向Fascin1抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-623在膀胱癌中的表达及通过靶向Fascin1对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测正常膀胱上皮组织、膀胱癌组织、正常永生化膀胱上皮细胞系(SV-HUC-1)和膀胱癌细胞系(T24、UMUC3)中miR-623的表达量;采用脂质体瞬时转染miR-623 mimics,划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-623过表达后膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的改变;生物信息学预测miR-623的作用靶蛋白。miR-623过表达后Western blot及双荧光素酶报告基因检测其靶点的表达及结合情况;使用Fascin1特异性siRNA观察膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,并同时转染miR-623 inhibitor进行恢复实验。结果:miR-623在膀胱癌中的表达水平显著低于在正常膀胱组织中的表达(P<0.05),在膀胱癌细胞系(T24、UMUC3)中的表达水平显著低于正常膀胱细胞系(SV-HUC-1)(P<0.05);miR-623过表达显著抑制T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力。生物信息学预测Fascin1为miR-623的靶基因,在T24和UMUC3细胞中过表达miR-623,能够显著降低Fascin1的蛋白水平;荧光素酶报告基因分析结果证实miR-623作用于Fascin1的3'-UTR。下调Fascin1表达能够抑制膀胱癌T24和UMUC3细胞的迁移和侵袭能力,同时抑制miR-623的表达能够提高细胞的迁移和侵袭能力。结论:miR-623在膀胱癌中表达水平降低,是一个抑癌因子;并可能通过靶向Fascin1调节膀胱癌的侵袭和转移能力。

AKT/mTOR信号通路调控miR-623表达对膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和迁移的影响

目的研究基于蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路研究调控微小核糖核酸-623(miR-623)表达对膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和迁移的影响。方法膀胱尿路上皮癌T24细胞经过培养、转染后,分为膀胱癌组、miR-623上调组、miR-623下调组。采用实时荧光定量PCR检测miR-623观察膀胱尿路上皮癌细胞的侵袭和迁移能力,采用免疫印迹(Western blot)检测磷酸蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),采用实时荧光定量PCR检测AKT、mTOR基因。结果miR-623上调组表达低于膀胱癌组、miR-623下调组;miR-623下调组表达低于膀胱癌组,高于miR-623上调组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-623上调组AKT、mTOR基因相对表达量低于膀胱癌组、miR-623下调组;miR-623下调组AKT、mTOR基因相对表达量低于膀胱癌组,高于miR-623上调组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-623上调组p-AKT、p-mTOR蛋白表达低于低于膀胱癌组、miR-623下调组;miR-623下调组p-AKT、p-mTOR蛋白表达高于miR-623上调组,低于膀胱癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论调控miR-623可以影响AKT/mTOR信号通路的活性,参与膀胱尿路上皮癌细胞侵袭和迁移的过程,在膀胱癌中起到重要作用。

miR-623靶向DNM2调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡研究

目的探讨miR-623调控非小细胞肺癌细胞A549凋亡的潜在分子机制。方法在非小细胞肺癌细胞A549中过表达或抑制miR-623,检测细胞的凋亡水平。通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统分析miR-623的底物。通过siRNA和质粒分别敲低和过表达底物,检测非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平。结果过表达miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(t=3.313,P<0.05);敲低miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(t=7.764,P<0.05)。miRDB在线分析发现miR-623潜在靶向TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、DNM2、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2。过表达miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549中DNM2的表达水平下降(t=5.418,P<0.05),而TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2的表达水平均无显著变化(P值均>0.05);抑制miR-623后,非小细胞肺癌细胞A549中DNM2的表达水平上升(t=2.898,P<0.05),而TRIM44、FOXN2、PTPRD、KLF3、EPHB6、APEM2、BIRC2、PHF6和FBN2的表达水平均无显著变化(P值均>0.05)。此外,miR-623靶向DNM2 mRNA的3′端非编码区。敲低DNM2后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡下降(t=7.381,P<0.05);过表达DNM2后,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡上升(t=4.113,P<0.05)。同时过表达miR-623和DNM2,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平无明显变化(t=0.751,P>0.05);同时敲低miR-623和DNM2,非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平无明显变化(t=0.626,P>0.05)。结论miR-623通过靶向DNM2 mRNA的3′端非编码区,抑制了DNM2的表达,最终抑制了非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。