MiR-634通过mTOR通路抑制宫颈癌细胞c4-1、caski增殖并促进其凋亡的研究

目的:探讨MiR-634通过mTOR通路抑制宫颈癌细胞c4-1、caski增殖并促进其凋亡的相关机制。方法:选取30例宫颈癌组织标本和宫颈癌细胞c4-1、caski作为研究对象,分析正常组织和宫颈癌组织的MiR-634和mTOR表达,MiR-634对宫颈癌细胞mTOR的表达水平以及对宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。结果:宫颈癌组织MiR-634相对表达水平显著低于正常组织(P<0.05),宫颈癌组织mTOR相对表达水平显著高于正常组织(P<0.05),宫颈癌组织mTOR的IS得分显著高于正常组织(P<0.05);过表达MiR-634显著降低mTOR的RNA和蛋白表达水平(P<0.05),抑制MiR-634的表达显著提高mTOR的RNA和蛋白表达水平(P<0.05);过表达MiR-634显著降低宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),抑制MiR-634的表达显著提高细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);抑制mTOR的表达均显著降低细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。结论:MiR-634通过抑制mTOR的表达来抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是宫颈癌基因靶向治疗的潜在靶点。

miR-634在肝癌中的表达及对肝癌细胞生物学行为的影响

目的：检测microRNA-634（miR-634）在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法：采用实时荧光定量PCR（RT-q PCR）法检测肝癌细胞系（Hep G2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739）、69例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634的相对定量,分析miR-634表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh分级、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/PI双染法和Transwell侵袭实验检测转染miR-634对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果：与正常人肝细胞系L-02相比,肝癌细胞的miR-634水平均降低（P〈0.05）,表达量依次为Hep G2〉SNU739〉Bel7402〉Bel7404〉SMMC7721;69例肝癌组织的miR-634水平为（0.253±0.019）,低于匹配癌旁组织（P〈0.05）,且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关（P〈0.05）。过表达组转染24~96 h后的miR-634水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义（P〈0.05）;与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：miR-634在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。

干扰LINC00308促进miR-634对前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究干扰长链非编码RNA(lncRNA)LINC00308是否通过促进微小RNA(miRNA)-634影响前列腺癌细胞的增殖与凋亡。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测前列腺癌组织中LINC00308的表达。利用LINC00308小干扰RNA(si-LINC00308)转染前列腺癌细胞PC-3M和DU145,构建干扰LINC00308的细胞,采用qRT-PCR检测LINC00308和miR-634的表达水平,流式细胞术评估细胞的周期与凋亡,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞核相关抗原Ki67(Ki67)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白的表达。starBase在线工具预测结合双荧光素酶报告实验分析LINC00308对miR-634的靶向调控。在PC-3M和DU145细胞中转染miR-634 mimic,利用上述方法检测miR-634在细胞增殖凋亡中的作用。结果前列腺癌组织中的LINC00308表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。干扰LINC00308显著提高PC-3M和DU145细胞的miR-634的表达水平、G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率和Caspase3蛋白水平,明显降低S期细胞比例、Ki67蛋白水平(P<0.05)。LINC00308靶向调控miR-634的表达。转染miR-634 mimic显著增加PC-3M和DU145细胞的G0-G1期细胞比例、凋亡率和Caspase3蛋白水平,明显减少S期细胞比例和Ki67蛋白水平(P<0.05)。结论干扰LINC00308可以促进miR-634的表达,阻滞前列腺癌细胞周期,并诱导细胞凋亡。

LncRNA HOXC13-AS靶向miR-634对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)HOXC13-AS(LncRNA HOXC13-AS)对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法收集20例子宫内膜癌组织标本及20例癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HOXC13-AS、微小RNA(miR)-634在子宫内膜癌组织及癌旁组织中的差异表达;以子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究对象,噻唑蓝(MTT)、流式细胞术、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证HOXC13-AS、miR-634的靶向作用;Western印迹法检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果相较于癌旁组织,HOXC13-AS在子宫内膜癌组织显著高表达(P<0.05),而miR-634显著低表达(P<0.05);HOXC13-AS敲除抑制细胞活力、迁移与侵袭,诱导CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9的表达水平显著降低(P<0.05)及细胞凋亡率及p21和Bax表达水平显著升高(P<0.05);miR-634过表达与抑制HOXC13-AS表达对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响相同;miR-634可显著抑制野生型载体WT-HOXC13-AS细胞的荧光素酶活性(P<0.05),且HOXC13-AS可负向调控miR-634的表达(P<0.05);干扰miR-634表达可逆转抑制HOXC13-AS对Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的作用。结论LncRNA HOXC13-AS可靶向调节miR-634调控子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭行为。

LncRNA CASC2靶向miR-634表达抑制神经胶质瘤细胞的生物学行为

目的:探讨LncRNA CASC2对神经胶质瘤U87细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并对其可能的机制进行探究。方法:收集2017年1月到2018年6月在我院行神经胶质瘤切除术患者的肿瘤组织18例及同时期脑外伤及癫痫手术中切除的脑组织18例,并收集其病历资料。通过qPCR检测A127、U251、U87细胞系中CASC2及miR-634的表达差异;利用生物信息学方法预测CASC2的靶基因,并使用荧光素酶报告基因对靶基因的表达进行验证;将CASC2 mimics转染至U87细胞中构建CASC2过表达模型,同时将miR-634转染至U87细胞中构建miR-634过表达模型,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力、Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力。结果:CASC2的表达与神经胶质瘤的病理分期相关以及淋巴结转移情况呈负相关。CASC2和miR-634在A127、U251、U87细胞系中均呈低表达水平(P<0.05),进一步增强CASC2的表达,U87细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著减弱(P<0.05)。增强miR-634的表达,U87细胞的增殖、侵袭、迁移能力相应增强;将CASC2 mimics、miR-634 3′UTR共转染后,双荧光素酶报告基因结果显示增强CASC2的表达后,miR-634的表达及活性相应下调(P<0.05),蛋白免疫印迹实验提示,增强miR-634表达后,EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表达含量降低(P<0.05)。结论:过表达CASC2靶向调控miR-634的表达,通过EGFR/PI3K/AKT通路,从而抑制神经胶质瘤细胞的增殖、侵袭及转移。

miR-634调控趋化因子受体-4蛋白对鼻咽癌细胞生物活性的作用机制

目的 探究miR-634调控趋化因子受体-4[chemokine(C-X-C motif)receptor 4,CXCR4]蛋白对鼻咽癌细胞生物活性的作用机制。方法 过表达miR-634转染至CNE1细胞,RT-PCR检测miR-634和CXCR4 mRNA的表达;荧光素酶报告基因检测miR-634和CXCR4的靶向关系;同时转染miR-634和CXCR4至鼻咽癌细胞,蛋白质印记检测CXCR4蛋白的表达;CCK8检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 与NP69细胞相比,CNE1细胞中miR-634 mRNA(0.48±0.05)表达显著降低,CXCR4 mRNA(0.96±0.09)表达显著升高(P<0.05);空白组与miR-NC组CNE1细胞中miR-634和CXCR4 mRNA表达无明显的差异(P>0.05);和空白组、miR-NC组相比,miR-634组CNE1细胞中miR-634 mRNA(1.72±0.12)的表达显著升高,CXCR4 mRNA(0.51±0.07)表达得到显著抑制(P<0.05)。荧光素酶报告实验结果显示,过表达miR-634显著降低CXCR4野生型质粒荧光素酶的活性(P<0.05);和空白组相比,miR-634组CXCR4(0.37±0.04)蛋白显著降低(P<0.05),CXCR4-1组CXCR4(1.26±0.11)蛋白明显升高(P<0.05),和CXCR4-1组相比,CXCR4-2组中CXCR4蛋白表达得到显著抑制(P<0.05),CXCR4-2组中CXCR4蛋白水平高于miR-634组(P<0.05)。和空白组相比,miR-634组细胞的增殖速率及侵袭数目显著降低,而CXCR4-1组细胞的增殖速率显著升高(P<0.05);和CXCR4-1组相比,CXCR4-2组细胞的增殖速率及侵袭数目(46.21±5.83)得到明显抑制(P<0.05);和空白组相比,miR-634组细胞凋亡率(17.68±3.21)显著增加,而CXCR4-1组细胞凋亡率明显降低(P<0.05);和CXCR4-1组细胞凋亡率相比较,CXCR4-2组细胞的凋亡率明显升高(P<0.05)。miR-634组和顺铂组细胞增殖、侵袭、凋亡能力均没有显著差异(P>0.05)。结论 miR-634抑制鼻咽癌CNE1细胞的增殖和侵袭,促进鼻咽癌细胞的凋亡,其作用机制与调控CXCR4蛋白有关。

miR-634靶向CDCA5基因对非小细胞肺癌增殖、凋亡的影响

目的研究miR-634在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中的表达及NSCLC细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测正常肺上皮BEAS-2B细胞和NSCLC A549、H1299、H1650细胞中miR-634、CDCA5 mRNA和CDCA5蛋白的表达。采用Lipofectamine2000转染A549细胞过表达miR-634,采用双荧光素酶基因报告实验检测miR-634对CDCA5的靶向作用,Western印迹检测转染后A549细胞中相关蛋白的表达,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,NSCLC A549、H1299、H1650细胞中miR-634表达下调,CDCA5 mRNA和CDCA5蛋白表达上调(均P<0.05)。过表达miR-634抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其细胞的凋亡(P<0.05)。沉默CDCA5抑制肺癌A549细胞的增殖促进其细胞凋亡(均P<0.05)。miR-634靶向调控CDCA5的表达,过表达CDCA5可逆转过表达miR-634对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。结论miR-634可通过靶向调控CDCA5基因抑制NSCLC A549细胞的增殖和诱导其细胞凋亡。

鼻咽癌组织中miR-634水平及其对鼻咽癌细胞生长的影响及机制研究

目的研究鼻咽癌组织中miR-634水平及其对鼻咽癌细胞生长及MEK/ERK信号通路的影响,探讨miR-634在鼻咽癌中的作用机制。方法收集鼻咽癌组织标本60例和鼻咽部非癌组织标本60例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞中miR-634水平。将人鼻咽癌CNE-1细胞分为空白对照组、阴性对照组和过表达miR-634组。采用MTT测定细胞增殖,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blotting测定鼻咽癌细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK)蛋白水平。结果鼻咽癌组织中miR-634水平低于癌旁组织(P<0.05)。鼻咽癌细胞中miR-634水平低于正常鼻咽部上皮细胞(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,过表达miR-634组鼻咽癌细胞中miR-634水平和细胞凋亡率升高(P<0.05);p-ERK、p-MEK蛋白水平降低(P<0.05)。转染3 d和5 d,3组细胞OD值比较差异有统计学意义(P<0.05),与空白对照组和阴性对照组比较,过表达miR-634组细胞OD值降低(P<0.05)。结论鼻咽癌组织中miR-634水平降低,过表达miR-634可抑制鼻咽癌增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与MEK/ERK信号通路有关。

Hsa-mir-634对Vero细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨hsa—mir-634在Vero细胞中的功能与作用机制。方法运用生物信息学方法在线预测hsa—mir-634的潜在靶基因细胞周期蛋白Dl（CyclinDl，CCNDl）的结合位点，将含有hsa—mir-634结合位点的CCNDl的3’UTR片段连人psi—CHECK2载体，构建双荧光报告基因载体。通过定点突变的方法突变hsa—mir-634和CCNDl的结合位点，构建双荧光报告突变基因载体。将构建的重组质粒转染293T细胞，进行双荧光检测；将化学合成的hsa—mir-634模拟物转染Vero细胞，荧光定量PCR和Western印迹法检测hsa—mir-634对内源性CCNDlmRNA水平和蛋白水平表达的影响，MTS法检测hsa—mir-634对Veto细胞增殖能力的影响，流式细胞仪检测hsa—mir-634对Vero细胞凋亡的影响。结果用生物信息学方法成功预测到hsa—mir-634与CCNDl的结合位点；测序结果显示，野生型及突变型CCND13’UTR序列成功连接到psi—CHECK2报告基因载体；双荧光检测结果显示，过表达hsa—mir-634可以抑制荧光素酶的表达。过表达hsa—mir-634后，其靶基因CCNDl在mRNA水平上无明显变化，但可以显著影响CCNDl蛋白的表达。过表达hsa—mir-634可抑制Vero细胞增殖，这种抑制作用在转染后第4天最为明显。另外，过表达hsa—mir-634可诱导Veto细胞的凋亡，空白细胞组、阴性对照组及hsa—mir-634过表达组晚期凋亡的比例分别为8．03％、7．96％和17．33％。结论Hsa—mir-634通过影响CCND1的表达影响Vero细胞的增殖和凋亡。