MiR-641在肝细胞癌中的表达及其对HepG2细胞功能的影响

目的探讨miR-641在肝细胞癌(HCC)组织中的表达情况及其对肝癌细胞株HepG2增殖和侵袭能力的影响。方法收集2018年1～8月重庆医科大学附属永川医院肝胆胰腺外科48例经病理确诊的HCC患者手术切除癌及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR (q RT-PCR)检测癌组织和癌旁组织中miR-641表达,并分析miR-641在不同临床病理资料之间的差异,脂质体法转染miR-641 mimics、inhibitors、无关序列(negative control,NC)到HepG2细胞,qRT-PCR检测各组miR-641表达水平,MTT法检测转染后24 h、48 h、72 h、96 h增殖能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-641在HCC癌组织中表达水平为(2.44±0.13),明显低于癌旁组织的(6.31±0.48),差异有统计学意义(P<0.05)。同时,miR-641在癌组织中的表达水平随患者Edmondson分级的升高而降低,其中Ⅰ、Ⅱ级组表达水平为(3.15±0.72),Ⅲ、Ⅳ级组表达水平为(2.02±0.74)。与NC组miR-614表达水平(1.0±0.07)比较,转染miR-641 mimics组miR-641表达水平(9.54±0.62)显著升高,转染inhibitors转染组miR-641表达水平(0.34±0.05)显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。同时,与96 h时NC组细胞的增殖水平(0.59±0.02)比较,miR-641mimics组的增殖水平(0.50±0.01)显著降低,miR-641inhibitors组的增殖水平(0.82±0.03)显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而侵袭实验数据显示,与NC组细胞相对侵袭数量相比,miR-641mimics组的细胞相对侵袭数量显著降低,miR-641inhibitors组的细胞相对侵袭数量显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论miR-641在HCC组织低表达,并与肝细胞癌Edmondson分级相关,其可能通过促进癌细胞的增殖和侵袭能力参与HCC的发生与发展。

miR-641在恶性肿瘤中的研究进展

微小RNA(miRNA,miR)是一类小的、非编码的内源性单RNA分子,由于与靶基因mRNA的3′未翻译区域(3′-UTR)融合,可以引起mRNA的切割或翻译控制,在人类基因组表达中起到了关键性作用。miR-641由于调节不同靶基因的相互影响,升高或降低了miR-641在不同癌细胞中的表现水平,参于了细胞生长、凋亡、侵袭和转移等多种生物进程,起到了类似于原癌基因或抑癌基因的调节功能。但近年来研究发现,miR-641可能作为新的靶点,对癌症的诊断、耐药、治疗等方面均有潜在价值。本文就目前miR-641在恶性肿瘤的研究进展加以综述,以期为研究miR-641与恶性肿瘤的关系提供新思路。

乳腺癌患者血清miR-325、miR-641、miR-1307水平与临床病理特征、复发的关系

目的探讨乳腺癌(BC)患者血清微小RNA-325(miR-325)、miR-641、miR-1307表达水平及其与临床病理特征、复发的关系。方法选取西安交通大学第一附属医院2018年3月至2020年3月期间收治的198例BC初诊患者(BC组)作为研究对象;另选取同期于西安交通大学第一附属医院就诊的86例乳腺良性病变患者作为对照组。检测各组血清中miR-325、miR-641、miR-1307的表达情况;Cox回归分析影响BC患者术后复发的风险因素;绘制ROC曲线评估血清miR-325、miR-641、miR-1307表达水平对BC复发的预测价值。结果与对照组相比,BC患者血清miR-325、miR-641表达水平降低,miR-1307表达水平升高(均P<0.05),且三者表达水平与TNM分期、淋巴结转移具有相关性(P<0.05);复发组BC患者血清miR-325、miR-641表达水平低于未复发组,miR-1307表达水平高于未复发组(均P<0.05);miR-1307表达是BC患者术后复发的危险因素,miR-325、miR-641为保护因素(均P<0.05),三者联合预测BC复发的AUC为0.935,联合预测效果优于单独预测(P<0.05)。结论BC患者血清miR-325、miR-641、miR-1307表达水平与TNM分期、淋巴结转移有关,且其表达水平与BC复发密切相关。

miR-641表达对肺腺癌A549细胞增殖和侵袭及迁移能力影响

目的探讨miR-641在肺腺癌中的表达情况及其分子生物学作用机制。方法收集延安大学附属医院胸外科2018-01-01-2019-03-31行手术切除的30例肺腺癌患者癌组织及对应周围正常肺组织标本,采用qPCR法检测肺腺癌组织和肺腺癌细胞系A549、H1299和H157中miR-641表达水平,分析miR-641表达与肺腺癌患者临床特征关系。MTT法检测miR-641对肺腺癌A549细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭及迁移实验检测miR-641对肺腺癌A549细胞迁移及侵袭能力的影响;靶基因双荧光素酶实验检测miR-641与CYR61的相互作用;PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中CYR61表达。结果 qPCR法检测miR-641在肺腺癌组织、肺组织、A549、H1299、H157和WI-38细胞中表达值分别为0.14±0.02、1.01±0.08、0.35±0.04、0.47±0.05、0.48±0.04、0.98±0.08,F=775.537,P<0.001;肺腺癌组织和肺组织miR-641表达差异有统计学意义,t=57.786,P<0.001。miR-641表达与TNM分期(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.013)有关联。NC组和miR-641 mimics组A549细胞增殖活力分别为0.98±0.07和8.23±0.53,t=23.489,P<0.001。miR-641mimics转染A549细胞24、48和72h后,细胞增殖活力分别为1.23±0.19、1.86±0.21和3.05±0.29,F=333.197,P<0.001。Transwell侵袭及迁移实验结果显示,与NC组(101.42±10.14)%和(97.24±7.63)%相比,miR-641mimics组迁移及侵袭力分别为(71.43±6.12)%和(63.47±7.12)%,t值分别为13.620和12.430,均P<0.001。Target Sacn生物信息网站预测miR-641基因序列与CYR61基因序列存在结合片段,靶基因双荧光素酶实验显示,野生型CYR61 3′-UTR相对双荧光素酶活性低于突变型CYR61 3′-UTR,F=49.832,P<0.001。NC组和miR-641mimics组CYR61蛋白表达水平分别为1.00±0.09和0.61±0.10,t=5.024,P=0.004。MTT增殖实验显示,与miR-641mimics相比较,miR-641mimics+pSUPER-CYR61转染A549细胞24、48和72h后细胞增殖活性增加,分别为1.61±0.15、2.29±0.23和3.46±0.34,F=356.301,P<0.001。Transwell迁移实验表明,NC组、miR-641mimics组和miR-641mimics+pSUPER-CYR61组A549细胞迁移力分别为(100.00±7.23)%、(45.61±5.67)%和(97.12±3.17)%,F=53.994,P<0.001;Transwell侵袭实验表明,NC组、miR-641mimics组和miR-641mimics+pSUPER-CYR61组A549细胞侵袭力分别为(100.00±7.82)%、(39.42±6.07)%和(85.62±5.37)%,F=34.893,P<0.001。结论 miR-641在肺腺癌组织和细胞中处于低表达状态,可抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调节CYR61有关,可成为肺癌基因治疗的潜在靶点。

CASC11通过调控miR-641的表达对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的作用机制研究

目的 探讨长链非编码RNA癌症易感候选基因11(Long non-coding RNA cancer susceptibility candidate gene 11,lncRNA CASC11)通过调控微小核糖核酸(MicroRNA,miR)-641的表达对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的作用机制。方法 逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测脑胶质瘤细胞株U251,U87,MGR3,UWR7和A172中CASC11表达水平及小干扰RAN CASC11(Small interfering RNA CASC11,si-CASC11)转染U87细胞后CASC11,miR-641表达水平;在人脑胶质瘤细胞U87中敲除CASC11后用四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、侵袭小室实验(Transwell assay)和细胞划痕实验检测U87细胞增殖、侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因验证CASC11和miR-641之间的靶向关系。结果 在U87细胞中CASC11表达水平最高,故选U87细胞进行后续实验;敲除CASC11后可抑制U87细胞增殖、侵袭和迁移能力,降低U87细胞中的CASC11 mRNA相对表达水平,升高miR-641 mRNA相对表达水平;CASC11和miR-641之间存在靶向关系。结论 敲除CASC11后可靶向负调控miR-641表达,抑制脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的恶性生物学行为,可能是脑胶质瘤的分子靶点。

八月札水提物对胶质瘤细胞EMT的作用机制研究

目的:通过长链非编码RNA(LncRNA)肿瘤易感基因(CASC11)/微小RNA-641(miR-641)信号轴探讨八月札水提物对胶质瘤细胞SHG-44上皮间质转化(EMT)的影响。方法:SHG-44细胞分别用含0、30、60、90、120和180μg/mL八月札水提物的培养基培养,24h后MTT法检测细胞存活率。SHG-44细胞随机分为对照组、八月札水提物组(90μg/mL八月札水提物处理24h)、阴性对照组(NC组:转染NC 24h)、CASC11模拟物组(CASC11mimic组:转染CASC11 mimic 24h)和八月札水提物+CASC11 mimic组(转染CASC11 mimic 24h后,90μg/mL八月札水提物处理24h),双荧光素酶报告基因检测CASC11和miR-641的靶向关系、qRT-PCR检测CASC11和miR-641表达水平、划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell实验检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(vimentin)蛋白相对表达量。结果:随八月札水提物浓度的增加,细胞存活率呈剂量依赖性降低(P<0.05);与对照组比较,八月札水提物组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量降低,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05);与八月札水提物组比较,八月札水提物+CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量升高,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量降低(P<0.05);与NC组比较,CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量升高,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量降低(P<0.05);与CASC11 mimic组比较,八月札水提物+CASC11 mimic组CASC11表达水平、划痕愈合面积百分比、侵袭细胞数及N-cad和vimentin蛋白相对表达量降低,miR-641表达水平和E-cad蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论:八月札水提物抑制胶质瘤细胞SHG-44上皮间质转化过程,其可能是通过降低CASC11表达,同时升高miR-641表达发挥作用。