Circ_0007142吸附miR-647调控CCR8基因促进胃癌细胞的上皮-间质转化和侵袭

背景与目的:胃癌是常见的消化道恶性肿瘤,circ_0007142被证实为结直肠癌的致癌因子,能促进结直肠癌的进展。探究circ_0007142吸附miR-647调控CCR8基因对胃癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)对组织和细胞中circ_0007142、miR-647、CCR8的表达进行检测;采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验鉴定circ_0007142的亚细胞定位;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)实验验证circ_0007142和miR-647、miR-647和CCR8的相互关系;采用transwell、克隆形成实验和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞的侵袭能力、集落形成能力和EMT程度;BALB/c裸小鼠移植瘤实验检测circ_0007142在体内的促瘤作用。结果:Circ_0007142和CCR8在胃癌组织和细胞中过表达,miR-647在胃癌组织和细胞中低表达。circ_0007142发挥分子海绵的作用抑制miR-647的表达,而miR-647通过与CCR8 mRNA的3’-UTR结合抑制CCR8表达。敲减circ_0007142或者上调miR-647的表达都可以抑制胃癌细胞的侵袭、克隆形成与EMT。而敲减circ_0007142或上调miR-647表达对胃癌细胞的影响能够被miR-647 inhibitor或CCR8过表达部分逆转(P均<0.05)。此外,在胃癌细胞中敲减circ_0007142的表达能够抑制肿瘤的体内生长。结论:Circ_0007142吸附miR-647上调CCR8的表达,进而促进胃癌细胞的EMT和侵袭,促进胃癌的进展。

miR-647通过靶基因NLRC5调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨miR-647对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:实验设置miR-NC组、miR-647组、anti-miR-NC组、anti-miR-647组、si-NC组、si-NLRC5组、miR-647+pcDNA组、miR-647+pcDNA-NLRC5组。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-647和核苷酸寡聚化域样受体亚家族C5(nucleotide oligomerization domain-like receptor subfamily C5,NLRC5)mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测NLRC5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测miR-647和NLRC5的靶向关系。结果:子宫内膜癌组织中miR-647低表达,NLRC5高表达(P<0.05);过表达miR-647或抑制NLRC5表达,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高,CyclinD1、Bcl-2表达水平显著降低,p21、Bax表达水平显著升高(P<0.05)。miR-647靶向调控NLRC5,NLRC5过表达逆转了miR-647过表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的作用。结论:过表达miR-647可能通过靶向下调NLRC5的表达抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

前列腺癌患者癌组织中miR-647和HOXA9表达水平及其与预后的关系分析

目的通过检测前列腺癌组织中微小RNA(microRNA,miR)-647、同源盒A9(HOXA9)表达水平,分析miR-647、HOXA9与前列腺癌患者预后的关系。方法收集本院108例前列腺癌患者术中切除的癌组织及其对应的癌旁组织,使用qRT-PCR技术检测组织中miR-647和HOXA9 mRNA表达水平,免疫组化法检测HOXA9蛋白表达水平,并分析miR-647、HOXA9表达水平与患者临床病理特征及预后的关系;Pearson相关系数分析miR-647与HOXA9的相关性。结果前列腺癌组织中miR-647表达水平(0.65±0.12)显著低于癌旁组织(1.01±0.09)(P<0.05),HOXA9 mRNA表达水平(1.86±0.37)明显高于癌旁组织(1.03±0.10)(P<0.05);癌组织中HOXA9蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);前列腺癌组织中miR-647与HOXA9呈负相关(r=-0.680,P=0.000);miR-647、HOXA9表达水平与患者T分期、淋巴结有无转移、Gleason评分以及前列腺特异抗原(PSA)水平有关(P<0.05);生存分析表明,miR-647高表达、HOXA9低表达时患者生存率较高;miR-647、HOXA9、Gleason评分是影响患者预后的相关因素(P<0.05)。结论miR-647在前列腺癌中低表达,而HOXA9高表达,miR-647与HOXA9呈负相关,两者表达水平与部分临床病理特征以及术后3年生存率有关,可影响患者预后。

miRNA-647在乳腺癌中的作用研究

目的探讨miRNA-647(miR-647)在乳腺癌(BC)发展中的作用。通过对BC组织和BC细胞两方面验证miR-647在BC中表达情况和作用研究。方法运用实时荧光定量聚合酶反应(qRT-PCR)对miR-647在BC组织及其细胞系中的表达水平进行测定分析。然后为进一步研究miR-647对BC细胞生物学作用,通过细胞计数试剂盒-8实验(CCK-8)、细胞划痕实验对细胞增殖和迁移能力进行分析,同时采用流式细胞术对过表达的miR-647影响细胞增殖和凋亡程度进行测定。结果BC组织中miR-647表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-647在BC细胞系中表达水平显著低于正常细胞系,并且在MCF-7中表达最少,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-647过表达显著抑制了BC细胞增殖能力、迁移能力,并且促进凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-647在乳腺癌中异常表达并且抑制BC细胞的恶性特征,在BC进程中发挥作用。

风湿性二尖瓣疾病合并心房颤动患者心房纤维化相关微小RNA-647及预测靶基因研究

目的:明确风湿性二尖瓣疾病合并心房颤动(房颤)患者心房组织的主要病理变化,生物信息学分析并筛选与风湿性二尖瓣疾病房颤患者心房纤维化相关的微小RNA(miRNA)及其靶基因。方法:收集在西安交通大学第一附属医院行心脏外科手术治疗的30例风湿性二尖瓣疾病患者(窦性心律组10例,房颤组20例)的临床资料及心房样本。苏木精-伊红染色、Masson染色、免疫组织化学染色后观察心房组织病理变化;实时定量聚合酶链反应及Western blot法检测纤维化相关蛋白和通路在心房组织中的表达;生物信息学分析并筛选出与风湿性二尖瓣疾病房颤发病机制相关的miR-647及其预测靶基因PRKCA;进一步应用双荧光素酶报告基因确定miR-647的靶基因为PRKCA。结果:相较于窦性心律组患者,房颤组患者左房组织具有典型的心房肌肥大、间质纤维化、心房肌细胞坏死等病理改变;房颤组患者左房纤维化蛋白及通路表达水平显著高于窦性心律组(P均<0.05);生物信息学筛选出风湿性二尖瓣疾病房颤相关miR-647及其纤维化相关的下游靶基因PRKCA;房颤组左房组织中miR-647明显下调,PRKCA表达则明显升高(P均<0.05);双荧光素酶报告基因实验验证miR-647对靶基因PRKCA具有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-647靶向作用于PRKCA基因,与风湿性二尖瓣疾病房颤患者的心房纤维化有关。